L'equinacòsid afavoreix la proliferació de cèl·lules epitelials tubulars renals humanes bloquejant la via de senyalització NF-κB mediada per HBX/TREM2

Contacte: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 Correu electrònic:audrey.hu@wecistanche.com

YuFan ZHanG, QinFanG Wu, liMin ZHonG, donGWei GnG

Resum.

La proteïna X del virus de l'hepatitis B (HBX) és necessària per a la replicació del VHB i té un paper en la progressió de l'hepatitis en humans. Tanmateix, es desconeix la funció subjacent de l'HBX durant la glomerulonefritis crònica induïda pel VHB (VHB-Gn). (echinacòsid de cistanche)(ecH) és un glucòsid feniletanoide del gènere Cistanche, que posseeix una forta activitat antiapoptosi i neuroprotectora. en el present estudi, es va explorar la funció de l'HBX i la relació entre HBX i ecH a les cèl·lules epitelials tubulars renals humanes (rTecs; línia cel·lular HK-2). Es van utilitzar anàlisis quantitatives de transcripció inversa de Pcr i Western blot per quantificar els nivells d'expressió d'ARNm i proteïnes d'HBX a les cèl·lules HK-2, respectivament. Es va realitzar l'assaig del kit de recompte de cèl·lules-8 per analitzar la proliferació cel·lular. Es va utilitzar l'anàlisi de citometria de flux per determinar la taxa d'apoptosi. L'HBX va mostrar efectes antiproliferatius i proapoptòtics a les cèl·lules HK-2 i es va associar positivament amb el receptor activador expressat a l'expressió de la cèl·lula mieloide 2 (TreM2). A més, l'ECH va interrompre la funció de l'HBX a les cèl·lules HK-2, funcionant com a supressor d'HBX. A més, es va utilitzar un inhibidor específic de NF-κB, PdTc, per examinar més a fons la relació entre HBX i nF-κB. Els resultats van suggerir que nF-κB estava implicat en la via de senyalització HBX/TreM2 i l'expressió TreM2 regulada negativament en RTECS. El present estudi va proporcionar nous coneixements sobre la funció de l'HBX i també va indicar el valor potencial de l'ECH com a agent terapèutic per al HBV-Gn.

Introducció

El virus de l'hepatitis B (VHB) és un virus Hepadnaviridae, que provoca hepatitis aguda i crònica en humans (1). El VHB no només causa una infecció persistent o transitòria al fetge, sinó que també infecta el teixit extrahepàtic, inclòs el pàncrees, el conducte biliar, el sistema limfoide i els ronyons (2). A més, la infecció per VHB està estretament associada a la glomerulonefritis crònica (VHB-Gn); tanmateix, els mecanismes moleculars del VHB durant el VHB-Gn no s'entenen completament (3,4).

La proteïna reguladora del virus de l'hepatitis B X (HBX) del VHB és necessària per a la replicació del VHB (5,6). diversos estudis han informat que l'HBX promou la proliferació cel·lular durant l'hepatocarcinoma associat a la infecció per VHB (7-9). Les cèl·lules epitelials tubulars renals humanes (rTecs) són una part important de l'interstici tubular renal i tenen un paper actiu en la inflamació renal (10). L'apoptosi rTec està estretament associada a la disfunció de l'interstici tubular, que posteriorment condueix a la progressió del VHB-Gn (10). L'HBX s'expressa principalment a les cèl·lules rTec i causa apoptosi rTec i lesions del tub renal en pacients amb HBV-Gn (11, 12). A més, s'ha informat que HBX suprimeix la proliferació de rTecs de rata (13), i la sobreexpressió d'HBX accelera la progressió del cicle cel·lular de la fase G1 a la fase S en les rTecs primàries, donant lloc a l'aturada del cicle cel·lular a la fase S (14). Per tant, identificar un inhibidor de l'HBX pot proporcionar una nova terapèutica per al VHB-Gn. Tanmateix, la xarxa molecular precisa de l'HBX en els rTecs humans no s'entén completament.(echinacòsid de cistanche)(ecH) és un compost natural extret deCistancheplantes, que mostra efectes antiapoptòtics i antiinflamatoris (15,16). Un estudi anterior va informar que ecH indueix la proliferació i prevé l'apoptosi de les cèl·lules epitelials intestinals (17). A més, s'ha informat que ecH accelera la regeneració òssia augmentant la proliferació de cèl·lules osteoblasts (18). ecH també pot disminuir la replicació del VHB, l'expressió d'antigen i la inflamació a les cèl·lules epitelials intestinals de rata (16, 19). Tanmateix, l'efecte biològic de l'ecH sobre rTecs no s'ha dilucidat del tot.

La sobreexpressió de TreM2 va promoure la proliferació de cèl·lules de glioma (22). Per contra, la derrota de TreM2 disminueix la translocació de nF-κB al nucli de les cèl·lules degeneratives del nucli pulposus humà (23). A més, TreM2 s'ha identificat com un nou objectiu terapèutic per a la degeneració del disc intervertebral humà (23). Tanmateix, no s'ha informat de la funció biològica de TreM2 en rTecs humans. en el present estudi, es va induir la sobreexpressió d'HBX (oeHBX) en rTecs humans (línia cel·lular HK-2) ​​i, posteriorment, l'efecte de ecH (echinacòsid de cistanche) sobre cèl·lules oeHBX transfectades es va investigar. L'objectiu del present estudi va ser investigar les funcions de l'HBX i el valor potencial de l'ecH com a agent terapèutic eficaç per al HBV-Gn.

Materials i mètodes

Cèl·lula cultura.La línia cel·lular rTec humana HK-2 es va comprar a Shanghai Yaji Biotechnology co., Ltd. Les cèl·lules HK-2 es van cultivar en medis DME/F12 (núm. cat. SH30023.01B; Hyclone; cytiva) complementat amb sèrum boví fetal al 10 per cent (núm. cat. 16000-044; Gibco; Thermo Fisher Scientific, inc. .), 2 mM de l-glutamina i 1% de penicil·lina/estreptomicina (núm. cat. P1400-100; Beijing Solarbio Science & Technology co., Ltd.) a 37˚C amb un 5% de CO2.

ARN aïllament i revés transcripció-quantitativa PCR (RT-qPCR).L'ARN total es va extreure de cèl·lules HK-2 mitjançant Trizol® (núm. cat. 1596 -026; Invitrogen; Thermo Fisher Scientific, inc.), segons el protocol del fabricant. L'ARN total es va transcriure inversament a ADNc mitjançant el kit de síntesi d'ADNc de primera cadena segons el protocol del fabricant (núm. cat. K1622; Thermo Fisher Scientific, Inc.). La qPCR es va realitzar mitjançant la premescla SYBr-Green segons el protocol del fabricant (núm. cat. K0223; Thermo Fisher Scientific, Inc.) en un detector en temps real ABI-7300 (Applied Biosystems; Thermo Fisher Scientific, Inc.). Les condicions de la PCR eren: 95 °C durant 10 min seguits de 40 cicles de 95 °C durant 15 segons, 60 °C durant 45 segons. Es van necessitar tres repeticions per a cada reacció. Es van utilitzar els següents parells d'imprimadors per a la qPCR: HBX endavant, 5'-GGcTGcTaGGTTGTacTG-3' i invers, 5'-caGaGGTGaaGcGaaGTG -3'; TreM2 endavant, 5'-TGGcacTcTcaccaTTacG-3' i enrere, 5'-ccTccc aTcaTcTTccTTcac-3'; i GaPdH cap endavant, 5'-AAT cccaTcaccaTcTTc-3' i cap enrere, 5'-aGGcTGTTG TcaTacTTc-3'. Els nivells d'ARNm es van quantificar mitjançant el mètode 2-ΔΔCq i es van normalitzar al gen de referència internaGAPDH (24).

Sobreexpressió i enderrocar.Per induir la sobreexpressió d'HBX i TreM2, les seqüències d'ADNc HBX o TreM2 de longitud completa es van inserir al vector plVX-puro (laboratoris cleantech, inc.) per doble digestió (Hindiii iEcoRI). Posteriorment, el plasmidi recombinat (1,5 µg) es va transfectar a cèl·lules HK-2 (2x105). El plasmidi simulat (un vector buit, 1 µg) es va transfectar de manera transitòria a cèl·lules HK-2 (2x105) com a control negatiu (oenc) mitjançant lipofectamine® 2000 (núm. cat. 11668-027, Invitrogen, Thermo Fisher Scientific, inc.). ecH(echinacòsid de cistanche)(núm. cat. 82854-37-3; Biopurify Phytochemicals, ltd.) es va dissoldre en DMSO (núm. cat. d2650; Sigma-Aldrich; Merck KGaa) a la concentració d'1, 2,5, 5, 10, 20 i

50 mg/l respectivament; i s'afegeix al cultiu de cèl·lules oeHBX o oeTreM2 transfectades. L'experimentació posterior va començar 48 h després.

Per eliminar l'expressió de TreM2, es van sintetitzar tres petits (si) ARN interferents (siTreM2-1, siTreM2-2 i siTreM2-3; 20 µM) dirigits a TreM2 (Shanghai Majorbio Bio-Pharm Technology co .ltd.) i posteriorment es va transfectar a cèl·lules HK-2 (2x105) mitjançant lipofectamine® 2000 segons el protocol del fabricant (Invitrogen; Thermo Fisher Scientific, Inc.). Com a control negatiu es va utilitzar una seqüència siRNA remenada no específica (5'uucuccGaacGuGucacGu3, 25 nM) control negatiu (nc). El lloc i les seqüències objectiu de les sirnas TreM2 es proporcionen a la taula Si. L'experimentació posterior es va realitzar 48 h després.

Occidental borrar.La proteïna total es va extreure de cèl·lules HK-2

utilitzant el tampó de lisi RIPA (núm. cat. BYl40825; Jrdun Biotech Co., Ltd.). La proteïna total es va quantificar mitjançant el kit d'assaig d'àcid bicinchonínic (núm. cat. PICPI23223; Thermo Fisher Scientific, inc.) segons el protocol del fabricant i es van separar 20 µg de proteïna/carril mitjançant SDS-PaGe en un gel al 15%. La densitometria de les mostres es va determinar mitjançant un lector de microplaques (dnM-9602, Pulangxin). Posteriorment, les proteïnes separades es van transferir a una membrana de PVDF. Després del bloqueig amb un 5% de llet seca sense greix durant 1 h a temperatura ambient, la membrana es va incubar amb anticossos primaris (taula SII) a 4 °C durant la nit i es va tornar a incubar amb l'anticossos secundaris anti-ratolí igG (1: 1, 000, cat. núm. a0216, Beyotime Institute of Biotechnology) durant 1 h a 37˚C. Les bandes de proteïnes immunoreactives es van visualitzar mitjançant un sistema ecl (cytiva). Les taques es van realitzar per triplicat.GAPDHi H3 es van utilitzar com a controls de càrrega de proteïnes citoplasmàtiques i nuclears, respectivament.

Resultats

ECH (echinacòsid de cistanche)suprimeix la funció de HBX en HK-2 cèl · lules.Per avaluar

la funció d'HBX, la sobreexpressió d'HBX es va induir a les cèl·lules HK-2. Els nivells relatius de mrna i proteïnes d'HBX es van regular significativament a les cèl·lules oeHBX en comparació amb les cèl·lules oenc (Fig. 1a i B). Posteriorment, es van cultivar cèl·lules oeHBX amb diferents concentracions d'ecH (1, 2,5, 5, 10, 20 i 50 mg/l; e1, e2,5, e5, e10, e20 i e50, respectivament). La sobreexpressió d'HBX va reduir significativament la proliferació de cèl·lules HK-2, i aquesta disminució es va revertir per ecH de manera dependent de la dosi a les 24 i 48 h (Fig. 1c).

A més, la taxa de proliferació de cèl·lules oeHBX no mostrava cap diferència significativa en comparació amb les cèl·lules tractades amb E1 (Fig. 1c). Per contra, el tractament amb e10 va augmentar significativament la taxa de proliferació de cèl·lules oeHBX en comparació amb el tractament amb E20 i E50, que no presentava cap diferència significativa (Fig. 1c). Per tant, es va examinar l'efecte de ecH sobre l'apoptosi a les cèl·lules tractades amb e2,5, e5 i e{9}}. La sobreexpressió d'HBX va augmentar significativament l'apoptosi de les cèl·lules HK-2 i la taxa d'apoptosi de les cèl·lules oeHBX va disminuir amb el tractament amb ecH de manera dependent de la dosi (Fig. 1d). en general, els resultats van suggerir que ecH va inhibir la funció de l'HBX a les cèl·lules HK-2 d'una manera dependent de la dosi.

TREM2 expressió és inhibit per ECH(echinacòsid de cistanche) en transfectat oeHBX

cèl · lules.Es van utilitzar rT-qPcr i western blotting per examinar els nivells relatius de mrna i d'expressió de proteïnes de TreM2 a les cèl·lules oeHBX, respectivament. TreM2 mrna i els nivells d'expressió de proteïnes es van regular significativament a les cèl·lules oeHBX en comparació amb les cèl·lules oenc (Fig. 2a i B). Tanmateix, ecH va disminuir els nivells d'expressió de TreM2 a les cèl·lules oeHBX transfectades de manera dependent de la dosi (Fig. 2a i B). Per tant, els resultats van suggerir que l'expressió HBX estava associada positivament amb l'expressió TreM2 i, a més, van indicar l'efecte supressor de ecH sobre HBX a les cèl·lules HK-2.

Enderrocar i sobreexpressió de TREM2 en HK-2 cèl · lules.Per avaluar encara més la funció de TreM2, es van induir la derrota i la sobreexpressió de TreM2 a les cèl·lules HK-2 mitjançant la interferència de rna i un vector lentiviral, respectivament. Per a l'assaig d'eliminació, tres siRNA dirigits al gen humàTREM2(siTreM2-1, siTreM2-2 i siTreM2-3) es van transfectar a cèl·lules HK-2 i es va utilitzar un siRNA no específic com a control negatiu (sinc). les tres sirnas TreM2 van eliminar amb èxit l'expressió endògena de TreM2 a les cèl·lules HK -2 (Fig. 3a i B). Tanmateix, els nivells relatius més baixos de mrna i d'expressió de proteïnes de TreM2 es van observar a les cèl·lules transfectades siTreM2-1 i siTreM2-2-(Fig. 3a i B), per tant, siTreM2-1 i siTreM{{13 }}les cèl·lules transfectades es van escollir per a l'experimentació posterior. Per als experiments de sobreexpressió, es va construir un plasmidi que contenia la seqüència de TreM2cdna humana de longitud completa i es va transfectar posteriorment a cèl·lules HK-2 (oeTreM2). a

plasmidi simulat va servir com a control negatiu (oenc). El nivell d'expressió de TREM2 va augmentar significativament a les cèl·lules oeTREM2 en comparació amb les cèl·lules oenc (Fig. 3c i d). Per tant, es van utilitzar cèl·lules oeTreM2 per a l'experimentació posterior.

TREM2 silenciant disminueix el apoptosi de oeHBX cèl · lules.Es va avaluar el perfil d'apoptosi de cèl·lules oeHBX transfectades amb siTREM2 o sinc. La taxa d'apoptosi de les cèl·lules oeHBX més sinc va ser significativament més alta en comparació amb les cèl·lules obertes. Tanmateix, la taxa d'apoptosi es va reduir significativament a les cèl·lules oeHBX més siTreM2-1 o siTreM2-2 en comparació amb les cèl·lules oeHBX més sinc (figura 4a). Els resultats van suggerir que la derrota de TreM2 va inhibir la funció de l'HBX durant l'apoptosi de cèl·lules HK-2.

Survivin pertany a l'inhibidor d'una família de proteïnes d'apoptosi, que inhibeix l'activitat apoptòtica i suprimeix la mort cel·lular (25). L'orientació a Survivin s'ha identificat com un nou enfocament per al tractament del carcinoma de cèl·lules renals (26). nF-κB també és un inhibidor de l'apoptosi que juga un paper en els processos tumorals antiapoptòtics (27). A més, l'activació de la caspasa3 està estretament associada amb l'apoptosi (28). en el present estudi, es va quantificar el contingut de proteïnes de TreM2, Survivin i caspase3 escindida a les cèl·lules HK-2. El nivell d'expressió TREM2 es va reduir significativament a les cèl·lules oeHBX més siTreM2-1/2 en comparació amb les cèl·lules oeHBX més sinc (figura 4B). El nivell d'expressió de Survivin va augmentar significativament a les cèl·lules oeHBX més siTreM2-1/2 en comparació amb les cèl·lules oeHBX. a més, el nivell d'expressió de caspasa3 escindida va disminuir significativament a les cèl·lules oeHBX més siTreM2-1/2 en comparació amb les cèl·lules oeHBX més sinc (figura 4B). A més, oeHBX va disminuir significativament la translocació de NF-κB al nucli, i la transfecció de siTREM2-1/2 va augmentar significativament la translocació nuclear de nF-κB (Fig. 4B). En conjunt, els resultats van suggerir que TreM2 era un factor aigües avall de l'HBX a les cèl·lules HK-2, per tant, HBX podria promoure l'apoptosi regulant l'expressió de TreM2 en rTecs humans.

TREM2 sobreexpressió suprimeix el translocació deNF-κB a el nucli en HK-2 cèl · lules.L'efecte de ecH(echinacòsid de cistanche)es va analitzar en cèl·lules transfectades2-oeTreM. La sobreexpressió de TreM2 va promoure l'apoptosi de les cèl·lules HK-2 (Fig. 5a). L'apoptosi de les cèl·lules oeTREM2 es va reduir significativament amb el tractament amb ECH (E10; Fig. 5A). A més, ECH va disminuir significativament l'expressió de TreM2 a les cèl·lules oeTreM2. La sobreexpressió de TREM2 va disminuir significativament els nivells d'expressió de Survivin, però, aquesta disminució de l'expressió es va revertir per ecH. a més, els nivells d'expressió de proteïnes de la caspasa3 escindida es van incrementar significativament a les cèl·lules oeTreM2 en comparació amb les cèl·lules oenc; un efecte que es va reduir significativament pel tractament amb ECH. A més, ecH va promoure la translocació de nF-κB al nucli de les cèl·lules oeTreM2 (Fig. 5B). En conjunt, els resultats van indicar que ecH també va suprimir la funció de TreM2 a les cèl·lules rTec humanes.

Funcions HBX són suprimit per el NF-κB inhibidor PDTCen humà RTEC.Per avaluar més la relació entre

Les cèl·lules HBX i nF-κB, HK-2 es van cultivar amb un inhibidor específic de nF-κB, PdTc (10 µmol/l; P10). La taxa d'apoptosi cel·lular de les cèl·lules oeHBX va augmentar significativament en comparació amb les cèl·lules oenc (Fig. 6a). Tanmateix, les cèl·lules oeHBX més PdTc van mostrar una taxa d'apoptosi significativament augmentada en comparació amb les cèl·lules oeHBX. A més, els nivells relatius d'ARNm i d'expressió de proteïnes de TreM2 han disminuït en les cèl·lules oeHBX més PdTc en comparació amb les cèl·lules oeHBX (Fig. 6B). Per tant, els resultats

va suggerir que nF-κB regulava negativament l'expressió TreM2 a les cèl·lules transfectades amb oeHBX.

NF-κB inhibidor PDTC suprimeix TREM2 promotor activitat en oeHBX cèl · lules.es va construir un reporter de luciferasa (pGl3-enhancer-luc2) que contenia la seqüència promotora de tipus salvatge de TreM2 (pGl{3-enhancer-luc2-pTreM2) i posteriorment es va transfectar a oenc , oeHBX i oeHBX més cèl·lules cultivades P10.

L'activitat luciferasa del vector reporter que conté el promotor TREM2 de tipus salvatge va augmentar significativament a les cèl·lules oeHBX en comparació amb les cèl·lules oenc. Tanmateix, PdTc va suprimir significativament l'activitat luciferasa del reporter a les cèl·lules oeHBX (Fig. 7). en general, els resultats van indicar que PdTc va inhibir la transcripció de TreM2 suprimint l'activitat promotora de TreM2 a les cèl·lules oeHBX.

Discussió

L'HBX s'expressa principalment en rTecs de pacients amb HBV-Gn i funciona com a determinant de la patogènesi viral (11,29). Per tant, augmentar el coneixement de la funció de la xarxa de molècules HBX és un pas crític per desenvolupar un nou enfocament per al tractament del HBV-Gn. L'objectiu del present estudi era examinar més la funció de l'HBX i explorar la seva xarxa molecular potencial en rTecs humans.

HBX inhibeix la proliferació de rTecs (11). en el present estudi, es van identificar les funcions antiproliferació i pro-apoptosi de HBX en RTEC humans, cosa que suggereix que HBX va suprimir el desenvolupament de rTecs humans. Un estudi anterior va indicar que ecH(echinacòsid de cistanche)inhibeix la replicació del VHB i l'expressió d'antigen (19). en el present estudi, ecH(echinacòsid de cistanche)El tractament va alterar la funció de l'HBX a les cèl·lules HK-2, per tant, l'HBX pot veure's afectat per ecH a les cèl·lules HK-2.

INFORMES DE MEDICINA MOLECULAR 22: 1137-1144, 2020 1143

A més, els resultats van suggerir que ecH(echinacòsid de cistanche)pot servir com a agent terapèutic potencial per al VHB-Gn.

TreM2 és un receptor immune innat que juga un paper en la resposta inflamatòria (30). En el present estudi, l'expressió HBX es va associar positivament amb l'expressió TreM2 en RTECS humans. A més, la derrota de TREM2 va disminuir significativament la taxa d'apoptosi de les cèl·lules oeHBX i ecH(echinacòsid de cistanche)El tractament va reduir l'efecte d'oeTreM2 sobre l'apoptosi cel·lular. En conjunt, aquests resultats van suggerir que TreM2 estava dirigit per HBX a les cèl·lules HK-2. Per tant, ecH(echinacòsid de cistanche)pot inhibir l'apoptosi dels rTecs humans bloquejant l'activitat de la via de senyalització HBX/TreM2.

Un informe anterior va demostrar que nF-κB no només té un paper en l'apoptosi cel·lular, sinó que també està implicat en la regulació de les respostes immunitàries i la inflamació (31). A més, TreM2 està mediat pel microRNA sensible a nF-κB-34a durant la malaltia d'Alzheimer i la degeneració macular (32,33). en el present estudi, la taxa d'apoptòtica de les cèl·lules oeHBX va augmentar significativament en presència de PdTc. Segons el que sabem, el present estudi va suggerir per primera vegada que l'inhibidor de NF-κB PdTc va suprimir l'activitat promotora de TreM2. A més, els resultats van suggerir que TreM2 va regular negativament la translocació de nF-κB al nucli de les cèl·lules HK-2, però es va associar positivament amb els nivells d'expressió de caspasa3 escindits. TreM2 va tenir un paper oposat a les cèl·lules HK-2 al seu paper en el nucli pulposus degeneratiu humà i les cèl·lules del glioma (22,23). Per tant, el present estudi va suggerir que TreM2 podria tenir diferents funcions en diferents tipus de cèl·lules humanes.

En conjunt, el present estudi no només va indicar que nF-κB era un nou component de la via de senyalització HBX/TreM2, sinó que també va suggerir que nF-κB regula negativament l'expressió de TreM2 en rTecs humans. Tanmateix, les principals limitacions del present estudi van ser la manca deen viuexperiments i dades clíniques. Per tant, més enllàen viui es requereixen estudis clínics per confirmar les conclusions del present estudi.

en el present estudi, la funció de ecH(echinacòsid de cistanche)es va investigar i els resultats van suggerir els efectes potencials de l'ecH(echinacòsid de cistanche)sobre les vies de senyalització en rTecs humans. A més, el present estudi va millorar el coneixement existent de la funció biològica de ecH a les cèl·lules rTec humanes i també va suggerir el seu potencial com a agent terapèutic nou per al VHB-Gn.

Referències

1. Karayiannis P: Virus de l'hepatitis B: virologia, biologia molecular, cicle de vida i propagació intrahepàtica. Hepatologia internacional 11: 1-9, 2017.

2. Seeger c i Mason WS: biologia del virus de l'hepatitis B. Microbiol Mol Biol rev 64: 51-68, 2000.

3. Usama e, ana Maria S, W ray K i Fervenza Fc: Tractament de la nefropatia associada al virus de l'hepatitis B. nephron clin Pract 119: c41-c49, 2011.

4. Zhang Y, li J, Peng W, Yu G, Wang l, chen J i Zheng F: Glomerulonefritis aguda postinfecciosa associada al VHB: un informe de 10 casos. PloS one 11: e0160626, 2016.

5. Slagle Bl i Bouchard MJ: Hepatitis B Virus X i regulació de l'expressió gènica viral. Cold Spring Harb Perspect Med 6: a021402, 2016.

6. Guerrieri F, Belloni l , d'andrea d, Pediconi n, le Pera l , Testoni B, Scisciani c, Floriot o, Zoulim F, Tramontano a,et al: Identificació a tot el genoma de dianes genòmiques directes d'HBx. BMc genomics 18: 184, 2017.

7. Shi T, Hua Q, Ma Z i lv Q: la regulació a la baixa de mir-200a-3p induïda per la proteïna X del virus de l'hepatitis B (HBx) promou la proliferació cel·lular i la invasió en la infecció associada a VHB hepatocarcinoma. Pathol res Pract 213: 1464-1469, 2017.

8. Tian Y, Xiao X, Gong X, Peng F, Xu Y, Jiang Y i Gong G: HBx afavoreix la proliferació cel·lular pertorbant la conversa entre mir-181a i PTen. Ciència rep 7: 40089, 2017.

9. Idris Me, Hachem H, Koering c, Merle P, Thénoz M, Montreux F i Wattel e: HBx desencadena la senescència cel·lular o la proliferació cel·lular segons el fenotip cel·lular. J Viral Hepat 23: 130-138, 2016.

10. Wang X, Wang l, Zhu n, Zhou Y, Gu lJ i Yuan WJ: la proteïna X del virus de l'hepatitis B modula les respostes de cèl·lules T i macròfags induïdes per cèl·lules epitelials tubulars renals. Immunol cell Biol 94: 266-273, 2016.

11. He P, Zhang d, li H, Yang X, li d, Zhai Y, Ma l i Feng G: la proteïna X del virus de l'hepatitis B modula l'apoptosi a les cèl·lules epitelials tubulars proximals renals humanes activant la via de senyalització JaK2/STaT3. int J Mol Med 31: 1017-1029, 2013.

12. Yang Y, Wang X, Zhang Y i Yuan W: la proteïna X del virus de l'hepatitis B i les citocines proinflamatòries sinergitzen per millorar l'apoptosi induïda per Trail de les cèl·lules tubulars renals mitjançant la regulació de dr4. int J Biochem cell Biol 97: 62-72, 2018.

13. He P, Zhou G, Qu d, Zhang B, Wang Y i li d: HBx inhibeix la proliferació i indueix l'apoptosi mitjançant la regulació de Fas/Fasl a les cèl·lules epitelials tubulars renals de rata. J nephrol 26: 1033, 2013.

14. Han W, luo M, He M, Zhu Y, Zhong Y, ding H, Hu G, liu l, chen Q i lu Y: la transfecció del gen HBx afecta el cicle de les cèl·lules epitelials tubulars renals primàries mitjançant la regulació de l'expressió de ciclina. Mol Med rep 18: 1947-1954, 2018.