L'extracte de fulla de Glochidion Littorale presenta efectes neuroprotectors en Caenorhabditis Elegans mitjançant l'activació DAF-16

Per a més informació poseu-vos al correu electrònictina.xiang@wecistanche.com 
Resum:Una sèrie de plantes utilitzades en medicina popular a Tailàndia i Àsia oriental estan despertant interès a causa de l'elevada bioactivitat dels seus extractes. L'objectiu d'aquest estudi era examinar els extractes de fulles comestibles de 20 plantes trobades a Tailàndia i investigar els possibles efectes neuroprotectors de la mostra més bioactiva. Es va determinar el contingut total de fenols i flavonoides i l'activitat d'eliminació de 2,2-difenil-1-picrilhidrazilradicals per als 20 extractes de fulles. A partir d'aquests assajos, l'extracte de fulla de Glochidionlittorale (GLE), que va mostrar un valor elevat en tots els paràmetres provats, es va utilitzar en experiments posteriors per avaluar els seus efectes sobre la neurodegeneració enCaenorhabditis elegans. El tractament amb GLE va millorar l'estrès oxidatiu induït per H2O2-atenuant l'acumulació d'espècies reactives d'oxigen i protegint els cucs contra la neurodegeneració induïda pel 1-metil-4-fenilpiridini. Els efectes neuroprotectors observats poden estar associats amb l'activació del factor de transcripció DAF-16. La caracterització d'aquest extracte per LC-MS va identificar diversos compostos fenòlics, com la miricetina, la cumestrina, l'àcid clorogènic i l'hesperidina, que poden tenir un paper clau enneuroprotecció. Aquest estudi informa de la nova activitat neuroprotectora de GLE, que es pot utilitzar per desenvolupar tractaments per a malalties neurodegeneratives com la síndrome de Parkinson.

Paraules clau: Caenorhabditis elegans; extracte de fulla;neuroprotecció; activitat antioxidant; DAF-16

1. Introducció 

Els trastorns neurodegeneratius, com ara la malaltia d'Alzheimer i la malaltia de Parkinson (PD), plantegen grans preocupacions sanitàries i financeres a les organitzacions sanitàries mundials [1]. Tot i que la vida humana ha augmentat en les últimes dècades als països industrialitzats, també ha augmentat la prevalença de malalties relacionades amb l'edat. S'espera que la incidència de trastorns d'aparició tardana com les alteracions neurològiques augmenti ràpidament durant les properes dècades. Per tant, és crucial fomentar estudis i realitzar assaigs clínics sobre compostos que poden tenir el potencial de curar, prevenir o, almenys, retardar l'aparició de malalties neurodegeneratives [2]. Un dels trets característics de la MP és la pèrdua progressiva de neurones dopaminèrgiques (DA) a la substància negra [3]. En la patogènesi de la PD, l'augment de la producció d'espècies reactives d'oxigen (ROS) té un paper clau en la pèrdua de cèl·lules DA [4]. Per tant, la reducció de l'estrès oxidatiu es considera un enfocament terapèutic prometedor en el tractament de la MP [5]. El 1-metil-4-fenilpiridini (MPP plus ), que inhibeix l'activitat del complex I mitocondrial, pot induir símptomes semblants a la PD en humans i models animals [6].

L'ús deCaenorhabditis eleganscom a model in vivo proporciona certs avantatges en l'estudi de la MP [7]. El nematode és senzill, econòmic i té un cicle de vida curt. Dóna suport a estudis que impliquen anàlisis a gran escala. A més, la xarxa neuronal de C. elegans s'ha cartografiat completament. Conté 8 neurones DA i gens homòlegs relacionats amb PD [8]. La neurodegeneració, que imita els símptomes parkinsonians, es pot induir a C. elegans mitjançant el tractament amb neurotoxines com MPP plus [9].
Els compostos antioxidants naturals representen fonts atractives per desenvolupar fàrmacs per tractar malalties neurodegeneratives a causa dels seus efectes neuroprotectors en models animals i de baixa toxicitat [3]. Se sap que els polifenols es troben entre els antioxidants més abundants en la dieta humana [10]. També s'ha comprovat que els processos oxidatius estan implicats en moltes patologies, com ara la neurodegeneració, el càncer, la diabetis, les malalties cardiovasculars i antiinflamatòries. Per tant, trobar polifenols amb propietats antioxidants de fonts naturals podria contribuir a prevenir o tractar aquestes patologies. Aquest estudi es va centrar en extractes de fulles comestibles de plantes que es troben a Tailàndia. La majoria de varietats conreades àmpliament al nord i al sud de Tailàndia s'han utilitzat com a medicina popular contra lesions i malalties generals; tanmateix, hi ha pocs informes sobre els seus efectes neuroprotectors.
En aquest estudi, primer vam examinar els extractes de fulles comestibles de 20 plantes cultivades a Tailàndia i vam avaluar el seu contingut fenòlic i flflavonoides i la seva activitat d'eliminació de radicals 2,2-difenil-1- picrhidrazil (DPPH). Els efectes de l'extracte de fulla de Glochidion littorale (GLE), que va mostrar un valor elevat en tots els paràmetres provats, es van avaluar en C. elegans amb neurodegeneració. A més, es van examinar les possibles vies implicades en l'efecte neuroprotector de GLE, juntament amb la identificació dels components principals en GLE.
Com que se sap que el factor de transcripció DAF-16 té un paper clau en la regulació de l'estrès oxidatiu [11], es va plantejar la hipòtesi que el GLE podria orientar-se a DAF-16. La soca CF1038 de C. elegans, que és una soca mutant de pèrdua de funció DAF-16, es va utilitzar per determinar la taxa de supervivència dels cucs tractats amb i sense GLE. En l'estrès oxidatiu induït per H2O2-, el tractament amb GLE no va augmentar la taxa de supervivència dels cucs transgènics (figura 1C).

2. Resultats

2.1. Projecció de fulles de plantes tailandeses

Els extractes bruts de fulles comestibles de plantes cultivades a Tailàndia es van preparar per ultrasons. Els extractes de fulles de 20 plantes es van examinar pel seu contingut fenòlic i flavonoides i l'activitat antioxidant mitjançant un assaig d'eliminació de radicals DPPH. Es va trobar que poques de les mostres provades, com Glochidion sphaerogynum i Mentha piperita, posseïen una alta activitat d'eliminació de radicals amb un baix contingut en fenòlics i flflavonoides, mentre que algunes mostres, com Clinacanthus nutans i Ocimum × citriodorum, van mostrar la tendència contrària (taula 1). ). L'extracte de fulla de G. littorale va mostrar una alta activitat d'eliminació de radicals DPPH, així com un alt contingut de fenòlics i flflavonoides. Per tant, es van investigar més a fons les bioactivitats associades a G. littorale.

2.2. Resistència millorada de GLE contra l'estrès oxidatiu mitjançant DAF-16 a C. Elegans

Es va investigar l'efecte de GLE sobre la supervivència dels cucs N2 sota estrès oxidatiu. El tractament amb H2O2 (5 mM) va induir un 75 per cent de mort en el grup control, mentre que el cotractament amb 50 µg/mL i concentracions més altes de GLE es va associar amb una taxa de supervivència elevada (figura 1A). Entre les concentracions provades de GLE, 100 µg/mL i 200 µg/mL es van associar amb les taxes de supervivència més altes (82,0 per cent i 88,2 per cent, respectivament). Per tant, aquestes dues concentracions es van utilitzar en experiments posteriors. Per avaluar l'efecte antioxidant de GLE in vivo, es van mesurar els nivells de ROS intracel·lulars en nematodes de tipus salvatge mitjançant diacetat de 2',7'-diclorodihidroflfluoresceïna (H2DCF-DA), una sonda de fluorescència coneguda per detectar la producció intracel·lular de ROS. Es van observar disminucions significatives de les intensitats de fluorescència en els grups tractats amb GLE en comparació amb les del grup no tractat (figura 1B), confirmant la propietat antioxidant de GLE.

2.3. El tractament GLE va reduir la letalitat de la MPP més la neurotoxicitat DA induïda mitjançant DAF-16 a C. Elegans C. elegans posseeix 8 neurones DA [8]. La degeneració selectiva d'aquestes neurones DA es va avaluar després de l'exposició a MPP plus. El tractament de cucs N2 de tipus salvatge amb 0,75 mM MPP plus va donar lloc a una disminució notable de la supervivència (figura 2). Tanmateix, el cotractament amb GLE va augmentar significativament la supervivència dels cucs. Es va investigar l'efecte del tractament amb GLE sobre els cucs mutants daf-16. Com es mostra a la figura 3 i la taula 2, el tractament amb GLE no va augmentar la supervivència d'aquests cucs després de l'exposició a MPP plus en comparació amb el del grup control. Aquests resultats suggereixen que el DAF-16 pot ser necessari per mediar l'efecte neuroprotector de GLE a C. elegans. A continuació, es va utilitzar una soca mutant amb pèrdua de funció de DAF-2, CB1370, per determinar si DAF-2 estava implicat en els efectes neuroprotectors observats. Tal com es mostra a la figura 4 i la taula 3, la supervivència mitjana i màxima va augmentar significativament en els cucs mutants daf-2 tractats amb GLE.

2.4. Efectes de GLE en la localització de DAF-16

S'ha demostrat que l'activació de DAF-16 està regulada per la seva acumulació nuclear [12]. Posteriorment, vam investigar si GLE podria induir l'acumulació nuclear de DAF-16 en una soca transgènica TJ356 que expressa una proteïna de fusió DAF{-16::GFP. Els resultats van mostrar que després de 48 h d'incubació amb 100 µg/mL de GLE, la intensitat de fluorescència verda de DAF -16 al nucli va augmentar significativament en comparació amb la del grup no tractat (figura 5).

2.5. Caracterització fitoquímica en GLE

LC-MS es va realitzar per perfilar els fitoquímics a GLE, i els seus resultats es presenten a la figura6. Els pics cromatogràfics es van identificar comparant les dades de MS amb bases de dades basades en la cerca de valors m/z dels pics d'ions moleculars en el mode positiu [M més H]més. En conseqüència, es van detectar la miricetina, la cumestrina, l'àcid clorogènic i l'hesperidina com a compostos principals (taula4).

3. Discussió

Els extractes de plantes són una font rica de compostos bioactius naturals. Molts estudis han avaluat extractes de plantes utilitzats als països del sud-est asiàtic, inclosa Tailàndia, on aquests extractes són components de la medicina popular [13,14]. En aquest estudi, es van examinar els extractes de 20 fulles de plantes comestibles de Tailàndia i es va seleccionar G. littorale per a una investigació posterior perquè mostrava un alt contingut de fenol, contingut de flflavonoides i activitat d'eliminació de radicals. Diversos estudis han investigat diverses espècies del gènere Glochidion [15–19]; tanmateix, hi ha pocs estudis sobre les propietats funcionals i els components de G. littorale. Les nostres dades van demostrar que GLE va protegir C. elegans contra l'estrès oxidatiu induït per H2O2- reduint l'acumulació intracel·lular de ROS. Això podria haver estat degut a l'alt contingut de compostos fenòlics com els flavonoides, que se sap que posseeixen una forta activitat antioxidant [20]. Aquestes troballes són similars a les obtingudes per Duangjan et al. (2019), que van demostrar que els extractes de fulles de G. zeylanicum poden protegir C. elegans contra l'estrès oxidatiu [21]. La via de senyalització semblant a la insulina (IIS) regula el creixement, la resposta a l'estrès i la longevitat en C. elegans [22,23]. Hem trobat que el mutant nul de daf-16 C. elegans tractat amb GLE era susceptible a l'estrès oxidatiu. Aquest resultat suggereix que l'efecte antioxidant de GLE en la reducció de l'estrès oxidatiu en nematodes possiblement està implicat no només en l'activitat d'eliminació de radicals, sinó també en la regulació del factor de transcripció DAF-16.

Es van examinar els efectes protectors de GLE contra la toxicitat induïda per MPP més en C. elegans. Les neurones DA dels nematodes prenen MPP més principalment mitjançant transportadors DA d'alta afinitat, que s'observa de manera similar en mamífers. L'acumulació de MPP plus dins de les neurones inactiva el complex mitocondrial I de la cadena respiratòria i indueix la mort cel·lular [24–27]. Es va trobar que el tractament GLE redueix significativament la letalitat associada amb MPP més el tractament en cucs de tipus salvatge. La via IIS està modulada per pèptids semblants a la insulina a través del receptor DAF-2 a C. elegans [28]. En condicions normals, la via IIS inhibeix la fosforilació de DAF-16 i impedeix la seva translocació nuclear. En els mutants nuls daf-2, el grup tractat amb GLE va sobreviure més temps que el grup control. En canvi, no es va observar cap diferència en la supervivència entre el grup control i el grup tractat amb GLE que contenia daf-16 cucs mutants nuls. Se sap que la senyalització DAF-2 regulada a la baixa facilita l'entrada de DAF-16 al nucli, on pot regular l'expressió dels gens diana i controlar la resistència a l'estrès i la longevitat [29]. Això pot explicar per què els cucs mutants daf-2 tractats amb GLE van mostrar una supervivència relativament més alta. A més, es va observar una acumulació nuclear augmentada de DAF-16 en cucs tractats amb GLE mitjançant TJ356 DAF-16::GFPC transgènic. elegans. De manera acumulada, aquests resultats van indicar que GLE podria haver mostrat els seus efectes neuroprotectors mitjançant l'activació de DAF-16.

4.3. Continguts fenòlics totalsS'ha utilitzat el mètode Folin-Ciocalteu per determinar el contingut fenòlic total. Breument, es van barrejar 11, 4 µL de l'extracte (1 mg/ml) amb 227, 3 µL de solució de Na2CO3 al 2 per cent (p/v) i després es va deixar reposar la barreja a temperatura ambient durant 2 min. Després d'afegir 11,4 µL de reactiu Folin-Ciocalteu al 10 per cent (v/v). La incubació a les fosques es va dur a terme durant 30 min. Posteriorment, es va mesurar l'absorbància a 750 nm mitjançant un lector de microplaques (Nivo 3F Multimode Plate Reader, PerkinElmer, Waltham, MA, EUA). L'àcid gàl·lic es va utilitzar com a estàndard per a la corba de calibratge. El contingut fenòlic total es va expressar com a equivalents d'àcid gàlic (mg equivalent d'àcid gàlic/g d'extracte vegetal).

4.4. Contingut total de flavonoides El mètode colorimètric de clorur d'alumini es va utilitzar per mesurar el contingut total de flavonoides. Breument, es van barrejar 25 µL de l'extracte (2 mg/mL) amb 7,5 µL de solució de NaNO2 al 5% (p/v) i 152,5 µL d'aigua destil·lada. Després de 6 min, es van afegir 15 µL de solució d'AlCl3 al 10 per cent (p/v) i es van deixar reposar durant 5 min. A continuació, es van afegir 50 µL de solució de NaOH 1 M a la mescla. Posteriorment, la barreja es va incubar a la foscor durant 15 min i es va mesurar l'absorbància a 510 nm mitjançant un lector de microplaques. El contingut total de flavonoides es va calcular generant una corba de calibratge utilitzant quercetina com a estàndard i els resultats es van expressar com a equivalent de quercetina (mg equivalent de quercetina/g d'extracte vegetal).4.5. Activitat d'eliminació de radicals lliures La capacitat d'eliminar radicals lliures es va avaluar mitjançant assaigs de DPPH [32]. Breument, es van barrejar 100 µL de l'extracte (1 mg/mL) amb 100 µL de solució de DPPH. Després de 30 min, es va mesurar l'absorbància a 517 nm mitjançant un lector de microplaques. Els resultats es van expressar com a percentatge d'inhibició dels radicals DPPH.

4.10. La localització nuclear de DAF-16transgènic C. elegans TJ356, que expressa una proteïna de fusió DAF-16-GFP, es va utilitzar per examinar la distribució intracel·lular de DAF-16. Els nematodes de l'etapa L1 es van tractar amb GLE durant 48 h a 2{{30}} ◦C. A continuació, els cucs es van transferir a un coixinet d'agarosa al 2 per cent sobre un portaobjectes de vidre i es van anestesiar afegint una gota (aproximadament 20 µL) d'azida de sodi 25 µM al coixinet d'agarosa. L'expressió de GFP es va examinar mitjançant microscòpia de fluorescència (EVOSflfl; Advanced Microscopy Group, Bothell, WA, EUA). La intensitat mitjana de fluorescència de DAF-16 als nuclis es va analitzar mitjançant el programari Image J (National Institutes of Health, Bethesda, MD, EUA). 4.11. Perfil fitoquímic mitjançant LC-MSL'extracte de fulla es va analitzar mitjançant el LCMS-8040 (Shimadzu). Els espectres de masses es van adquirir en un rang de m/z 50–1000 mitjançant el mode d'escaneig Q3. La solució es va injectar en un Inertsil ODS-3 (250 × 2,1 mm, 5 µm, GL Sciences, Tòquio, Japó) a una temperatura de columna a 40 ◦ C utilitzant un gradient de (A) 0,1 per cent d'àcid fòrmic i (B). ) acetonitril/aigua (80/20) que conté un 0,1 per cent d'àcid fòrmic. Es va utilitzar el següent gradient amb un cabal de 0,2 ml/min: 0-100 per cent de B (0-45 min), 100 per cent de B (45-50 min) i 0 per cent de B (50-60 min). Els compostos es van identificar putativament fent coincidir els valors m/z experimentals amb la biblioteca de valors m/z calculats teòricament a les bases de dades, incloses la base de dades de metabolomes humans i la base de dades METLIN. 4.12. Anàlisi estadística Les dades es van expressar com la mitjana ± desviació estàndard per a cada grup. La diferència significativa entre els dos grups es va avaluar mitjançant la prova t, mentre que la diferència entre tres i més grups es va avaluar mitjançant ANOVA unidireccional, seguida de la prova de comparació post-hoc de Tukey. La significació estadística es va establir en p <0,001 i="" p=""><0,0001. per="" als="" assajos="" de="" vida="" útil,="" la="" supervivència="" de="" c.="" elegans="" es="" va="" representar="" mitjançant="" corbes="" de="" supervivència="" de="" kaplan-meier="" i="" es="" va="" analitzar="" mitjançant="" proves="" de="" rang="" de="" registre="" mitjançant="" el="" programari="" graphpad="" prism="" (versió="" 9.01;="" graphpad="" software,="" san="" diego,="" ca,="">

Abdel Fawaz Bagoudou 1, Yifeng Zheng 2, Masahiro Nakabayashi 2, Saroat Rawdkuen 3, Hyun-Young Park 4, Dhiraj A. Vattem 4,5, Kenji Sato 6, Soichiro Nakamura 1 i Shigeru Katayama 1,2*

1 Escola de Postgrau en Medicina, Ciència i Tecnologia, Universitat de Shinshu, 8304 Minamiminowa, Kamiina, Nagano 399-4598, Japó;

2Institut de Ciències Biomèdiques, Universitat de Shinshu, 8304 Minamiminowa, Kamiina, Nagano 399-4598, Japó;

3 School of Agro-Industry, Mae Fah Luang University, 333 Moo 1, Thasud, Muang, Chiang Rai 57100, Tailàndia;saroat@mfu.ac.th

4 Edison Biotechnology Institute, Konneker Research Laboratories, Ohio University, Athens, OH 45701, EUA;

5 College of Health Sciences & Professions, Ohio University, Athens, OH 45701, EUA

6 Graduate School of Agriculture, Kyoto University, Kyoto 606-8502, Japó;

Contribucions de l'autor:

Contribucions de l'autor: Conceptualització, SR, DAV i SK; investigació, AFB, YZ, MN, SR, H.-YP, DAV i KS; redacció: preparació de l'esborrany original, AFB; redacció: revisió i edició, SK; supervisió, SN Tots els autors han llegit i acceptat la versió publicada del manuscrit.
Finançament: aquesta investigació no va rebre cap finançament extern.
Declaració de la Junta de Revisió Institucional: No aplicable.
Declaració de consentiment informat: no aplicable.
Declaració de disponibilitat de dades: les dades estan disponibles per l'autor corresponent a petició raonable.
Conflictes d'interessos: els autors declaren no conflicte d'interessos.
Disponibilitat de mostres: les mostres dels compostos no estan disponibles als autors

Referències

1 Pohl, F.; Lin, PKT El potencial ús de productes naturals vegetals i extractes de plantes amb propietats antioxidants per a la prevenció/tractament de malalties neurodegeneratives: assajos in vitro, in vivo i clínics. Molècules 2018, 23, 3283. [CrossRef] [PubMed]

2. Kim, GH; Kim, JE; Rhie, SJ; Yoon, S. El paper de l'estrès oxidatiu en les malalties neurodegeneratives. Exp. Neurobiol. 2015, 24, 325–340. [CrossRef] [PubMed]

3. Lu, X.-l.; Yao, X.-l.; Liu, Z.; Zhang, H.; Li, W.; Li, Z.; Wang, G.-L.; Pang, J.; Lin, Y.; Xu, Z. Efectes protectors del xiloketal B contra la neurotoxicitat induïda per MPP més a Caenorhabditis elegans i cèl·lules PC12. Cervell Res. 2010, 1332, 110–119. [Ref creuat]

4. Trimmer, PA; Bennett, JP, Jr. El model cíbrid de la malaltia de Parkinson esporàdica. Exp. Neurol. 2009, 218, 320–325. [Ref creuat]

5. Cheon, S.-M.; Jang, I.; Lee, MH; Kim, DK; Jeon, H.; Cha, DS Sorbus alnifolia protegeix la neurodegeneració dopaminèrgica a Caenorhabditis elegans. Farmàcia. Biol. 2016, 55, 481–486. [Ref creuat]

6. Schmidt, N.; Ferger, B. Trobades neuroquímiques en el model MPTP de la malaltia de Parkinson. J. Transmissió Neural. 2001, 108, 1263–1282. [CrossRef] [PubMed]

7. Harrington, A.; Yacoubian, TA; Slone, SR; Caldwell, K.; Caldwell, G. Anàlisi funcional de la neuroprotecció mediada de VPS41- en Caenorhabditis elegans i models de mamífers de la malaltia de Parkinson. J. Neurosci. 2012, 32, 2142–2153. [CrossRef] [PubMed]

8. Fu, R.-H.; Harn, H.-J.; Liu, S.-P.; Chen, C.-S.; Chang, W.-L.; Chen, Y.-M.; Huang, J.-E.; Li, R.-J.; Tsai, S.-Y.; Hung, H.-S.; et al. n-butilideneftalida protegeix contra la degeneració neuronal dopaminèrgica i l'acumulació de sinucleïna en models de Caenorhabditis elegans de la malaltia de Parkinson. PLOS ONE 2014, 9, e85305. [Ref creuat]

9. Jadiya, P.; Khan, A.; Sammi, SR; Kaur, S.; Mir, SS; Nazir, A. Efectes antiparkinsonians de Bacopa monnieri: coneixements de models transgènics i farmacològics de Caenorhabditis elegans de la malaltia de Parkinson. Bioquímica. Biofísica. Res. Commun. 2011, 413, 605–610. [CrossRef] 10. Andrade, JMDM; Fasolo, D. Polifenols Antioxidants de fonts naturals i contribució a la promoció de la salut. En Polifenols en salut humana i malaltia; Elsevier BV: Amsterdam, Països Baixos, 2014; pàgines 253–265.

11. Hsu, A.-L.; Murphy, CT; Kenyon, C. Regulació de l'envelliment i la malaltia relacionada amb l'edat per DAF-16 i el factor de xoc tèrmic. Ciència 2003, 300, 1142–1145. [Ref creuat]

12. Henderson, ST; Johnson, TE daf-16 integra aportacions ambientals i de desenvolupament per mediar l'envelliment del nematode Caenorhabditis elegans. Curr. Biol. 2001, 11, 1975–1980. [Ref creuat]

13. Hutadilok-Towatana, N.; Chaiyamutti, P.; Panthong, K.; Mahabusarakam, W.; Rukachaisirikul, V. Activitats antioxidants i d'eliminació de radicals lliures d'algunes plantes utilitzades en la medicina popular tailandesa. Farmàcia. Biol. 2006, 44, 221–228. [Ref creuat]

14. Stewart, P.; Boonsiri, P.; Puthong, S.; Rojpibulstit, P. Activitat antioxidant i canvis ultraestructurals en línies cel·lulars de càncer gàstric induïts per extractes de plantes populars comestibles del nord-est de Tailandia. Complement BMC. Altern. Med. 2013, 13, 60. [CrossRef]

15. Hui, W.; Lee, W.; Ng, K.; Chan, C. L'aparició de triterpenoides i esteroides en tres espècies de Glochidion. Phytochemistry 1970, 9, 1099–1102. [Ref creuat]

16. Takeda, Y.; Mima, C.; Masuda, T.; Hirata, E.; Takushi, A.; Otsuka, H. Glochidioboside, un glucòsid d'alcohol (7S,8R)-dihydrodeh ydrodiconiferyl de fulles de glochidia obovatum. Fitoquímica 1998, 49, 2137–2139. [Ref creuat]

17. Zhang, X.; Chen, J.; Gao, K. Components químics de Glochidion wrightii Benth. Bioquímica. Syst. Ecol. 2012, 45, 7–11. [Ref creuat]

18. Tian, ​​J.-M.; Fu, X.-Y.; Zhang, Q.; Ell, H.-P.; Gao, J.-M.; Hao, X.-J. Components químics de Glochidion assamicum. Bioquímica. Syst. Ecol. 2013, 48, 288–292. [Ref creuat]

19. Kongkachuichai, R.; Charoensiri, R.; Yakoh, K.; Kringkasemsee, A.; Insung, P. Valor nutricional i contingut antioxidant de verdures autòctones del sud de Tailàndia. Química dels Aliments. 2015, 173, 838–846. [Ref creuat]

20. Pietta, P.-G. Flavonoides com a antioxidants. J. Nat. Prod. 2000, 63, 1035–1042. [CrossRef] [PubMed]

21. Duangjan, C.; Rangsinth, P.; Gu, X.; Zhang, S.; Pica l'ullet, M.; Els extractes de fulles de Tencomnao, T. Glochidion zeylanicum presenten propietats d'allargament de la vida útil i de resistència a l'estrès oxidatiu en Caenorhabditis elegans mitjançant vies de senyalització DAF-16/FoxO i SKN-1/Nrf-2. Phytomedicine 2019, 64, 153061. [CrossRef]

22. Jensen, VL; Gallo, M.; Riddle, DL Objectius de DAF-16 implicats en la longevitat adulta i la formació de dauer de Caenorhabditis elegans. Exp. Gerontol. 2006, 41, 922–927. [CrossRef] [PubMed]

23. Daitoku, H.; Fukamizu, A. FOXO Factors de transcripció a les xarxes reguladores de la longevitat. J. Biochem. 2007, 141, 769–774. [Ref creuat]

24. Lakso, M.; Vartiainen, S.; Moilanen, A.-M.; Sirviö, J.; Tomàs, JH; Nass, R.; Blakely, RD; Wong, G. Pèrdua neuronal dopaminèrgica i dèficits motors en Caenorhabditis elegans que sobreexpressen -sinucleïna humana. J. Neurochem. 2004, 86, 165–172. [CrossRef] [PubMed]

25. Nass, R.; Hall, DH; Miller, DM; Blakely, RD degeneració induïda per neurotoxines de neurones de dopamina a Caenorhabditis elegans. Proc. Natl. Acad. Ciència. EUA 2002, 99, 3264–3269. [Ref creuat]

26. Wang, Y.-M.; Pu, P.; Le, W.-D. L'esgotament d'ATP és la causa principal de la MPP més la mort neuronal induïda per la dopamina i la letalitat del cuc en C. elegans transgènics -sinucleïna. Neurosci. Bou. 2007, 23, 329–335. [Ref creuat]

27. Braungart, E.; Gerlach, M.; Riederer, P.; Baumeister, R.; Hoener, M. Caenorhabditis elegans MPP més el model de la malaltia de Parkinson per a la detecció de fàrmacs d'alt rendiment. Neurodegener. Dis. 2004, 1, 175–183. [Ref creuat]

28. Panowski, SH; Dillin, A. Signals of youth: Endocrine regulation of aging in Caenorhabditis elegans. Tendències Endocrinol. Metab. 2009, 20, 259–264. [Ref creuat]