L'extracte de ginseng vermell coreà millora la melanogènesi en humans i indueix efectes antifotoenvelliment en ratolins sense pèl amb irradiació ultraviolada, part 1

May 16, 2023

abstracte

Fons: Panax ginseng és un meravellós remei herbal per a totes les malalties del cos. Potser per això es diu Panax, que vol dir "curar per a tots". La melanina és un pigment que dóna color a la nostra pell; tanmateix, l'augment de la producció de melanina pot conduir a la formació de tumors. L'exposició humana a la radiació ultraviolada B ha augmentat àmpliament a causa de l'augment de la llum solar a causa de l'escalfament global. En conseqüència, s'ha observat un fenomen anomenat fotoenvelliment per a tots els colors i tipus de pell. Com a resultat d'aquest fenomen, s'incrementa un conjunt d'enzims anomenats metaloproteinases de la matriu, que serveixen com a enzims de degradació de les proteïnes de la matriu extracel·lular, principalment col·lagen, provocant l'esgotament del col·lagen i donant lloc a la formació precoç d'arrugues.

Segons estudis rellevants, el cistanche és una herba comuna que es coneix com "l'herba miracle que allarga la vida". El seu component principal és el cistanòsid, que té diversos efectes com ara la promoció de la funció antioxidant, antiinflamatòria i immune. El mecanisme entre el cistanche i el blanqueig de la pell rau en l'efecte antioxidant dels glucòsids de cistanche. La melanina a la pell humana es produeix per l'oxidació de la tirosina catalitzada per la tirosinasa, i la reacció d'oxidació requereix la participació de l'oxigen, de manera que els radicals lliures d'oxigen del cos es converteixen en un factor important que afecta la producció de melanina. Cistanche conté cistanòsid, que és un antioxidant i pot reduir la generació de radicals lliures al cos, inhibint així la producció de melanina.

rou cong rong benefits

Feu clic a Cistanche Chemist Warehouse per blanquejar

Per a més informació:

david.deng@wecistanche.com WhatApp:86 13632399501

MètodesPer tant, en el nostre estudi, hem utilitzat la línia cel·lular de melanoma murí B16/F10 per estudiar la inhibició de la melanogènesi per l'extracte de ginseng vermell coreà (KRG) in vitro i ratolins sense pèl HRM-2 exposats a l'ultraviolat artificial B per examinar el eficàcia de KRG in vivo. Vam preparar una crema d'extracte de ginseng vermell al 3 per cent i vam avaluar els seus efectes sobre la pell humana.

Resultats: Els nostres resultats van demostrar que KRG va induir una potent supressió de l'activitat de la tirosinasa i la producció de melanina a les cèl·lules B16/F10; a més, va reduir la transcripció i traducció dels components implicats en la via de producció de melanina. En els experiments in vivo, KRG va suprimir potentment l'expressió de metaloproteinases de la matriu, va reduir la formació d'arrugues i va inhibir la degradació del col·lagen. A la pell humana, la crema de ginseng va augmentar la resiliència de la pell i la humitat de la pell i va millorar el to de la pell.

Conclusió: Per tant, concloem que KRG és un excel·lent producte per blanquejar la pell i anti-envelliment.

·2019 La Societat Coreana de Ginseng. Serveis editorials d'Elsevier BV Aquest és un article d'accés obert

1. Introducció

La melanina és un compost responsable de la pigmentació de la pell, i la varietat de colors de la pell a la raça humana és atribuïble a la quantitat de cèl·lules productores de melanina presents a la pell [1]. El procés responsable de la formació de melanina s'anomena melanogènesi. En aquest procés, l'hormona estimulant dels melanòcits (a-MSH) s'uneix al seu receptor (és a dir, el receptor de la melanocortina 1) provocant nivells elevats d'AMPc, que al seu torn activa el factor associat a la microftàlmia (MITF) a través de diverses vies, com ara el cíclic. Proteïna d'unió a l'element de resposta de monofosfat d'adenosina (AMPc), cinasa regulada extracel·lular i proteïna cinasa B (AKT), provocant la seva degradació. A causa d'aquesta degradació, el pas limitant de la velocitat en el procés de melanogènesi (és a dir, l'acció de l'enzim tirosinasa, TYR) es veu afectat i s'activa. TYR és responsable de la conversió de la tirosina en L-3,4-dihidroxifenilalanina (L-DOPA), que forma melanina. La proteïna relacionada amb la tirosinasa 1 (TRP-1) i la proteïna relacionada amb la tirosinasa 2 (TRP{-2) són factors més avall de TYR i MITF que s'activen i estan implicats en la formació de melanina. En conseqüència, durant tot el procés, el TYR és el component més important de la regulació de la producció de melanina a les cèl·lules de la pell [2-4].

cistanche herb

El Panax ginseng és una herba meravellosa que s'ha consumit àmpliament a l'est d'Àsia durant més d'1,000 anys, ja que té molts efectes beneficiosos per a la salut. Està disponible en diverses formes, incloses begudes, càpsules i comprimits [5,6]. Estudis anteriors han revelat els efectes destacables del ginseng quan s'utilitza per reduir la incidència de diversos tipus de tumors, moltes anomalies mentals, diabetis, hipertensió, hiperlipèmia i inflamació [7-13]. En particular, a la península de Corea, els suplements de ginseng formen part d'una dieta normal. Comercialment, el ginseng està disponible en forma d'extracte d'arrel de ginseng sencera, extractes de ginsenòsids individuals o càpsules. Els ginsenòsids són els compostos actius constituents presents a tota l'arrel de ginseng que són responsables de les propietats eficaços que milloren la salut del ginseng [14].

Hi ha hagut molts estudis sobre els efectes del ginsenòsid únic sobre la producció de melanina i el melasma [15]. No obstant això, actualment, cap estudi ha informat dels efectes anti-melanogènics de l'extracte de ginseng vermell coreà (KRG) sobre la producció de melanina i ha examinat els seus efectes per blanquejar la pell i anti-envelliment, especialment en humans. Per tant, vam investigar la inhibició de TYR i la inhibició de la producció de melanina per part de KRG in vitro a la línia cel·lular de melanoma B16/F10 mitjançant un estudi mecanicista de les vies implicades en aquest procés. Els nostres resultats van indicar que KRG va inhibir notablement l'activitat TYR i va disminuir el contingut de melanina mitjançant la via de degradació del MITF. A més, el nostre estudi in vivo utilitzant un model de fotoenvelliment i hiperpigmentació de ratolins sense pèl (HRM-2) irradiat amb ultraviolats B (UVB) va revelar que la producció de melanina en ratolins HRM-2 es va reduir substancialment i notablement pel aplicació de KRG (150 i 300 mg/kg). A més, la crema d'extracte de ginseng vermell al 3 per cent va mostrar excel·lents qualitats antiarrugues i blanquejant la pell en humans. Així, vam concloure que les formulacions KRG i KRG com a crema haurien de ser útils a la indústria cosmètica com a agents blanquejadors i anti-envelliment.

2. Materials i mètodes

2.1. Productes químics i reactius

Mitjà d'àguila modificat per Dulbecco (WelGene Co, Corea); sèrum boví fetal (WelGene Co., Corea); estreptomicina i penicil·lina (Lonza, MD, EUA); reactiu TRIzol (Invitrogen, Carlsbad, CA, EUA); Es van obtenir primers oligodT, MITF, TYR, TRP-1, TRP-2 i b-actina (Bioneer, Daejeon, Corea). El 3-(4,5-dimetiltiazol-2-il)-2,5-difeniltetrazolimbromur es va comprar a Sigma-Aldrich. Es van obtenir anticossos per a MITF, TYR, TRP-1 i TRP-2 (Santa Cruz Biotechnology, Santa Cruz, Inc., TX, EUA). Els bolets TYR i L-DOPA es van comprar a Sigma (St. Louis, MO, EUA). Tots els altres reactius eren de grau analític local.

cistanche for sale

2.2. Preparació de la mostra

El KRG va ser amablement proporcionat per Korea Ginseng Cooperation, que constava de la següent composició d'11 ginsenòsids (mg/g): Rb1 6,67, Rb2 2,79, Rc 1.01. , Rd 1.01, Rg3s 2.22, Rg3r 0.79, Re 1.97, Rf 1.40, Rg1 1.67, Rg2s 1.23 i Rh{1 0.77 analitzat per anàlisi de cromatografia líquida d'alt rendiment (HPLC). Mentre que la crema de ginseng vermell al 3% (la composició dels ginsenòsids era la mateixa que la descrita anteriorment) va ser preparada per la Universitat de Kyungnam, Changwon, República de Corea. Breument, una barreja de 80 ml d'aigua purificada i 30 ml d'oli d'ametlla dolça o oli de llavors de gira-sol es va escalfar a 80 ○ C. A continuació, es va tornar a afegir aigua purificada i es va emulsionar amb una batedora. Posteriorment, es va afegir tocoferol com a antioxidant i es va afegir un 3% d'extracte de ginseng vermell com a ingredient actiu; la barreja es va anomenar crema de ginseng vermell.

2.3. Avaluació de l'estabilitat de la crema de ginseng vermell

Es van realitzar les proves següents per avaluar l'estabilitat de la crema de ginseng vermell al 3 per cent:

cistanche amazon

(1) prova de pH

El pH de la crema de ginseng vermell es va mesurar els dies 1, 7, 15 i 30 de l'experiment 30-dia. El pH de la crema de ginseng vermell era lleugerament àcid i gairebé no va mostrar canvis durant els 30 dies (taula 2).

(2) Prova de decoloració

El grau de decoloració de la crema de ginseng vermell es va mesurar els dies 1, 7, 15 i 30. No es va observar cap canvi de color durant el període experimental de 30-dia (figura suplementària 1).

(3) Prova de pegat

Per comprovar si hi havia una resposta al·lèrgica a la crema de ginseng, es va aplicar 1 ml de crema de ginseng vermell a la zona posterior central dorsal (1 cm × 1 cm) dels voluntaris i es va avaluar la reacció de la pell després de 24 h. Es van avaluar diversos tipus de reaccions cutànies, tal com es mostra a la taula suplementària. 3A-B, i no es va observar cap eritema, edema o reacció adversa. Per tant, aquesta crema es va provar més per a altres paràmetres de la pell. A més, es va avaluar el grau d'irritació de la pell, tal com es mostra a la taula suplementària. 4, per obtenir l'índex primari d'irritació de la pell.

2.4. Règim de tractament de crema de ginseng vermell i avaluació dels efectes sobre el contingut d'oli i humitat, l'elasticitat i el blanquejament de la pell

Per avaluar els efectes de la crema de ginseng vermell sobre el contingut d'oli, el contingut d'humitat, l'elasticitat i el blanquejament de la pell, 10 dones (uns 40 anys d'edat, no fumadores, sense antecedents de malalties de la pell o tractament facial) es van dividir en dos grups de cinc individus cadascun: el grup control, en què es va aplicar crema sense extracte de ginseng vermell (no KRG) i el grup experimental, en què es va aplicar crema amb extracte de ginseng vermell (grup tractat amb KRG). El nombre d'individus es va calcular mitjançant el programari estadístic, G*Power 3.1 omicX; el coeficient de significació era 0,05, la potència era 80, el nombre de grups era 2 i el nombre de mesures repetides era 6.

how to take cistanche

Es van seleccionar deu individus (cinc al grup experimental i quinze al grup control) per tenir en compte una taxa d'abandonament del 20 per cent. Els experiments d'assaig amb humans van ser permesos pel Comitè de Revisió Institucional de la Universitat de Kyungnam (IRB # 1040460-A-2017-040).
Cada dia durant 1 mes, la crema es va aplicar a la pell 1 h després de la neteja. A continuació, es van mesurar els paràmetres esmentats a la pell les setmanes 0, 2 i 4.

La crema es va aplicar a la zona T (1) de la cara, que es troba 1 cm per sobre de la part superior de la meitat de la T al front entre les celles i als costats dret i esquerre durant 3e5 segons. La zona U (2) es va dibuixar horitzontalment des del nas i verticalment cap avall des de la cua de l'ull, tal com es mostra a la figura suplementària 2. Per estandarditzar les condicions de mesura, la investigació es va realitzar a 24 C ± 1 C i 55 per cent. ± 10 per cent d'humitat relativa.

El contingut d'oli, el contingut d'aigua, l'elasticitat i el contingut de melanina es van mesurar mitjançant un sebúmetre SM815 (CK electronics, Alemanya), cronòmetre CM825 (CK electronics, Alemanya), hexàmetre MX18 (CK electronics, Alemanya) i un cutòmetre (CK electronics, Alemanya). , Alemanya), respectivament, tocant aquests instruments amb la pell durant 3-5 segons.
El contingut d'humitat i oli i els tons de pell de la pell es van analitzar mitjançant la prova T. Es va considerar una anàlisi empírica dels resultats de l'estudi per indicar canvis estadísticament significatius per als valors p de<0.05. After the end of the application period, the satisfaction of the product assessed through a questionnaire was converted into a score for each response.

2.5. Cultiu cel·lular

La línia cel·lular de melanoma murí B16/F10 es va obtenir de la American Type Culture Collection i es va cultivar en el medi d'àguila modificat de Dulbecco complementat amb un sèrum boví fetal al 8% (WelGene Co, Daejeon), 100 UI/mL de penicil·lina i 100 mg/mL de sulfat d'estreptomicina (Lonza, MD, EUA). Les cèl·lules es van mantenir en una incubadora humidificada al 5% de CO2 a 37 graus C.

2.6. Assaig d'inhibició de TYR lliure de cèl·lules

L'assaig es va realitzar mitjançant un protocol lleugerament modificat tal com s'ha descrit anteriorment [3]. Breument, es va col·locar 1 0 mL de KRG per triplicat en una placa de 96-pou i es va barrejar amb 60 mL de 50 mmol/L de tampó fosfat sobre gel (pH 6, 8). Posteriorment, es van afegir 20 ml de L-DOPA de 0,9 mg/ml a cada pou. Finalment, es van afegir 10 ml de TYR de bolets a cada pou i la placa es va incubar a 27 graus C durant 10 min. Després de la incubació, la producció de dopacrom es va mesurar espectrofotomètricament a 450 nm mitjançant un lector de microplaques (Versamax; Molecular Devices, LLC, CA, EUA); en aquest experiment, es va utilitzar l'àcid cògic com a control positiu [16].

cistanche side effects reddit

2.7. Assaig d'inhibició de la melanina

Les cèl·lules B16/F10 es van sembrar en plaques de cultiu de 6-pou a una densitat de 2,5 × 103 cèl·lules/pou i es van incubar durant 5 dies. Després que les cèl·lules aconseguissin la confluència desitjada, es va aplicar el tractament amb KRG i es van estimular les cèl·lules amb a-MSH. A continuació, es van incubar les cèl·lules durant 3 dies, es van recollir utilitzant una solució d'àcid etilendiaminotetraacètic de tripsina al 0,25% i es van transferir a tubs de microcentrífuga d'1,5-ml. Els tubs es van centrifugar a 10,000rpm durant 10 min, i el pellet es va dissoldre en 2mol/L de NaOH durant 15 minuts a 60 graus C. A continuació, la barreja es va transferir a 96-plaques de pous i l'absorbància de cada pou a 450 nm es va mesurar mitjançant un lector de microplaques (Versamax; Molecular Devices, LLC, CA, EUA). L'absorbància es va comparar amb la de les corbes estàndard produïdes a partir de melanina sintètica (Sigma).

2.8. Experimentació i agrupació amb animals

Es van obtenir ratolins sense pèl mascles HRM-2 de sis setmanes d'edat de Central Lab Animal Inc. (Seül, Corea del Sud) i es van allotjar en una habitació controlada (23 graus ±1 graus, 55 per cent ±5 per cent). humitat relativa, cicle llum/fosc de 12 h) i accés ad libitum a aigua i pinsos. Totes les experimentacions amb animals es van realitzar estrictament pel Comitè Institucional de Cura i Ús d'Animals de la Universitat de Daejeon (Daejeon, Corea) (número de permís: DJUARB2017-033). Després d'un període d'aclimatació d'1 setmana, els ratolins es van dividir aleatòriament en cinc grups, cadascun dels quals contenia quinze animals: el grup normal, que no va rebre cap tractament; el grup control irradiat amb UVB; el grup control positiu, que va rebre un 0,01 per cent de protecció solar i irradiació UVB; el grup de dosis més baixes de KRG, que va rebre KRG 150 mg/kg po amb irradiació UVB; i el grup de KRG de dosis més alta, que va rebre KRG 300 mg/kg po amb irradiació UVB.

2.9. Irradiació UVB i inducció del fotoenvelliment

La pell dorsal dels ratolins HRM{{0}} es va irradiar amb una làmpada UVB (15 W; longitud d'ona màxima, 312 nm; intensitat UV, 100 mW cm²; IedaBoeki Co., Tòquio, Japó). Per avaluar els efectes del control positiu (0,01 per cent de protecció solar) i KRG sobre la formació d'arrugues i la pigmentació, es van irradiar ratolins HRM-2 amb 100 mJ/cm2 UVB (1 dosi eritemàtica mínima =100 mJ/cm2 ) diàriament durant la setmana 1 i després 200 mJ/cm2 UVB a partir de les setmanes 2-5. Els ratolins es van controlar tres vegades per setmana. La ingesta dietètica i el pes corporal es van mesurar cada setmana durant 12 setmanes.

cistanche para que serve

2.10. Efecte sobre la producció de melanina en ratolins HRM-2

Per avaluar la producció de melanina resultant de l'exposició dels ratolins a UVB, l'àrea dorsal dels ratolins es va dividir en els costats dret i esquerre. En tots els grups excepte el grup normal, el costat esquerre va rebre radiació UVB (control), protector solar o KRG i UVB durant 5 setmanes. El costat dret es va deixar sense tractar. La irradiació UVB es va aplicar tres vegades per setmana durant 5 setmanes (tal com es descriu anteriorment) i l'estat de pigmentació de la pell es va analitzar a les setmanes 1, 3 i 5 mitjançant la càmera digital (model D70; Nikon, Tòquio, Japó) després els ratolins van ser anestesiats amb èter. L'anàlisi d'imatge de la pell dorsal es va realitzar mitjançant un programari (Bio-Rad, EUA) a les fotografies de la càmera digital. El grau de deposició de melanina es va analitzar a partir de la diferència entre la zona pigmentada, exposada a UVB i tractada amb mostra del costat esquerre en comparació amb la zona no tractada i no pigmentada del costat dret.

2.11. Mesura de les arrugues de la pell 

El grau d'envelliment de la pell induït per UVB es va mesurar mitjançant l'observació de la formació d'arrugues. Per avaluar la formació d'arrugues, els ratolins HRM{{0}} van ser anestesiats mitjançant la injecció intraperitoneal d'hidrat de cloral (0,1 ml d'hidrat de cloral al 7 per cent/ratolí 25 g) a la setmana 5 L'exposició a UVB i el tractament de la mostra es van descriure a la secció anterior. Les arrugues de la pell es van avaluar a les setmanes 3, 4 i 5 mitjançant DETAX System II (MIXPAC) i Double-Stick Disc (3M Healthcare, Alemanya) després de la irradiació UVB. El disc Double-Stick (polveritzat amb DETAX System II) es va unir a la pell del ratolí i es va treure després de 2e3 minuts. Les arrugues del disc es van avaluar pel sistema de puntuació de Bissett [17]: grau 0, absència d'arrugues; grau 1, diverses arrugues superficials; grau 2, algunes arrugues; i grau 3, algunes arrugues profundes. Després de treure el disc i netejar la pell amb etanol al 70 per cent, la pell es va fotografiar mitjançant un microscopi digital USB (× 400; CE FOROHS, Xina) i es va realitzar una anàlisi visual de les arrugues de la pell.

2.12. Assaig immunoabsorbent lligat a enzims

Per investigar l'efecte dels gens relacionats amb les arrugues induïts per UVB (és a dir, metaloproteinasa de la matriu; MMP-2), es va recollir la pell de tots els grups tractats i es van analitzar les proteïnes mitjançant l'assaig immunosorbent lligat a enzims (ELISA) kit segons les instruccions del fabricant (kit MMP-2 ELISA; R&D Systems, EUA).

2.13. Observació histològica de la pell

Els teixits de la pell extrets de cada grup experimental es van fixar en una solució de formalina al 10 per cent durant 48 h i després es van tenyir amb hematoxilina i eosina pel mètode de Cardiff [18] per determinar el gruix epidèrmic. Per a la visualització de col·lagen, es va realitzar la tinció de tricoma de Masson mitjançant protocols establerts [19].

2.14. Extracció d'ARN i reacció en cadena de la polimerasa en temps real

L'ARN total es va extreure de les cèl·lules B16/F10 i de la pell del ratolí dilatada amb UVB-ira després de ser tractats amb KRG i estimulats amb a-MSH mitjançant TRIzol segons les instruccions del fabricant. L'ARN (2 mg) es va recuit amb oligodT (Bioneer Co, Daejeon) durant 10 minuts a 70 graus C i es va refredar durant 5 minuts sobre gel, es va transcriure inversament mitjançant premescla de transcriptasa inversa (Bioneer Co., Daejeon) en 20 ml de la barreja de reacció. , i funciona durant 90 minuts a 42,5 graus en un termociclador. La reacció es va acabar a 95 graus durant 5 minuts per inactivar la transcriptasa inversa. La reacció en cadena de la polimerasa de transcripció inversa (PCR) es va realitzar en alíquotes d'ADNc obtingudes a partir de la reacció de la transcriptasa inversa (RT) en una premescla de PCR (Bioneer Co, Daejeon). Els productes de PCR es van electroforitzar en un gel d'agarosa a l'1 per cent, es van tacar amb bromur d'etidi i es van visualitzar mitjançant ImageQuant LAS 500 (GE Healthcare Life Sciences, Seül, Corea del Sud). La intensitat de les densitats de bandes es va normalitzar a la de la gliceraldehid 3- fosfat deshidrogenasa (GAPDH) i les seqüències d'imprimació es proporcionen a la taula suplementària. 1. L'expressió de MMP-2, MMP{-9 i interleucina (IL)-1b es va analitzar mitjançant PCR quantitativa en temps real mitjançant un sistema de PCR en temps real Applied Biosystems 7500 ( Applied Biosystems, EUA).

cistanche tubulosa supplement

2.15. Anàlisi Western blot

Les cèl·lules B16/F10 es van tractar amb KRG en presència d'a-MSH (10 mM). Les proteïnes totals de les cèl·lules i la pell del ratolí irradiada amb UVB es van extreure mitjançant les instruccions del tampó de lisi PRO-PREP (iNtRON Biotechnology, Corea). A continuació, es va mesurar la concentració de proteïnes mitjançant el kit d'assaig PRO-MEASURE (PRO-PREP; iNtRON Biotechnology, Corea) i es van separar quantitats iguals de proteïnes per gels de poliacrilamida al 10% mitjançant electroforesi en gel de dodecilsulfat de sodi-poliacrilamida (SDS-PAGE) i transferit a membranes de difluorur de polivinilidè (PVDF) (Immobilon-P; Millipore, Billerica MA, EUA). La unió inespecífica a les membranes de PVDF es va minimitzar mitjançant la incubació de la membrana en un tampó de bloqueig que contenia un 5 per cent de llet seca sense greix i un 0, 1 per cent de Tween-20 en solució salina tamponada Tris (TBS). A continuació, es van incubar les membranes durant la nit a 4 graus amb anticossos primaris específics, seguida d'una incubació durant 1 h amb anticossos anticonill conjugat amb peroxidasa de rave picant (dilució 1: 3000). Els anticossos lligats es van visualitzar mitjançant l'aplicació de solució de quimioluminescència millorada (Supex, Daegu, Corea) i les imatges es van analitzar mitjançant el programari ImageJ. La b-actina es va utilitzar com a control intern.

2.16. Anàlisi estadística

Les dades es van presentar com a mitjana ± Error estàndard de la mitjana (SEM). L'anàlisi de variància unidireccional (ANOVA), la prova de Dunnett i la prova t de Student no aparellada es van aplicar per a l'avaluació estadística de les dades o quan s'indicava específicament el contrari. Els resultats de l'anàlisi estadística de ***p < 0.001, **p <0,05 i *p <0,01 es van considerar significatius.

Per a més informació: david.deng@wecistanche.com WhatApp:86 13632399501

Potser també t'agrada