Avaluació in vitro de les soques probiòtiques més actives capaços de millorar les funcions de barrera intestinal i prevenir malalties inflamatòries del sistema gastrointestinalⅢ

4. Discussió

Mantenir la integritat de la barrera intestinal és d'importància crucial en la prevenció de l'aparició no només de malalties intestinals, sinó també de trastorns metabòlics, autoimmunes i del sistema nerviós [36,37]. Els nombrosos estudis realitzats sobre la mucosa intestinal han demostrat que protegeix l'hoste mitjançant l'estimulació dels mecanismes de la immunitat innata i adquirida [38], i garanteix l'homeòstasi gràcies al manteniment de l'equilibri de la microbiota [39]. aliments i a la microbiota intestinal dels humans i dels animals [40,41].

Feu clic per alleujar immediatament el restrenyiment d'adults

En els darrers anys s'han aconseguit grans avençosen l'estudi dels mecanismes de simbiosi entre els bacteris làctics i l'hoste. S'ha demostrat que els seus principals efectes beneficiosos inclouen la regulació del desequilibri de la flora intestinal [42], l'enfortiment de les funcions de barrera intestinal [23,27,36] ], el manteniment de l'homeòstasi [36,43], la regulació del sistema immunitari [43] i la producció de neurotransmissors (eix intestino-cervell) [44]. També s'ha demostrat que l'exopolisacàrid (EPS) produït pels lactobacils té la peculiar capacitat de modificar la microbiota [45] i de millorar la colonització i el creixement dels bacteris intestinals actuant com a font de carboni [46].

A més, els probiòtics poden competir amb els patògens colonitzadors del tracte gastrointestinal, impedint-ne l'adhesió i inhibint-ne el creixement a causa de la disminució del pH causada per la producció d'àcid làctic [36]. Els models in vitro que simulen el còlon humà representen una eina útil per als estudis mecànics sobre les interaccions dels probiòtics amb l'epiteli intestinal [47]; en aquest treball, hem utilitzat un model experimental de cocultius de cèl·lules epitelials intestinals, Caco-2 i HT{29-MTX, i hem analitzat la seva interacció amb diferents soques de Lactobacillus spp. per determinar quina d'aquestes soques. va mostrar la millor funcionalitat protegint l'epiteli intestinal, reforçant la barrera i promovent propietats antiinflamatòries i immunomoduladores.

L'elecció de treballar amb un co-cultiu es va deure a diverses proves: en primer lloc, la resistència elèctrica transepitelial (TEER) és molt més alta a les monocapes de Caco-2 (fins a 500 ohms cm2) que a l'intestí humà. (12–69 ohm cm2) a causa d'una alta expressió de TJ; a més, la barrera intestinal està formada per diversos fenotips cel·lulars, incloent enterocits, cèl·lules caliciformes, cèl·lules de Paneth, cèl·lules endocrines i cèl·lules mare. El model de co-cultiu que combina els dos fenotips cel·lulars principals que es troben a l'intestí, Caco-2 i HT29-MTX secretor de moc, proporciona una monocapa epitelial recoberta de moc que imita de manera més eficient la condició que es produeix in vivo.

L'efectivitat d'aquest model ha estat demostrada per Mahler et al. [48].L'elecció de les soques es va deure al fet que estaven comercialitzades i ja havien estat objecte de diversos estudis; de fet, L. brevis SP-48 està present en productes comercials (per exemple, Florap lady) que afavoreixen l'equilibri de la flora intestinal i la funcionalitat del tracte urinari. A més, el nostre estudi recent va indicar que inhibia H. pylori i actua com un modulador del sistema immunitari, reduint la inflamació potencialment relacionada amb el tractament de la malaltia intestinal intestinal [49].

De la mateixa manera, l'activitat de L. fermentum es va avaluar en un model de cèl·lules epitelials gàstriques demostrant la modulació de citocines inflamatòries i la inhibició de H. pylori [32]; a més, altres soques de L. fermentum van mostrar propietats antiinfeccioses i immunomoduladores [50].Lactobacillus rhamnosus IMC 501 i Lactobacillus paracasei IMC 502 són soques probiòtiques disponibles comercialment (per exemple, SYNBIO). Verdenelli i els seus coautors van demostrar la persistència de les dues soques, administrades en combinació, al tracte intestinal dels subjectes de prova, i una millora en la regularitat natural i el benestar intestinal [51,52].L. brevis normalment colonitza el tracte gastrointestinal humà i s'ha demostrat que proporciona diversos efectes estimulants de la salut [53], alguns dels quals milloren la funció de barrera de la mucosa [54]. L. reuteri LR92 també està present en productes comercials i estudis clínics van demostrar que millora els símptomes de còlics en nounats si s'administra preventivament a les mares durant els últims mesos de l'embaràs [55].

En la primera part del treball, doncs, vam tractar els cocultius, que es van diferenciar durant 21 dies, amb les diferents soques de Lactobacillus spp. durant 24 h, i vam analitzar, mitjançant un assaig de PCR i ELISA en temps real, els nivells d'expressió dels TJs Occludin, Zonulin-1 i Claudin{-1, i el pèptid antimicrobià HBD-2 . Els resultats obtinguts van revelar que totes les soques de lactobacils provades poden induir significativament l'expressió de TJ, en particular L. brevis i L. rhamnosus. Pel que fa a HBD-2, en canvi, s'aprecia una inducció significativa de la producció de pèptids especialment en presència de L. reuteri. Per avaluar l'activitat antiinflamatòria dels lactobacils, els cocultius es van tractar durant 24 h amb S. Typhimurium LPS sol o en combinació amb diferents soques,i es van avaluar els nivells d'expressió de citocines pro i antiinflamatòries mitjançant PCR en temps real i assaig ELISA.

Les dades obtingudes van revelar que, excepte IL-8, l'expressió de la qual no va ser modulada per L. fermentum i L. paracasei, totes les soques podrien induir significativament l'expressió de citocines proinflamatòries i induir la de la citocina antiinflamatòria TGF-. A partir de les dades obtingudes, i tenint en compte que totes les soques probiòtiques analitzades van mostrar una activitat antiinflamatòria important, podem afirmar que tres soques específiques semblen tenir un efecte especialment beneficiós sobre la mucosa intestinal: L. reuteri, que sorgeix per la seva capacitat per estimular significativament la defenses immunitàries mitjançant la promoció de l'alliberament massiu de HBD-2, L. rhamnosus i L. brevis, que va revelar una gran capacitat per enfortir la barrera intestinal, condició necessària per al correcte manteniment de diverses funcions, inclosa l'absorció de micronutrients i el manteniment de l'homeòstasi. En la segona part del treball, doncs, hem avaluat la capacitat d'aquestes tres soques per inhibir l'adhesió i la invasió de S. Typhimurium i EIEC a la mucosa intestinal.

Amb aquesta finalitat, es van realitzar assajos d'adhesió i invasió de tres maneres diferents: inhibició, competició i desplaçament, per entendre la dinàmica de la interacció entre els lactobacils i els patògens. De fet, mitjançant la preincubació amb lactobacils, la seva capacitat de produir bacteriocines i de baixar el pH del medi pot exercir una activitat mata que inhibeix l'adhesió del patogen; d'altra banda, l'addició simultània d'ambdues espècies podria provocar competència entre les dues espècies bacterianes, tant per la unió als llocs receptors cel·lulars com per a l'absorció dels factors nutritius; finalment, l'addició del probiòtic després de l'adhesió del patogen pot provocar el seu desplaçament dels llocs d'unió, també a causa de l'activitat de destrucció exercida per les bacteriocines.

Els resultats obtinguts van demostrar que les tres soques van inhibir significativament els assajos de competència d'adhesió EIEC i van bloquejar la seva invasió mitjançant la competència i la inhibició. Aquest comportament diferent podria ser perquè els lactobacils no són capaços d'evitar l'adhesió del patogen si es prenen de manera preventiva, mentre que poden competir amb ell; tanmateix, un cop s'ha produït l'adhesió, l'activitat que millora la integritat de la barrera dels lactobacils (que augmenta l'expressió de la unió estreta) evita la invasió de la submucosa intestinal. Pel que fa a S. Typhimurium, però, l'activitat inhibidora es realitza principalment en la fase d'adhesió, tant en l'assaig d'inhibició com en l'assaig de competició, probablement perquè evita aigües amunt l'adhesió del patogen, reduint així significativament la càrrega bacteriana que envaeix el patogen. submucosa intestinal, que ja està significativament reduïda. En els assajos de desplaçament no es van obtenir resultats satisfactoris per a ambdues soques, ni pel que fa a l'adhesió ni a la invasió, demostrant que els lactobacil·lis no són capaços d'exercir la seva acció protectora contra els dos patògens si es prenen quan la infecció ja s'ha produït.

5. Conclusions

Encara que l'ús de suplements a base de probiòtics s'ha practicat durant molts anys, últimament l'interès per aquest tipus de productes va augmentar significativament a causa del creixent interès públic en l'ús de beneficis/recursos naturals [56]. Es va demostrar àmpliament que els lactobacils són probiòtics. que pot contribuir al manteniment de les funcions essencials per a un estat de salut òptim; tanmateix, aquests estudis in vitro mostren que diferents soques probiòtiques poden actuar de manera diferent pel que fa a l'epiteli i cap al patogen amb el qual interactuen; per aquest motiu seria útil, a l'hora de dissenyar formulacions a base de probiòtics, tenir en compte l'especificitat de les soques i el seu ús previst, per obtenir formulacions consorciades capaços d'aconseguir el màxim rendiment en termes de benefici per al pacient.

Herbes medicinals naturals per alleujar el restrenyiment-Cistanche

Cistanche és un gènere de plantes paràsites que pertany a la família de les Orobanchaceae. Aquestes plantes són conegudes per les seves propietats medicinals i s'han utilitzat en la medicina tradicional xinesa (MTC) durant segles. Les espècies de Cistanche es troben predominantment a les regions àrides i desèrtiques de la Xina, Mongòlia i altres parts de l'Àsia Central. Les plantes de Cistanche es caracteritzen per les seves tiges carnoses i groguenques i són molt apreciades pels seus beneficis potencials per a la salut. En TCM, es creu que Cistanche té propietats tòniques i s'utilitza habitualment per nodrir el ronyó, millorar la vitalitat i donar suport a la funció sexual. També s'utilitza per abordar problemes relacionats amb l'envelliment, la fatiga i el benestar general. Tot i que Cistanche té una llarga història d'ús en medicina tradicional, la investigació científica sobre la seva eficàcia i seguretat és contínua i limitada. Tanmateix, se sap que conté diversos compostos bioactius com ara glicòsids feniletanoides, iridoides, lignans i polisacàrids, que poden contribuir als seus efectes medicinals.

Wecistanche'scistanche en pols, pastilles de cistanche, càpsules de cistanche, i altres productes es desenvolupen utilitzantdesertcistanchecom a matèries primeres, totes les quals tenen un bon efecte per alleujar el restrenyiment. El mecanisme específic és el següent: Es creu que Cistanche té beneficis potencials per alleujar el restrenyiment en funció del seu ús tradicional i de determinats compostos que conté. Tot i que la investigació científica específicament sobre l'efecte de Cistanche sobre el restrenyiment és limitada, es creu que té múltiples mecanismes que poden contribuir al seu potencial per alleujar el restrenyiment. Efecte laxant:Cistanches'ha utilitzat durant molt de temps a la medicina tradicional xinesa com a remei per al restrenyiment. Es creu que té un efecte laxant lleu, que pot ajudar a promoure els moviments intestinals i induir el restrenyiment. Aquest efecte es pot atribuir a diversos compostos que es troben a Cistanche, com ara glicòsids feniletanoides i polisacàrids. Humitejar els intestins: basat en l'ús tradicional, es considera que Cistanche té propietats hidratants, dirigides específicament als intestins. La promoció de la hidratació i la lubricació dels intestins pot ajudar a suavitzar les eines i facilitar el pas, alleujant així el restrenyiment. Efecte antiinflamatori: el restrenyiment de vegades es pot associar amb una inflamació del tracte digestiu. Cistanche conté determinats compostos, inclosos els glicòsids feniletanoides i els lignans, que es creu que tenen propietats antiinflamatòries. En reduir la inflamació als intestins, pot ajudar a millorar la regularitat del moviment intestinal i alleujar el restrenyiment.