L'alta concentració de iopromida indueix l'apoptosi i l'autofàgia a les cèl·lules renals embrionàries humanes mitjançant l'activació d'una via d'estrès cel·lular depenent de ROS
Mar 24, 2022
Resum.L'ús de mitjans de contrast iodats pot afectarfunció renal. No obstant això, cap informe ha abordat la nefrotoxicitat de dosis elevades de mitjans de contrast iodats en condicions normalsronyócèl·lules i els seus mecanismes moleculars associats. Materials i mètodes: Es va avaluar la proliferació cel·lular mitjançant l'assaig MTT. La mort cel·lular es va avaluar examinant els canvis morfològics i l'assaig TUNEL. L'autofàgia es va detectar mitjançant la tinció de taronja d'acridina i la tinció de lisotracker. Es va examinar la producció d'espècies reactives d'oxigen i l'activitat de la cinasa AKT. Resultats: la loperamida va induir la mort cel·lular i va desencadenar l'apoptosi i l'autofàgia a les cèl·lules HEK 293. La viabilitat cel·lular es va restaurar significativament en presència d'un inhibidor de la pan-caspasa o d'un eliminador de ROS, N-acetil-L-cisteïna. Es va trobar que l'activitat de la cinasa AKT es va reduir a les cèl·lules HEK 293 tractades amb iopromida. Conclusió: altes concentracions de iopromida indueixen dany cel·lular, apoptosi i autofàgia mitjançant la regulació de les vies d'estrès cel·lular activades per AKT i ROS a les cèl·lules HEK 293.
CISTANCHE MILLORARÀ LA FUNCIÓ RENAL/RENAL
Roentgen va descobrir els raigs X a finals del segle XIX, que va ser seguit per la introducció dels mitjans de contrast que contenen iode (ICCM) a principis del segle XX, que va obrir un nou camp d'investigació en ciència mèdica ({{ 4}}). Els agents de contrast que contenen iode s'administren al cos humà a través de les venes i s'utilitzen per a exàmens de diagnòstic radiològic del sistema urinari, del cor, del sistema cefaloraquidi i dels vasos sanguinis de diverses parts del cos. L'ICCM millora el contrast entre el teixit normal i les lesions, proporciona informació sobre les característiques morfològiques de les lesions i millora la sensibilitat de l'examen i la precisió del diagnòstic. L'efecte de millora de la imatge de l'agent de contrast fa visibles molts teixits i lesions cel·lulars (5-8). El principal mecanisme farmacològic és que les molècules de iode de l'agent de contrast que conté iode absorbeixen l'energia dels raigs X, la qual cosa fa que les molècules de iode exerceixin un efecte especial de protecció contra els raigs X. Per tant, a la radiografia apareix una imatge blanca d'alta densitatla pel·lícula, proporcionant així una millora del teixit que conté sang a les imatges (3,5,9,10).
Els agents de contrast que contenen iode es classifiquen segons l'estructura química, l'osmolalitat i el lloc d'injecció. Segons l'estructura química, els agents de contrast que contenen iode es divideixen en quatre tipus: estructures de monòmers iònics, estructures de dímers iònics, estructures de monòmers no iònics i estructures de dímers no iònics. Segons l'osmolalitat, els agents de contrast que contenen iode es divideixen en tres tipus: mitjans de contrast osmolars alts (HOCM), mitjans de contrast osmolars baixos (LOCM) i mitjans de contrast iso-osmolars (IOCM). Segons el lloc d'injecció, els agents de contrast que contenen iode es divideixen en dos tipus: mitjans de contrast intravasculars i subaracnoides (1). En general, els agents de contrast que contenen iode no iònics presenten una osmolalitat inferior que els agents de contrast que contenen iode. A més, els agents de contrast que contenen iode no iònics són menys tòxics i exerceixen efectes al·lèrgics (11, 12). La injecció d'ICCM a l'espai subaracnoidal ha de mostrar una neurotoxicitat baixa i una osmolalitat baixa (13, 14).
CISTANCHE MILLORARÀ LA MALALTIA RENAL/RENAL
Les reaccions adverses als fàrmacs (ADR) dels agents de contrast que contenen iode inclouen reaccions al·lèrgiques i químiques. Els principals símptomes de les reaccions al·lèrgiques són febre, nàusees, vòmits, marejos, erupcions cutànies, picor, esternuts i congestió nasal(4,11,12). Es poden produir pàpules, urticària, calfreds, opressió toràcica, xoc, aturada cardiorespiratòria i mort en cas de reaccions al·lèrgiques greus (8, 11, 12). Les reaccions adverses i les taxes de mortalitat de l'ICCM intravascular no iònic són d'aproximadament 2 a 7 per mil i 2 a 9 per milió, respectivament (15-23). Les reaccions químiques adverses condueixen principalment a la nefropatia induïda per contrast (CIN). CIN és el deteriorament defunció renali empitjorament defunció renaldesprés de l'administració d'agents de contrast que contenen iode. El mecanisme patològic pot incloure vasoconstricció,renalcanvis en el flux sanguini o toxicitat directarenalcèl·lules tubulars (15-27). El 2006, Lameire et al. va assenyalar que CIN exerceix efectes tòxics directes sobrerenalcèl·lules tubulars o hipòxia a larenalmedul·la (4,28). Les principals causes derenalLa hipòxia medul·lar inclou una disminució del flux sanguini, una disminució del transport d'oxigen i un augment del consum d'oxigen. Aquests factors poden estar relacionats amb un augment de la pressió osmòtica, la viscositat i la inducció de la prostaglandina E2 per ICCM(4,28).Estudis anteriors han demostrat que els mitjans de contrast baixos o iso-osmolars a concentracions superiors a 75 mg I/ml (sis vegades més alt que la concentració de dosi normal) podrien inhibir la proliferació cel·lular i induir la mort cel·lular enronyócel·les (KRK52-E, LLC-PK1, HKCS,HK-2). Els tipus de mort cel·lular inclouen l'apoptosi i l'autofàgia (29-35). No obstant això, els mecanismes detallats encara no estan clars. En el present estudi, hem investigat els mecanismes moleculars, inclòs el dany cel·lular, l'apoptosi i l'autofàgia, induïts per la iopromida, que és un LOCM, a les cèl·lules HEK 293.
Paraules clau:iopromida; cèl·lules de ronyó embrionari humà 293; apoptosi; espècies reactives a l'oxígen; ronyó; renal
Materials i mètodes
Línia cel·lular i cultiu. L'embrió humàronyóLa línia cel·lular (HEK) 293 es va comprar al Centre de Recerca i Col·lecció de Biorecursos (Hsinchu, Taiwan, ROC). Les cèl·lules es van mantenir en el medi Eagle modificat de Dulbecco (DMEM) complementat amb sèrum boví fetal al 10% a 37Cin una incubadora amb un 5% de CO. Reactius i productes químics. La iopromida (Ultravist) es va obtenir del Dr. Yuh-Feng Tsai del Departament de Radiologia Diagnòstica de l'Hospital Memorial Shin Kong Wu Ho Su. Excepte on s'indiqui, els reactius químics es van comprar a Sigma-Aldrich (St.Louis, MO, EUA).Morfologia i viabilitat cel·lular. Les cèl·lules HEK 293 (0.8×1{04 cèl·lules/pou) es van cultivar en plaques de 96 pous durant 24 hores i es van tractar amb diferents concentracions (0,25,50,100 i 200 mg/ml) de iopromida durant 24 o 48 h. Es va examinar la morfologia cel·lular per avaluar l'apoptosi o l'autofàgia mitjançant un microscopi lleuger amb un augment de 200x (Leica Microsystems GmbH, Wetzlar, Alemanya). La viabilitat cel·lular es va avaluar mitjançant l'assaig MTT (bromur de tetrazoli blau de tiazolil) tal com es va descriure anteriorment (36). Breument, les cèl·lules es van barrejar amb MTT durant 4 h. L'absorbància a 570 nm es va mesurar mitjançant un lector de microplaques multimode SpectraMax iD3 (Molecular Devices Ltd., San Jose, CA, EUA). El percentatge de viabilitat cel·lular es va calcular establint el grup control no tractat al 100%.
Assaig de desoxinucleotidil transferasa terminal dUTP nick-end labeling (TUNEL). Per detectar trencaments d'ADN, es va utilitzar un kit de detecció de mort cel·lular in situ (Roche, Mannheim, Alemanya) segons les instruccions del fabricant. Breument, les cèl·lules HEK 293 es van sembrar durant 24 h seguits d'un tractament amb 50 mgI / ml de iopromida durant 48 h més. Les cèl·lules es van fixar i es van tenyir amb sondes de fluoresceïna. Les cèl·lules positives de TUNEL es van analitzar mitjançant un citòmetre d'imatge avançat NucleoCounter NC-3000 (ChemoMetee A/S, Allerod, Dinamarca). La intensitat de fluorescència relativa es va calcular utilitzant la relació entre la mitjana mitjana de la intensitat de fluorescència de la mostra i la de les cèl·lules de control no tractades. La intensitat relativa de la fluorescència s'expressa com a canvi de plec (37).Assajos d'activitat de caspasa 3/7 i caspasa 9. Per determinar les alteracions de l'activitat enzimàtica de la caspasa, es van utilitzar el kit d'assaig de caspases-3/7 FAM FLICAw i el kit d'assaig de caspases FAM FLICAw-9 (MyBioSource, San Diego, CA, EUA) segons les instruccions del fabricant. Breument, les cèl·lules HEK 293 es van sembrar en plaques de 6-pous a una densitat de 1 × 106 cèl·lules/pou durant 24 h i es van tractar amb iopromida (50 mglI/ml o 100 mglI/ml) durant 48 h més. Les mostres es van avaluar tal com es va descriure anteriorment (36, 37) i es van analitzar mitjançant el citòmetre d'imatge avançat NucleoCounter NC-3000r (ChemoMetec A/S).
CISTANCHE MILLORARÀ LA INSUFICIÈNCIA RENAL/RENAL
Tinció de taronja d'acridina (AO). AO es va utilitzar per examinar si es van formar orgànuls vesiculars àcids (AVO) a la iopromidacèl·lules tractades. Breument, les cèl·lules HEK 293 es van sembrar durant 24 h seguides d'un tractament amb iopromida (50 mgl / ml) durant 48 h més. Les mostres es van preparar tal com es va descriure anteriorment (37, 38). La intensitat de la fluorescència vermella es va mesurar i analitzar mitjançant un citòmetre d'imatge avançat NucleoCounter* NC-3000 (ChemoMetec A/S). El color vermell brillant fluorescent representa la formació de vacúols autofàgics àcids. La intensitat relativa de la fluorescència es va calcular utilitzant la relació entre la mitjana mitjana de la intensitat de fluorescència de la mostra i la de les cèl·lules de control no tractades. La intensitat relativa de la fluorescència s'expressa com a canvi de plec.
Tinció vermella de LysoTracker. Les cèl·lules HEK 293 es van tractar amb 50 mgl/ml de iopromida durant 48 hores i es van preparar mostres tal com es va descriure anteriorment (37, 38). La intensitat de la fluorescència es va mesurar i analitzar mitjançant un citòmetre d'imatge avançat NucleoCounter NC-3000 (ChemoMetec A/S). El vermell brillant fluorescent representa els orgànuls àcids de les cèl·lules. La intensitat de fluorescència relativa es va calcular utilitzant la relació entre la mitjana mitjana de la intensitat de fluorescència de la mostra i la de les cèl·lules de control no tractades. La intensitat relativa de la fluorescència s'expressa com a canvi de plec.
Detecció de la producció d'espècies reactives d'oxigen (ROS). Per detectar l'impacte de la iopromida en la producció de ROS, les cèl·lules HEK 293 es van tractar amb 50 mgl/ml de iopromida durant 24 h. Les mostres es van preparar tal com es va descriure anteriorment (37,38). Breument, es van afegir 50 μM CM-H5DCFDA (indicador general d'estrès oxidatiu) (Abcam, Cambridge, Regne Unit) i les cèl·lules es van incubar durant 30 min a 37 graus C. La intensitat de fluorescència de les cèl·lules es va mesurar mitjançant un NucleoCounter NC{{10} }}n citòmetre d'imatge avançat (ChemoMetec A/S).
Assaig d'activitat de la cinasa AKT in vitro. Per determinar les alteracions en l'activitat de la cinasa AKT, es va utilitzar un kit d'assaig de quinasa AKT (Cell Signaling Technology, Beverly, MA, EUA) segons les instruccions del fabricant. Les cèl·lules HEK 293 (2 × 106 cèl·lules/plat) es van sembrar en plats de 10 cm durant 24 h i es van tractar amb 50 o 100 mgI/ml de iopromida durant 24 h. Les cèl·lules es van collir i manipular tal com es va descriure anteriorment (39). Breument, es van immunoprecipitar 200 mg de proteïna de cada mostra amb 2 mg d'anticossos anti-AKT durant la nit. Els immunoprecipitats AKT es van barrejar amb la glicogen sintasa quinasa -3 / substrat durant 30 min a 30 graus. Les mostres es van aplicar a un 10 per cent de SDS-PAGE i es va determinar la intensitat relativa de fosfo-GSK-3 a/ (Ser219) en comparació amb el control no tractat. Anàlisi estadística. Les dades es van obtenir d'almenys tres experiments independents i es van expressar com a mitjana ± desviació estàndard (SD). Les diferències estadístiques es van avaluar mitjançant la prova t de Student en comparació amb el grup control no tractat. El valor p inferior a 0,05 es va considerar estadísticament significatiu (37).
Resultats
proporcionen una inhibició significativa de la proliferació cel·lular HEK 293. Per investigar l'efecte de la iopromida sobre la proliferació cel·lular, les cèl·lules HEK 293 es van tractar amb 0, 25,50,100 i 200 mgI/ml de iopromida durant 24 (figura 1A) o 48 h. (Figura 1B). La viabilitat cel·lular es va mesurar mitjançant l'assaig MTT. Les concentracions inhibidores mitjanes màximes (ICso) van ser de 187 ± 3, 45 mgl/ml i 53, 10 ± 1, 87 mgl/ml a les 24 i 48 h de tractament amb iopromida, respectivament (figura 1). Els nostres resultats van revelar que la iopromida inhibeix la proliferació cel·lular. A més, es van observar alteracions morfològiques a les cèl·lules HEK 293 quan es van tractar cèl·lules amb iopromida a concentracions superiors a 50 mgI/ml durant 48 h (figura 2A). Algunes cèl·lules es van reduir i van aconseguir una forma rodona, cosa que indica que les cèl·lules podrien haver patit apoptosi. Mentrestant, algunes cèl·lules mostraven vacúols, cosa que implicava que les cèl·lules podrien haver patit autofàgia (figura 2B).
la promesa indueix la mort cel·lular. Per investigar si la iopromida va induir la mort cel·lular, vam detectar trencaments d'ADN a les cèl·lules HEK 293 tractades amb iopromida mitjançant l'assaig TUNEL. La intensitat de fluorescència relativa de TUNEL va augmentar a les cèl·lules HEK 293 tractades amb iopromida, cosa que suggereix la presència d'un gran nombre de cèl·lules apoptòtiques (figura 3A i B). Les caspases són mediadors crucials de l'apoptosi. Durant l'apoptosi, les caspases s'activen i inicien una cascada d'activitats catalíticas. Les activitats enzimàtiques de la caspasa es van determinar en cèl·lules HEK 293 tractades amb 50 o 100 mgI/ml de iopromida durant 48 h mitjançant els kits d'assaig de caspasa. Les activitats de la caspasa-9 i la caspasa-3/enzimàtica es van elevar (figura 4A i B), cosa que indica que la iopromida va induir la mort cel·lular. A més, l'inhibidor de la pan-caspasa (Z-VAD-FMK) va bloquejar la mort de les cèl·lules HEK 293 tractades amb iopromida (figura 5). Aquestes dades van revelar que la iopromida indueix l'apoptosi.
la lopromida desencadena l'autofàgia per protegir les cèl·lules de l'apoptosi. L'autofàgia actua com una "espasa de doble tall" i destrueix els orgànuls danyats o envellits en resposta a factors d'estrès externs, inclòs l'estrès oxidatiu o l'acumulació d'agregats proteics. Recentment, també s'ha demostrat que l'autofàgia està implicada en la mort cel·lular induïda per l'estrès. Per abordar el paper de l'autofàgia en la mort induïda per iopromida de cèl·lules HEK 293, es va examinar la formació de vesícules autofàgiques mitjançant assajos de tinció AO i LysoTracker Red. Es van observar vacúols autofàgics a les cèl·lules HEK 293 tractades amb 50 mgl/ml de iopromida (Figura 6A). La iopromida (50 mgI/ml) va augmentar la intensitat de fluorescència dels orgànuls vesiculars àcids (AVOs) i va disminuir.
Intensitat de fluorescència AO a les cèl·lules HEK 293 (figura 6B i C). A més, es va utilitzar LysoTracker Red per identificar compartiments subcel·lulars àcids a les cèl·lules vives. El nombre de lisosomes àcids i la intensitat de la fluorescència van augmentar a les cèl·lules tractades amb iopromida (figura 7). Les dades van indicar que l'autofàgia es va produir a les cèl·lules tractades amb iopromida.
Per aclarir la relació entre l'autofàgia i l'apoptosi, les cèl·lules HEK 293 es van tractar prèviament amb els inhibidors de l'autofàgia 3-Metiladenina (3-MA) o bafilomicina A1 (Baf). Les cèl·lules es van tractar posteriorment amb iopromida (50 mg/ml) durant 48 h més. La viabilitat cel·lular es va avaluar mitjançant l'assaig MTT. La viabilitat cel·lular va disminuir encara més fins al 30% després del tractament amb iopromida i 3-Ma enfront del 53% en el grup de tractament només amb iopromida (figura 8A). Mentrestant, la viabilitat cel·lular va disminuir encara més fins al 18 per cent després del tractament amb iopromida i Baf enfront del 53 per cent en el grup de tractament només amb iopromida (figura 8B). Aquests resultats suggereixen que l'apoptosi HEK 293 induïda per iopromida està mediada per la inducció de l'autofàgia.
la loperamida va provocar la producció de ROS i va suprimir la via de senyalització AKT. Un estudi anterior va demostrar que la producció de ROS era induïda per mitjans de contrast iodats(40). De fet, el tractament de cèl·lules HEK 293 amb 50 mgI/ml de iopromida va donar lloc a un augment del 165 per cent de la producció de ROS (figura 9A i B). La N-acetil-L-cisteïna (NAC), un eliminador de ROS, va bloquejar la producció de ROS i va restaurar el creixement cel·lular (figura 9C). La producció de ROS està relacionada amb l'estrès oxidatiu, que condueix a la inactivació de la via de senyalització AKTi inducció de l'apoptosi(37). Per examinar si l'activitat de la cinasa AKT es suprimeix a les cèl·lules HEK 293 tractades amb iopromida (50 mgl/ml), vam mesurar l'activitat de la cinasa AKT. Es va trobar que l'activitat de la cinasa AKT es reduïa a les cèl·lules tractades amb iopromida, la qual cosa implicava que la senyalització AKT estava bloquejada (figura 10A).
Discussió
L'aplicació intravascular de mitjans de contrast de baixa osmolaritat (LOCM) o de contrast iso-osmolar (IOCM) provoca nefropatia severa ilesió renal(2,41,42).El LOCM també s'ha conegut per induir reaccions al·lèrgiques. La freqüència de reaccions adverses als fàrmacs (ADR), reaccions al·lèrgiques greus de letalitat a LOCM és de 0.2-0,7 per cent, 1 a 4/100,000 i 2-9 /1000,000, respectivament (43). En la nostra revisió anterior, vam demostrar que l'IOCM indueix nefropatia i lesió renal augmentant l'estrès oxidatiu, millorant la vasoconstricció renal i induint danys a les cèl·lules tubulars (43). La isquèmia renal a la medul·la, la producció de ROS, la reducció de la producció d'òxid nítric i la inducció de lesions epitelials tubulars i endotelials vasculars són factors de risc de lesió en cèl·lules i teixits (44,45). En el present estudi, hem investigat els efectes citotòxics de la iopromida sobre l'apoptosi i l'autofàgia en cèl·lules HEK 293 normals. Els nostres resultats van demostrar que la iopromida augmenta significativament l'apoptosi i l'autofàgia a les cèl·lules HEK 293 mitjançant la inducció d'una via dependent de ROS.
Quan una cèl·lula rep estímuls extracel·lulars perjudicials, s'indueix l'apoptosi o l'autofàgia com a resposta activa ràpida a la lesió. Molts estudis han suggerit que els mitjans de contrast iodats (ICM) exerceixen efectes citotòxics irenalmort de cèl·lules epitelials tubulars mitjançant autofàgia i/o apoptosi (46-49). Peer et al. va demostrar que la iopromida, el ioxaglat i el ioxatalamat indueixen l'apoptosirenalcèl·lules mesangials, tubulars, epitelials, endotelials i hepàtiques (50). Tan et al. van demostrar que a les cèl·lules NRK-52E, la viabilitat cel·lular es va reduir al 70 per cent després del tractament amb 150 mgI/ml de iopromida en comparació amb el grup control(51). Ludwig et al. van demostrar que el tractament amb iopromida de 120 mgl/ml durant 2 hores va induir la fragmentació de l'ADN a les cèl·lules tubulars renals proximals humanes (HK-2)(52). Els nostres resultats van demostrar que la iopromida va reduir la viabilitat de les cèl·lules HEK 293 en un temps i la concentració depenent del temps. manera (figura 1). La iopromida va induir alteracions morfològiques, fragmentació de l'ADN, apoptosi i autofàgia a les cèl·lules HEK 293 (figura 2). La iopromida va induir activitats de caspasa-3/-7 i caspasa-9 a concentracions de 50 i 100 mgI/ml a les cèl·lules HEK 293 (figura 4A i B). A més, els resultats de la viabilitat cel·lular van revelar que la citotoxicitat induïda per iopromida a les cèl·lules HEK 293 es va inhibir significativament mitjançant l'addició d'un inhibidor de pan-caspasa (figura 5). Aquests resultats van indicar que la iopromida indueix danys a l'ADN i activitats de caspasa 9 i caspasa 3/-7 mediades per la mort cel·lular apoptòtica.
Recentment, Lei Rong et al. van suggerir que l'autofàgia té un paper protector en les lesions induïdes per iohexol i iodixanol en humans.renalcèl·lules epitelials tubulars HK-2 (47). No obstant això, no estava clar si l'autofàgia s'associa amb una lesió normal de cèl·lules HEK 293 induïda per iopromida. Per examinar l'efecte de la iopromida sobre l'autofàgia, vam utilitzar l'assaig de tinció AO. AO és una sonda fluorescent verda lisosomotròpica que es protona i queda atrapada dins dels orgànuls vesiculars àcids (AVO). L'autofàgia es caracteritza per un augment de la formació d'AVO. Per tant, els AVO es poden quantificar mitjançant imatges o citometria de flux després de tacar les cèl·lules amb AO (41, 53-55). Com es mostra a les figures 6A i B, la iopromida va augmentar la intensitat de fluorescència AVO i va disminuir la intensitat de fluorescència AO cel·lular (figura 6C) a les cèl·lules HEK 293. Els nostres resultats van indicar que la iopromida va induir l'autofàgia, tal com es va avaluar mitjançant l'assaig de tinció AO. També vam demostrar que la iopromida va augmentar la intensitat de fluorescència de LysoTracker Red, suggerint així que la iopromida va induir l'activitat del lisosoma durant el procés d'autofàgia (figura 7). Estudis anteriors han demostrat que l'autofàgia té un paper protector en el cisplatí induïtrenallesió de cèl·lules epitelials tubulars (56-58). Per examinar més el paper de l'autofàgia en la mort cel·lular induïda per iopromida, les cèl·lules HEK 293 es van tractar amb els inhibidors de l'autofàgia 3-metiladenina (3-MA) o bafilomicina A1 (tractament combinat de Baf. (iopromida amb {{ 6}}MA o Baf) va disminuir significativament la viabilitat cel·lular en comparació amb la iopromida sola (figura 8), cosa que suggereix que l'autofàgia té un paper protector en la lesió cel·lular HEK 293 induïda per iopromida.
L'ICM entra a les cèl·lules i indueix canvis en la funció mitocondrial, donant lloc a un augment de la generació de ROS i la mort de cèl·lules apoptòtiques (59). Tana Xuexian et al. també va demostrar un augment significatiu de la producció de ROS a les cèl·lules NRK-52E tractades amb iopromida(60). S'ha demostrat que els agents antioxidants, com ara bicarbonat de sodi, NAC, àcid ascòrbic (vitamina C), estatines i inhibidors de la fosfodiesterasa tipus 5 tenen efectes induïts per l'ICM (61-65). En un estudi in vivo, es va demostrar que NAC era més eficaç que la hiperhidratació sola per prevenir els aguts induïts per contrastinsuficiència renal(63). En el present estudi, vam demostrar que la iopromida va induir la producció de ROS a les cèl·lules HEK 293 (figura 9A i B). Es va trobar que la viabilitat cel·lular augmentava significativament en el grup iopromida més NAC en comparació amb el grup només amb iopromida (figura 9C).Les alteracions en l'activitat AKT són essencials per a la supervivència cel·lular i s'ha demostrat que regulen fortament l'apoptosi i l'autofàgia en presència d'ICM (66-68). Aquí, vam investigar l'efecte de la iopromida sobre la regulació de l'AKT a les cèl·lules HEK 293. Els resultats van revelar una reducció marcada de l'activitat de la cinasa AKT a les cèl·lules tractades amb iopromida en comparació amb les cèl·lules control. Els nostres resultats suggereixen que la inhibició de l'activitat AKT està correlacionada amb l'apoptosi i l'autofàgia induïdes per iopromida, que es poden controlar.
a través de la via de senyalització AKT. Els nostres resultats suggereixen que la iopromida indueix la producció de ROS, que inhibeix l'activitat i la senyalització de la cinasa AKT. La via de senyalització AKT es correlaciona positivament amb la supervivència cel·lular i s'associa negativament amb la mort cel·lular i l'autofàgia.En aquest estudi, vam demostrar que l'autofàgia protegia les cèl·lules de l'apoptosi. El dany cel·lular i la citotoxicitat de les cèl·lules HEK es van iniciar per apoptosi induïda per iopromida (figura 10B). De manera concloent, vam demostrar que la iopromida va inhibir significativament la viabilitat cel·lular HEK 293 i va induir apoptosi i autofàgia en comparació amb el grup control in vitro. A més, altes concentracions de iopromida indueixen dany cel·lular, apoptosi i autofàgia mitjançant l'estrès cel·lular depenent de ROS i la inhibició de la via de senyalització AKT a les cèl·lules HEK 293 normals.