Ni la variant africà-cèntrica S47 ni P72 de TP53 s'associa amb un risc reduït de malària febril en un estudi de cohort malià

Fons. S'ha demostrat que el TP53 té un paper en els processos inflamatoris, inclosa la malària. Abans vam trobar que p53 atenua la inflamació induïda per paràsits i prediu la protecció clínica contra la infecció per Plasmodium falciparum en nens malians. Aquí, vam investigar si els polimorfismes del codó 47 i 72 p53 estan associats amb un risc diferencial d'infecció per P. falciparum i malària sense complicacions en un estudi de cohort prospectiu de la immunitat de la malària.

Mètodes. Els polimorfismes del codó p53 47 i 72 es van determinar mitjançant la seqüenciació de l'exó 4 de TP53 en 631 nens i adults malians inscrits a l'estudi de cohort de Kalifabougou. Els efectes d'aquests polimorfismes sobre el risc prospectiu de malària febril, parasitemia incident i temps fins a febre després de parasitemia incident durant 6 mesos de transmissió intensa de malària es van avaluar mitjançant models de perills proporcionals de Cox.

Què fa l'herba cistanche—Anti-inflamatoris

Resultats. Els factors de confusió del risc de malària, inclosa l'edat i l'hemoglobina S o C, eren similars entre individus amb o sense polimorfismes p53 S47 i R72. En relació amb les seves respectives variants comunes, ni S47 ni R72 es van associar amb diferències en el risc prospectiu de malària febril, parasitemia incident o paludisme febril després de la parasitemia.

Conclusions. Aquestes troballes indiquen que els polimorfismes del codó 47 i 72 p53 no estan associats amb la protecció contra la parasitemia incident de P. falciparum o la malària febril sense complicacions.

Beneficis del suplement de cistanche: anti-inflamatòria

Paraules clau. malària; P47S; polimorfismes p53; P72R; estudi prospectiu de cohorts.

L'agent clínicament significatiu de la malària a l'Àfrica, Plasmodium falciparum, ha infectat humans durant gairebé 10,000 anys [1]. Durant aquest temps, l'elevada taxa de mortalitat de la malària severa per falciparum ha imposat una forta pressió selectiva sobre el genoma humà [2]. Com a tal, s'han mantingut polimorfismes d'eritròcits específics que d'altra manera podrien ser perjudicials per a l'hoste (per exemple, la mutació de l'hemoglobina falciforme [HbS] responsable de la malaltia de cèl·lules falciformes) en poblacions endèmiques de la malària, ja que aquestes mutacions confereixen resistència a la malària fent que l'eritròcit sigui menys hospitalari per a la malària. el paràsit invasor [3–5]. Els estudis d'associació a tot el genoma han identificat polimorfismes addicionals no relacionats amb la funció dels eritròcits com a protectors contra la malària greu, però fins a un 89% de la susceptibilitat a la malària greu encara s'ha d'atribuir a loci genòmics específics [6–9]. A més, no hi ha proves de polimorfismes hostes d'eritròcits monetaris que puguin ser protectors contra la malària sense complicacions (no greus). Estudis anteriors han implicat el supressor de tumors p53 en el control de la infecció per malària. S'ha demostrat que l'augment de p53 hoste redueix la càrrega hepàtica de Plasmodium en ratolins [10]. El nostre grup anteriorment va mostrar una expressió més gran dels gens diana TP53 i p53 a la sang de nens malians no infectats que més tard presentarien una parasitemia asimptomàtica per P. falciparum en relació amb els que més tard van presentar malària febril [11]. Aquestes observacions han portat a la pregunta de si els polimorfismes TP53 podrien explicar aquestes diferències en el fenotip clínic. El TP53 és el gen mutat amb més freqüència en els càncers humans, amb la majoria de mutacions sense sentit que es produeixen en punts calents dins del domini ric en prolina (aminoàcids 55-100) o del domini d'unió a l'ADN (aminoàcids 102-192) [12, 13]. La mutació natural més comuna es produeix al codó 72 (rs1042522), que sorgeix d'un polimorfisme d'un sol nucleòtid (SNP) a l'exó 4 [14, 15]. Un residu de prolina en aquesta posició (P72), considerada la forma ancestral, es troba preferentment en individus d'ascendència africana, mentre que un residu d'arginina (R72) es produeix més freqüentment en americans i europeus blancs no hispans, amb una freqüència que augmenta linealment amb la latitud. 16, 17]. Tot i que la substitució de prolina per arginina provoca canvis estructurals i funcionals significatius [18], es creu que ambdós residus funcionen prou per protegir-se dels diferents càncers que els individus poden trobar a les seves respectives latituds (revisat a [13]). En particular, la variant R72 s'associa amb temperatures fredes i baixa intensitat UV [19], però els estudis que avaluen l'associació dels polimorfismes del codó 72 amb el càncer de pell han donat troballes inconsistents [20–23]. Malgrat l'augment de la freqüència de P72 entre els africans en relació amb els europeus [17], altres han proposat que la variant R72 pot ser protectora contra la infecció per malària en humans [24], basant-se en l'evidència que R72 ha augmentat el potencial apoptòtic en relació amb P72 [24]. 25] i que l'apoptosi és un mecanisme pel qual l'hoste elimina els hepatòcits parasititzats al fetge [10]. El segon SNP que codifica p53 més freqüent també es produeix a l'exó 4 i es localitza dins de la regió que codifica el domini de transactivació N-terminal al codó 47 (rs1800371) [26], on la prolina més comuna (P47) es pot substituir per serina (S47). ) [27]. En contrast amb el polimorfisme molt comú al codó 72, la variant S47 és relativament rara en humans, amb una freqüència d'al·lel del 2% al 4% a les poblacions africanes [26, 27]. Com que S47 encara no s'ha detectat en nord-americans d'origen no africà [28], a la literatura s'ha denominat aquest polimorfisme com a variant africà-cèntrica. La variant S47 pot conferir resistència a la mort cel·lular programada depenent del ferro (ferroptosi), donant lloc a un augment del risc de càncers espontanis [27, 29]. En els ratolins S47, aquesta ferroptosi defectuosa pot donar lloc a una acumulació de ferro i una resposta antiinflamatòria a l'hemozoïna del pigment de la malària, la qual cosa condueix a l'especulació que la variant S47 pot limitar la inflamació induïda per la malària i, per tant, millorar la supervivència en persones que viuen a zones amb transmissió intensa de la malària. 30]. Els estudis sobre polimorfismes p53 i la susceptibilitat a la malària en humans s'han limitat fins ara. Dos estudis han examinat l'associació entre les variants del codó 72 i el risc de malària en humans amb resultats contradictoris [24, 31]. Tanmateix, segons el que sabem, l'associació entre els polimorfismes del codó 47 p53 i el risc de malària encara no s'ha investigat en humans. En l'estudi actual, vam examinar si els polimorfismes del codó 47 i 72 p53 afecten el risc d'infecció per P. falciparum i la malària clínica en una cohort prospectiva de nens i adults maliens.

cistanche tubulosa: antiinflamatori

Feu clic aquí per veure els productes Cistanche

【Demana més】Correu electrònic:cindy.xue@wecistanche.com / Whats App: 0086 18599088692 / Wechat: 18599088692

MÈTODES

Disseny de l'estudi i participants

El lloc d'estudi i la població d'estudi s'han descrit en altres llocs [32]. Breument, l'estudi es va dur a terme al poble de Kalifabougou, Mali, on la transmissió de la malària per P. falciparum és intensa i estacional, que es produeix de juny a desembre [32]. El maig de 2011, vam inscriure 695 nens i adults sans, d'entre 3 mesos i 25 anys, en un estudi de cohort observacional longitudinal per investigar la immunitat contra la malària, en el qual es va dur a terme una vigilància activa quinzenal de la malària amb revisions setmanals a casa i una vigilància passiva per si mateix. - derivació. Els criteris d'exclusió en la inscripció van incloure el nivell d'hemoglobina<7 g/dL, axillary temperature >37.5°C, acute systemic illness, underlying chronic disease, use of antimalarial or immunosuppressive medications in the past 30 days, and pregnancy. Malaria episodes were defined as parasitemia of >2500 paràsits per microlitre, una temperatura axil·lar superior o igual a 37,5 graus en 24 hores i cap altra causa de febre perceptible a l'examen físic. Els episodis es van detectar de manera prospectiva mitjançant l'autoderivació a la clínica de l'estudi i les visites setmanals de vigilància clínica activa. Tots els individus amb signes i símptomes de malària i qualsevol nivell de parasitemia detectat per microscòpia van ser tractats segons les directrius del Programa Nacional de Control de la Malària de Mali. Durant les visites programades a la clínica, es va recollir sang per punxada al dit cada 2 setmanes per a frotis de sang i taques de sang seca (DBS) en paper de filtre. Les infeccions asimptomàtiques per P. falciparum es van detectar mitjançant l'examen microscòpic de frotis de sang i l'anàlisi de la reacció en cadena de la polimerasa (PCR) de taques de sang al final del període de vigilància. Les primeres infeccions per P. falciparum es van detectar retrospectivament amb PCR de DBS recollits longitudinalment, tal com es descriu en un altre lloc [32]. Els primers episodis de malària es van determinar a partir de les dades de la visita clínica. Els valors d'hemoglobina, mesurats per un analitzador HemoCue, es van utilitzar per determinar l'estat d'anèmia, d'acord amb els criteris de l'Organització Mundial de la Salut. La tipificació d'hemoglobina per a HbS es va realitzar amb un sistema de prova d'hemoglobina D-10 (Bio-Rad). En altres llocs es van descriure tres classes clíniques amb diferents nivells d'immunitat clínica [11].

Aïllament i seqüenciació d'ADN

L'ADN genòmic es va extreure de mostres de sang sencera mitjançant 3 mètodes: (1) de pellets de sang sencera (100 μL) mitjançant un kit de sang QIAamp 96 DNA (Qiagen), segons el protocol del fabricant; (2) dels DBS que utilitzen el QIAamp DNA Mini Kit (Qiagen), segons el protocol del fabricant; o (3) des de DBS mitjançant un mètode d'extracció d'alt rendiment personalitzat, tal com es descriu en un altre lloc [33]. L'ADN genòmic purificat es va utilitzar per amplificar l'exó 4 de TP53 mitjançant PCR mitjançant els següents primers publicats anteriorment [34]: 5′-TGAGGACCTGGTCCTCTGAC- 3′ (cap endavant) i invers 5′-AGAGGAATCCCAAAGTTC CA-3′ ( revés). L'amplificació per PCR es va realitzar mitjançant el HotStarTaq Plus Master Mix Kit (Qiagen) a una temperatura de recuit de 60 graus, segons el protocol recomanat pel fabricant. Els productes de PCR amplificats es van purificar i seqüenciar pel mètode de terminació de cadena a Quintara Biosciences. Els fitxers de seqüències rebuts es van analitzar mitjançant el programari Benchling (alliberament 2022.2.3; https://benchling.com) i es van alinear amb la seqüència de referència TP53 (identificador del gen 7157; Centre Nacional d'Informació Biotecnològica). Les trucades de base informades pel programari es van comprovar manualment amb els cromatogrames. Les seqüències generades estaran disponibles a GenBank (núms d'accés OP593553–OP594185).

Anàlisi estadística

Les corbes de Kaplan-Meier es van utilitzar per estimar les probabilitats respectives de romandre lliure de (1) malària clínica, (2) parasitemia per P. falciparum o (3) paludisme febril un cop parasitemia. Per al temps fins a la malària febril un cop parasitemica, el temps de la parasitemia incident, estimat com el punt mitjà entre l'últim resultat negatiu de la PCR de P. falciparum i el primer resultat positiu de la PCR de P. falciparum, es va utilitzar com a hora d'inici. Es van utilitzar models de perills proporcionals de Cox per estimar l'estadística de Wald per provar la importància de les diferències en el temps fins al primer esdeveniment entre les variants de TP53 al codó 47 o 72 en anàlisis univariants o anàlisis que incloïen covariables tal com s'indica a les taules. La prova de suma de rangs de Kruskal-Wallis es va utilitzar per comparar les diferències entre grups per obtenir resultats continus. Per a les variables categòriques, es van realitzar comparacions de grups mitjançant proves de χ 2. La significació estadística es va definir com un 2-valor P amb cua<.05. All analyses were performed using R software (version 4.2.0).

planta de cistanche per augmentar el sistema immunitari

Aprovació ètica

L'estudi de cohort Kalifabougou va ser aprovat pel Comitè d'Ètica de la Facultat de Medicina, Farmàcia i Odontologia de la Universitat de Ciències, Tècnica i Tecnologia de Bamako i la Junta de Revisió Institucional de l'Institut Nacional d'Al·lèrgies i Malalties Infeccioses, Instituts Nacionals de Salut. . Es va obtenir el consentiment informat per escrit dels participants adults i dels pares o tutors dels nens participants. Aquest estudi va ser aprovat com a investigació de subjectes humans exempts per la Junta de Revisió Institucional de la Universitat d'Indiana (protocol 2005922267).

RESULTATS

Freqüència de polimorfismes TP53 entre els participants de l'estudi

Dels 695 individus inscrits inicialment a la cohort de Kalifabougou, 631 tenien suficient ADN genòmic per a la seqüenciació de l'exó 4 de TP53. Els alineaments de seqüències van revelar 40 individus (6,3%) amb polimorfismes S47, dels quals 33 eren heterozigots i 7 eren homozigots (taula 1). Es van observar polimorfismes R72 en 327 individus (51,8%), dels quals 206 (32,6%) eren heterozigots i 121 (19,2%) eren homozigots (taula 1). Ni els polimorfismes del codó 47 ni del codó 72 estaven en equilibri Hardy-Weinberg (prova exacta de Haldane, P=6.5 × 10−6 i P=1.0 × 10−12, respectivament). La distribució dels potencials modificadors del risc de malària (edat, sexe, HbS o hemoglobina, parasitemia existent per P. falciparum i anèmia) no va variar significativament entre els grups de variants TP53 per a S47 o R72 (taula 1). Els 6 individus que eren heterozigots tant per als al·lels S47 com per R72 eren homes i PCR positius per a P. falciparum en el moment de la inscripció (taula 1).

No hi ha associació de polimorfismes del codó 47 i del codó 72 TP53 amb risc reduït d'episodis clínics de malària o incident P. falciparumParasitèmia

Es van realitzar anàlisis de temps fins a l'esdeveniment per examinar l'associació entre les variants S47 i P72 i el risc de malària febril. L'anàlisi inicial entre P47/P47, P47/S47 i S47/S47 no va mostrar cap diferència significativa en el risc de malària (dades no mostrades), presumiblement a causa de les petites mides de mostra dels genotips heterozigots P47/S47 i homozigots S47/S47. Així, aquests genotips es van col·lapsar en un sol estrat. Per al codó 72, els genotips heterozigots i homozigots es van mantenir com a 3 estrats separats. No hi va haver diferències significatives en el temps fins al primer episodi de malària clínica entre els genotips P47/P47 (mediana [interval de confiança del 95%], 184 [165-210] dies) i la variant S47 (151 [133-210] dies) o entre Genotips P72/P72 (183 [59-210] dies) i P72/R72 (210 [160-210] dies) o R72/R72 (159 [142-210] dies) en les anàlisis univariants (figura 1A i 1B). ) o les anàlisis ajustades que incloïen edat, sexe, parasitemia inicial, anèmia i presència d'HbS com a covariables (taula suplementària 1). Els individus que eren P47/S47 i P72/R72 van demostrar un risc de malària clínica similar al dels homozigots P47/P47 i P72/P72 (figura suplementària 1). S'ha demostrat que l'augment de p53 redueix la càrrega de l'etapa hepàtica de Plasmodium en models de ratolí [10]. Per tant, vam determinar si els polimorfismes de TP53 estaven associats amb un risc diferencial d'infeccions per P. falciparum incidents determinat per una vigilància intensiva i activa de PCR en individus que van començar l'estudi negatiu per a P. falciparum per PCR (n=330). No vam detectar una diferència significativa en el temps fins a la primera infecció per P. falciparum detectable per PCR entre P47/P47 (mediana [interval de confiança del 95%], 85 [81-91] dies) i la variant S47 (85 [58-124] dies) genotips o entre genotips P72/P72 (88 [80–95] dies) i P72/R72 (81 [72–91] dies) o genotips R72/R72 (91 [80–116] dies) en anàlisis univariants ( Figura 1C i 1D) o anàlisis ajustades que incloïen covariables rellevants (taula suplementària 2).

No hi ha associació de polimorfismes TP53 amb protecció contra la malària febril després de l'incident P. falciparum Parasitemia o diferències en l'expressió gènica

El nostre grup va identificar prèviament un subconjunt de nens dins de la cohort de Kalifabougou que estaven afebrils en el moment de l'incident, la parasitemia de P. falciparum confirmada per PCR [11]. Aquests nens es van classificar com a "febre retardada" o "immunes" segons si havien progressat a febre després de 2-14 dies o si es van mantenir asimptomàtics durant la resta de la temporada de malària, respectivament. Aquests 2 subconjunts van demostrar una expressió més gran dels gens diana TP53 i TP53 a la línia de base preinfecció en relació amb els nens que estaven febrils en el moment de la parasitemia incident de P. falciparum ("febre precoç") [11]. Per determinar si els polimorfismes TP53 estaven associats amb la febre retardada o els fenotips immunes, vam examinar la distribució dels polimorfismes S47 i R72 en aquests subconjunts, però no vam observar cap diferència significativa entre els 3 fenotips clínics (taula 2). El reexamen de l'expressió de TP53 en els transcriptomes d'ARN-seq obtinguts a la línia base sana de cada nen (n=80) [11] pels polimorfismes del codó 47 i 72 no va revelar diferències entre els polimorfismes comuns i les seves variants respectives (figura 2). Per determinar si les variants S47 o P72 s'associen amb la protecció de la febre de la malària un cop parasitemia a la cohort pare, es va determinar el risc de malària febril, utilitzant el moment de la primera parasitemia com a hora d'inici. Aquí, vam incloure tots els individus que van començar l'estudi P. falciparum negatiu per PCR i, posteriorment, van tenir parasitemia de P. falciparum confirmada per PCR (n=292). No es van observar diferències significatives en el temps fins a la primera febre un cop parasitemic en subgrups amb polimorfismes S47 o P72 en relació amb els seus respectius genotips comuns mitjançant anàlisis univariants (figures 3A i 3B). Tot i que hi va haver una tendència cap a un augment del risc de malària febril un cop parasitemia per a S47 en comparació amb P47/P47 (figura 3A), aquesta diferència es va fer més insignificant estadísticament quan es va ajustar per covariables rellevants com l'edat i l'HbS (taula suplementària 3).

DISCUSSIÓ

En contrast amb la malària greu, els polimorfismes genètics de l'hoste que s'associen amb la resistència a la malària sense complicacions han implicat principalment variants del gen dels eritròcits [2, 5]. Mentre que diversos gens no eritròcits s'han associat amb la protecció contra la malària greu [6, 7, 9], només un grapat de gens implicats en la resposta inflamatòria, és a dir, NOS2 i TNF, s'han associat específicament amb un risc diferencial de malària no complicada o lleu. [2, 35–38]. El factor de transcripció p53 manté l'homeòstasi cel·lular en resposta als senyals d'estrès mitjançant la regulació d'una àmplia gamma d'objectius aigües avall, incloses les vies inflamatòries, que juntes suprimeixen els processos oncogènics [39]. El potencial oncogènic de la inflamació crònica està ben establert [40], i hi ha cada cop més evidència que p53 pot modular la inflamació de l'hoste en el context dels patògens [41, 42]. En suport d'això, el nostre grup va observar prèviament que l'augment de l'expressió de TP53 i els seus objectius aigües avall es va associar amb la protecció de la febre durant la parasitemia incident de P. falciparum, cosa que suggereix que p53 inicialment podria amortir la resposta febril durant la infecció per malària [11]. En un estudi anterior, els ratolins amb la variant p53 S47 van mostrar una resposta antiinflamatòria a l'hemozoïna del pigment de la malària, cosa que suggereix que els polimorfismes específics de p53 podrien limitar la inflamació durant les infeccions per malària en humans [30]. En el context del repte inflamatori amb lipopolisacàrids, els ratolins amb el polimorfisme p53 R72 van demostrar una supervivència augmentada en relació amb els ratolins P72, cosa que implica que la variant R72 pot protegir contra les respostes patològiques als bacteris gramnegatius [43]. Aquí, vam avaluar si els polimorfismes del codó 47 o 72 afecten el risc de malària per P. falciparum en una cohort longitudinal prospectiva i vam demostrar que cap d'aquests polimorfismes s'associa amb un risc diferencial de parasitemia incident o malària febril incident. A més, cap d'aquests polimorfismes TP53 no estava sobrerepresentat entre el subconjunt de nens que estaven protegits de la febre malària i que van demostrar una expressió més gran de TP53 i els seus objectius a la línia de base preinfecció en l'estudi anterior del nostre grup [11]. Els nostres resultats són coherents amb estudis transversals de dones primípares de Ghana (n=314) i nens ruandesos (n=545), que no van mostrar cap associació entre el polimorfisme R72 i la prevalença de la infecció per P. falciparum o la intensitat del paràsit. [31]. L'única altra investigació publicada dels polimorfismes p53 a la malària va ser un estudi de nounats a Sardenya, que va trobar una major freqüència del presumpte genotip homozigot R72 protector de la malària en una àrea amb una endemicitat de malària anteriorment més alta (n=46) en relació amb una àrea amb una endemicitat de malària anteriorment menor (n=47) [24]. Partint de la premissa que la variant R72 de p53 ha millorat el potencial apoptòtic [25] i, per tant, pot prevenir la infecció en fase hepàtica mitjançant l'apoptosi d'hepatòcits parasititzats [10], els autors van suggerir que l'endemicitat de la malària podria haver seleccionat positivament el polimorfisme R72 [24]. ]. Tanmateix, aquesta hipòtesi no està recolzada per les nostres dades que no mostren cap diferència en el temps fins a la parasitèmia confirmada per PCR entre els genotips del codó 72. A més, un polimorfisme R72 protector de la malària no podria explicar per què l'al·lel P72 és més freqüent en africans que en europeus [17], una observació que implicaria P72 com l'al·lel seleccionat per mantenir-se en poblacions endèmiques de malària segons el " hipòtesi de la malària" [8]. Pot ser que l'activitat funcional conferida per R72 no sigui rellevant per al risc de malària febril. Com s'ha dit anteriorment, tot i que la variant R72 pot protegir els ratolins contra el repte de lipopolisacàrids [43], també s'ha demostrat que provoca la inflamació en el context d'una dieta alta en greixos [44] o càncer de mama [45] en estudis amb ratolins. Així, com el polimorfisme R72 afecta la resposta inflamatòria pot dependre tant del tipus com de l'agudesa de la pertorbació.

Taula 1. Factors de confusió potencials del risc de malària i dels genotips TP53

Figure 1. p53 Codon 47 and 72 polymorphisms and malaria risk in the Kalifabougou cohort during the 2011 malaria season. Kaplan-Meier curves of time to first febrile malaria episode (defined as >2500 parasites per microliter by blood smear and axillary temperature >37,5 graus) (A, B) i temps fins a la primera reacció en cadena de la polimerasa (PCR) – confirmada parasitemia de Plasmodium falciparum (C, D), estratificada pels genotips de variant p53 indicats. Per a C i D, l'anàlisi va incloure només individus que van començar la temporada de malària negativa per a P. falciparum per PCR. La importància es va determinar mitjançant els riscos proporcionals de Cox, utilitzant l'estadística de la prova de Wald. Les taules mostren el nombre d'individus en risc en els dies indicats des de la inscripció. Abreviatura: HR, ràtio de perill.

Taula 2. Distribució dels genotips TP53 entre nens amb susceptibilitat diferencial malària febril després de la parasitemia inicial de Plasmodium falciparum

Figura 2. Expressió de TP53 pels polimorfismes del codó 47 i 72. Expressió de TP53 pels polimorfismes indicats del codó p53 47 (A) i 72 (B) en mostres de sang sencera de 80 nens malians a la seva línia de base sana i no infectada el maig de 2011, abans de la temporada de malària [11]. La importància es va determinar mitjançant la prova de Wilcoxon (A) o l'anàlisi de la variància (B). L'expressió gènica s'informa com a recomptes de log2 per milió (CPM).

La manca d'associació entre les variants del codó 47 o del codó 72 i la protecció contra la malària també es podria explicar per la seva manca d'efecte sobre l'expressió de p53, com és evident a les nostres dades (figura 2) i estudis anteriors [27, 46]. Una de les conclusions principals de l'estudi anterior del nostre grup va ser que l'expressió de p53 i els seus objectius aigües avall es va incrementar en nens que estaven protegits de la febre precoç durant la parasitemia incident [11], cosa que suggereix que la inducció de l'expressió de p53 pot ser necessària per controlar la inflamació. Tot i que la variant S47 disminueix la capacitat d'induir apoptosi en relació amb P47, l'expressió de la proteïna p53 dins de la cèl·lula encara es manté a nivells similars [27]. Això, combinat amb l'observació que cap dels nens del grup "immune" més protegit albergava la variant S47, suggereix que la reducció de l'apoptosi mitjançant aquest polimorfisme és poc probable el mecanisme pel qual p53 afecta la febre malària. De la mateixa manera, el polimorfisme R72 és funcionalment significatiu, però no necessàriament provoca un augment de l'expressió de p53 [25, 46]. Les forces selectives poden augmentar la freqüència dels al·lels afavorits amb el temps. L'al·lel S47 estava present en el 6,3% dels participants avaluats, amb un 1,1% homozigot, donant una freqüència d'al·lel del 3,7%, que és coherent amb el 2%-4% reportat anteriorment per als africans de l'Àfrica subsahariana [28]. Per contra, l'al·lel R72 estava present en el 51,8% dels participants (19,2% homozigots), donant una freqüència d'al·lel del 35,5% en aquesta població. El predomini de l'al·lel P72 a la cohort maliana és coherent amb l'augment de la freqüència d'aquest al·lel a latituds més properes a l'equador, una troballa que s'ha atribuït a la selecció natural [17].

Els beneficis de cistanche per als homes enforteixen el sistema immunitari

És temptador especular per què l'al·lel S47 es manté a un ritme tan baix entre els africans. Atès que S47 ha disminuït el potencial apoptòtic en relació amb P47 [27], la baixa freqüència de l'al·lel S47 es podria explicar pel cost d'aptitud incorregut pel seu manteniment a causa de desavantatges selectius no relacionats amb la inflamació patològica durant la malària, com ara un augment del risc de càncer de mama premenopàusica. [47]. Tanmateix, la variant S47, limitant la resposta inflamatòria induïda per l'hemozoïna [30], encara podria ser protectora contra la malària més greu. Com que l'estudi actual només va avaluar la malària per P. falciparum no complicada, no va abordar si cap d'aquests polimorfismes estava associat amb una reducció del risc de malària greu. Cal destacar l'associació modestament significativa entre la doble heterozigosi (P47/S47 i P72/R72) i la parasitemia asimptomàtica de P. falciparum a la inscripció al maig (taula 1). A les zones de malària intensa i estacional, la infecció crònica asimptomàtica per P. falciparum al final de l'estació seca reflecteix una immunitat acumulada contra la malària més alta [48]. Com que aquests 6 individus dobles heterozigots tenen una edat mitjana més alta en relació amb els altres grups, la sobrerepresentació de la parasitemia asimptomàtica dins d'aquest genotip pot ser simplement una funció casual de l'exposició passada a la malària més que una conseqüència dels polimorfismes p53. Es necessitarien estudis de cohorts addicionals dels polimorfismes del codó 47 i 72 p53 i del risc de malària per confirmar la importància del genotip doble heterozigot. Cal destacar més limitacions d'aquest estudi. Tot i que el nostre estudi és un dels estudis més grans sobre polimorfismes p53 i risc de malària fins ara, només 7 dels 631 participants eren homozigots per a S47, limitant el nostre poder per detectar una associació. A més, només vam avaluar polimorfismes p53 dins de l'exó 4 i, per tant, podríem haver perdut l'impacte d'altres mutacions potencialment rellevants, incloses les mutacions 3KR (K117R + K161R + K162R) que impliquen llocs d'acetilació de p53 [49]. Cal destacar que vam avaluar el codó 117, que es troba a l'exó 4 i que només hi havia lisina. Tampoc vam avaluar polimorfismes en regions no codificants de TP53 o en reguladors p53 que poden afectar p53 a nivell de proteïnes, com ara MDM2 [28, 50]. Els enfocaments de seqüenciació de nova generació que avaluen de manera exhaustiva els polimorfismes a les regions no traduïdes 5' i 3', així com totes les regions de codificació per als reguladors TP53 i p53 podrien abordar aquestes limitacions. Finalment, no vam determinar si els genotips de p53 diferien en la seva expressió de p53 a nivell cel·lular, cosa que pot haver proporcionat informació important sobre si el polimorfisme dels codons 47 i 72 podria afectar les vies regulades p53-. En resum, l'estudi actual proporciona evidència que ni les variants del codó 47 ni del codó 72 de p53 són protectores contra la malària segons el temps fins a la parasitemia de P. falciparum i la malària febril sense complicacions. Donades les freqüències més baixes de l'al·lel S47 en aquesta població, es necessitarien estudis més amplis per confirmar la manca d'associació de la variant S47 amb el risc de malària.

Figura 3. Polimorfismes dels codons 47 i 72 p53 i risc de malària febril després de la parasitemia incident. Kaplan-Meier representa el temps fins a la primera malària febril utilitzant la primera reacció en cadena de la polimerasa, confirmada per Plasmodium falciparum, com a hora d'inici estratificada per polimorfismes variants del codó 47 (A) o del codó 72 (B) p53. La importància es va determinar mitjançant els riscos proporcionals de Cox mitjançant l'estadística de la prova de Wald. Les taules mostren el nombre d'individus en risc en el moment indicat des de la inscripció. Abreviatura: HR, ràtio de perill.

Dades complementàries

Hi ha materials suplementaris disponibles a The Journal of Infectious Diseases en línia. Constituïts per dades facilitades pels autors en benefici del lector, els materials publicats no són editats per còpia i són responsabilitat exclusiva dels autors, per la qual cosa les preguntes o comentaris s'han d'adreçar a l'autor corresponent.

Notes

Agraïments. Ens agradaria donar les gràcies als participants de l'estudi i al personal de suport a la investigació a Kalifabougou i Bamako, Mali. També estem agraïts a Shanping Li, Emily LaVerriere i Daniel E. Neafsey per proporcionar material genòmic i orientació tècnica.

Aportacions dels autors. PDC i TMT van concebre el projecte. SD, KK, AO, BT, PDC i TMT van dissenyar l'estudi de cohort original i SD, KK, AO i BT el van implementar. ELG va realitzar els experiments. JB, AU, ELG i TMT van realitzar l'anàlisi de dades. PDC va aportar recursos addicionals. JB, PDC i TMT van escriure el manuscrit. Tots els autors van llegir i aprovar el manuscrit.

Exempció de responsabilitat. El contingut és responsabilitat exclusiva dels autors i no representa necessàriament les opinions oficials dels National Institutes of Health.

Suport financier. Aquest treball va comptar amb el suport de l'Institut Nacional d'Al·lèrgies i Malalties Infeccioses (NIAID) i els Instituts Nacionals de Salut (subvencions R01AI158719 i K08AI125682 a TMT). L'estudi de cohort Kalifabougou compta amb el suport de la Divisió d'Investigació Intramural de NIAID.

Potencials conflictes d'interessos. Tots els autors: No s'han informat conflictes. Tots els autors han enviat el formulari ICMJE per a la divulgació de possibles conflictes d'interessos. S'han revelat els conflictes que els editors consideren rellevants per al contingut del manuscrit.

Referències

1. Sundararaman SA, Plenderleith LJ, Liu W, et al. Els genomes de les espècies de Plasmodium de ximpanzé críptic revelen esdeveniments evolutius clau que condueixen a la malària humana. Nat Commun 2016; 7:11078.

2. Kwiatkowski DP. Com la malària ha afectat el genoma humà i què ens pot ensenyar la genètica humana sobre la malària. Am J Hum Genet 2005; 77:171–92.

3. Allison AC. Protecció que ofereix el tret de cèl·lules falciformes contra la infecció de la malària subterciana. Br Med J 1954; 1:290–4.

4. Lell B, May J, Schmidt-Ott RJ, et al. El paper dels polimorfismes de glòbuls vermells en la resistència i la susceptibilitat a la malària. Clin Infect Dis 1999; 28:794–9.

5. Lopera-Mesa TM, Doumbia S, Konate D, et al. Efecte de les variants de glòbuls vermells sobre la malària infantil a Mali: un estudi de cohort prospectiu. Lancet Haematol 2015; 2: e140–9.

6. Ravenhall M, Campino S, Sepulveda N, et al. Polimorfismes genètics nous associats amb malària greu i sota pressió selectiva al nord-est de Tanzània. PLoS Genet 2018; 14:e1007172.

7. Ndila CM, Uyoga S, Macharia AW, et al. Polimorfismes de gens candidats humans i risc de malària greu en nens a Kilifi, Kenya: un estudi d'associació de casos i controls. Lancet Haematol 2018; 5:e333–45.

8. Ebel ER, Uricchio LH, Petrov DA, Egan ES. Revisitant la hipòtesi de la malària: comptabilització de la poligenicitat i la pleiotropia. Tendències Parasitol 2022; 38:290–301.

9. Xarxa d'Epidemiologia Genòmica de la Malària. Informació sobre la susceptibilitat a la malària mitjançant dades de tot el genoma de 17,000 individus d'Àfrica, Àsia i Oceania. Nat Commun 2019; 10:5732.

10. Kaushansky A, Ye AS, Austin LS, et al. La supressió de l'hoste p53 és fonamental per a la infecció en fase hepàtica de Plasmodium. Cell Rep 2013; 3:630–7.

11. Tran TM, Guha R, Portugal S, et al. Una signatura molecular a la sang revela un paper de p53 en la regulació de la inflamació induïda per la malària. Immunitat 2019; 51:750–65.e10.

12. Baugh EH, Ke H, Levine AJ, Bonneau RA, Chan CS. Per què hi ha mutacions hotspot en el gen TP53 en càncers humans? Cell Death Differ 2018; 25:154–60.

13. Hoyos D, Greenbaum B, Levine AJ. Els genotips i fenotips de mutacions missense en el domini prolina de la proteïna p53. Cell Death Differ 2022; 29:938–45.

14. Harris N, Brill E, Shohat O, et al. Base molecular de l'heterogeneïtat de la proteïna p53 humana. Mol Cell Biol 1986; 6:4650–6.

15. Matlashewski GJ, Tuck S, Pim D, Lamb P, Schneider J, Crawford LV. Polimorfisme de l'estructura primària al residu d'aminoàcids 72 de p53 humà. Mol Cell Biol 1987; 7: 961–3.

16. Katkoori VR, Jia X, Shanmugam C, et al. La importància pronòstica del polimorfisme del codó p53 72 difereix amb la raça en l'adenocarcinoma colorectal. Clin Cancer Res 2009; 15: 2406–16.

17. Beckman G, Birgander R, Sjalander A, et al. El polimorfisme p53 es manté per selecció natural? Hum Hered 1994; 44:266–70.

18. Thomas M, Kalita A, Labrecque S, Pim D, Banks L, Matlashewski G. Dues variants polimòrfiques de p53 de tipus salvatge difereixen bioquímicament i biològicament. Mol Cell Biol 1999; 19:1092–100. 19. Shi H, Tan SJ, Zhong H, et al. La temperatura de l'hivern i els raigs UV estan estretament relacionats amb els canvis genètics en la via supressora del tumor p53 a l'Àsia oriental. Am J Hum Genet 2009; 84:534–41.

20. McGregor JM, Harwood CA, Brooks L, et al. Relació entre el polimorfisme del codó 72 p53 i la susceptibilitat a les cremades solars i el càncer de pell. J Invest Dermatol 2002; 119: 84–90.

21. Nan H, Qureshi AA, Hunter DJ, Han J. Interacció entre el polimorfisme del codó 72 p53 i les variants del receptor de melanocortina 1 sobre la resposta al bronzejat i el risc de melanoma cutani. Br J Dermatol 2008; 159:314–21.

22. Cotignola J, Chou JF, Roy P, et al. Investigació de l'efecte dels polimorfismes MDM2 SNP309 i TP53 Arg72Pro sobre l'edat d'aparició del melanoma cutani. J Invest Dermatol 2012; 132:1471–8.

23. Liu T, Lei Z, Pan Z, et al. Associació genètica entre el polimorfisme del codó p53 72 i el risc de carcinoma cutani de cèl·lules escamoses. Tumor Biol 2014; 35:3899–903.

24. Gloria-Bottini FMG, Saccucci P, Bottini E. P53 codon 72 and past malaria morbidity in Sardenya. Malar Chemoth Cont Elimination 2013; 2(1):107.

25. Dumont P, Leu JI, Della Pietra AC 3r, George DL, Murphy M. Les variants polimòrfiques del codó 72 de p53 tenen potencials apoptòtics marcadament diferents. Nat Genet 2003; 33:357–65. 26. Felley-Bosco E, Weston A, Cawley HM, Bennett WP, Harris CC. Estudis funcionals d'un polimorfisme de línia germinal al codó 47 dins del gen p53. Am J Hum Genet 1993; 53:752–9.

27. Li X, Dumont P, Della Pietra A, Shetler C, Murphy ME. El polimorfisme del codó 47 a p53 és funcionalment significatiu. J Biol Chem 2005; 280:24245–51.

28. Barnoud T, Parris JLD, Murphy ME. Variants genètiques comunes a la via TP53 i el seu impacte en el càncer. J Mol Cell Biol 2019; 11:578–85.

29. Jennis M, Kung CP, Basu S, et al. Un polimorfisme específic d'Àfrica en el gen TP53 deteriora la funció supressora del tumor p53 en un model de ratolí. Genes Dev 2016; 30: 918–30.

30. Singh KS, Leu JI, Barnoud T, et al. La variant TP53 centrada en l'Àfrica augmenta l'acumulació de ferro i la patogènesi bacteriana, però millora la resposta a la toxina de la malària. Nat Commun 2020; 11:473.

31. Gai PP, Meese S, Bedu-Addo G, Gahutu JB, Mockenhaupt FP. No hi ha associació del polimorfisme del codó 72 p53 amb la malària en primípares de Ghana i nens ruandesos. Am J Trop Med Hyg 2014; 90:1133–4.

32. Tran TM, Li S, Doumbo S, et al. Un estudi de cohort longitudinal intensiu de nens i adults malians no revela cap evidència d'immunitat adquirida a la infecció per Plasmodium falciparum. Clin Infect Dis 2013; 57:40–7.

33. LaVerriere E, Schwabl P, Carrasquilla M, et al. Disseny i implementació de panells de seqüenciació d'amplicons multiplexats per servir l'epidemiologia genòmica de les malalties infeccioses: un estudi de cas de malària. Mol Ecol Resource 2022; 22: 2285–303.

34. Kawaguchi H, Ohno S, Araki K, et al. p53 Polimorfisme en càncer d'esòfag associat al virus del papil·loma humà. Càncer Res 2000; 60:2753–5.

35. Kun JF, Mordmuller B, Perkins DJ, et al. Òxid nítric sintasa 2Lambaréné (G-954C), augment de la producció d'òxid nítric i protecció contra la malària. J Infect Dis 2001; 184:330–6.

36. Flori L, Delahaye NF, Iraqi FA, Hernandez-Valladares M, Fumoux F, Rihet P. TNF com a gen candidat de la malària: cribratge de polimorfisme i anàlisi d'associació basada en la família de l'atac lleu de malària i parasitemia a Burkina Faso. Genes Immun 2005; 6:472–80.

37. Fugtagbi G, Otu PS, Abdul-Rahman M, et al. Associació de TNF-alfa, MBL2, NOS2 i G6PD amb resultats de malària en persones del sud de Ghana. Genet Res (Camb) 2022; 2022:6686406.

38. Meyer CG, May J, Luty AJ, Lell B, Kremsner PG. El TNFalfa-308A s'associa amb intervals més curts de reinfeccions per Plasmodium falciparum. Tissue Antigens 2002; 59:287–92.

39. Cooks T, Harris CC, Oren M. Caught in the crossfire: p53 in inflammation. Carcinogènesi 2014; 35:1680–90.

40. Coussens LM, Werb Z. Inflamació i càncer. Natura 2002; 420:860–7.

41. Madenspacher JH, Azzam KM, Gowdy KM, et al. p53 Integra la defensa de l'hoste i el destí cel·lular durant la pneumònia bacteriana. J Exp Med 2013; 210:891–904.

42. Menendez D, Shatz M, Azzam K, Garantziotis S, Fessler MB, Resnick MA. La família de gens receptors de tipus Toll està integrada a les xarxes de danys a l'ADN humà i p53. PLoS Genet 2011; 7:e1001360.

43. Frank AK, Leu JI, Zhou Y, et al. El polimorfisme del codó 72 de p53 regula la interacció amb NF-κB i la transactivació de gens implicats en la immunitat i la inflamació. Mol Cell Biol 2011; 31:1201–13.

44. Kung CP, Leu JI, Basu S, et al. El polimorfisme P72R de p53 predisposa a l'obesitat i a la disfunció metabòlica. Cell Rep 2016; 14:2413–25.

45. Gunaratna RT, Santos A, Luo L, et al. El paper dinàmic del polimorfisme d'un sol nucleòtid del codó 72 p53 en la tumorigènesi mamària en un model de ratolí humanitzat. Oncogen 2019; 38:3535–50.

46. ​​Kim BY, Lee SY, Chung SK. Regulació transcripcional diferencial del codó polimòrfic p53 72 en vies metabòliques. Int J Mol Sci 2021; 22:10793.

47. Murphy ME, Liu S, Yao S, et al. Un SNP funcionalment significatiu en TP53 i risc de càncer de mama en dones afroamericanes. NPJ Càncer de Mama 2017; 3:5.

48. Portugal S, Tran TM, Ongoiba A, et al. El tractament de la infecció crònica asimptomàtica per Plasmodium falciparum no augmenta el risc de malària clínica després de la reinfecció. Clin Infect Dis 2017; 64:645–53.

49. Li T, Kon N, Jiang L, et al. Supressió del tumor en absència d'aturada del cicle cel·lular, apoptosi i senescència mediada per p53-. Cèl·lula 2012; 149:1269–83.

50. Grochola LF, Zeron-Medina J, Meriaux S, Bond GL. Polimorfismes d'un sol nucleòtid a la via de senyalització p53. Cold Spring Harb Perspect Biol 2010; 2:a001032.