Efectes de diferents parts extretes de Cistanche Deserticola sobre els efectes hipoglucèmics dels ratolins negres Db / Db Ⅱ
Mar 11, 2024
2 Mètodes experimentals
2.1 Preparació de productes processats Cistanche deserticola Cistanche deserticola:
Preneu els materials medicinals de Cistanche deserticola, netegeu les impureses, coeu-los al vapor en una olla a pressió normal durant 2 hores, talleu-los en 6 mm i assequeu-los a 70 graus. Cistanche deserticola: agafeu trossos de decocció de Cistanche deserticola, afegiu-hi la quantitat adequada de vi d'arròs, barregeu-ho bé, humitegeu-ho durant 8 hores (vi d'arròs groc: aigua=1:1), coeu al vapor a alta pressió durant 4 hores i assequeu-ho a 70 graus. (Feu servir 30 ml de vi d'arròs per cada 100 g de Cistanche deserticola).
EXTRACTE NATURAL DE CISTANCHE ORGANIC
Servei de suport de Wecistanche: el major exportador de cistanche a la Xina:
Correu electrònic:wallence.suen@wecistanche.com
Whatsapp/Tel:+86 15292862950
Compreu per obtenir més detalls de les especificacions:
https://www.xjcistanche.com/cistanche-shop
2.2 Enriquiment de diferents parts extretes de Cistanche deserticola/Cistanche deserticola
Prendre 30 g de pols de Cistanche deserticola/Tamarococcus deserticola, afegir 10 vegades la quantitat d'aigua, calor i reflux per a l'extracció dues vegades, 2 hores cada vegada, combinar els extractes, concentrar, afegir etanol fins que el contingut d'alcohol arribi al 60%, precipitar a baixa temperatura durant 12 hores, i filtrar amb succió. , el precipitat és la part de polisacàrid brut. Concentrar el sobrenedant a una concentració adequada, aplicar-lo a la resina d'adsorció macroporosa D101 i eluir-lo amb aigua i etanol de diferents concentracions en seqüència. Recollir l'eluït d'aigua i concentrar a pressió reduïda fins a una pasta espessa, que és la fracció total d'oligosacàrids; rentar amb etanol al 40%. Liquidar, concentrar i assecar a pressió reduïda, que és la fracció total de glucòsids de Cistanche deserticola.
2.3 Determinació del contingut de diferents parts extretes de Cistanche deserticola/Cistanche deserticola
2.3.1 Determinació del contingut total de polisacàrids de Cistanche deserticola/Cistanche deserticola.
Peseu la mostra de glucosa 20. 00 mg en un matràs aforat de 50 ml per fer 0. Per a una solució estàndard de glucosa de 4 mg·mL-1, pipeteu 3, 4, 5, 6 i 7 ml respectivament en un matràs aforat de 50 ml, diluïu-lo a volum amb aigua i pipeteu 2,0 ml de cada solució de glucosa amb gradient de concentració en un tub d'assaig. Agafeu una altra quantitat igual d'aigua destil·lada com a control en blanc, afegiu 1 ml de fenol al 5% a cada tub, agiteu bé, afegiu ràpidament 5 ml d'àcid sulfúric concentrat, deixeu-ho durant 10 minuts, poseu-lo en un bany d'aigua de 40 graus per 15 minuts, treure'l, refredar ràpidament a temperatura ambient i mesurar el valor d'absorbància a 490 nm, prendre l'absorbància (A) com a ordenada i la concentració de glucosa (C) com a abscissa, dibuixar una corba estàndard i obtenir la equació de regressió Y=8.37X-0.162 8 (R2=0.994 6). Pesar amb precisió 1,0 g de pols de polisacàrid total de matèries primeres i productes, col·locar-los en matràs aforats de 50 ml respectivament, afegir aigua per dissoldre i ajustar el volum a la marca, treure amb precisió 2,0 ml en un tub d'assaig i mesurar-lo. manera com el mètode estàndard de preparació de corbes. , això és.
2.3.2 Determinació del contingut de betaïna a Cistanche deserticola/Cistanche deserticola
2.3.2.1 Preparació de la solució de referència:
Peseu amb precisió 1,17 mg de la solució de referència de betaïna, poseu-lo en un matràs aforat de 5 ml, afegiu-hi metanol al 50% per dissoldre i diluir-lo a volum, i ja està llest.
2.3. 2. 2 Condicions cromatogràfiques
La columna cromatogràfica és la columna cromatogràfica Ecosil {{{0}}AMINO (4,6 mm×250 mm, 5 μm), fase mòbil: acetonitril-aigua (99,5 ∶ 0,5) , temperatura de la columna: 30 graus, longitud d'ona de detecció: 194 nm, cabal: 0,6 mL·min-1, volum d'injecció 10 μL, cromatograma mostrat a la figura 1. 2.3.2.3 Preparació de la solució d'assaig amb precisió Peseu la pols de la fracció total d'oligosacàrids dels productes crus i acabats 1,0 g, col·locat respectivament en un matràs aforat de 5 ml, afegiu aigua destil·lada per dissoldre i diluir-lo a volum, agiteu bé, passeu per una membrana de filtre microporosa de 0,45 μL i ja està llest.
2.3.2.4 Determinació del contingut de la mostra
Absorbiu amb precisió la solució de prova d'oligosacàrids totals en Cistanche deserticola crua i preparada, mesureu-la segons les condicions de "2.3.2.2" i calculeu el contingut de betaïna a la mostra.
2.3.3 Determinació del contingut d'equinacòsid, verbascòsid i heterocimicifugarina a Cistanche deserticola/Cistanche deserticola
2.3.3.1 Preparació de la solució de referència
Peseu amb precisió 4,50 mg d'echinacòsid, 4,80 mg de verbascòsid i 5,05 mg de comimicina heteròloga en matràs aforats de 5 ml, afegiu metanol al 50% per dissoldre i diluir-lo fins a la marca i preneu cada control. Poseu 200 μL de la solució de mostra a la injecció. vial, afegiu 400 μL de metanol al 50% i barregeu bé per fer una solució de referència mixta, agiteu bé i ja està llest.
2.3.3.2 Condicions cromatogràfiques
La columna cromatogràfica és Ecosil C18 (4,6 mm×250 mm, 5 μm), metanol és la fase mòbil A, 0,1% àcid fòrmic és la fase mòbil B, gradient d'elució, {{ 12}}~45 min, 30% A→ 70% A, el cabal és d'1,0 ml·min-1, la temperatura de la columna és de 30 graus, la longitud d'ona de detecció és de 330 nm, el volum d'injecció és de 10μL i el cromatograma es mostra a la figura 2.
2.3.3.3 Preparació de la solució d'assaig
Peseu amb precisió 1,0 g del glucòsid en pols total de matèries primeres i productes, col·loqueu-los en matràs aforats d'100 ml, afegiu-hi metanol al 50% per dissoldre, ajusteu el volum a la marca i agiteu-los. bé. Treure amb precisió 5 ml de cada mostra en un matràs aforat de 10 ml, afegir metanol al 50% per fer el volum, agitar bé i passar per una membrana de filtre microporosa de 0,45 μm per obtenir-lo.
2.3.3.4 Determinació del contingut de la mostra
Traieu amb precisió la mostra de glucòsids totals de Cistanche deserticola i mesureu-la segons les condicions de "2.3.3.2". Calcula el contingut d'echinacòsid, verbascòsid i còmplice heteròleg de la mostra.
2.4 Agrupació d'animals, modelització i administració de fàrmacs
L'habitació dels animals té 12 hores de llum i 12 hores de foscor, una humitat relativa del 50% al 70% i una temperatura ambient de 18 a 22 graus. Els ratolins negres db/db i els ratolins negres db/m (grup control normal) es van alimentar normalment amb alimentació normal i l'experiment va començar a les 9 setmanes d'edat. Excepte el grup de control normal, la resta de ratolins negres db/db es van seleccionar aleatòriament segons els nivells de sucre en sang i el pes corporal. Dividit en 8 grups, és a dir, grup model, grup control positiu, grup de polisacàrids totals de Cistanche deserticola, grup d'oligosacàrids totals de Cistanche deserticola, grup de glucòsids totals de Cistanche deserticola, grup de polisacàrids totals de Tartschistanche deserticola, grup d'oligosacàrids totals de Tarthouse deserticola, grup de glucòsids totals de Tartschistanche deserticola. Excepte el control normal
Excepte el grup model i el grup model, a les rates dels altres grups se'ls va administrar una administració intragàstrica a una dosi de 2 ml/100 g durant 4 setmanes consecutives. La concentració del líquid era de 4,1 g·kg-1. El grup control normal i el grup model van ser tractats de la mateixa manera. Doneu una certa quantitat de solució salina normal a l'estómac.
2.5 Efectes de diferents parts extretes de Cistanche deserticola sobre els nivells de glucosa en sang de ratolins negres db/db
2.5.1 Prova de tolerància oral a la glucosa (OGTT).
Després de 26 dies d'administració, van dejunar durant 12 hores i, 60 minuts després de l'administració l'endemà, els ratolins negres de cada grup van rebre 2,0 g·kg-1 de glucosa a 0, {{10}}.5, 1.0 i 2 respectivament. .0 S'ha pres sang de la vena de la cua per mesurar el valor de glucosa en sang. Amb el valor de la glucosa en sang com a ordenada i el temps com a abscisses, es va fer un gràfic de canvi de glucosa en sang i es va calcular l'àrea sota la línia de la corba de la glucosa en sang de cada grup experimental segons la fórmula (AUC, hmmoL·L{ {13}}) [19]. AUC=A × {{20}}.25 + B × 0.50 + C × 0.75 + D. A la fórmula: A, B, C i D són els valors de glucosa en sang a 0, 0,5, 1,0 i 2,0 h respectivament.
2.5.2 Càlcul de l'índex de resistència a la insulina i l'índex d'arteriosclerosi
L'índex de resistència a la insulina es va calcular segons el mètode de la literatura [20]: HOMA-IR=Glucosa × Insulina / 22. 5. HOMA - =20 × Insulina / (Glucosa - 3}.5) × 100%. IR és la resistència a la insulina i (%) és la funció cel·lular. La unitat molar de glucosa és mmol·L-1
. La insulina s'administra en mU·L-1. Els nombres de glucosa i insulina es mesuren durant el dejuni. L'índex d'arteriosclerosi (índex aterogènic) es va calcular segons el mètode descrit per Zheng et al. [21]. Mètode de càlcul: Índex aterogènic=(TC-HDL-C) / HDL-C.
2.5.3 Efectes de diferents parts extretes de Cistanche deserticola/Cistanche deserticola sobre l'INS sèric i l'HbA1c de ratolins negres db/db
Agafeu les mostres de sèrum congelat i porteu-les a temperatura ambient abans d'utilitzar-les per a proves amb kits d'immunoassaig vinculats a enzims INS i HbA1c. Seguiu estrictament els mètodes i passos de les instruccions del kit.
2.6 Efectes de diferents parts extretes de Cistanche deserticola/Cistanche deserticola sobre el nivell d'estrès oxidatiu hepàtic de ratolins negres db/db
Agafeu les mostres de sèrum congelat i porteu-les a temperatura ambient abans d'utilitzar-les per a proves amb kits d'immunoassaig relacionats amb enzims MDA i SOD. Seguiu estrictament els mètodes i passos de les instruccions del kit.
2.7 Efectes de diferents parts extretes de Cistanche deserticola/Cistanche deserticola sobre el metabolisme del greix hepàtic de ratolins negres db/db
Els nivells de TG, TC, HDL-C i LDL-C en sèrum de rata es van mesurar mitjançant kits pertinents. Per obtenir passos específics de mesura, consulteu les instruccions del kit.
2.8 Efectes de diferents parts extretes de Cistanche deserticola/Ratiana càmfora sobre UA, Cr i mALB en plasma i orina de ratolins negres db/db
Agafeu mostres de plasma i orina congelades i porteu-les a temperatura ambient abans d'utilitzar-les per provar kits d'immunoassaig vinculats a enzims UA, Cr i mALB. Seguiu estrictament els mètodes i passos de les instruccions del kit.
2.9 Observació de seccions patològiques de pàncrees i ronyó mitjançant tinció HE
Els teixits del pàncrees i els ronyons remullats amb un fixador de paraformaldehid al 10% durant 24 hores es van eliminar, es van rentar amb aigua destil·lada i es van emmagatzemar en etanol al 70%. Es van treure mostres de teixit, es van deshidratar amb etanol graduat, es van netejar, es van incrustar en parafina, es van seccionar i després es van tenyir amb hematoxilina i eosina (tinció H&E). Després que la cola de la secció s'hagi assecat, utilitzeu un sistema d'imatge digital d'alta resolució per observar i fer fotos de les seccions.
2.10 Determinació del col·lagen tipus IV del teixit renal mitjançant immunohistoquímica
Per a l'expressió, les seccions de ronyó es van desparafinar a l'aigua i després es van sotmetre a la recuperació d'antigen. Es van bloquejar amb sèrum de cabra al 10% i es van incubar amb l'anticòs primari a 4 graus durant la nit. Després del rentat, es va incubar l'anticossos secundari. La solució actual era DAB per al desenvolupament del color. El rentat, la deshidratació i el segellat es van realitzar sota un microscopi òptic. Observeu l'expressió de la proteïna de col·lagen tipus IV al teixit renal.
2.11 Mètodes estadístics
Ús del programari GraphPad Prism versió 5.01 (2007, GraphPad Software re inc) per analitzar les dades i els resultats
El resultat és mitjà±SEM Indica que la diferència entre els dos grups és unidireccional
ＡＮＯＶＡ( ｏｌｌｏｅｄｅＢｏｎｅｒｒｎｎ′ un parell de prova de columna), P<0.05 is a significant difference and has statistical significance.
