L'expressió Clr-f regula l'homeòstasi immune i metabòlica renal Ⅱ

Lesions tubulars i glomerulars del ronyó en ratolins Clr-f-defcient.

L'examen inicial deClr-fLes seccions de ronyó −/− van revelar diverses alteracions a l'escorça renal. Per a evaluarlesions histopatològiques, Seccions de ronyó tenyides de PASa partir de quatre 12-setmanes d'edat iClr-fEls ratolins -/- es van avaluar de manera cegada (Fig.2A). Es va observar una presència variable de lesions tubulars proximals i distalsClr-f−/− ronyons que incloïen, engreix de cèl·lules epitelials tubulars, desplaçament nuclear i pèrdua de vores de raspall (Fig.2A; panells superiors). En casos rars, es va trobar necrosi tubular en forma d'acumulació de restes necròtiques luminals i pèrdua epitelial completa en algunes de les àrees examinades. ElClr-f−/− ronyons també exhibitspatologies glomerulars(Fig.2A; panells inferiors), amb àrees d'engrossiment focal dels tufs glomerulars, una mínima proliferació de fibroblasts periglomerulars associada a una fibrosi intersticial lleu i lesions més greus amb mesangiòlisi, aneurismes capil·lars que van progressar fins a una interrupció pronunciada dels glomèruls i una presència constant de restes cel·lulars necrotitzants a l'espai de Bowman. . La puntuació de la patologia glomerular va revelar un nombre significatiu delesions glomerularsen ratolins amb deficiència de Clr-f en comparació amb els companys de camada WT (Fig.2B). La microscòpia electrònica va revelar danys greus en podòcits, esborrament del procés del peu podòcit i engrossiment significatiu de lasoterrani glomerularmembrana (GBM) (Fig.2C,D).

Feu clic a cistanche herba per a la malaltia renal

Per avaluar si hi havia dipòsits d'immunoglobulines renals, que s'associen característicament a les patologies observades, hem tingut seccions d'escorça renal de ronyons WT i Clr-f−/− per la presència d'anticossos IgA, IgM i IgG per IF (Fig. 2E). ). Els ronyons Clr-f−/− mostren una clara tinció IF dominant dels dipòsits glomerulars d'IgA acompanyada de dipòsits d'IgM pronunciats i una presència menor però consistent de dipòsits d'IgG. De la mateixa manera, vam detectar patrons similars de dipòsits tubulointersticials d'IgA, IgM i IgG als ronyons Clr-f−/−. La proteïna complementària C3 també es va detectar àmpliament als ronyons Clr-f-/-, però no als ronyons WT (Fig. 2F).

Clr-f és necessari per a una funció renal adequada.

Per avaluar l'impacte de les patologies Clr-f-/- en la funció renal, es va analitzar la composició de la sang i l'orina de 12-mascles d'edat Clr-f-/- i WT companys d'edat. Vam trobar un augment modest, però estadísticament significatiu, de la proporció de proteïnes d'orina i creatinina (UP/CR) en els ratolins Clr f -/- en comparació amb els ratolins WT, amb un augment de la creatinina sèrica, però nivells de proteïna d'orina similars en comparació amb WT. ratolins, així com una excreció fraccional similar de sodi (FENa) (Fig. 2G). Tenint en compte l'expressió tubular de Clr-f, vam avaluar si la pressió arterial del ratolí Clr-f-/- en ratolins Clr-f-/- de 12-setmanes i 24-setmanes d'edat estava afectada. Els ratolins Clr-f-/- van mostrar una disminució marginal, però no estadísticament significativa, de la pressió arterial en comparació amb els companys de camada WT (Fig. 2H). Aquests resultats mostren que la filtració renal normal s'altera en absència de Clr-f, però Clr-f no mostra cap paper significatiu en l'homeòstasi dels electròlits renals o la regulació de la pressió arterial.

El transcriptoma renal Clr-f−/− mostra una desregulació del metabolisme.

Investigar els processos transcripcionals subjacents responsables de Clr-f−/−patofenotips renals, vam realitzar la seqüenciació d'ARN en ronyons de ratolins WT i Clr-f−/− d'una setmana 7-, 13- i 24-. Els gens expressats de manera diferent (DEG) en ratolins Clr-f-/- en comparació amb els ratolins WT es van investigar mitjançant l'anàlisi d'enriquiment funcional i l'anàlisi de patotips transcripcionals (Fig. 3A). Hem mapejat xarxes d'interacció de processos biològics enriquits a partir de l'anàlisi d'enriquiment de conjunts de gens (GSEA) dels DEG identificats a cada edat (Fig. 3B). La nostra anàlisi va mostrar un enriquiment dels gens relacionats amb el cicle cel·lular regulats als ronyons de ratolins Clr-f-/- de 7-setmanes d'edat. A les 13 setmanes, els processos metabòlics, el transport, la mort cel·lular i les respostes a substàncies tòxiques es van enriquir a partir de DEG amb una expressió augmentada en els ronyons Clr-f-/-, mentre que el muntatge de cilis no mòbils, la transcripció d'ADN i el processament es van enriquir a partir de DEG amb disminució de l'expressió. Els ronyons de ratolins Clr-f-/- de 24-setmanes d'edat també van mostrar un enriquiment dels processos metabòlics i el transport entre els DEG amb una expressió augmentada, així com processos que regulencirculació de la sang, mentre que els processos de regulació de la senyalització de la mort cel·lular, la immunitat i el factor de creixement transformant beta (TGF) es van enriquir a partir de DEG amb una expressió reduïda.

Per capturar els processos associats a l'edat que subjauen als defectes renals Clr-f−/−, es van analitzar gens pertanyents a quatre patrons dinàmics d'expressió diferencial: DEG que augmenten amb l'edat, disminueixen amb l'edat o augmenten o disminueixen de manera transitòria a les 13 setmanes d'edat. L'anàlisi d'enriquiment funcional dels processos biològics, les funcions moleculars i les vies definides entre aquests grups va revelar que els DEG amb una expressió creixent de 7 a 24 setmanes d'edat als ronyons Clr-f-/- estaven sobrerepresentats en les vies metabòliques dels lípids, mentre que els DEG relacionats amb les cèl·lules. l'adhesió al substrat va disminuir en l'expressió de les 7 a les 24 setmanes d'edat (Fig. 3C). Els DEG amb un augment transitori de l'expressió a les 13 setmanes d'edat es van associar principalment amb la respiració mitocondrial, mentre que els DEG amb una disminució transitòria de l'expressió mapejades a les vies del cicle cel·lular. Dins d'aquestes quatre categories d'expressió dinàmica hi havia tres subgrups que representen patrons d'expressió diferencials en els quals la magnitud del canvi en l'expressió entre les 7 i les 13 setmanes era similar, superior o inferior al grau de canvi entre les 13 i les 24 setmanes d'edat. , respectivament (Fig. 3C). Els processos biològics enriquits i les funcions moleculars de cada subgrup de gens eren en gran mesura diferents en els quatre patrons d'expressió dinàmics principals identificats, però reflectien processos cel·lulars relacionats o superposats dins de cada grup. En general, el perfil transcripcional dels ronyons Clr-f−/− revela una desregulació dinàmica i en evolució del metabolisme cel·lular, la funció i l'homeòstasi.

Els ratolins Clr-f-/- acumulen greix.

L'augment identificat associat a l'edat dels DEG relacionats amb el metabolisme dels lípids ens va portar a investigar dades d'expressió de ratolins WT i Clr-f-/- per a gens coneguts associats a lípids. La majoria d'aquestes transcripcions gèniques estaven elevades en ratolins Clr-f-/- (Fig. 4A) i s'alineaven amb augments dels dipòsits adiposos abdominals i perirrenals en ratolins Clr-f-/- a les 24 setmanes d'edat (Fig. 4B). Tot i que els ratolins Clr-f-/- i WT presentaven pes corporals similars (Fig. 4C), el pes de l'adip abdominal en els ratolins Clr-f-/- va ser significativament més gran, cosa que indica que el teixit adipós representava una proporció més gran de Clr-f. −/− pes corporal del ratolí (Fig. 4D). També vam detectar l'acumulació de lípids ectòpics dins dels ronyons de ratolins Clr-f-/-, com ho demostra l'augment de la tinció d'ORO dels ronyons de ratolí Clr f -/- (Fig. 4E). Com que el greix perirenal i la presència de greix intersticial al ronyó s'associen amb factors de risc metabòlic de CKD21, vam plantejar la hipòtesi de si Clr-f és protector contraetiologies de la diabetisotrastorns metabòlics relacionatsassociat ambCKD.

Els ronyons de ratolí Clr-f−/− tenen similituds i diferències de perfil transcripcional amb la malaltia renal humana.

L'acumulació de lípids ectòpics al ronyó s'associa amb infamació, fibrosi, disfunció mitocondrial i mort cel·lular22,23. Per avaluar si els ronyons Clr-f-/- s'assemblen a malalties renals definides, vam comparar el perfil transcripcional dels ronyons Clr-f-/- amb els perfils d'expressió publicats de teixit renal i/o sang dedonants humans amb ERC, nefropatia diabètica(DN), nefritis lúpica (LN) oNefropatia IgA(IgAN) (Fig. 5A). Clr-f-/- perfils transcripcionals renals agrupats amb sang de pacients amb IgAN i teixit glomerular de pacients amb DN (Fig. 5B). La comparació dels perfils d'expressió de pacients Clr-f−/− i IgAN mitjançant l'anàlisi d'enriquiment funcional va mostrar augments paral·lels en l'expressió gènica relacionades amb les respostes d'òxids reactius cel·lulars, la mort cel·lular, la proteòlisi i el metabolisme de les amides, així com disminucions compartides de l'expressió gènica associada a la membrana. processos de tràfic, organització del citoesquelet, senyalització PI3K-AKT, cicle cel·lular i metabolisme d'ADN/ARN (Fig. 5C). Per contra, els conjunts d'expressió renal Clr-f−/− diferien d'IgAN, amb una expressió augmentada de gens pertanyents a les vies de senyalització AGE-RAGE, ErbB, TNF/MAPK i Rap1, i processos de reabsorció d'aigua regulada per vasopressina i activitat lisosoma. i la disminució de l'expressió dels gens pertanyia a la unió adherent, a l'assemblatge del cili no mòbil, al cicle cel·lular, al metabolisme de l'ADN i a la senyalització de TGF. Aquestes troballes suggereixen que, de manera similar a l'IgAN, els processos cel·lulars de control del creixement, homeòstasi i reparació també estan desregulats en els ronyons Clr-f-/-, mentre que s'alteren el metabolisme, la senyalització d'estrès iestructura epiteliali la funció són exclusives dels ronyons Clr-f−/−.

Els ronyons deficients en Clr-f presenten infamació i infiltració de cèl·lules immunitàries.

Tenint en compte els rols immunomoduladors coneguts de les proteïnes Clr, vam examinar la contribució de les cèl·lules immunitàries aClr-f−/− patologia renal. Hem analitzat la composició de cèl·lules immunitàries dels ronyons sencers del ratolí 12-WT i Clr-f-/- d'una setmana d'edat mitjançant citometria de flux. La nostra anàlisi va revelar un augment significatiu del nombre de neutròfils, cèl·lules T i cèl·lules B, però no hi ha cap diferència en el nombre de cèl·lules NK renals, ILC o macròfags (Fig. 6A). L'anàlisi de la distribució periglomerular de les cèl·lules immunitàries dins de l'escorça renal dels ronyons WT i Clr-f-/- per IF, vam observar acumulacions glomerulars de cèl·lules CD45+ (Fig. 6B). L'etiquetatge de CD11c, F4/80, NKp46 i CD3, marcadors indicatius de DC, macròfags, NK/ILC i cèl·lules T respectivament, va revelar una acumulació intraglomerular de cèl·lules CD11c+ (Fig. 6C) i acumulacions periglomerulars de F4/{{ 16}}, cèl·lules NKp46+ i CD3+ als ronyons Clr-f−/− (Fig. 6D). La quantificació visual de les poblacions de cèl·lules immunitàries detectades als glomèruls va confirmar un augment significatiu de la presència de cadascuna d'aquestes poblacions de cèl·lules immunitàries als ronyons de ratolins Clr-f-/- en comparació amb els ratolins WT (Fi. 6E). L'infiltrat immune en la malaltia renal autoimmune es veu millorat per la secreció tubular d'IL-12 provocant lesions per les cèl·lules secretores d'IFN24-26. Per tant, vam examinar els ronyons WT i Clr-f-/- per detectar la presència d'aquestes citocines i vam observar la tinció tant d'IL-12 com d'IFN a les cèl·lules del tubulointerstici renal Clr-f-/- (Fig. 6F, G).

Com que es planteja que Clr-f és un senyal de salut cel·lular per a les cèl·lules que expressen NKR-P1G, vam plantejar la hipòtesi que la infiltració immune renal als ratolins Clr-f-/- es deu en part a una major presència de limfòcits que expressen NKR-P1G. al ronyó. L'anàlisi de l'expressió de NKR-P1G en cèl·lules TCR + T renals i NK1.1+ Cèl·lules NK en ratolins WT i Clr f -/- mitjançant citometria de flux no va mostrar cap diferència en la intensitat mitjana de fluorescència de la tinció de NKR-P1G en NK renal. cèl·lules, però un augment de la tinció de NKR-P1G de cèl·lules T renals en ratolins Clr-f-/- (Fig. 6H)

Figura 5. Comparació entre perfils transcripcionals de ratolins Clr-f−/− i ERC humans. (A) Taula de conjunts de dades del perfil d'expressió gènica de 15 trastorns renals humans enfront de ratolins Clr-f-/- de 13-setmanes. La font de referència per a les fonts del conjunt de dades del perfil d'expressió humana s'indica a la columna Estudi. (B) Matriu de similitud que mostra l'agrupació jeràrquica dels perfils diferencials d'expressió gènica al panell (A). La línia discontínua vermella dins del dendrograma indica el nivell de separació de clúster matricial. (C) Comparació de 4531 DEG (Log2 FC; Padj.<0.05) of 13-week-old Clr-f−/− mice (group 0) and IgAN patients. Gene set enrichment from 4 DEG clusters: (I) upregulated in both Clr-f−/− mice and IgAN patients, (II) upregulated in Clr-f−/− mice and downregulated IgAN patients, (III) downregulated in Clr-f−/− mice, and upregulated IgAN patients, and (IV) downregulated in both Clr-f−/− mice and IgAN patients. Heat maps were constructed using Morpheus (https://sofware.broadinstitute. org/morpheus).

La deficiència de Clr-f dóna lloc a una autoimmunitat i patogènesi independents de T i B. Per aclarir la contribució immune a la patologia renal dels ratolins Clr-f-/-, vam examinar els ratolins Clr-f-/- que també eren deficients en cèl·lules T i B, utilitzant la soca de ratolí deficient Rag1- (Rag1−/−Clr-f−/−). Com que els ratolins Rag1-/-Clr-f-/- no tenen anticossos, podríem avaluar la patogènesi associada a Clr-f en absència de deposició d'immunoglobulines. L'anàlisi dels ronyons Rag1-/-Clr-f-/- va revelar lesions glomerulars indicatives de glomerulopatia proliferativa lleu i àrees de fibrosi glomerular (Fig. 7A). La puntuació de la patologia glomerular va mostrar un nombre significativament més gran de glomèruls amb lesions en els ratolins Rag1-/-Clr-f-/- en comparació amb els ratolins Rag1-/- (Fig. 7B). La puntuació de les seccions de ronyó Rag1−/−Clr-f−/− va identificar augments de la proliferació endocapilar, creixents, glomeruloesclerosi o esclerosi segmentària focal i fibrosi intersticial i atròfia tubular, amb un augment significatiu de la presència de cel·lularitat mesangial (Fig. 7C). .

Per avaluar la contribució de les cèl·lules T i B a l'acumulació de lípids observada en ratolins Clr-f-/-, vam mesurar el pes corporal total i el pes adipós abdominal en Rag1-/-Clr-f-/- en relació amb els ratolins Rag1-/-. El pes corporal de Te Rag1-/-Clr-f-/- va ser significativament menor que els controls Rag1-/- (Fig. 7D), mentre que el pes dels lípids abdominals va augmentar significativament (Fig. 7E), encara que en menor mesura que l'observat a Els ratolins Clr-f-/- en comparació amb els ratolins WT (174 mg de greix guanyat enfront de 274 mg de mitjana).

Finalment, per investigar els contribuents immunitaris a aquests defectes renals, vam examinar els ronyons Rag1-/-Clr-f-/- per detectar la presència d'IL-12 i IFN i cèl·lules immunitàries infiltrants renals. L'anàlisi IF dels ronyons Rag1-/-Clr-f-/- va revelar una major presència d'IL -12 i IFN (Fig. 7F, G). També vam observar una acumulació periglomerular extensa de cèl·lules CD45+ als ronyons Rag1-/-Clr-f-/- (Fig. 7H), que es va trobar que consistia en CD11c+, F4/80+ i Nkp46+ cel·les. Aquests descobriments suggereixen que els mecanismes independents de les cèl·lules T i B són els mediadors primaris de la patologia renal en ratolins deficients per a Clr-f.

Servei de suport de Wecistanche: el major exportador de cistanche a la Xina:

Correu electrònic:wallence.suen@wecistanche.com

WhatsApp/Tel:+86 15292862950}

Compreu per obtenir més detalls de les especificacions:

https://www.xjcistanche.com/cistanche-shop

ACONSEGUIR EXTRACTE DE CISTANCHE ORGANIC NATURAL AMB 25% ECHINACOSIDE I 9% ACTEOSIDE PER A LA INFECCIÓ RENOLÓ