L'administració in vivo de consorcis de bacteris intestinals replica els metabotips A i B d'urolitina en un model de rata que no produeix urolitinaⅡ

Resultats

Anàlisi de l'especificitat i sensibilitat dels primers dissenyats i de la sonda per a Ellagibacter i Enterocloster

L'especificitat dels cebadors i de la sonda Ellagibacter i Enterocloster es va confirmar carregant les seves seqüències al programa d'alineació de seqüències ProbeMatch.31 Es mostren els resultats.a les taules 1S i 2S.† Posteriorment, es va verificar l'especificitat dels cebadors i la sonda mitjançant qPCR mitjançant les condicions de reacció optimitzades descrites a la secció Materials i mètodes. Es van provar espècies bacterianes representatives de les famílies Eggerthellaceae i Lachnospiraceae amb la major similitud amb Ellagibacter i Enterocloster a la seqüència del gen 16S rRNA, a més d'altres espècies estretament relacionades detectades freqüentment a l'intestí humà (Taules 1S i 2S†).Fig. La figura 2 mostra els diagrames d'amplificació corresponents a les corbes de quantificació estàndard.

Feu clic per al tractament del restrenyiment

Els valors de TC es van representar contra la concentració bacteriana (Co) com a equivalents genòmics/reacció log 10 (6,25 × 10-6 ng, per al genoma haploide). El pendent de la corba de regressió lineal, calculada mitjançant l'ADN genòmic, era de -3,78 i el valor R2 era superior a 0,99. Pel que fa a la sensibilitat del sistema qPCR, es necessitaven 1,5 equivalents del genoma com a mínim per a una reacció positiva mitjançant el mode TaqMan. Els valors de TC obtinguts amb la corba de calibratge d'E. isourolithinifaciens i E. cargolats van oscil·lar entre 15,5 ± 0,7 i 37,8 ± 0,7, mentre que no es va detectar cap amplificació d'ADN per a les altres soques provades.

Amb aquest mètode (qPCR) es va realitzar la quantificació d'Ellagibacter i Enterocloster en mostres fecals de rates, considerant la mitjana de tres rèpliques. Els resultats es van expressar com a log 10 bacteris per g de feces i es van comparar amb els valors d'abundància relativa obtinguts per la seqüenciació d'ARNr 16S. Hem observat una correlació positiva entre els resultats obtinguts pels dos mètodes a Ellagibacter (r=0,660, p < 0,001) i Enterocloster (r=0,459, p< 0.001) (data not shown).

Efecte dels consorcis bacterians administrats per via oral sobre la producció in vivo d'urolitines

L'anàlisi d'Uro a les femtes va mostrar que inicialment (T{{0}}), les rates no van produir Uros després d'ingerir pols d'EA (Fig. 3A-C). Tanmateix, després d'administrar els consorcis bacterians A (Fig. 3A). ) i B (Fig. 3B), les rates van ser capaces de produir Uros. Durant les tres primeres setmanes, quan les rates dels grups A i B només van ingerir pols d'EA, la concentració d'Uro (rang:0–1,43 µg g−). 1) i el del seu precursor EA (rang: 0,07–4,54 µg g-1) a les femtes era baix. Tanmateix, a partir del dia 21, quan el consum de nous va començar com a segona font d'EA, hi va haver un augment molt significatiu de la producció d'EA fecal (Fig. 3A-C) i d'Uro als grups A (Fig. 3A) i B (Fig. 3B). ).

A més, es van observar diferències en el perfil Uro entre els grups A i B. Al grup A, Uro-C, Uro-M6, Uro-M7 i el metabòlit final Uro-A van ser predominants. En canvi, al grup B, els tres Uros finals (Uro-A, UroB i IsoUro-A) estaven presents, mentre que els intermedis eren escassos. No obstant això, es va detectar una concentració fecal més alta de l'Uro-G descrit recentment al grup B que al grup A. A més, la concentració d'Uro-B era inferior a la d'Uro-A i IsoUro-A al grup B. A més, Uro-A i IsoUro-A, però no Uro-B, es va produir en totes les rates del grup B (Fig. 3B). Quan es van afegir nous a la dieta de les rates control (grup C) el dia 21, també es va observar una concentració fecal més alta d'EA. que abans del consum de nous, on la concentració d'EA fecal era molt baixa (Fig. 3C). Tanmateix, ni la ingesta d'EApowder ni el consum de nous van promoure la producció d'Uros a l'intestí de rates control (és a dir, sense consorcis bacterians).

Colonització intestinal de bacteris administrats per via oral Inicialment, abans que les rates dels grups A i B comencessin el consum dels consorcis bacterians, Gordonibacter o Ellagibacter estaven sota el límit de detecció a les mostres fecals quan es va realitzar una anàlisi de seqüenciació metagenòmica mitjançant la plataforma MiSeq-Illumina (Fig. 3D-F). ). Quan es va utilitzar qPCR,Els nivells de Gordonibacter a les rates eren baixos (<5.8 log bacteria per g faeces), and Ellagibacter levels were under the limit of detection (data not shown). In contrast, Enterocloster was detected using the MiSeq-Illumina and qPCR in the faeces of rats from all groups (A, B, and C) at the baseline (Fig. 3D–F). 

L'abundància relativa (mitjana ± SD) d'Enterocloster als grups A, B i C era {{0}}.{03 ± 0.02, {{10} }},04 ± 0,06 i 0,13 ± 0,17%, respectivament, però sense diferències significatives (p=0,570). L'administració dels consorcis bacterians A i B va provocar l'aparició i l'augment gradual de Gordonibacter i Ellagibacter a les femtes del grup A i B corresponents, respectivament (Fig. 3D i E). A més, els nivells d'Enterocloster fecals van augmentar al llarg de l'estudi en els grups A i B (Fig. 3D i E).

No obstant això, l'anàlisi LEfSe va mostrar escasses diferències en altres grups de bacteris intestinals quan les dades de seqüenciació metagenòmica dels grups A i B es van comparar amb les del grup control (Fig. 4A i B). Curiosament, es va observar una reducció del gènere Streptococcus i la família de les Streptococcaceae als grups A. i B en comparació amb el grup control (Fig. 4A i B). Cinc dies després d'aturar l'administració oral dels consorcis bacterians (data final de l'estudi), es va detectar una reducció de l'abundància d'Ellagibacter i Enterocloster al grup B, que també va provocar una disminució significativa de la producció d'Uro (Fig. 3B i E). Al grup A, també es va observar una reducció de l'abundància de Gordonibacter però no d'Enterocloster (Fig. 3A), que va provocar una disminució de la concentració d'Uro, però va ser menys pronunciada que al grup B (Fig. 3D i E). En el grup control, Ellagibacter va estar sota el límit de detecció durant tot l'estudi, i Enterocloster i Gordonibacter es van mantenir en nivells molt baixos (Fig. 3F).

Estudi de la toxicitat dels bacteris intestinals administrats per via oral

Es van investigar els possibles efectes secundaris de la ingestió del consorci bacterian. No es van observar efectes adversos sobre el creixement, l'augment de pes, la ingesta d'aliments i els òrgans vitals després de 4 setmanes d'administració oral mitjançant sonda de consorcis bacterians en rates dels grups A i B en comparació amb el grup control. Tanmateix, les rates mascles van guanyar 107,4 ± 2,4 g, mentre que les rates femelles van guanyar menyspes (25,7 ± 5 g) al final de l'estudi sense diferències en comparació amb el grup control. El consum d'aliment per gàbia va ser de 63,1 ± 1,4 g per a rates mascles i de 33,8 ± 1,8 g per a rates femelles. No obstant això, la ingesta d'aigua va ser de 136,1 ± 37,2 g i 76.0 ± 12,6 g, per rates masculines i femelles per gàbia respectivament .

Es van observar diferències hematològiques entre homes i dones en algunes variables, com ara la distribució d'eritròcits (RDW, p {{0}},005), leucòcits (p=0},005), l'amplada de distribució de plaquetes (PDW, p. =0.005) i el contingut d'hemoglobina dels reticulòcits (CHr, p=0.013) (taula 2). Tot i així, no es van observar diferències per a cap variable entre els grups que van consumir els consorcis bacterians (grups A i B) i el grup control (grup C). També es van analitzar els valors bioquímics i només es van detectar diferències entre homes i dones en algunes variables com l'índex de creatinina (p < 0,001), fòsfor (p=0,007), fosfatasa alcalina (ALP) (p {{13}). }},003) i tiroxina (T4) (p=0,002) (taula 3). Tanmateix, no es van observar diferències per a cap de les variables entre els grups que van consumir els consorcis bacterians (grups A i B) i el grup control (grup C).

Herbes medicinals naturals per alleujar el restrenyiment-Cistanche

Cistanche és un gènere de plantes paràsites que pertany a la família de les Orobanchaceae. Aquestes plantes són conegudes per les seves propietats medicinals i s'han utilitzat en la medicina tradicional xinesa (MTC) durant segles. Les espècies de Cistanche es troben predominantment a les regions àrides i desèrtiques de la Xina, Mongòlia i altres parts de l'Àsia Central. Les plantes de Cistanche es caracteritzen per les seves tiges carnoses i groguenques i són molt apreciades pels seus possibles beneficis per a la salut. En TCM, es creu que Cistanche té propietats tòniques i s'utilitza habitualment per nodrir el ronyó, millorar la vitalitat i donar suport a la funció sexual. També s'utilitza per abordar problemes d'envelliment, fatiga i benestar general. Tot i que Cistanche té una llarga història d'ús en medicina tradicional, la investigació científica sobre la seva eficàcia i seguretat és contínua i limitada. Tanmateix, conté diversos compostos bioactius com ara glicòsids feniletanoides, iridoides, lignans i polisacàrids, que poden contribuir als seus efectes medicinals.

Wecistanche'scistanche en pols, pastilles de cistanche, càpsules de cistanche, i altres productes es desenvolupen utilitzantdesertcistanchecom a matèries primeres, totes les quals tenen un bon efecte per alleujar el restrenyiment. El mecanisme específic és el següent: Es creu que Cistanche té beneficis potencials per alleujar el restrenyiment en funció del seu ús tradicional i de determinats compostos que conté. Tot i que la investigació científica específicament sobre l'efecte de Cistanche sobre el restrenyiment és limitada, es creu que té múltiples mecanismes que poden contribuir al seu potencial per alleujar el restrenyiment. Efecte laxant:Cistanches'ha utilitzat durant molt de temps a la medicina tradicional xinesa com a remei per al restrenyiment. Es creu que té un efecte laxant lleu, que pot ajudar a promoure els moviments intestinals i induir el restrenyiment. Aquest efecte es pot atribuir a diversos compostos que es troben a Cistanche, com ara glicòsids feniletanoides i polisacàrids. Humitejar els intestins: segons l'ús tradicional, es considera que Cistanche té propietats hidratants, dirigides específicament als intestins. La promoció de la hidratació i la lubricació dels intestins pot ajudar a suavitzar les eines i facilitar el pas, alleujant així el restrenyiment. Efecte antiinflamatori: el restrenyiment de vegades es pot associar amb una inflamació del tracte digestiu. Cistanche conté determinats compostos, inclosos els glicòsids feniletanoides i els lignans, que es creu que tenen propietats antiinflamatòries. En reduir la inflamació als intestins, pot ajudar a millorar la regularitat del moviment intestinal i alleujar el restrenyiment.