La vacunació amb virus inactivats autògens materns augmenta la immunitat al PRRSV en garrins Part 1

Resum:

La immunitat derivada de la mare és un component crític per a la supervivència i l'èxit de la descendència en els porcs per protegir-se dels patògens circulants com el virus de la síndrome reproductiva i respiratòria porcina tipus 2 (PRRSV-2).

L'objectiu d'aquest estudi és investigar la transferència de la immunitat anti-PRRSV als garrins procedents de davallades que van rebre el virus viu modificat (MLV) sol (tractament (TRT) 0), o en combinació amb un dels dos inactivats autògens. vacunes (AIV, TRT 1 més 2). Els garrins d'aquestes daurades van ser desafiats amb la soca autògena PRRSV-2 a les dues setmanes d'edat i es va avaluar la seva resposta immune adaptativa (IR) fins a 4 setmanes després de la inoculació (dpi).

L'IR sistèmic humoral i cel·lular es va analitzar en les daurades pre-part, en garrins, pre-inoculació i a 2 i 4 wpi. Tots dos AIV van protegir parcialment els garrins amb una patologia pulmonar reduïda i un augment de pes; El TRT 1 també va reduir la virèmia dels garrins, que s'explica millor per la producció d'anticossos neutralitzants induïda per l'AIV en garrins i la seva transferència als garrins. En els garrins, abans de la inoculació, els principals productors sistèmics d'IFN eren les cèl·lules CD21 més B. De 0 a 4 wpi, el paper d'aquestes cèl·lules B va disminuir i les cèl·lules T CD4 es van convertir en els principals productors sistèmics d'IFN.

Els bons virus vius es refereixen a virus que no causen malalties i tenen una certa relació amb la immunitat del cos humà. Els virus vius poden estimular el sistema immunitari humà perquè produeixi una resposta immune, millorant així la immunitat humana. Els estudis han demostrat que després que el cos humà estigui infectat amb un virus viu, alliberarà alguns mediadors i citocines, que poden activar les cèl·lules immunitàries, promoure la funció del sistema immunitari i millorar la capacitat del cos de resistir els virus.

A més, els virus benignes i viables també poden ocupar cèl·lules de manera competitiva, cosa que dificulta que els patògens envaeixin i es reprodueixin, protegint així el cos humà d'altres infeccions. Per tant, una infecció adequada per virus benignes i vius pot millorar la immunitat humana, però una infecció excessiva pot provocar malalties. Per tant, a la vida diària, les persones han de prestar atenció a controlar la infecció de virus vius i millorar la immunitat mitjançant un estil de vida saludable. Des d'aquest punt de vista, hem de millorar la immunitat. Cistanche pot millorar significativament la immunitat. La cendra de carn conté una varietat d'ingredients biològicament actius, com ara polisacàrids, dos bolets i Huangli, etc. Aquests ingredients poden estimular diverses funcions del sistema immunitari. cèl·lules semblants a cèl·lules, augmentant la seva activitat immune.

Feu clic a Beneficis per a la salut del cistanche

Als pulmons, les cèl·lules T CD8 eren les principals i les cèl·lules T CD4 eren els productors secundaris d'IFN, inclòs un nou subconjunt de cèl·lules T CD8 −CCR7− CD4 porcines, cèl·lules TEMRA CD4 potencialment diferenciades terminalment. En resum, aquest estudi demostra que la vacunació materna contra l'AIV pot millorar la protecció dels garrins abans del deslletament contra el PRRSV-2; mostra la importància de transferir anticossos neutralitzants als garrins i introdueix dos nous subconjunts de cèl·lules immunitàries en porcs: cèl·lules CD21 més B que produeixen IFN i cèl·lules T CD8 −CCR7− CD4.

Paraules clau:

vacunació materna; vacuna autògena inactivada; transferència d'immunitat; resposta immune humoral; resposta immune mediada per cèl·lules; cèl·lules T; PRRSV; porc; cèl·lules B productores d'IFN; Cèl·lules CD4 TEMRA.

1. Introducció

La immunitat derivada de la mare (MDI) en mamífers és una simfonia impressionant ("complexitat harmònica"—[1]). En aquest sistema, o simfonia, una mare transfereix la protecció immune (temporal i/o duradora) a la seva descendència, ja sigui durant la gestació a través de la placenta, després del naixement a través de secrecions mamàries o ambdues [2]: els humans reben immunoglobulines durant la gestació i, finalment, a través de la mamària. secrecions [3]; els gossos i rosegadors reben immunoglobulines durant la gestació i mitjançant secrecions mamàries, i els porcs i altres bestiar només reben immunoglobulines a través de les secrecions mamàries.

De manera similar a altres espècies, els garrins reben aquest MDI en forma d'immunoglobulines, cèl·lules immunitàries i altres molècules relacionades amb el sistema immunitari [4,5]. Tot i que les immunoglobulines es poden rebre de diferents truges (= acolliment creuat), només les mares biològiques poden transferir amb èxit cèl·lules immunitàries a la seva descendència [5], i la quantitat d'ingesta de calostre en garrins disminueix significativament la mortalitat i millora el rendiment [6] ]. Aquestes cèl·lules immunitàries inclouen cèl·lules B [7], així com diferents subconjunts de cèl·lules T: CD4, CD8 i, principalment, receptors de cèl·lules T (TCR) - cèl·lules T δ [8].

Aquests subconjunts de cèl·lules T es poden distingir encara més segons la seva etapa de diferenciació i el seu patró d'homing. En els porcs, la cadena CD8 s'utilitza per diferenciar CD8 - naïf de CD8 més cèl·lules T CD4 experimentades amb antigen o de memòria [9-11]. L'expressió del receptor de quimiocines (CCR) 7 distingeix encara més CCR7 més l'homing dels ganglis limfàtics de les cèl·lules T perifèriques del teixit CCR7 [12]. Amb una anàlisi combinada de CD8 / CCR7, podem distingir diversos subconjunts de cèl·lules T diferents: CD8 -CCR7 més cèl·lules T CD4 naïves, CD8 més CCR7 més cèl·lules T CD4 de memòria central (TCM) i CD8 més CCR7 - memòria efectora (TEM). ) Cèl·lules T CD4; CCR7- i els ganglis limfàtics que s'envien al teixit perifèric CCR7 més cèl·lules T CD8 i CD8 −CCR7−, CD8 més CCR7− i CD8 més CCR7 més cèl·lules T TCR-δ.
Tot i que anteriorment vam informar que les cèl·lules T porcines TCR-δ posseeixen un patró d'homing invers en comparació amb els seus homòlegs TCR-, encara no s'ha descrit el paper específic d'aquests diferents subconjunts [13]. Tant els subconjunts de cèl·lules immunitàries com els anticossos es transfereixen a la descendència per protegir-los de diversos patògens [4,5].

Durant dècades, el patogen més desastrós per als porcs ha estat els virus de la síndrome reproductiva i respiratòria porcina (PRRSV, [14,15]). Existeixen dos tipus principals de PRRSV: tipus 1 i 2 (PRRSV-1 i 2); la seva gran diversitat i les seves capacitats immunosupressores fan que el PRRSV sigui una malaltia problemàtica, provocant pèrdues econòmiques enormes per a la indústria porcina [16] i fins ara, si bé les vacunes proporcionen una protecció parcial contra el PRRSV, no han estat capaços de controlar completament aquesta malaltia.

Hi ha dos tipus de vacunes principals disponibles per protegir contra el PRRSV: vacunes de virus vius modificats (MLV) i vacunes inactivades, principalment vacunes autògenes inactivades (AIV); tanmateix, ambdós tipus s'enfronten als seus reptes.

El llarg temps per desenvolupar les vacunes MLV molt immunogèniques significa que solen ser més heteròlogues a les soques de PRRSV prevalents en granges i, mentre que els AIV es dirigeixen contra aquestes soques prevalents a les granges, la seva naturalesa inactivada les fa generalment menys immunogèniques.

Aquests reptes comporten una manca de protecció especialment en els porcs joves que es pot atribuir a tres factors: en primer lloc, l'elevada taxa de mutació del PRRSV limita la protecció heteròloga, de manera que redueix l'eficàcia de la vacuna MLV; segon, la seva capacitat immunosupressora limita les vacunes més febles (per exemple, les AIV) i el seu retard en la inducció d'una resposta immune protectora deixa els porcs joves especialment susceptibles [17]; i tercer, la nostra comprensió de la resposta immune al PRRSV, especialment en garrins, és limitada. Loving i Lunney van fer una bona revisió sobre la comprensió general de la resposta immune al PRRSV [18,19].

Sobre la base del temps prolongat per establir la immunitat induïda per la vacuna contra el PRRSV, els productors de porcs solen vacunar davallades i truges per permetre la transferència de la immunitat als garrins. La investigació sobre la vacunació materna utilitzant un MLV comercial contra el tipus PRRSV-1 no va impedir la vacunació de garrins de 2 o 3-setmanes i va protegir parcialment els garrins contra el desafiament heteròleg [20]. Aquesta estratègia de vacunació també va induir cèl·lules secretores d'IgG, IgA i interferó (IFN) específiques del PRRSV-1-en el calostre i la llet de les truges vacunades. Aquestes cèl·lules productores d'IFN són molt importants en les respostes antivirals, inclòs el PRRSV [19,21].
Aquesta vacunació també va induir IgG sèrica anti-PRRSV, que es va detectar després de sis setmanes d'edat per als garrins no vacunats i es va mantenir estable en garrins vacunats abans del repte; no obstant això, les cèl·lules secretores d'IFN no es van poder distingir dels nivells de fons en garrins predeslletats [22]. Tot i que l'ús de MLV és un estàndard de la indústria, un règim de vacunació combinat d'una vacunació MLV prim i AIV d'augment sembla prometedor per superar cadascun dels inconvenients de l'ús independent de MLV i AIV.

Per tant, l'objectiu principal d'aquest estudi era determinar no només si, sinó també com, la vacunació materna amb dos AIV diferents (tractament (TRT) 1 més 2) pot augmentar només una vacunació MLV estàndard de la indústria (TRT 0 ), per protegir millor la descendència del repte precoç de PRRSV2. Amb aquesta finalitat, vam estudiar la resposta immune humoral i mediada per cèl·lules (CMI) induïda per la vacuna en aquestes daurades i vam desafiar els primers deslletaments de davallades dins de cadascun d'aquests grups a les 2 setmanes d'edat. La resposta immune sistèmica i local d'aquests garrins es va seguir durant 2-4 setmanes.

Mostrem que la vacunació de reforç amb AIV podria millorar la protecció dels garrins contra el repte del PRRSV a les 2 setmanes d'edat i també identifiquem els mecanismes immunitaris subjacents i caracteritzem la resposta humoral i CMI anti-PRRSV en aquests porcs joves. A més, vam detectar dos nous tipus de cèl·lules en porcs: (1) cèl·lules T CD8 −CCR7− CD4 que contribueixen fortament a la producció d'IFN en el rentat broncoalveolar (BAL), potencials cèl·lules CD4 TEMRA, i (2) una font important de la resposta anti-PRRSV especialment en garrins: cèl·lules B productores d'IFN.

2. Materials i Mètodes

2.1. Disseny de l'estudi, animals i processament de mostres

L'objectiu d'aquest estudi era avaluar l'efecte de diferents sèries de vacunació materna contra el PRRSV2 sobre la immunitat protectora dels garrins deslletats contra el PRRSV-2. Abans de l'estudi, dues empreses independents de ciències biològiques van aïllar i propagar una soca de PRRSV-2 (polimorfisme de longitud de fragment de restricció (RFLP), 1-7-4) d'una empresa de porc de Carolina del Nord; van produir dues vacunes autògenes diferents. Les dues vacunes contenien diferents components propietaris, però contenien la mateixa soca 1-7-4 PRRSV-2 inactivada. El disseny d'aquest estudi s'il·lustra a la figura 1.

Ambdues vacunes es van administrar per via intramuscular en una sèrie de quatre dosis abans del part: segons el calendari de vacunació corporatiu de l'empresa porcina de Carolina del Nord, 46 cries negatives del PRRSV-2 en una granja comercial de truges es van vacunar amb la vacuna Ingelvac PRRS MLV (Boehringer Ingelheim Vetmedica). GmbH, Alemanya) nou setmanes abans de la reproducció. Per mantenir una terminologia coherent al llarg d'aquest estudi, les femelles de porc madures sexualment inscrites (aquí definides com a daurades) es denominaran daurades fins i tot després d'haver estat criades i donades a llum (comunament anomenades truges). Quatre setmanes abans de la reproducció, es van recollir mostres de sang de totes les daurades per obtenir sèrum i després es van assignar tres tractaments: TRT 0 (només vacunació MLV); TRT 1 (vacunació MLV més 4 dosis de vacuna autògena (1-7-4) inactivada 1); o TRT 2 (vacunació MLV més 4 dosis de vacuna autògena (1-7-4) inactivada 2).

Gilts that did not breed were dropped from the study. 3 weeks before farrowing, blood was collected from pregnant gilts for the isolation of serum and peripheral blood mononuclear cells (PBMC). At this point, five gilts remained in both TRT 0 and TRT 2; nine gilts remained in TRT 1. Within these gilts, we selected three gilts per group to provide the piglets for the challenge study. The selected gilts had an adequate litter size (>7) i el títol de neutralització del focus fluorescent (FFN) sèric més alt (criteri immune primari) i la resposta IFN de cèl·lules T CD4 més alta (criteris immunitaris secundaris) contra la soca desafiament AIV dins del seu grup. Per a TRT 1 més 2, aquests títols FFN van oscil·lar entre 1:4 i 1:128. Com que la TRT {{10}} no tenia cap títol contra la soca AIV, vam triar les daurades amb els títols anti-MLV més alts; aquests títols oscil·laven entre 1:16 i 1:32. La resposta a l'IFN dins de totes les daurades seleccionades va oscil·lar entre el 0,09-0,21 per cent del total de cèl·lules T CD4.

Cadascun d'aquests daurats va proporcionar quatre garrins per a l'estudi del repte. A les 2 setmanes d'edat (= 0 setmanes després de la infecció, wpi), es van seleccionar els quatre garrins amb el pes de camada més mitjà per a l'estudi de repte i es van transportar a les instal·lacions d'habitatge de nivell 2 de bioseguretat de la Universitat Estatal de Carolina del Nord ( NCSU) Laboratory Animal Resources (LAR) (Raleigh, Carolina del Nord). Aquí, van ser assignats aleatòriament a un dels sis bolígrafs de la mateixa habitació; es van allotjar dos porcs per tractament a cada corral (un per daurat). En resum, hi va haver un total de 36 garrins a l'estudi amb 12 garrins per grup de tractament.

During the study, four piglets died before the end of the study: three piglets from one gilt (TRT 0) died within 30 h of arrival at LAR and were dropped from the study. Additionally, one pig (TRT 2) was euthanized between weeks three and four of the study due to high fever (>106◦ F) i manca de resposta a l'estimulació física. Aquest porc es va incloure en totes les anàlisis fins a la setmana 3 i es va avaluar la patologia dels seus pulmons. No es va produir cap anàlisi de citometria de flux (FCM) per a aquest animal a la necròpsia.

Un dia després del deslletament i l'arribada a NCSU, tots els garrins es van inocular per via intranasal amb 1 × 105,5 PRRSV-2 partícules virals (soca autògena 1-7-4) en 1 ml de solució salina tamponada amb fosfat 1X (PBS, Corning, Corning, NY, EUA) (500 µL/fosa nasal), es van mantenir en posició supina durant 30 segons i van tornar als seus bolígrafs. La meitat dels animals es van sacrificar a 2 dpi i la resta d'animals es van sacrificar a 4 dpi. A la necròpsia, es van recollir i processar BAL, pulmons i ganglis limfàtics traqueobronquials (TrBr LNs) tal com es va descriure anteriorment [13].

El mostreig es va fer abans de la inoculació (0 wpi) i després setmanalment, tal com es mostra a la figura 1. El sèrum es va recollir en tubs de Serum Separator Tubes (SST) (Becton Dickinson (BD) Biosciences, San Jose, CA, EUA) i La sang per aïllar PBMC es va recollir en tubs d'heparina (BD Biosciences). L'allotjament d'animals va ser de la guia dels Instituts Nacionals de Salut per a animals de recerca. Els garrins tenien accés il·limitat a l'aigua, van ser alimentats amb una dieta de deslletament de transició, després amb una dieta regular dues vegades al dia i es van mantenir a 83 ◦F amb un cicle de llum/foscor de 12-hores. Els procediments experimentals van ser aprovats pel Comitè Institucional de Cura i Ús d'Animals de la Universitat Estatal de Carolina del Nord (IACUC) ID # 17-166A (29 de novembre de 2017).

2.2. Propagació, valoració i avaluació de virus

L'aïllat viral de PRRSV-2 (soca, 1-7-4) es va propagar en macròfags alveolars porcins (PAM) negatius per PRRSV en RPMI-1640, 1 × amb L-glutamina (Corning, Corning, NY , EUA) complementat amb un 10% de sèrum fetal boví (FBS) (VWR, Radnor, PA, EUA) i 1X antibiòtic-antimicótico (Corning) (anomenat RPMI-complet) durant aproximadament 30 h en matràs T-75 (Sarstedt, Nümbrecht, Alemanya) fins que es va observar un efecte citopàtic. Els flascons es van congelar-descongelar una vegada i el sobrenedant es va girar a 2200 g a 4 ◦ C durant 10 min. Per concentrar el virus, el sobrenedant es va transferir a tubs de centrífuga Nalgene de 36 ml (Thermo Fisher Scientific, Rochester, NY, EUA) i es va girar en una ultracentrífuga Sorvall 100S (Sorvall, Thermo Fisher Scientific), Newtown, CT, EUA) a 73. ,000 g a 4 ◦C durant 2 h.

El sobrenedant es va descartar i el pellet es va tornar a suspendre en medi (RPMI complet) i es va emmagatzemar en alíquotes de 100 µL a -80 ◦C. Els títols de dosi infecciosa de cultiu de teixits 50 (TCID50) de solucions d'estoc viral es van determinar utilitzant PAM tal com s'ha descrit anteriorment (mètode Spearman-Karber TCID50 segons el manual de proves diagnòstiques de l'OIE [Organització Mundial per a la Salut Animal, abans Office International des Epizooties (OIE). ), "Capítol 2.8.7 Síndrome reproductiva i respiratòria porcina", Terr. Man., núm. maig 2015, 2015].

2.3. Virèmia

El sèrum aïllat va ser analitzat pel laboratori de diagnòstic de la companyia porcina de Carolina del Nord mitjançant la reacció en cadena quantitativa de la polimerasa de transcripció inversa (RT qPCR) amb un kit d'ARN/ADN patògen 5X MagMAX (Thermo Fisher Scientific) i el kit qPCR VetMAX PRRSV (Thermo Fisher Scientific). El sèrum daurat vacunat va ser negatiu per al PRRSV (qPCR) durant el part, tal com va determinar el Laboratori de Diagnòstic Veterinari de la Universitat Estatal d'Iowa (ISU VDL, Ames, IA, EUA). Els valors de ∆Ct es van calcular restant el valor de Ct d'una mostra del valor de Ct considerat com a PRRSV negatiu (Ctneg=37) per a PRRSV: ∆Ct=37 − Ctx.

2.4. Validació d'anticossos neutralitzants i determinació de mostres positives

Les mostres de sèrum de daurans i garrins es van enviar al Laboratori de Recerca i Diagnòstic Animal de la Universitat Estatal de Dakota del Sud (Brookings, SD) que va completar la determinació d'anticossos neutralitzants (NA) de PRRSV-2 utilitzant FFN i la soca d'inoculació 1-7-4. Un resultat positiu és la dilució sèrica més alta amb una reducció del 90 per cent o superior en el nombre d'unitats de formació de focus fluorescents [23].

2.5. Procediments de necròpsia, puntuació i aïllaments de cèl·lules de teixit

A la necròpsia (2 o 4 wpi), els animals es van sacrificar mitjançant una injecció intravenosa letal d'Eutasol (Covetrus, MW, 390 mg/mL de pentobarbital, 50 mg de fenitoïna/mL). A continuació, es van recollir els pulmons, el timus i els LN de TrBr.

Per als pulmons es van fer fotos dorsals i ventrals; es van rentar els pulmons amb 1 × PBS per recollir el rentat alveolar bronquial (BAL) i es van prendre cinc mostres totals per a la histologia: una dels lòbuls caudals dret i esquerre, lòbuls mitjans dret i esquerre i després una del lòbul accessori. Les mostres d'histologia es van fixar en un fixador de formaldehid / Zn (Electron Microscopy Sciences, Hatfield, PA) durant 24 hores, es van transferir a etanol al 70 per cent i es van tacar amb hematoxilina i eosina (H&E). Les diapositives tacades (histologia) i les fotografies pulmonars (patologia bruta) es van enviar a ISU VDL i es van puntuar per un patòleg de diagnòstic veterinari que estava cec als tractaments i a les dates de necròpsia; La puntuació de la lesió pulmonar i la pneumònia intersticial es van realitzar tal com es va descriure anteriorment [24].

Les vistes dorsals i ventrals de les fotografies pulmonars es van avaluar pel percentatge de pulmó afectat per pneumònia. Concretament, es va estimar visualment el percentatge de pneumònia per a cada lòbul pulmonar i el percentatge total de tot el pulmó es va calcular a partir de la proporció ponderada de cada lòbul respecte del volum total del pulmó. Cadascun dels quatre lòbuls cranioventrals representava el 10%, el lòbul accessori el 5% i cadascun dels dos lòbuls caudals representava el 27,5% del pulmó total.

Les seccions d'histopatologia pulmonar es van examinar cegament per detectar lesions microscòpiques i es va donar a cada lòbul una puntuació estimada basada en la gravetat de la pneumònia intersticial de la següent manera: 0=cap lesió microscòpica; 1=pneumònia intersticial mínima; 2=pneumònia intersticial lleu; 3=pneumònia intersticial moderada; 4=pneumònia intersticial abundant; 5=pneumònia intersticial multifocal severa; 6=pneumònia intersticial severa i difusa. Per a tots els teixits recollits (pulmons, tim i TrBr LN), el teixit es va tallar en trossos petits i es va pressionar a través de filtres de drenatge rodons d'acer inoxidable (Grainger, Lake Forest, IL, EUA) en tubs de 50 ml amb PBS gelat per eluir. suspensions unicel·lulars. Els grups fibrosos es van filtrar amb filtres de 40 µm (BD Biosciences, San Jose, CA, EUA).

2.6. Aïllament de sang perifèrica, estimulació viral i tinció/anàlisi d'IFN-FCM

L'aïllament de PBMC es va realitzar mitjançant la centrifugació de densitat Ficoll-Paque (GE Healthcare, Uppsala, Suècia) i tubs SepMate-50 ml (STEMCELL Technologies, Vancouver, BC, Canadà) segons el protocol del fabricant. Els recomptes de cèl·lules PBMC i de suspensió de cèl·lules individuals es van completar amb un sistema de recompte de cèl·lules CASY (Schärfe System, ara: Roche Innovatis AG, Bielefeld, Alemanya). Per a l'assaig de producció d'IFN, es van xapar 5 × 105 PBMC i limfòcits dels pulmons i TrBr LN en vuit rèpliques en una placa de fons rodó 96-pou (Corning) en 100 µl RPMI-complet i reposar durant la nit en un incubadora a 37 ◦ C i 5 per cent de CO2. L'endemà al matí es van afegir 100 µL de soca PRRSV 1-7-4 (Multiplicitat d'infecció, MOI=0.1) que contenia RPMI complet a cada pou; Les plaques es van tornar a la incubadora durant 24 h d'estimulació viral.

Durant les últimes 4 h de cultiu, es va afegir monensina (5 µg/mL, Alfa Aesar, Haverhill, MA, EUA) per bloquejar l'alliberament d'IFN de les cèl·lules. Un cop finalitzada la incubació de 24 hores, les rèpliques es van agrupar i es van tacar tal com s'indica a la taula 1; de mitjana, es van registrar 276.756 limfòcits vius únics (SLL) en un Cytoflex mitjançant el programari CytExpert (Beckman Coulter, Brea, CA, EUA). L'anàlisi de dades es va realitzar amb la versió 10.6.1 de FlowJo (FLOWJO LLC). La jerarquia de gating per a l'anàlisi de la resposta a l'IFN es mostra a les figures 4 i 5 per a PBMC i a la figura suplementària S1 i figura 7 per a BAL, teixit pulmonar i TrBr LN.

2.7. Anàlisi estadística

Les anàlisis estadístiques es van realitzar mitjançant Graphpad Prism 8 (Graphpad Software, San Diego, CA, EUA). Les dades amb un conjunt de dades complet es van analitzar mitjançant ANOVA bidireccional (al llarg de l'estudi) o unidireccional (a la necròpsia). Les dades amb punts de dades que falten (principalment a causa de la necròpsia del 50 per cent dels porcs a 2 dpi) es van analitzar mitjançant un model d'efectes mixts (Màxima probabilitat restringida, REML). Totes les comparacions múltiples es van realitzar amb la prova de comparació múltiple de Dunnett. La il·lustració de les dades es va realitzar mitjançant gràfics de violí que mostraven la distribució, els punts individuals, la mediana (segons sigui el cas, línia negra discontínua) i els intervals 25/75 (segons una línia de colors aplicable). Les anàlisis de correlació entre els nivells de nAb daurat i garrin es van realitzar mitjançant coeficients de correlació de Pearson i un interval de confiança del 95 per cent de dues cues.

3. Resultats

3.1. Disseny de l'estudi i eficàcia de la vacuna: signes clínics, virèmia, augment de pes i patologia pulmonar

L'estudi es va dur a terme tal com es mostra a la figura 1. Després de la inoculació de PRRSV, els porcs van mostrar símptomes lleus de PRRSV que van començar entre 3 i 4 dies després de la infecció: febre [principalment a 1 wpi, dns], letargia, consum reduït d'aliments, tos/esternuts lleus. No es van observar diferències significatives per a aquests símptomes i van persistir en diferents graus fins a la necròpsia. La figura 2 il·lustra la virèmia, els guanys setmanals de pes corporal, així com les puntuacions brutes i histopatologia.

Tal com es mostra a la figura 2A, tots els porcs eren negatius al PRRSV-2 al deslletament i la inoculació intranasal amb PRRSV-2 va induir una virèmia que va assolir un màxim de 2 wpi. Tot i que no hi va haver cap diferència en la virèmia entre la TRT 0 i la TRT 2, la TRT 1 va tenir una virèmia significativament menor durant les dues primeres setmanes que el grup control TRT 0. Els guanys de pes dels porcs en tots els grups van ser molt similars durant les tres primeres setmanes; tanmateix, al final de l'estudi, i en comparació amb el TRT 0, el TRT 2 i el TRT 1 tenien augments de pes setmanal significativament més elevats (figura 2B). Sobretot, mentre que la patologia pulmonar generalment es resol en la infecció per PRRSV i, per tant, era similar entre grups a 4 dpi (dns), ambdues vacunacions AIV maternes, de manera que TRT 1 més 2, van reduir significativament la patologia pulmonar a 2 wpi: ambdues van disminuir els nivells percentuals. de lesions macroscòpiques i/o pneumònia intersticial (figura 2C, D). La prevalença de lesions pulmonars macroscòpiques als pulmons de TRT 0 va ser entre el 20-70 per cent; en canvi, la majoria dels porcs de TRT 1 més 2 tenien una prevalença de lesions pulmonars per sota del 20 per cent (figura 2C). De la mateixa manera, mentre que la puntuació histopatologia mitjana de la pneumònia intersticial als pulmons dels porcs TRT 0 era de tres, va ser d'1,8 per a TRT 1 i 1,2 per a TRT 2, respectivament. En comparació amb TRT 0, això demostra una tendència cap a la importància (p=0.07) i una disminució significativa de la histopatologia pulmonar en porcs procedents de daurades vacunades amb AIV (figura 2D). Aquestes dades demostren que la vacunació amb AIV pot reduir significativament la virèmia i la patologia pulmonar, a més, també mostren que la vacunació materna contra el PRRSV-2 pot augmentar la immunitat dels garrins de 2-setmanes d'edat.

3.2. Inducció d'anticossos neutralitzants materns i la seva transferència als garrins

La inducció de la resposta immune humoral en daurades i la seva descendència es va analitzar determinant els títols de NA FFN (figura 3).

La vacunació de tots els grups amb el MLV va induir títols de NA en daurades d'entre quatre i 64 sense diferències significatives entre els tres grups (dns). En canvi, mentre que la vacunació MLV sola (TRT 0) no incloïa NA contra la soca heteròloga 1-7-4, ambdues vacunacions de reforç AIV van induir títols de NA de fins a 1:16 (per a TRT 2) i fins i tot 1. : 128 (per a TRT 1): figura 3A.

Aquests garrins sèrics es van transferir maternament als garrins (figura 3B): mentre que els garrins TRT 0 no mostraven títols de NA a 0 wpi, els garrins TRT 1 i TRT 2 tenien NA sèrics per colar 1-7-4 abans. infecció que es correlacionava directament amb els nivells de NA materns (figura 3C, r=0.886, p <0.0001). Aquests títols de NA van disminuir durant les dues primeres setmanes, abans d'estabilitzar-se en 4 wpi. No obstant això, en comparació amb el TRT 0, els garrins de les daurades vacunades amb AIV (TRT 1 més 2) tenien títols sèrics de NA significativament més alts ja abans del repte i aquests títols augmentats van durar fins a 2-3 wpi, de manera que fins a les 4-5 setmanes d'edat—Figura 3B.

For more information:1950477648nn@gmail.com