Efectes dels glucòsids totals de Cistanche Deserticola sobre la proliferació, l'apoptosi i l'expressió de la proteïna relacionada amb la via de senyalització Wnt/-catenina de cèl·lules HepG2

FENG Duo1,2, WANG Jing2, JIANG Yong-jun3, ZHOU Shi-qi1, DUAN Hao1, GUO Yu1, ZHAO Jian1, YAN Wen-jie1,*

（1.Beijing Key Laboratory of Bioactive Substances i Functional Food, College of Biochemical Engineering, Beijing Union University, Beijing 100023, Xina; 2. Institut de Desenvolupament de l'Alimentació i la Nutrició, Ministeri d'Agricultura i Afers Rurals, Beijing 100081, Xina; 3. Mongòlia Interior Sankou Biotechnology Co., Ltd., Ordos, Mongòlia Interior 017000, Xina)

Resum: Explorar l'efecte inhibidor deglucòsids totals deCistanche deserticola(TG) sobre les cèl·lules HepG2 i el seu mecanisme. En aquest article, es van tractar diferents concentracions (0, 3,5, 10,5, 21, 31,5, 42 ug/mL) de TG durant 24 h en cèl·lules de càncer de fetge HepG2 i es va detectar la viabilitat de les cèl·lules HepG2 mitjançant l'assaig CCK8 . Es van utilitzar el mètode de tinció doble Hoechst33342/PI i l'annexina V-FITC/PI per detectar l'apoptosi de les cèl·lules HepG2. El fenomen de la migració cel·lular es va detectar mitjançant un assaig de migració cel·lular. Mentrestant, es van detectar canvis en la progressió del cicle cel·lular mitjançant citometria de flux. I l'expressió de -fetoprotein (AFP), -catenina, Disheveled (Dsh) i GSK-3 es va detectar mitjançant western blot. Els resultats van mostrar que la TG podria reduir la proliferació de cèl·lules HepG2 de manera dependent de la concentració, amb només un 31,04 per cent de viabilitat cel·lular quan la TG era de 42 ug/mL. A més, el TG podria danyar l'estructura cel·lular i induir l'apoptosi cel·lular, i la taxa d'apoptosi podria arribar al 32,44 per cent per detecció AV/PI. A més, el TG també podria promoure la necrosi cel·lular i limitar la migració cel·lular. Hi va haver diferències significatives entre el grup tractat i el grup control. Mentrestant, una alta concentració de TG podria aturar les cèl·lules HepG2 en la fase G2/M. Finalment, en comparació amb el grup control, l'expressió relativa de -catenina i Dsh va disminuir, mentre que GSK-3 va augmentar en els grups tractats amb TG. En conclusió, TG podria inhibir el creixement de cèl·lules HepG2 afectant la progressió del cicle cel·lular, promovent l'apoptosi i limitant la migració cel·lular. El mecanisme pot ser a través de la via de senyalització Wnt/-catenina, que va activar GSK-3 per degradar -catenina per aconseguir la inhibició del càncer de fetge.

Paraules clau: Cistanche deserticola; glucòsids totals; cèl·lula HepG2; anti-hepatoma; Via del senyal Wnt/ -Catenina

Cistanche deserticola maPertany a una substància medicinal i homòloga alimentària i és una planta herbàcia perenne parasitària de les Orobaceae.Té els efectes d'antioxidació, anti-fatiga, anti-envelliment, anti-tumoral, protecció hepàtica, regulació endocrina, millora de la capacitat de memòria i anti-osteoporosi. Es coneix com "Ginseng del desert". Després de confirmar que deserticola deserticola s'ha convertit en una substància medicinal i homòloga d'aliments el 2018, ha cridat molta atenció. No només pot jugar el valor d'aplicació clínica de la medicina herbal xinesa, sinó que també pot afectar l'efecte d'intervenció nutricional dels aliments.També mostra un gran potencial en el desenvolupament de nous productes naturals contra el càncer de fetge [2-3]. La investigació nutricional i els efectes funcionals dels aliments deserticola deserticola són cada cop més aprofundits [4].

Cistanche vivent del desert

En els darrers anys, s'ha informat que Cistanche deserticola té unantitumoralefecte. Ye et al. [5]han trobat que l'equinàcia extreta de la sal de Cistanche deserticola pot inhibir la proliferació de cèl·lules HepG2 reduint l'expressió de TREM2 i bloquejant la via del senyal PI3K/AKT; Alguns estudiosos han trobat que els glicòsids feniletanoides de Cistanche deserticola poden inhibir la proliferació de cèl·lules HepG2 [6]; L'equinòsid té un cert efecte inhibidor sobre la proliferació de cèl·lules O [7] i cèl·lules de càncer de còlon SW480 [8] del càncer renal 786-; En un altre estudi, s'ha demostrat que els glicòsids feniletanoides de Cistanche deserticola redueixen el dany hepàtic en ratolins portadors de tumors H22 i milloren la funció immune reduint els nivells d'AFP, afectant així negativament el creixement del tumor [9]. Tant la decocció de Cistanche deserticola [10] com el polisacàrid [11] es poden passar a través de la via de senyalització Wnt/ - Catenina millora els símptomes clínics de les rates de Parkinson i té un paper neuroprotector. A més, els estudis han trobat que l'equinàcia pot inhibir el Wnt per/ - La via de senyalització de la catenina té un paper contra el càncer de mama [12]; A més, també pot reduir les cèl·lules THP-1 en la leucèmia aguda humana - expressió de proteïnes de catenina [13]. Durant tot el temps, la via de senyalització Wnt/-Catenina ha rebut una atenció considerable [14]. S'informa que es pot observar en el 20% - 35% dels casos d'HCC [15] - Activació de la catenina. Cada vegada hi ha més evidència que la via de senyalització Wnt/ - Catenina té un paper important en l'aparició i desenvolupament del càncer de fetge [16], però si els glucòsids totals de Cistanche deserticola regulen Wnt/ - Hi ha pocs informes sobre l'efecte anti-hepatoma de la via de senyalització de Catenina. Els glucòsids totals de l'extracte de Cistanche deserticola, inclosos els feniletanoides i altres glicòsids [17], es van estudiar en aquest experiment mitjançant l'estudi de la proliferació, apoptosi, migració i els nivells d'expressió de proteïnes relacionades de cèl·lules HepG2 induïts pels glucòsids totals de Cistanche deserticola (TG) , per explorar el mecanisme de la inhibició del càncer de fetge de TG i per explicar el mecanisme potencial dels TG contra el càncer de fetge, per proporcionar la base científica certa per enriquir encara més l'aplicació clínica de Cistanche deserticola en el camp del càncer de fetge.

El glucòsid de feniletanol és el principal component actiu de Cistanche deserticola

1.Material i mètodes

1.1 Materials i instruments

Les cèl·lules HepG2 (carcinomes hepatocel·lulars humans) es van comprar al Centre de cèl·lules de l'Institut de Medicina Bàsica de la Universitat Mèdica de la Unió de Pequín, Xina.Els glucòsids totals deExtracte de Cistanche en pols(Fracció de massa superior o igual al 75 per cent, combinada amb echinacòsid i al costat de la piscina, proporcionada per Inner Mongolia Sankou Biotechnology Co., Ltd.) es van dissoldre en medi DMEM a les concentracions corresponents de TG per a experiments posteriors.

Extracte de Cistanche en pols

Feu clic aquí per veure els productes Cistanche Extract Protect Liver

【Ask for more】 Email: xue122522@foxmail.com /  Whats App:  0086 18599088692 /  Wechat:  18599088692

El sèrum boví fetal es va comprar a Gibco, EUA; Es van comprar anticossos (solució mixta de gentamicina penicil·lina-estreptomicina), medi DMEM-H, kit de detecció d'apoptosi cel·lular i cicle cel·lular, solució de colorant/annexina V-FITC i solució de colorant Hoechst 33342/PI d'apoptosi a Genview; El 0, 25 per cent de tripsina i el kit de determinació de la concentració de proteïna BCA es van comprar a Beijing Dingguo Changsheng Biotechnology Co., Ltd; Els anticossos anti-catenina de conill es van comprar a ABclonal; L'anticossos anti-Dsh de conill (ADAR1) es va comprar a Bios; Els anticossos de conill anti GSK3 i els anticossos de conill anti-AFP es van comprar a Affinity. Incubadora de cèl·lules de CO2 (Innova CO-170), centrífuga d'escriptori d'alta velocitat a baixa temperatura (3K15, Sigma, Alemanya), instrument d'etiquetatge enzimàtic multifuncional (INFINITE M NANO TECAN), microscopi de fluorescència (C-SHG1, Nikon, Japó). ), citometria de flux (FACSCALIBUR, BD, EUA), dispositiu d'electroforesi (EN027015, BIO-RAD, EUA), dispositiu de transferència de membrana (043BR57802, BIO-RAD, EUA).

1.2 Mètode experimental

1.2.1 Pas cel·lular

Les cèl·lules HepG2 es van cultivar en un medi complet DMEM que contenia un 10 per cent de sèrum fetal boví i un 1% d'anticossos triples (100 U/mL de penicil·lina, 100 mg/mL d'estreptomicina i gentamicina) en una incubadora de cèl·lules al 5 per cent de CO2 a 37ºC. grau. Després que les cèl·lules van créixer fins a una confluència del 80% al 90%, es van digerir amb un 0,25% de tripsina (-EDTA) i es van subcultivar en una proporció d'1:2 a 4. Després de 2-3 dies de creixement cel·lular, el creixement logarítmic es van prendre cèl·lules de fase per a un subcultiu o experiments posteriors

1.2.2 Efecte del TG sobre la morfologia de les cèl·lules HepG2

Es van agafar cèl·lules HepG2 de la fase de creixement logarítmic i es van inocular en una placa de 24-pou amb una concentració cel·lular de 5 per pou × 104 peces/mL, després que les cèl·lules s'adherissin a la paret, afegiu TG fins a la concentració final de 0, 3,5, 10,5, 21, 31,5, 42 μ G/mL, 0,5 mL per pou, es va cultivar durant 24 hores i es va observar la morfologia cel·lular de cada grup sota un microscopi de llum.

1.2.3 Efecte de la TG sobre la proliferació de cèl·lules HepG2

Agafeu cèl·lules HepG2 en l'etapa de creixement logarítmic i ajusteu la concentració cel·lular a 1 × 104 peces/pou, inoculades en plaques de 96 pous, afegint 100 peces per pou μ 50. Incubeu en una incubadora cel·lular. Després que les cèl·lules s'adhereixen a la paret, es tracten amb fàrmacs segons 1.2.2 anterior, i cada grup té sis reperforacions, cultivades durant 24 hores. La taxa de supervivència cel·lular es va mesurar mitjançant el mètode CCK8 i el valor d'absorbància (OD) es va mesurar a una longitud d'ona de 450 nm. La taxa de supervivència cel·lular i la taxa d'inhibició cel·lular es van calcular mitjançant la fórmula següent.

A la fórmula, el grup en blanc només conté líquid CCK8, mentre que el grup control conté grup de tractament 0 μ G/mL, grup experimental: grup de tractament 3,5, 10,5, 21, 31,5, 42 μ G/mL.

1.2.4 Efecte de la TG sobre el cicle cel·lular HepG2

Agafeu cèl·lules en fase de creixement logarítmic i premeu 5 × Es va inocular una densitat cel·lular de 105 cèl·lules per pou en una placa de sis pous i es va col·locar un sistema de 2 ml per pou que contenia 5 × 105 cèl·lules en una caixa de cultiu i es va sotmetre a tractament farmacològic. tal com es descriu a 1.2.2 anterior. Després del cultiu, es van realitzar les operacions posteriors segons les instruccions del kit.

1.2.5 Efecte de la TG sobre la migració de cèl·lules HepG2:

Seleccioneu cèl·lules de fase de creixement logarítmica i col·loqueu-les en una placa de sis pous. Es va eliminar un sistema de 2 ml per pou que contenia 6 × 105 cèl·lules quan l'adhesió cel·lular i l'agregació cel·lular eren superiors al 90 per cent. Realitzar el tractament farmacològic segons 1.2.2 anterior. A les 0 h, seleccioneu aleatòriament 5 camps de visió sota el microscopi per a les fotografies, col·loqueu-los a la incubadora per a un cultiu posterior durant 24 hores, feu fotos al microscopi òptic, utilitzeu el programari Image J per analitzar l'àrea de ratllat de les cèl·lules i calculeu el taxa de migració segons la fórmula següent (2) [18].

1.2.6 Mètode de tinció doble Hoechst 33342/PI per detectar l'apoptosi

Seleccioneu cèl·lules en fase de creixement logarítmic i col·loqueu-les en una placa {{0}}pou, amb un sistema de 0,5 ml que contenia 3 × 104 cèl·lules es van tractar amb fàrmacs segons 1.2.2 anterior i 1 ml de tampó de tinció cel·lular. es va afegir, seguit de 5 μ L de colorant Hoechst i 5 μ LPI de solució de colorant per a la tinció. Incubeu a la foscor a 37 graus durant 7-10min, traieu una 24-placa forada, humiteu-la amb PBS i feu fotos amb un microscopi de fluorescència per a l'observació.

1.2.7 Detecció de l'apoptosi de cèl·lules HepG2 mitjançant una tinció doble d'annexina V-FITC/PI

Seleccioneu cèl·lules en fase de creixement logarítmic i col·loqueu-les en una placa de sis pous, amb un sistema de 2 ml per pou que contenia 2 × 105 cèl·lules es van tractar amb fàrmacs segons 1.2.2 anterior, i les operacions posteriors es van realitzar segons les instruccions del kit, afegint 5 μ L d'annexina V-FITC i 5 μ L de solució de tinció de PI es va incubar a 4 graus a la foscor i després es va col·locar a citometria de flux per a la detecció d'apoptosi.

1.2.8 Efecte de la TG sobre l'expressió de proteïnes en cèl·lules HepG2

Premeu 2 × 106 cèl·lules / cèl·lula es van tractar amb fàrmacs segons 1.2.2 anterior, utilitzant proteïnes de lisat de 80 μ L (RIPA: PMSF=100:1) i després utilitzant l'electroforesi SDS-PAGE per separar cada mostra de proteïnes. (50 mostres per pou μ g) Completeu la transferència de proteïnes a la membrana de PVDF en un bany de gel, utilitzant 1 × Netegeu la cinta amb una solució tampó TBST, segelleu lentament la taula d'agitació BSA a temperatura ambient durant 1 hora i afegiu un anticossos. (AFP, GSK3) en proporció-, - Catenina, Dsh), incubar a 4 graus durant la nit i, a continuació, incubar la membrana de PVDF amb l'anticossos secundari diluït a temperatura ambient durant 1-2 hores. GAPDH s'utilitza com a referència interna. Després de desenvolupar i fixar la membrana de PVDF, observeu els canvis en l'expressió de la proteïna diana [6].

1.3 Anàlisi de dades

L'anàlisi de significació d'un factor únic d'ANONA es va realitzar mitjançant el programari estadístic SPSS 25.0 per expressar; Les dades experimentals de citometria de flux es van analitzar mitjançant Flowjo; Utilitzeu Graphpad Prism 8.0.2 per dibuixar. P<0.05 indicates a statistically significant difference, while P<0.01 indicates a highly significant difference.

2.Resultats i anàlisi

2.1 Efecte del TG sobre la morfologia de les cèl·lules HepG2

figura 1 cèl·lules hepg2 tractades amb diferents concentracions de tg durant 24 h (200x)

Durant el procés d'apoptosi, en primer lloc, el seu volum disminuirà i es deformarà gradualment i, a continuació, les cèl·lules adherides patiran lentament processos com ara la contracció, l'arrodoniment, la desaparició i la picnosi del cromosoma intracel·lular. Alguns nuclis patiran trencament, marginació i formació de vesícules apoptòtiques. Tal com s'observa a la figura 1, 3.5 i 10.5 μ Quan les cèl·lules HepG2 es van tractar amb g/mL TG, el volum cel·lular va disminuir gradualment; I després observar visualment 21 μ A g/mL, el nucli va començar a reduir-se i el volum es va fer més petit; trenta-un punt cinc μ A g/mL, les cèl·lules anaven acompanyades de deixalles flotants i cel·lulars; quaranta-dos μ A g/mL, la membrana cel·lular es trenca completament, les cèl·lules pateixen lisi, es produeix una necrosi i el límit no està clar. Les cèl·lules es troben en un estat de col·lapse i mort imminent.

2.2 Efecte del TG sobre la proliferació de cèl·lules HepG2

Figura 2 Efecte del TG sobre la proliferació de cèl·lules HepG2

Nota: * representa el mateix que 0 μ La diferència era significativa a g/mL (P<0.05), and * * indicates a significant difference (P<0.01).

Com es pot veure a la figura 2, després de 24 hores de tractament amb diferents concentracions de TG, la proliferació de cèl·lules HepG2 està restringida en diferents graus. En comparació amb la taxa de supervivència cel·lular del grup control, la taxa de supervivència cel·lular del grup de tractament mostra una tendència a la baixa amb l'augment de la concentració, que és del 96,95 per cent, 92,59 per cent, 92,78 per cent, 77,24 per cent, 31,04 per cent i la concentració és de 3,5, 10,5 i 21, respectivament μ No hi va haver cap diferència significativa en g/mL i la disminució va ser petita, mentre que 31,5 per cent μ G/mL i 42 μ a g/mL, hi va haver una diferència significativa (P<0.01), with an IC50 of 37.77 after TG treatment μ g/mL. CCK8 test results indicate that when TG concentration is 21 μ When the concentration is above g/mL, the inhibitory effect on HepG2 cells is better.

2.3 Efecte de la TG sobre el cicle cel·lular HepG2

Figura 3 Efectes de diferents concentracions de TG en el cicle cel·lular de les cèl·lules HepG2

Com es mostra a la figura 3, després de 24 hores de tractament amb diferents concentracions de TG, es va trobar que a mesura que augmentava la concentració, la fase G0/G1 va disminuir gradualment, representant el 59,9 per cent, el 56,7 per cent, el 56 per cent, 54 per cent, 33,4 per cent i 29,1 per cent, respectivament, amb una disminució significativa; La proporció de la fase S va ser del 14,3 per cent, 15,8 per cent, 16,8 per cent, 18,7 per cent, 25,1 per cent i 27,6 per cent, respectivament, amb diferents graus d'augment; 3.5-21 en comparació amb el grup control (23,88 per cent ) μ A g/mL, la fase G2/M té pocs canvis, representant el 25,85 per cent, el 24,92 per cent i el 25,33 per cent, respectivament. Quan el TG és de 31,5 μ G/mL i 42 μ a g/mL, va augmentar significativament, un 37,89 per cent i un 39,42 per cent, respectivament. Aquesta prova va trobar que el TG a concentracions baixes (3,5-21 μ G/mL), no inhibeix la divisió i proliferació cel·lular de la manera principal que afecta el cicle cel·lular, i a concentracions elevades (31,5 μ G/mL i 42 μ G/mL) pot induir l'aturada cel·lular en la fase S i en la fase G2/M, inhibint així la proliferació cel·lular. Al mateix temps, quan el TG és de 31,5 μ G/mL i 42 μ a g/mL, el subG1 també va augmentar, cosa que és coherent amb la investigació de Sun Qian et al. [19] que els derivats de l'artemisinina poden augmentar el pic subG1 de les cèl·lules HepG2 a concentracions elevades. També va trobar que amb l'augment de la concentració d'artemisinina, augmenta la proporció de cèl·lules en fase G2/M. Els resultats del cicle cel·lular suggereixen que la TG pot promoure la inhibició de la progressió del cicle cel·lular, induint així l'apoptosi cel·lular.

2.4 Efecte de la TG sobre la migració de cèl·lules HepG2

Figura 4 Efectes de diferents concentracions de TG sobre la migració de cèl·lules HepG2

Nota: * representa el mateix que 0 μ La diferència era significativa a g/mL (P<0.05), and * * indicates a significant difference (P<0.01).

La metàstasi de cèl·lules canceroses és una de les claus del tractament del càncer, i la recurrència del càncer també hi està estretament relacionada. Per tal d'investigar si TG pot inhibir la migració de cèl·lules HepG2, es va utilitzar un mètode de rascada per observar la migració cel·lular. Com es mostra a la figura 4, amb l'augment de la concentració de TG, la 24-mobilitat horària disminueix gradualment i l'efecte inhibidor és evident. La mobilitat és del 14,82 per cent, 13,42 per cent, 12,66 per cent, 10,11 per cent, 8,46 per cent, 7,24 per cent, 21 μ G/mL van mostrar diferències significatives (P<0.05), 31.5 μ G/mL and 42 μ G/mL showed a significant difference (P<0.01). The results of this experiment indicate that TG can inhibit the migration of liver cancer cells, thereby limiting the metastasis of cancer to other tissues.

2.5 Mètode de tinció doble Hoechst 33342/PI per detectar l'apoptosi

Figura 5 Efectes de diferents concentracions de TG sobre Hoechst 33342/PI a les cèl·lules HepG2

La tinció nuclear es va realitzar amb Hoechst 33342 per detectar la condensació de cromatina [20]. Les cèl·lules normals mostraven un blau baix, les cèl·lules apoptòtiques mostraven un blau alt / vermell baix i les cèl·lules necròtiques mostraven un blau / vermell alt. Com es pot veure a la figura 5, en comparació amb el grup control, en el grup de tractament amb TG es va observar concentració de cromatina i fragmentació nuclear. Al mateix temps, quan el TG estava a 3.5-21, es va observar que μ En el rang de g/mL, la fluorescència blava augmentava gradualment, cosa que suggereix que el TG inhibeix principalment la proliferació cel·lular mitjançant l'apoptosi a concentracions baixes; I per sobre de 21 μ A g/mL, la fluorescència vermella augmenta, cosa que suggereix que el TG danya i destrueix principalment l'estructura cel·lular per matar cèl·lules a concentracions més altes. Els resultats d'aquest experiment indiquen que el tractament amb TG pot induir apoptosi i necrosi de cèl·lules HepG2.

2.6 Tinció doble d'annexina V-FITC/PI per detectar l'efecte de TG sobre l'apoptosi de cèl·lules HepG2

Figura 6 Efecte de TG sobre la doble tinció AV/PI de cèl·lules HepG2

Nota: * representa el mateix que 0 μ La diferència era significativa a g/mL (P<0.05), and * * indicates a significant difference (P<0.01).

Per determinar encara més l'efecte que indueix l'apoptosi de TG a les cèl·lules HepG2, hem utilitzat el mètode de tinció doble Annexin V-FITC/PI per tenyir cèl·lules HepG2. Com es mostra a la figura 6, amb l'augment de la concentració, la taxa d'apoptosi mostra una tendència a l'alça, 0, 3,5, 21, 41 μ Les taxes d'apoptosi de g/mL eren del 5,63 per cent, 7,65 per cent, 10,93 per cent i 32,44 per cent, respectivament, de manera dependent de la dosi. Els resultats van mostrar que la TG pot induir l'apoptosi destruint la integritat de la membrana de les cèl·lules HepG2. Aquest resultat és coherent amb els resultats de la tinció AV/PI de cèl·lules HepG2 discutides per Qi Xinxin et al. [6].

2.7 Efecte de la TG sobre l'expressió de proteïnes en cèl·lules HepG2

Figura 7 Expressió de proteïnes en cèl·lules HepG2 tractades amb diferents concentracions de TG

Nota: * representa el mateix que 0 μ La diferència era significativa a g/mL (P<0.05), and * * indicates a significant difference (P<0.01).

L'alfa-fetoproteïna (AFP) s'utilitza com a marcador sèric per al diagnòstic i proves d'eficàcia del càncer de fetge primari [21]. Com es pot veure a la figura 7, en comparació amb el grup control, el nivell d'expressió d'AFP en el grup de tractament ha disminuït, cosa que suggereix que la TG pot inhibir l'aparició de càncer de fetge fins a cert punt, però la probabilitat de revertir el càncer de fetge és molt petita. . A més, Dsh - El nivell de catenina va disminuir linealment amb l'augment de la concentració de fàrmacs; GSK-3 Va augmentar gradualment, però no de manera dependent de la dosi. Per tant, s'especula que TG pot regular l'expressió relativa de Dsh - Catenina i GSK-3, mitjançant la via de senyalització clàssica Wnt/ - Catenina per induir l'apoptosi a les cèl·lules HepG2.

3 .Discussió i Conclusió

El càncer de fetge és un dels tumors malignes més comuns a la Xina i també es troba entre les tres principals malalties amb mortalitat.[22]. Els principals mètodes de tractament del càncer de fetge inclouen la resecció quirúrgica, el trasplantament de fetge, la quimioradioteràpia i la immunoteràpia [23-25]. S'informa que l'any 2016, la taxa d'incidència de càncer de fetge a la Xina va ser del 9,57% i la taxa de mortalitat va arribar al 13,92% [26]. "A causa dels símptomes inespecífics del càncer de fetge precoç, una vegada que es presenten els símptomes, es troben principalment a les etapes mitjanes i tardanes. Per tant, la gent és més activa en l'ús de la medicina tradicional xinesa per tractar el càncer de fetge [27]". La gent creu que els compostos naturals tenen la menor toxicitat molecular i han demostrat ser beneficiosos per al tractament del càncer de fetge, de manera que estan examinant activament nous compostos naturals per al càncer de fetge.

Els glucòsids totals de Cistanche deserticola poden inhibir les cèl·lules canceroses de fetge en la fase inicial del càncer de fetge

En els últims anys, els múltiples efectes deCistanche deserticolahan cridat molta atenció i s'han convertit a poc a poc en un dels punts calents en el desenvolupament de la investigació sobre aliments i medicaments saludables. Els experiments de morfologia cel·lular i CCK-8 han confirmat que una certa concentració de TG pot destruir la morfologia cel·lular i inhibir el creixement i la proliferació de cèl·lules HepG2, i la concentració està en proporció directa a la taxa d'inhibició cel·lular.

El cicle cel·lular fa referència a tot el procés que experimenta una cèl·lula des de la finalització d'una mitosi fins al final de la següent divisió. Es divideix en dues etapes: interfase i divisió. La citometria de flux utilitza colorants fluorescents per distingir la fase G0/G1, la fase S i la fase G2/M. Mitjançant la detecció del cicle cel·lular, es constata que després del tractament amb diferents concentracions de TG, es constata que a concentracions elevades de TG (31,5 μ G/mL i 42 μ G/mL) poden bloquejar les cèl·lules perquè no estiguin en la fase G2/M. i afecten l'activitat de les cèl·lules HepG2, donant lloc a citotoxicitat, inhibint així la proliferació cel·lular. Durant la progressió del càncer, les cèl·lules canceroses dels tumors primaris envaeixen els teixits normals adjacents, fan metàstasi a llocs distants i formen noves colònies. S'estima que un total del 90% de la mortalitat relacionada amb el càncer es deu a metàstasi [28]. La via de senyalització Wnt està implicada en el procés de transformació de cèl·lules epitelials a mesenquimals i de transformació de cèl·lules mesenquimals a epitelials per promoure la metàstasi del càncer. En el carcinoma hepatocel·lular (HCC), nivells elevats de - Catenina s'associen amb metàstasi millorada i mal pronòstic [29]. En aquest estudi, es va trobar que la taxa de migració de cèl·lules HepG2 tractades amb TG durant 24 hores va disminuir gradualment amb l'augment de la concentració, de manera dependent de la concentració.Això indica que la TG pot controlar la migració de les cèl·lules canceroses i prevenir la propagació del càncer, possiblement mitjançant la reducció de la via de senyalització Wnt - Expressió de la catenina.En general, els nuclis afectats semblen més petits; Alguns concentrats o agregats de cromatina a la perifèria, mentre que altres tenen característiques típiques com ara la fragmentació de la cromatina nuclear i la formació de cossos apoptòtics [30-31]. Hoechst 33342 és un colorant fluorescent blau que pot penetrar a la membrana cel·lular i té una baixa toxicitat per a les cèl·lules. Alguns estudis han trobat que s'han observat característiques morfològiques de les cèl·lules apoptòtiques, inclosa la coagulació nuclear i la fragmentació, a les cèl·lules HepG2 tacades amb Hoechst 33342 [32]. En aquest experiment, es va trobar que després de 24 hores de tractament amb TG, la proporció de cèl·lules amb coagulació de cromatina i fragments nuclears fluorescents augmentava de manera dependent de la concentració, cosa que és coherent amb els resultats de l'estudi de Yang et al. [33] sobre l'apoptosi induïda per gingerol de cèl·lules HepG2. Utilitzant el mètode de tinció doble Annexin V-FITC/PI per detectar cèl·lules HepG2 tractades amb TG durant 24 hores, es va trobar quela taxa d'apoptosi de les cèl·lules va augmentar gradualment amb l'augment de la concentració.

Atal glucòsids de Cistanche deserticol

Dsh, - Catenina i GSK-3 És un típic Wnt/ - Disheveled (Dvl/Dsh) és un regulador important de la via de senyalització de la catenina, que és una proteïna clau en la via de senyalització Wnt i pot transmetre senyals Wnt cap avall. efectors [34]. A la via clàssica de senyalització Wnt, el receptor Frizzled invoca Dsh a la membrana cel·lular, que actua com a proto-oncogen i s'associa amb el factor inhibidor de l'eix somàtic (Axin), el gen de la poliposi adenomatosa coli (APC) i GSK. -3 Unió per formar un complex de degradació que inhibeix GSK-3 sí - La degradació de la fosforilació de la catenina provoca - La catenina entra al nucli i funciona [34-36]. - La catenina s'expressa principalment a la membrana cel·lular de les cèl·lules normals i està relacionada amb l'adhesió cel·lular. També participa en la transmissió d'informació de les vies de senyalització Wnt, regulant la proliferació i diferenciació cel·lular. Quan la via de senyalització Wnt s'activa de manera anormal, - La redistribució de la catenina pot ser una de les raons de l'aparició del tumor [37]. Segons s'informa, es pot observar en el 20% - 35% dels casos d'HCC [15] - Activació de la catenina. Al mateix temps, també és possible suprimir Wnt per / - La via de senyalització de la catenina activa l'autofàgia per inhibir la proliferació de cèl·lules HepG2 [38]. Aquest estudi va trobar que després del tractament amb TG, les cèl·lules HepG2, Dsh - El nivell de catenina va disminuir linealment amb l'augment de la concentració del fàrmac; GSK-3 Va augmentar gradualment, però no de manera dependent de la dosi. Per tant, es pot inferir que el TG passa la via de senyalització Wnt/ - Catenina per induir l'apoptosi a les cèl·lules HepG2.

Els biomarcadors més utilitzats del càncer de fetge primari a tot el món són - Alfa-fetoproteïna (AFP) [39]. L'AFP té un paper important en el seguiment precoç, la classificació patològica, la selecció del tractament i el pronòstic dels pacients amb càncer de fetge primari 9. Independentment del mètode de tractament, quan el nivell d'AFP és superior a 400 ng/mL, comportarà una mala supervivència [40]. En detectar el nivell d'expressió de la proteïna AFP a les cèl·lules tractades amb TG,es va trobar que el TG pot reduir eficaçment l'expressió d'AFP, cosa que indica que el TG pot tenir un paper en la inhibició de les cèl·lules canceroses del fetge en l'etapa inicial del càncer de fetge.

Té de Cistanche

En resum,Els glucòsids totals de Cistanche deserticola inhibeixen la proliferació i el creixement de cèl·lules HepG2 influint en la progressió del cicle cel·lular, destruint l'estructura cel·lular, promovent l'apoptosi i limitant la migració cel·lular.El mecanisme d'acció pot ser a través de la via del senyal Wnt/ - Catenina, activant la degradació de GSK-3: la catenina pot inhibir el càncer de fetge, però cal més investigació. En el futur, els experts i els estudiosos poden explorar profundament l'aplicació de Cistanche deserticola a Wnt/ - Les molècules de proteïnes aigües amunt i aigües avall de la via de senyalització de Catenin s'utilitzen per verificar els gens objectiu i explorar encara més el mecanisme d'acció dels glucòsids totals de Cistanche deserticola. contra les cèl·lules HepG2. A més, com a substància medicinal i homòloga d'aliments, la cistanche deserticola es pot consumir en la dieta diària per proporcionar tant prevenció com tractament, i també proporcionar una certa base teòrica per a la pràctica de la Gran Perspectiva de l'Alimentació, promovent la construcció d'una "Xina saludable". i millorar el nivell de salut de les persones.

[1] FENG D, HE Y, JIANG YJ, et al. Progrés de la investigació sobre la funció antienvelliment de Cistanches[J]. Journal of Food Safety & Quality, 2021, 12(11): 4429-4437.

[2] Ma G, Chen J, Wei T, et al. Inhibició dels papers de FOXA2 en la migració i invasió de cèl·lules de càncer de fetge suprimint transcripcionalment microRNA103a-3p i activant l'eix GREM2/LATS2/YAP [J]. Citotecnologia. 2021, 73:523-537.

[3] LI MQ, WANG K, ZHOU X. Inhibició dels pèptids de mongeta mungo sobre la proliferació a la cèl·lula HepG2 [J]. Journal of Chinese Institute of Food Science and Technology, 2018, 18(10): 52-57.

[4] HU Y, WANG S, WU X, et al. Compostos derivats de la medicina herbal xinesa per a la teràpia del càncer: un enfocament en el carcinoma hepatocel·lular [J]. J Etnofarmacol. 2013, 149(3):601-612. doi:10.1016/j.jep.2013.07.030.

[5] YE Y, SONG Y, ZHUANG J, et al. Efectes anticancerígens de l'equinacòsid en el model de ratolí de carcinoma hepatocel·lular i cèl·lules HepG2 [J]. J Cell Physiol. 2019, 234(2): 1880-1888. doi:10.1002/jcp.27063

[6] QI XX, YOU SP, HE ZX, et al. Efecte del glucòsid de feniletanol Cistanche deserticola sobre la proliferació i l'apoptosi de cèl·lules HepG2 in vitro [J]. Journal of Xinjiang Medical University, 2021, 44(09): 1041-1047.

[7] XIE YT. Efectes de l'ecniacòsid sobre l'apoptosi de les cèl·lules 786-O i els mecanismes inductius in vitro[D]. Col·legi de professors de Baotou, 2020.

[8] HAN YM, JIN WM, ZENG H, et al, Efectes de l'ecniacòsid sobre la proliferació, invasió i metàstasi de cèl·lules SW480 de càncer de còlon in vitro i in vivo [J]. Journal of Guangzhou University of Traditional Chinese Medicine, 2020,37(08):1542-1549.

[9] HU Q, YOU SP, LIU T, et al. Una investigació sobre l'efecte contra el càncer de fetge de cistanche [J]. Carcinogènesi, Teratogènesi i Mutagènesi, 2018,30(03):194-199.

[10] XU Q, QIN W, WU FZ, et al. Efecte de la decocció de Roucongrong (Herba Cistanches Deserticolae) a la substància negra mitjançant la via de senyalització Wnt/-catenina en rates amb malaltia de Parkinson induïda per 6-hidroxidopamina[10] J].Journal of Traditional Chinese Medicine,2021,41(05):762-770.

[11] YIN SL, WANG HB, YANG S. Efectes neuroprotectors del polisacàrid de Cistanche Deserticola en rates de Parkinson induïts per 6-HODA causat per l'activació de la via de senyalització Wntt/-catenina[J]. Xinès 10 Journal of Integrative Medicine on Cardio-Cerebrovascular Disease, 2020,18(08):1227-1230.

[12] TANG C H. L'equinacòsid inhibeix les cèl·lules canceroses de mama suprimint la via de senyalització Wnt/-catenina [D]. Universitat Mèdica de Chongqing, 2020.

[13] FENG L, MA QL, SHI L, et al. L'equinaceïna inhibeix la proliferació de cèl·lules de leucèmia mieloide aguda suprimint el senyal SOX4/Wnt/beta-catenina [J]. Immunological Journal, 2020,36(02):138-142.

[14] Clevers H, et al. Senyalització i malaltia de Wnt/-catenina [J]. Cèl·lula. 2012, 149(6):1192-205.

[15] Russell JO, Monga SP. Senyalització Wnt/ -Catenina en el desenvolupament del fetge, l'homeòstasi i la patobiologia[J]. Annu Rev Pathol. 13 de 2018: 351-378. doi:10.1146/annurev-pathol-020117-044010

[16] LIU CY, CHEN KF, CHEN PJ. Tractament del càncer de fetge [J]. Cold Spring Harb Perspect Med. 2015, 5(9):a021535.

[17] WANG F, LI R, TU P, et al. Els glucòsids totals de Cistanche deserticola afavoreixen la recuperació de la funció neurològica induint la regeneració neurovascular mitjançant la via Nrf-2/Keap-1 en rates MCAO/R. Fronteres en farmacologia 2020, 11, 236.

[18] CANÇÓ QJ. Efecte inhibidor dels extractes de fruites d'Akebia sobre l'adhesió, la migració i la invasió de cèl·lules humanes d'hepatoma HepG2 i mecanismes relacionats [D]. Universitat de Medicina Tradicional Xinesa de Xangai, 2019.

[19] SUN Q, WANG J, LI Y, et al. Síntesi i avaluació de les activitats citotòxiques dels derivats de l'artemisinina[J]. Chem Biol Drug Des. 2017, 90(5): 1019-1028.

[20] ZHAO YM, SUN LN, ZHOU HY, et al. Els canals de potassi dependents del voltatge estan implicats en l'apoptosi induïda pel glutamat de les neurones de l'hipocamp de rata [J]. Neurosci Lett. 2006, 398(1-2):22-27.

[21] GALLE PR, FOERSTER F, KUDO M, et al. Biologia i importància de l'alfa-fetoproteïna en el carcinoma hepatocel·lular [J]. Liver Int, 2019, 39(12): 2214-2229.

[22] MA G, CHEN J, WEI T, et al. Inhibició dels papers de FOXA2 en la migració i invasió de cèl·lules de càncer de fetge mitjançant la supressió transcripcional de microRNA-103a-3p i l'activació de l'eix GREM2/LATS2/YAP [J]. Citotecnologia. 2021, 73(4): 523-537.

[23] KAMARAJAH SK, FRANKEL TL, SONNNENDAY C, et al. Avaluació crítica del sistema d'estadificació de la 8a edició de la Comissió Conjunta Americana sobre el Càncer (AJCC) per a pacients amb carcinoma hepatocel·lular (HCC): una anàlisi de vigilància, epidemiologia i resultats finals (SEER)[J]. J Surg Oncol. 2018, 117(4):644-650.

[24] EDGE SB, COMPTON CC. The American Joint Committee on Cancer: la 7a edició del manual d'estadificació del càncer de l'AJCC i el futur de TNM[J]. Ann Surg Oncol. 2010, 17(6):1471-1474.

[25] VAUTHEY JN, LAUWERS GY, ESNAOLA NF, et al. Estadificació simplificada del carcinoma hepatocel·lular [J]. Revista d'oncologia clínica: revista oficial de la Societat Americana d'Oncologia Clínica. 2002, 20(6): 1527-36.

[26] ZHENG R, ZHANG S, ZENG H, et al. Incidència i mortalitat per càncer a la Xina, 2016. Journal of the National Cancer Center, 2022, 2(1), 1–9.

[27] ANWANWAN D, SINGH SK, SINGH S, et al. Reptes del càncer de fetge i possibles enfocaments de tractament [J]. Biochim Biophys Acta Rev Càncer. 2020, 1873(1): 188314.

[28] CHAFFER CL, WEINBERG RA. Una perspectiva sobre la metàstasi de cèl·lules canceroses [J]. Science, 2011, 331(6024): 1559-1564.

[29] ZHONG Z, YU J, VIRSHUP DM, et al. Wnts i els distintius del càncer [J]. Cancer Metastasis Rev 2020, 39: 625–645.

[30] SYAM S, ABDUL AB, SUKARI MA, et al. Els efectes de supressió del creixement de la girinimbina sobre HepG2 impliquen la inducció de l'apoptosi i l'aturada del cicle cel·lular [J]. Molècules. 2011, 16(8):7155-7170.

[31] ZHANG X, LUO W, ZHAO W, et al. Apoptosi induïda per isocriptotanshinona i senyalització MAPK activada en cèl·lules MCF-7 de càncer de mama humà[J]. J Càncer de mama. 2015, 18(2):112-118.

[32] Ponselvi Induja M, Ezhilarasan D, Ashok Vardhan N. L'extracte metanòlic d'Evolvulus alsinoides desencadena l'apoptosi a les cèl·lules HepG2[J]. Avicenna J Phytomed. 2018, 8(6): 504-512.11

[33] YANG G, WANG SP, ZHONG LF, et al. 6-El gingerol indueix l'apoptosi a través de l'eix lisosomal-mitocondrial a les cèl·lules G2 de l'hepatoma humà[J]. Phytother Res. 2012, 26(11):1667-1673. doi:10.1002/ptr.4632

[34]  LI J, GUO G, FAN YM, et al. Disheveled promou la proliferació del glioma: un estudi experimental [J]. Chinese Remedies & Clinics, 2021, 21(18): 3077-3080.

[35] Fiedler M, Mendoza-Topaz C, Rutherford TJ, Mieszczanek J, Bienz M. Disheveled interacciona amb la interfície de polimerització del domini DIX d'Axin per interferir amb la seva funció en la regulació a la baixa -catenina[J]. Proc Natl Acad Sci US A. 2011;108(5):1937-1942. doi:10.1073/pnas.1017063108.

[36]  SHI QQ, ZUO GW, FENG ZQ, et al. Estudi sobre l'efecte anti-hepatoma del ginsenòsid Rh2 i el mecanisme de degradació de la -catenina mitjançant l'activació de GSK-3 [J]. Drogues tradicionals i herbes xineses, 2016,47(18):3231-3238.

[37] HE S, TANG S. WNT/-catenina senyalització en el desenvolupament de càncers de fetge[J]. Biomed Pharmacother. 2020, 132: 110851.

[38] HU P, CHENG B, HE Y, et al. L'autofàgia suprimeix la proliferació de cèl·lules HepG2 mitjançant la inhibició de la senyalització glipican-3/wnt/-catenina [J]. Onco apunta allà. 2018;11:193-200.

[39] GAO YX, YANG TW, YIN JM, et al. Progrés i perspectives dels biomarcadors en càncer de fetge primari (Revisió) [J]. Int J Oncol. 2020, 57(1): 54-66.

[40] Tangkijvanich P, Anukulkarnkusol N, Suwangool P, et al. Característiques clíniques i pronòstic del carcinoma hepatocel·lular: anàlisi basada en els nivells sèrics d'alfa-fetoproteïna [J]. J Clin Gastroenterol. 2000, 31(4):302-308.

[41] FENG D, DUAN H, LYU YN, et al. Aplicació de Cistanche Deserticola Ma en aliments funcionals a la Xina[J]. Ciència i tecnologia dels aliments, 2021,46(12):76-81.