El glucòsid de Cistanche regula a l'alça Bmi1 i promou la proliferació de cèl·lules mare espermatogonals de ratolí mitjançant la via de senyalització Akt
May 23, 2023
Objectiu: Investigar l'efecte promotor i els mecanismes relacionats dels glucòsids de Cistanche sobre la proliferació de cèl·lules mare espermatogonals de ratolí. Mètode: es van utilitzar l'assaig MTT i l'assaig de proliferació cel·lular EdU per detectar l'efecte del glucòsid de Cistanche sobre la capacitat de proliferació de les cèl·lules mare espermatogonals de ratolí; es va utilitzar el mètode Western blot per detectar l'expressió de proteïnes Bmi1, p-Akt i Akt per glucòsid de cistanche; L'experiment de RT-PCR va detectar els resultats d'expressió de gens relacionats i, finalment, va demostrar la relació reguladora aigües amunt i aigües avall entre les proteïnes p-Akt i Bmi1 mitjançant inhibidors i siRNA. Resultat: en comparació amb el grup control, 0.5-1 µM Glucòsid de Cistanche va promoure la proliferació de cèl·lules mare espermatogonals de ratolí (P<0.05); Compared with the control group, the expression levels of p-Akt and Bmi1 proteins in the 0.5-1 µ M Cistanche glycoside treated group increased (P<0.05); Akt inhibitors downregulated the levels of p-Akt and Bmi proteins (P<0.05); SiBmi1 had no significant effect on Akt mRNA levels (P>0.05). Conclusió: el glucòsid de Cistanche activa la via de senyalització Akt i regula l'expressió Bmi1, afavorint la proliferació de cèl·lules mare espermatogonals de ratolí.
Paraules clau: glucòsid de Cistanche; Cèl·lules mare espermatogonals de ratolí; Bmi1 ; proliferació cel·lular
La infertilitat s'ha convertit en un problema global que dificulta el desenvolupament de la societat humana [1-2]. Segons les estadístiques epidemiològiques, aproximadament el 15% -20% de les parelles a tot el món pateixen malalties d'infertilitat, i la disfunció masculina causa més del 50% dels símptomes d'infertilitat [3]. Per tant, trobar mètodes de tractament efectius per a la infertilitat masculina s'ha convertit en un tema de recerca candent en el camp de la salut reproductiva tant a nivell nacional com internacional.
Cistanche beneficis masculins- Tonificant ronyó
Feu clic aquí per veure els productes Cistanche per a malalties renals
【Demanar més】 Correu electrònic:cindy.xue@wecistanche.com / Whats App: 0086 18599088692 / Wechat: 18599088692
El complex inhibidor de proteïnes polycomb 1 (PRC1) compost pel lloc d'integració 1 del virus de la leucèmia del ratolí Moroni específic de cèl·lules B (Bmi1) pot prevenir l'envelliment prematur i mantenir la capacitat d'autorenovació de les cèl·lules mare [4]. La proteïna quinasa B (Akt) està implicada en la proliferació i diferenciació cel·lular [5], i l'Akt activat està implicada en diverses activitats biològiques importants [6-7].
El glucòsid de Cistanche I (C27H30O11, pes molecular: 530,52) és un hidrolitzat de glucòsid de Cistanche aïllat de la medicina tradicional xinesa El glucòsid de Cistanche, que té diverses activitats farmacològiques i biològiques [8-9). Segons els informes, el glucòsid de Cistanche pot tenir un cert efecte terapèutic sobre l'osteoporosi [10]. Tanmateix, l'impacte del glucòsid I de Cistanche en la funció reproductiva masculina encara no està clar. Les cèl·lules mare espermatogèniques (SSC) són el grup d'espermatozoides més primitiu amb la capacitat d'autorenovar-se i diferenciar-se, jugant un paper insubstituïble en el manteniment de la funció reproductiva masculina. Per tant, aquest estudi va utilitzar SSC de ratolí com a model in vitro per explorar l'efecte del glucòsid de Cistanche sobre la capacitat de proliferació dels SSC de ratolí i el seu mecanisme d'acció.
Ginseng del desert: ronyó tonificant
1 Material i mètodes
1.1 Cultiu cel·lular
En aquest estudi, es van utilitzar cèl·lules mare espermatogonals de ratolí (C18-4). Les cèl·lules provenien del grup de recerca del professor He Zuping i es van separar, purificar i identificar segons les especificacions. Les cèl·lules mare espermatogonals del ratolí es van afegir un 10% de sèrum fetal boví (Gibco) i un 1% de penicil·lina/estreptomicina en DMEM/F12 (Gibco) i es van cultivar en medi (37 graus, 5% de CO2)
1.2 Experiment MTT
Inoculeu C18-4 amb una quantitat de 5000 cèl·lules per pou en una placa de 96-pou per garantir una inoculació cel·lular uniforme. Després de l'adhesió cel·lular, seleccioneu els fàrmacs i les concentracions de fàrmacs necessaris per al tractament. Després de 72 hores d'addicció a les drogues, es van afegir 50 µl de blau de tiazol (MTT) preparat al pou on es van inocular les cèl·lules i les plaques de 96 pous es van col·locar en una incubadora cel·lular durant 4-5 hores. Després de la incubació, descarteu la solució de cultiu de les plaques de 96 pous, afegiu 150 µl de sulfòxid de dimetil (DMSO) a cada pou i, finalment, mesureu l'absorbància mitjançant un assaig immunosorbent lligat a enzims (Biotek) a una longitud d'ona de 490 nm.
Cistanche en pols-Ronyó tonificant
1.3 Proliferació cel·lular EdU
Inoculeu les cèl·lules uniformement a una placa de {{0}}pou (6,0 × 103/pou), després que les cèl·lules s'adhereixin a la paret, afegiu medicaments durant 24 hores segons les necessitats experimentals i, a continuació, utilitzeu 100 μ LDMEM/ F12 conté 20 µL d'EdU com a substitut del medi de cultiu original i després es prova el potencial de proliferació de les cèl·lules segons les instruccions del kit de prova EdU.
1.4 Occidental Taca
La mostra de proteïna cel·lular preemmagatzemada es va dividir mitjançant gel SDS PAGE i després es va transferir a la membrana PVDF després de l'electroforesi. Es va segellar amb un 5 per cent de llet desnatada durant 1 hora. Es va combinar amb anticòs primari específic a 4 graus durant la nit: anticòs p-Akt anti-ratolí de conill (1 ∶ 2000) (CST), anticòs Akt (1 ∶ 1000) (CST), GAPDH (1 ∶ 5000) (Abcam), Bmi1 (1 ∶ 5000) (Abcam). El segon dia, s'uneix amb anticossos secundaris de conill a temperatura ambient durant 1 hora. Les proteïnes corresponents es van detectar mitjançant el kit de quimioluminescència líquida (ECL) (Bio-Rad) i, finalment, es va observar la reacció antigen-anticossos mitjançant el sistema ChemiDoc (Bio-Rad).
1,5 RT-PCR
El reactiu utilitzat en el procés d'extracció de l'ARN total és el reactiu TRIzol (Invitrogen) i l'ADNc s'obté d'acord amb les instruccions del kit de transcripció inversa d'ADNc de la primera cadena (Vazyme). RT PCR es va realitzar mitjançant TaqMan expressió gènica Master Mix (Bio-Rad) segons les instruccions, utilitzant ΔΔ El mètode Ct calcula el canvi en els múltiples relatius de l'expressió d'ARNm, amb un valor de 2 - ΔΔ Ct. Taula de seqüències de primers a (Taula 1)
1.6 transfecció de siRNA
El siRNA de l'ARNm Bmi 1 es va comprar a Ribobio i la llista de seqüències es troba a la taula 2. Es va utilitzar el reactiu de transfecció Lipofectamine 6000 (Invitrogen). Les cèl·lules (2, 0 × 105/pou) es van cultivar durant la nit en DMEM/F 12 suplementat amb sèrum boví fetal al 10 per cent en una placa de 6-pous. Segons les directrius del fabricant, Lipofectamine 6000 es va barrejar a fons amb siRNA de control i siRNA Bmi1, respectivament, i es va transfectar durant 5 hores en un medi de cultiu sense sèrum boví fetal. Després de rentar-se amb PBS, el medi de cultiu original es va substituir amb sèrum boví fetal al 10% DMEM/F12. Després de 24 hores, es van recollir cèl·lules per detectar els canvis d'expressió de diverses proteïnes i gens corresponents.
Taula 1 Seqüències d'encebadors amplificades per RT PCR
Taula 2 seqüència de siRNA Bmi1
1.7 Anàlisi estadística
Totes les dades es van analitzar mitjançant SPSS 16.0 i el programari GraphPad Prism 8. A partir de les diferències de valors mitjans entre dos o més grups, es van seleccionar la prova t de Student i la prova ANOVA unidireccional per a la comparació. Una diferència de P<0.05 was considered statistically significant.
2 Resultats
2.1 Efectes dels glucòsids de Cistanche sobre les cèl·lules mare espermatogòniques
Per tal de determinar si el glicòsid Epimedium I té un efecte proliferatiu sobre les cèl·lules mare espermatogonals de ratolí, vam trobar mitjançant experiments MTT que el glucòsid I de Cistanche pot promoure la proliferació de cèl·lules mare espermatogòniques de ratolí a concentracions de {{0}}.5 i 1 µ M (figura 1A). A continuació, per tal de verificar encara més l'efecte proliferatiu del glucòsid I de Cistanche sobre les cèl·lules mare espermatogòniques de ratolí, vam confirmar encara més mitjançant experiments de proliferació de cèl·lules EdU que el glucòsid I de Cistanche també pot promoure la proliferació de cèl·lules mare espermatogòniques de ratolí a concentracions de 0,5 i 1 µM. (Figura 1B).
Cistanche vivent del desert-Ronyó tonificant
2.2 El glucòsid de Cistanche regula l'expressió de Bmi1
Estudis de laboratori anteriors han demostrat que Bmi1 s'expressa molt en el teixit testicular en comparació amb altres teixits d'òrgans i s'expressa principalment al nucli de les cèl·lules mare espermatogonals de ratolí. Estudis recents han demostrat que Bmi1 és de gran importància per mantenir la proliferació de cèl·lules mare espermatogonals [12]. Per tant, especulem que el glucòsid I de Cistanche té un efecte regulador sobre Bmi1, promovent així la proliferació de cèl·lules mare espermatogonals de ratolí. Els resultats de Western blot van mostrar que el glucòsid I de Cistanche va regular significativament l'expressió de la proteïna Bmi1 (figura 2).
2.3 El glucòsid de Cistanche activa la via de senyalització Akt
Segons els informes, l'Akt fosforilada està estretament relacionada amb la proliferació i diferenciació cel·lular [13]. Per tant, vam investigar l'efecte de la icariina I sobre la fosforilació Akt. Vam trobar que els glucòsids de Cistanche regulaven significativament l'expressió de fosforilació d'Akt a concentracions de 0.5 i 1 µM (figura 3).
2.4 Inhibició de la regulació a la baixa Akt de Bmi1
Segons informes d'investigació anteriors [14], vam seleccionar un inhibidor d'Akt (MK-2206) a una concentració de 10 (µM) i vam trobar que la inhibició de p-Akt inhibia significativament Bmi1. Aquest resultat indica que l'expressió Bmi1 està regulada per Akt (figura 4)
Figura 1: Efecte del glucòsid I de Cistanche sobre les cèl·lules mare espermatogonals de ratolí
A. Es va utilitzar l'assaig MTT per detectar l'efecte del tractament amb glicòsid I de Cistanche durant 3 dies sobre la viabilitat de les cèl·lules mare espermatogonals de ratolí; B. L'experiment de proliferació cel·lular EdU es va utilitzar per detectar la proliferació de cèl·lules mare espermatogonals de ratolí després de 3 dies de tractament amb glucòsids de Cistanche, així com el gràfic d'anàlisi estadística; *Pàg<0.05, * * P<0.01 compared to the control group, n=3.
Figura 2: Efecte del glucòsid I de Cistanche sobre la proteïna Bmi1
Es va utilitzar l'assaig de Western blot per detectar l'efecte del tractament amb Cistanche deserticola glicòsid I sobre l'expressió de Bmi1 en cèl·lules mare espermatogonals de ratolí després de 24 hores, i també es va presentar el mapa estadístic * P<0.05, compared to the control group, n=3.
Figura 3: Efecte del glucòsid I de Cistanche sobre la via de senyalització Akt
L'assaig de Western blot es va utilitzar per detectar l'expressió de la fosforilació Akt i Akt en cèl·lules mare espermatogonals de ratolí després de 24 hores de tractament amb Cistanche Cistanche glicòsid I, i també es va presentar el mapa estadístic** P<0.01, compared to the control group, n=3.
Figura 4: L'efecte de l'inhibidor Akt sobre Bmi1. L'experiment de Western blot es va utilitzar per detectar l'expressió d'Akt i Bmi1 fosforilats en cèl·lules mare espermatogonals de ratolí després de 24 hores de tractament amb inhibidor d'Akt, i es va presentar el diagrama estadístic* P<0.05 * * P<0.01, compared to the control group, n=3.
2.5 El silenci de Bmi1 no afecta l'expressió Akt
Per validar encara més la relació aigües amunt-avall entre Bmi1 i Akt, vam silenciar Bmi1 i vam observar canvis en l'expressió de la cèl·lula Akt. En primer lloc, es van transfectar siRNAs de diferents seqüències de Bmi1 a cèl·lules de ratolí per explorar la seva eficiència de transfecció. Els resultats de l'experiment RT PCR van mostrar que siBmi1-1, siBmi1-2 i siBmi1-3 van reduir significativament l'expressió de Bmi1, amb siBmi1-2 i siBmi1-3 tenint millors efectes (figura 5A). Western blot va confirmar a més que tant siBmi1-2 com siBmi1-3 poden reduir significativament els nivells de proteïna Bmi1 (figura 5B), de manera que vam seleccionar siBmi1-2 i siBmi1-3 per a investigacions posteriors. Curiosament, RT-PCR va demostrar que silenciar Bmi1 no va afectar l'expressió Akt (figura 5C). Els resultats anteriors indiquen que Akt es troba aigües amunt de Bmi1.
Figura 5: L'impacte de silenciar Bmi1 a Akt
A. Anàlisi RT-PCR dels efectes de tres seqüències silenciadores sobre l'expressió del gen Bmi1; B. Es va utilitzar l'experiment de Western blot per detectar l'efecte de tres seqüències de siRNA diferents sobre el silenciament de la proteïna Bmi1 en comparació amb siCtrl i es va realitzar una anàlisi estadística; C. Anàlisi RT-PCR de l'efecte del silenciament de Bmi1 sobre el gen Akt** P<0.01, * * * P<0.001 compared to the control group, n=3.
3 Discussió
La infertilitat dificulta seriosament el desenvolupament sostenible de la societat humana, ja que la infertilitat masculina representa el 50 per cent dels pacients amb infertilitat. Amb el desenvolupament continu de la tecnologia mèdica, el nivell de tractament clínic de la infertilitat masculina s'ha millorat significativament. No obstant això, els mètodes de tractament quirúrgic existents, com la tecnologia de reproducció assistida, tenen inconvenients com ara un alt cost i una baixa taxa d'èxit i tenen un petit ventall de beneficiaris. Són adequats per a pacients que tenen azoospèrmia completa durant la recuperació de microespermatozoides testiculars, tenen malalties genètiques clares i no estan disposats a rebre tractament per diverses raons [16]. Per tant, s'han fet esforços tant nacionals com internacionals per desenvolupar mètodes de tractament més segurs i fiables per a la infertilitat masculina, i la teràpia farmacològica s'ha convertit en un punt d'investigació en el camp de la infertilitat masculina [17]. La pràctica clínica existent ha demostrat que la medicina tradicional xinesa a la Xina té una bona eficàcia i seguretat en el tractament de la infertilitat masculina [18].
Eficàcia de Cistanche deserticola-Ronyó tonificant
El glucòsid de Cistanche és un tema candent en el tractament de la infertilitat masculina en la medicina tradicional xinesa en els últims anys. El seu component principal, el glucòsid de Cistanche, té diverses activitats farmacològiques, com ara la millora de la funció immune [19], la millora de la funció reproductiva masculina [20], els antioxidants [21] i l'anti-osteoporosi [22]. Per aclarir encara més el mecanisme d'acció del glucòsid de Cistanche després d'entrar al cos humà, aquest estudi va seleccionar el glucòsid de Cistanche, un hidrolitzat del glucòsid de Cistanche, com a objecte d'investigació per explorar el mecanisme específic pel qual l'hidrolitzat exerceix el seu efecte farmacològic. En primer lloc, vam trobar que el glucòsid I de Cistanche pot promoure la proliferació de cèl·lules mare espermatogonals de ratolí. Val la pena assenyalar que el glucòsid de Cistanche I no va promoure la proliferació de cèl·lules mare espermatogonals de ratolí de manera dependent de la concentració, cosa que indica que el glucòsid de Cistanche I té un rang segur de dosi. A continuació, vam trobar que el glucòsid de Cistanche I va augmentar significativament el nivell d'expressió de la proteïna Bmi1 estretament relacionada amb la funció reproductiva masculina. Recentment, els investigadors han descobert que l'absència de Bmi1 pot afectar seriosament la funció reproductiva dels ratolins mascles, que es manifesta principalment en oligospèrmia i engrandiment testicular [23]. Mentrestant, un altre estudi del nostre grup de recerca també va confirmar que la inhibició de Bmi1 pot afectar seriosament la capacitat de proliferació de les cèl·lules mare espermatogonals. Per tant, especulem que el glucòsid I de Cistanche que promou la proliferació de cèl·lules mare espermatogonals de ratolí pot estar relacionat amb la regulació de l'expressió Bmi1. Segons els informes, p-Akt està estretament relacionat amb la proliferació i diferenciació cel·lular [14]. Per tant, vam provar els canvis en la proteïna p-Akt causats pel glucòsid I de Cistanche i vam trobar que el glucòsid I de Cistanche també regulava p-Akt. Finalment, vam explorar la relació aigües amunt i aigües avall entre Akt i Bmi1. Val la pena assenyalar que hi ha diferències en els resultats de la investigació de la relació aigües amunt i aigües avall entre Bmi1 i Akt obtingudes per diferents laboratoris [24-25]. Els resultats d'aquest estudi indiquen que els inhibidors específics d'Akt regulen a la baixa Bmi1 mentre silencien Bmi1 no afecta els nivells d'ARNm d'Akt, cosa que indica que Akt pot estar aigües amunt de Bmi1, que està regulat per Akt. En l'estudi de l'efecte de silenciar Bmi1 a Akt, només l'hem explorat a nivell d'ARNm. Com que Bmi1 és un inhibidor de la transcripció, especulem que hi pot haver una interacció entre la proteïna Bmi1 i la proteïna Akt. Tanmateix, actualment no hi ha evidència completa que confirmi la relació aigües amunt i aigües avall entre Akt i Bmi1. Per tant, ho complementarem i millorarem en el futur.
Efectes del ronyó Cistanche-Tonificant
En resum, aquest estudi va trobar per primera vegada que el glucòsid de Cistanche I té l'efecte d'afavorir la proliferació de cèl·lules mare espermatogòniques, revelant un nou mecanisme del glucòsid I de Cistanche que promou la proliferació de cèl·lules mare espermatogòniques a nivell cel·lular, enriquint la base teòrica. per a l'aplicació del glucòsid Cistanche en el tractament clínic de la infertilitat masculina.
referència
［1］ Dutta S, Biswas A, Sengupta P. Obesitat, alteració endocrina i infertilitat masculina ［J］. Asian Pac J Reprod, 2019, 8(5): 195.
［2］ Zhang F, Liu M, Gao J. Alteracions en gens codificants del complex sinaptonemal i infertilitat humana ［J］. Int J Biol Sci, 2022, 18(5): 1933-1943.
［3］ Serrano R, Garcia-Marin LJ, Bragado MJ. Fosfoproteoma de l'esperma: Desenvolupant la infertilitat masculina ［J］. Biology (Basilea), 2022, 11(5): 659.
［4］ Yang D, Liu HQ, Yang Z, et al. IMC1 al cor: funcions noves més enllà de la tumorigènesi ［J］. EBioMedicine, 2021, 63: 103193.
［5］ Abeyrathna P, Su Y. El paper crític d'Akt en la funció cardiovascular ［J］. Vascul Pharmacol, 2015, 74: 38-48.
［6］ Peltier J, O'Neill A, Schaffer DV. PI3K/Akt i CREB regulen la proliferació i diferenciació del progenitor de l'hipocamp neuronal adult (J). Dev Neurobiol, 2007, 67(10): 1348-1361.
［7］ Rafalski VA, Brunet A. Energy metabolism in adult neuronal stem cell fate ［J］. Prog Neurobiol, 2011, 93: 182–203.
［8］Liu Zichen, Xu Ying, Chen Shizhong Farmacocinètica i distribució de teixits del glucòsid I de Cistanche en rates [J] Chinese Journal of Pharmacy, 2008 (11): 848-851
［9］Zi Hui, Li Keqiang, Shang Deyang, et al Comparació del metabolisme i la distribució de teixits del glicòsid de Cistanche en compostos monòmers i compostos en rates model d'osteoporosi [J] Chinese Journal of Experimental Prescriptions, 2015, 21 (6): {{ 4}}
［10］Zi Hui, Fan Ying, Jiang Ning, et al Estudi experimental sobre la promoció de la diferenciació osteogènica de les cèl·lules mare mesenquimals de medul·la òssia de rata a través de la via de senyalització BMP/Runx2/Osx per Cistanche glicòsid I i Cistanche glicòsid II [J] Chinese Journal of Osteoporosi, 2019, 25 (05): 690-695
［11］ Zhou S, Dong J, Xiong M, et al. UHRF1 interacciona amb ARNsn i regula l'empalmament alternatiu a les cèl·lules mare espermatogonals de ratolí (J). Informes sobre cèl·lules mare, 2022, 17(8): 1859-1873.
［12］ Yu J, Shen C, Lin M, et al. L'IMC1 promou el manteniment de les cèl·lules mare espermatogonals reprimint epigenèticament la senyalització Wnt10b/-catenina ［J］. Int J Biol Sci, 2022, 18(7): 2807-2820 .
［13］ Chen Z, Li L, Wu W, et al. L'exercici protegeix les cèl·lules satèl·lits musculars proliferatives contra l'esgotament mitjançant l'eix Igfbp7-Akt-mTOR ［J］. Theranostics, 2020, 10(14): 6448-6466.
［14］ Ma Y, Sender S, Sekora A, et al. La resposta inhibidora als inhibidors de la via PI3K/AKT MK-2206 i Buparlisib està relacionada amb diferències genètiques en les línies cel·lulars d'adenocarcinoma ductal pancreàtic (J). Int J Mol Sci, 2022, 23(8): 4295.
［15］ Carson SA, Kallen AN. Diagnòstic i gestió de la infertilitat: una revisió ［J］. JAMA, 2021, 326(1): 65-76.
［16］ Bosch E, De Vos M, Humaidan P. The Future of Cryopreservation in Assisted Reproductive Technologies ［J］. Front Endocrinol (Lausana), 2020, 11:67.
［17］ Wang M, Wang Q, Du Y, et al. Vitamines combinades amb la medicina tradicional xinesa per a la infertilitat masculina: una revisió sistemàtica i metaanàlisi ［J］. Andrologia, 2020, 8(5): 1038-1050.
［18］ Zhang Z, Yang J, Kong T, et al. Elements de la síndrome de la medicina tradicional xinesa de la infertilitat masculina revelats per l'anàlisi del model d'arbre latent ［J］. J Tradit Chin Med, 2018, 38(6): 926-935.
［19］Ji Xin Progrés de la investigació sobre l'efecte immunomodulador dels glucòsids de Cistanche [J] Hebei Pharmaceutical, 2016, 38 (05): 753-756
［20］Li Kangmei, Li Mingxing, Chen Minqi, et al Progrés de la investigació sobre els efectes dels glucòsids de Cistanche en el sistema reproductor [J] Western Traditional Chinese Medicine, 2022, 35 (04): 143-146
［21］Zhang Pan, Shi Juan, Liu Li, et al Estudi sobre l'activitat antioxidant dels glucòsids de Cistanche i els seus derivats [J] China Food Additives, 2016, (02): 85-88
［22］Zhang Hao, Zheng Yuling, Ding Hui Progrés de la investigació sobre les vies relacionades del glucòsid de cistanche en el tractament de l'osteoporosi [J] Journal of Tianjin University of Traditional Chinese Medicine, 2022, 41 (04): 531-538
［23］ Dai X, Zhang Q, Yu Z, et al. Els ratolins amb deficiència de Bmi1 presenten infertilitat masculina［J］. Int J Biol Sci, 2018, 14(3): 358-368.
［24］ Yang W, Wu Z, Yang K, et al. BMI1 promou la fibrosi cardíaca en la insuficiència cardíaca induïda per la isquèmia mitjançant la via de senyalització PTEN-PI3K/Akt-mTOR［J］. Am J Physiol Heart Circ Physiol, 2019, 316(1): H61-H69.
［25］ Su Z, Yang Z, Xu Y, et al. Apoptosi, autofàgia, necroptosi i metàstasi del càncer［J］. Mol Cancer, 2015, 14: 48.
