Plataformes de vacunes basades en àcids nucleics contra la malaltia del coronavirus 19 (COVID-19)

Resum

La pandèmia de la malaltia del coronavirus 2019 (COVID-19) ha infectat 673.010.496 pacients i ha provocat la mort de 6.854.959 casos a tot el món fins avui. S'han fet esforços enormes per desenvolupar plataformes de vacunes contra la COVID-19 fonamentalment diferents. Les vacunes basades en àcids nucleics que consisteixen en vacunes d'ARNm i d'ADN (vacunes de tercera generació) han estat prometedores pel que fa a la producció ràpida i còmoda i la provocació eficient de les respostes immunes contra la COVID-19. Diversos basats en ADN (ZyCoV-D, INO-4800, AG0302-COVID19 i GX{-19N) i basats en ARNm (BNT162b2, ARNm{-1273 i ARCoV) s'han utilitzat plataformes de vacunes aprovades per a la prevenció de la COVID-19. Les vacunes d'ARNm estan a l'avantguarda de totes les plataformes per a la prevenció de la COVID-19. No obstant això, aquestes vacunes tenen una menor estabilitat, mentre que les vacunes d'ADN són necessàries amb dosis més altes per estimular les respostes immunitàries. El lliurament intracel·lular de vacunes basades en àcids nucleics i els seus esdeveniments adversos necessita més investigació. Tenint en compte la reaparició de les variants de preocupació de la COVID-19, la reavaluació de la vacuna i el desenvolupament de vacunes polivalents, o estratègies de pan-coronavirus, són essencials per a una prevenció eficaç de les infeccions.

Beneficis del suplement de cistanche: com enfortir el sistema immunitari

Feu clic aquí per veure els productes Cistanche Enhance Immunity

【Demanar més】 Correu electrònic:cindy.xue@wecistanche.com / Whats App: 0086 18599088692 / Wechat: 18599088692

Paraules clau

Malaltia del coronavirus 19 · Vacunes àcid nucleic-base · Immunitat · Protecció

Fons

A finals de 2019, un nou coronavirus beta va sorgir a Wuhan, Xina, i es va estendre ràpidament per tot el món. La malaltia del coronavirus 2019 (COVID-19) té un alt potencial de pandèmia a causa de la seva alta taxa de contagios amb alta mortalitat a nivell mundial (Sharma et al. 2020; Su et al. 2020; Wibawa 2021). Per tant, calen esforços substancials per desenvolupar vacunes o teràpies efectives contra la malaltia (Su et al. 2020). Els símptomes de la malaltia COVID-19 varien, com ara símptomes lleus semblants al fu, pneumònia, síndrome de dificultat respiratòria aguda (SDRA) i resultat fatal. Els pacients amb càncer, diabetis, malalties cardiovasculars, adults grans i fins i tot persones predisposades genèticament corren el risc més alt de patir la gravetat de la COVID-19 (Sharma et al. 2020; Su et al. 2020; Wibawa 2021; Vakil et al. 2022). Segons les recomanacions de l'Organització Mundial de la Salut (OMS), l'ús de màscares, l'ús de fàrmacs antivirals, el distanciament social i el compliment dels procediments de vacunació són comportaments crucials per controlar la pandèmia de COVID-19 a tot el món (Sharma et al. 2020). L'esforç científic per al desenvolupament de vacunes eficients contra patògens invasius es remunta a molts anys enrere (Deb et al. 2020; Zhang et al. 2020; Wibawa 2021). Aquestes plataformes de vacunes també s'han dissenyat contra bacteris patògens (Farhani et al. 2019; Jafari i Mahmoodi 2021). En aquest sentit, el desenvolupament d'una vacuna eficient, protectora i segura es considera un enfocament preventiu fonamental per dificultar la propagació del coronavirus 2 (SARS-CoV-2) de la síndrome respiratòria aguda severa (Moore i Klasse 2020). Per tant, diferents empreses farmacèutiques i equips d'investigació d'arreu del món van competir per presentar una vacuna segura i eficaç contra la COVID-19 per a l'ús de la comunitat internacional. Aquests esforços han desenvolupat altres plataformes de vacunes per entrar en assaigs preclínics i clínics i alguns d'ells s'han aprovat (Chen et al. 2021), incloses vacunes tradicionals com les vacunes vives o inactivades, subunitats i basades en àcids nucleics com a vacunes de nova generació. (Moore i Klasse 2020). D'acord amb l'evidència científica, les vacunes vives atenuades estimulen les respostes immunitàries innates, cel·lulars i humorals induint receptors de tipus Toll (TLR) amb immunitat a llarg termini i poden desenvolupar hipersensibilitat. El principal inconvenient d'aquestes vacunes són les seves costoses avaluacions de seguretat i eficàcia. Les vacunes virals inactivades provoquen malament les respostes immunes cel·lulars, cosa que en mitiga l'eficàcia. L'abril de 2020, Sinovac i l'Institut de Productes Biològics de Wuhan (Sinopharm) van fabricar una vacuna COVID-19 inactivada (Moore i Klasse 2020; Su et al. 2020). Les vacunes de subunitats són segures, amb alguns defectes, com ara una baixa immunogenicitat, un requisit de reforç o adjuvant i un cost elevat (Koirala et al. 2020; Su et al. 2020). S'han desenvolupat vacunes basades en àcids nucleics a partir d'informació de seqüències. Inclouen seqüències d'ADN o ARNm d'antígens que estimulen fortament les respostes immunitàries cel·lulars i humorals en diverses dosis. A causa dels seus avantatges, com ara la producció ràpida i les primeres vacunes COVID-19 en assaigs clínics, un avantatge notable de les vacunes basades en ADN és la seva estabilitat en diverses condicions d'emmagatzematge (Silveira et al. 2020; van Riel i de Wit 2020). Les vacunes basades en ARN van rebre més atenció de companyies farmacèutiques com Pfizer/Biotech i Moderna. A diferència de les vacunes d'ADN, estimulen una resposta immune humoral eficaç com a lligands TLR sense adjuvant, i la seva seqüència es modifica per impedir la degradació de l'ARNm (Moore i Klasse 2020; van Riel i de Wit 2020; Soiza et al. 2021). Aquesta revisió tenia com a objectiu avaluar els desenvolupaments recents en vacunes basades en àcids nucleics, incloses les vacunes d'ARNm i d'ADN contra la COVID-19.

Text principal

Mecanisme molecular d'infecció i resposta immunitària del coronavirus

planta de cistanche per augmentar el sistema immunitari

El genoma COVID-19 és un ARN monocatenari positiu que codifica quatre proteïnes estructurals principals que consisteixen en embolcall (E), espiga (S), membrana (M) i nucleocàpsida (N) (Stadler i Rappuoli 2005). tal com es representa a la figura 1a. El SARS-CoV humà inclou la glicoproteïna de punta (S) com a part de l'embolcall. La incorporació del virus a les cèl·lules hostes es realitza mitjançant una proteïna espiga que consta de subunitats S1 i S2. Tenen un paper essencial en l'adhesió als receptors de cèl·lules hoste coneguts com a enzim convertidor d'angiotensina II (ACE2) per a l'inici de la infecció (Fig. 1b). La regió central del domini S1 que s'uneix a ACE2 amb alta afinitat és un domini d'unió al receptor (RBD). En aquest sentit, la interacció entre el RBD i l'ACE2 és necessària per a l'inici de la infecció de cèl·lules humanes (He et al. 2020). A més, el truncament de la proteïna S és essencial per a l'entrada viral a les cèl·lules hoste; després de la connexió de la regió RBD a ACE2, una proteasa hoste coneguda com a TM proteasa serina 2 (TMPRSS2) escinda la proteïna S en dominis S1 i S2, la qual cosa condueix a la fusió del domini S2 a la cèl·lula hoste (Huang et al. 2020). Tot i que les respostes immunitàries fortes són efectives contra la COVID-19, la hipersensibilitat i la tempesta de citocines (principalment interleucina-6-, IL{-1b, GM-CSF-, interferó- / IFN -, factor de necrosi / Les respostes impulsades per TNF -, IL-10-, IL{-2- i IL{- 7-) s'han de prohibir (Chowdhury et al. 2020). Després de la fixació viral (interacció spike-ACE2) i l'entrada a les cèl·lules respiratòries, els macròfags alveolars fagocítics i les cèl·lules dendrítiques (DC) presenten antígens virals a les cèl·lules T i activen T CD4+(cèl·lules T auxiliars) i T CD{{37 }}(cèl·lula T citotòxica). Posteriorment, s'alliberen citocines proinflamatòries com IL6, IL12, TNF i IFN, etc. per trobar el virus. Tanmateix, els alts nivells de producció de citocines que condueixen a la tempesta de citocines causen danys pulmonars (Hosseini et al. 2020). Segons l'evidència científica, les cèl·lules T auxiliars són necessàries per a l'eliminació de la infecció viral, la inducció de cèl·lules B per produir anticossos i l'estimulació de les cèl·lules T citotòxiques (Sharma et al. 2020). Objectius antigènics de la COVID-19 Per desenvolupar una vacuna segura i protectora contra un organisme patògen, és essencial identificar les millors dianes immunogèniques (Lu et al. 2020b). L'adopció d'objectius antigènics potencials és fonamental per provocar que els epítops de cèl·lules T i B indueixin correctament la immunitat cel·lular i humoral (Rueckert i Guzmán 2012). La proteïna S viral interacciona amb les cèl·lules hostes mitjançant el domini RBD com a lligand essencial. El domini RBD pot induir la producció d'anticossos neutralitzants i la resposta immune de cèl·lules T contra COVID-19. Així mateix, es confirma la immunogenicitat de la proteïna S (Pushparajah et al. 2021). La proteïna N té una seqüència petita i molt conservada en comparació amb altres proteïnes virals. La proteïna N s'expressa molt durant la infecció pel virus, amb una resposta immune humoral significativa associada contra COVID-19 entre els pacients. A més, amb respostes cel·lulars contra la proteïna N, es pot considerar un antigen candidat adequat en el disseny de la vacuna (Dutta et al. 2020). A més, la proteïna M i la proteïna E estimulen els epítops T CD4+ (Wang et al. 2005; Abdelmageed et al. 2020; Dong et al. 2020). Provocar respostes immunitàries fortes contra la proteïna S és determinant i necessari (Buchholz et al. 2004). La proteïna S inclou els epítops de cèl·lules T i B més immunogènics coneguts com a dianes preferides en el desenvolupament de vacunes contra COVID-19. S'ha aplicat a totes les vacunes de plataforma d'ARNm desenvolupades com les vacunes Pfizer/BioNtech i Moderna.

Fig. 1 a L'estructura del virió SARS-CoV-2; Les proteïnes de superfície principals del virus COVID-19 inclouen la glicoproteïna Spike (S), la membrana (M) i les proteïnes de l'embolcall (E). La proteïna S és la principal vacuna i diana terapèutica que interacciona amb el receptor de l'enzim convertidor d'angiotensina II (ACE2) per a l'inici de la infecció. b Dominis de la proteïna espiga; la proteïna S inclou subunitats S1 (NTD o domini no traduït i RBD o domini d'unió al receptor) i S2

Història dels fàrmacs basats en àcids nucleics

Els oligonucleòtids es van introduir en assaigs clínics fa més de 30 anys. La història de l'ús d'enfocaments terapèutics basats en àcids nucleics data de 1977 quan Paterson et al. van utilitzar àcids nucleics per sintonitzar l'expressió gènica (Paterson et al. 1977). Actualment, han rebut més consideració. Els fàrmacs basats en àcids nucleics es divideixen en diferents categories, incloses les formes antisentit, els ribozimes, l'ARNm i les vacunes basades en l'ADN (Sharma et al. 2014). Un oligodesoxinucleòtid sintètic va inhibir la replicació del virus del sarcoma de Rous (RSV), que era complementari a l'ARNm del RSV i es coneixia com a antisentit (Zamecnik i Stephenson 1978). El primer antisentit es va ingressar a la clínica contra el Citomegalovirus (CMV) (Mulamba et al. 1998). El petit ARN interferent (siRNA) té el potencial d'inhibir l'expressió gènica i, per primera vegada, es va informar l'any 1998. Un altre grup de petits ARN no codificants inclou els microARN (miRNAs) que tenen un paper indispensable en la regulació de l'expressió gènica, amb funcions similars a les del siRNA i potencial terapèutic (Usman i Blatt 2000; Sharma et al. 2014). Com s'ha esmentat, la classe ribozima de molècules d'ARN actua com a enzims que dirigeixen la transcripció. Els ribozimes van entrar en assaigs clínics contra el càncer i algunes infeccions víriques com el virus de la immunodeficiència humana (VIH) (Usman i Blatt 2000; Abera et al. 2012). A més de les vacunes basades en ARNm i ADN, es classifiquen en fàrmacs basats en àcids nucleics introduïts el 1990 i van rebre més atenció en el desenvolupament de vacunes per combatre la COVID-19 (Le et al. 2020; Zhang et al. .2020). Els principals avantatges d'aquests grups de vacunes inclouen la seva ràpida producció i alta especificitat contra els antígens diana corresponents (Le et al. 2020).

cistanche tubulosa: millora el sistema immunitari

Vacunes basades en ARNm

El lliurament inicial de molècules d'ARNm a les cèl·lules hostes va incloure la transfecció d'ARNm a cèl·lules fibroblastes mitjançant un lípid catiònic (Park et al. 2021). Les vacunes d'ARNm inclouen antígens patògens ARNm que produeixen proteïnes antigèniques per cèl·lules humanes. Diversos avantatges de les vacunes d'ARNm inclouen un procés de producció senzill, una immunitat eficient i protectora, una manipulació i industrialització convenients i la flexibilitat per respondre a les variants de COVID-19 (Kaufman et al. 2016; Fang et al. 2022). Alguns enfocaments, com ara l'addició de seqüències 5ʹ-cap i Kozak, s'apliquen mitjançant seqüències 3ʹ-poli-A i modificació de nucleòsids d'ARNm (Borah et al. 2021). Les vacunes d'ARNm es tradueixen al citosol hoste. Per tant, no hi ha risc per a la inserció de genomes de l'hoste, que es coneix com el seu principal avantatge. En aquest sentit, les vacunes basades en ARNm van rebre més atenció com a enfocament preventiu segur contra el càncer i les malalties infeccioses recentment (Kaur i Gupta 2020). El mecanisme d'acció principal de les vacunes d'ARNm s'ha representat a la figura 2.

Vacunes basades en ADN

Les vacunes d'ADN comprenen diversos gens que codifiquen pèptids antigènics virals expressats per vectors plasmidis i transmesos a les cèl·lules mitjançant electroporació (EP). En comparació amb altres plataformes de vacunes, les vacunes d'ADN proposen una plataforma flexible i ràpida per desenvolupar vacunes, la qual cosa la converteix en una tecnologia fascinant per lluitar contra les epidèmies en desenvolupament com la COVID-19. A més, la producció d'antigen de la vacuna d'ADN es produeix a les cèl·lules diana, cosa que ajuda a recapitular la conformació natural de l'antigen viral i la modificació post-traduccional. El principal desavantatge de les vacunes d'ADN és la seva immunogenicitat restringida. Per tant, és important tenir en compte estratègies com ara l'adjuvant o l'ús d'un règim de primer impuls que podria augmentar el potencial de la vacuna d'ADN. A més, integrar l'àcid nucleic a l'ADN hoste és una altra preocupació de bioseguretat que resulta en oncogènesi i mutagènesi (Rauch et al. 2018). Tot i que segons estudis previs, el risc d'inserció de la vacuna d'ADN és insignificant, l'OMS i la FDA recomanen la implementació de la seguretat de la vacuna d'ADN per a la seva integració (Wang et al. 2004; Schalk et al. 2006). Les vacunes d'ADN transfereixen els gens del coronavirus a les cèl·lules humanes. El principi de vacunació depèn del lliurament d'ADN al nucli cel·lular, de manera que s'inicia la transcripció de l'antigen i segueix una traducció. Les vacunes d'ADN utilitzen habitualment plasmidis com a vectors. En funció de la via d'administració de la vacuna, s'aborden tant els miòcits com els queratinòcits. Tanmateix, les cèl·lules presentadores d'antigen a prop del lloc d'injecció també es poden transfectar directament mitjançant vacunes d'ADN. En aquests casos, el procés de cebament creuat representa antígens que utilitzen les dues molècules del complex d'histocompatibilitat principal (MHC-I/II) (Hobernik i Bros 2018). Els antígens generats s'alliberen mitjançant cossos apoptòtics o exosomes que donen lloc al seu reconeixement per part de cèl·lules presentadores d'antigen, que al seu torn provoquen respostes immunitàries cel·lulars i humorals. S'utilitzen diverses estratègies de lliurament per produir una resposta immune forta (Donnelly et al. 2005; Li i Petrovsky 2016; Strizova et al. 2021). Pel que fa a la regulació immune durant la infecció per COVID-19, s'ha revelat que els pacients amb risc de vessament pericàrdic amb un pronòstic errònia indiquen un augment de les cèl·lules T CD{3+CD8+ més CD{{ 18}} Cèl·lules reguladores HLA-DR i T (Treg) (Duerr et al. 2020). Aquests resultats demostren que la infecció greu es produeix a causa d'una resposta immune desequilibrada que agreuja les condicions de la malaltia (Tay et al. 2020). El progrés de la vacuna contra la COVID-19 tenia com a objectiu desenvolupar una resposta immune eficaç i adequada (inclosos els dos braços) sense progressar cap a aquest desequilibri (Hobernik i Bros, 2018). Tot i que els assaigs clínics en humans de vacunes d'ADN van desencadenar respostes totals, aquestes respostes sovint són inadequades per generar avantatges clínics acceptables. A més, els components bàsics de l'ADN plasmidi, per exemple, les seqüències de CpG no metilades, poden provocar l'activació de respostes immunes innates, augmentant les respostes immunes adaptatives contra els antígens expressats. Així, les vacunes d'ADN són més aplicables a la medicina veterinària (Coban et al. 2013; Silveira et al. 2017; Hobernik i Bros 2018). A causa d'aquest inconvenient, algunes línies d'investigació se centren en l'optimització i el lliurament de vacunes d'ADN, incloent l'optimització de codons, disseny de promotors, adjuvants moleculars, aplicació d'EP, vacunació primer boost o mètodes "òmics" per al disseny avançat de vacunes (Li et al. 2012; Silveira et al. 2020). La figura 3 il·lustra les principals etapes dels mecanismes de la vacuna d'ADN en les respostes immunitàries efectives.

Fig. 2 Formulació de la vacuna d'ARNm, administració i mecanismes de provocació immune: una formulació d'ARNm amb una nanopartícula lipídica (LNP) manté i millora l'estabilitat de la seqüència. b S'administra una solució salina de la vacuna ARNm-LNP per via intramuscular. c L'ARNm que conté LNP es transfecta a les cèl·lules presentadores d'antigen (APC) mitjançant endocitosi. L'ARNm s'allibera al citoplasma i es tradueix a proteïnes virals, després són lisats pel proteasoma i s'uneixen al complex principal d'histocompatibilitat I (MHC-I) a la superfície del reticle endoplasmàtic i es presenten a les cèl·lules T citotòxiques (Tc).

El potencial de les vacunes basades en ARNm i ADN

Una estructura de vacuna a nivell d'ARNm conté elements per reparar l'estabilitat i l'expressió de proteïnes, inclosa la 3′ UTR, la seqüència de codificació, 5′UTR, 5′ cap i la cua poli (A) (Liu 2019). Els elements 5′ i 3′ UTR que flanquegen la seqüència codificant derivada de gens virals o eucariotes milloren l'estabilitat estructural i milloren la traducció de l'ARNm que són factors essencials per a les vacunes (Ross i Sullivan 1985; Holtkamp et al. 2006). Per a una traducció eficient de proteïnes a partir de l'ARNm, es necessita una estructura de tapa de 5′ (Martin et al. 1975; Ross i Sullivan 1985). La cua poli (A) de l'ARNm també té un paper regulador en l'estabilitat i la traducció de l'ARNm (Holtkamp et al. 2006). A més, l'ús de codons té un paper vital en la traducció de proteïnes. En aquest sentit, per augmentar la traducció de proteïnes a partir de l'ARNm, els codons rars es substitueixen per codons sinònims utilitzats que tenen un ARNt cognat abundant al citosol (Stepinski et al. 2001). Un altre enfocament per a l'optimització de seqüències és l'enriquiment del contingut G:C. Diversos mètodes han desenvolupat vacunes d'ADN candidates eficients i segures en els últims anys. En una plataforma de vacunes basada en ADN, s'apliquen vectors plasmidis derivats de bacteris per expressar els antígens desitjats dins de les cèl·lules hoste. Els plasmidis bacterians s'han d'introduir a les cèl·lules eucariotes i traslladar-los al nucli. A continuació, l'ADN es transcriu i es tradueix a partir de gens estrangers al nucli i al citoplasma de la cèl·lula hoste, respectivament. Per tant, dissenyar un plasmidi adequat amb una alta eficiència de transfecció i expressió de proteïnes és essencial per aconseguir una vacuna potent d'ADN (Malone et al. 1989). La seqüència de la regió eucariota (en plasmidis de vacunes d'ADN), aigües amunt del gen inserit, està formada per un promotor i un senyal poli A (poliA) (AAU AAA) situat als extrems 3' de la seqüència antigènica (Shan et al. .2011). Els promotors són elements crítics necessaris en els plasmidis de la vacuna d'ADN per provocar alts nivells d'expressió dels antígens desitjats a les cèl·lules hostes (Becker et al. 2008) i donar lloc a la transcripció de l'ARNm del gen inserit. El promotor més utilitzat en les vacunes d'ADN inclou el promotor del citomegalovirus humà (CMV). El senyal de la seqüència poliA provoca estabilitat i transferència de l'ARNm i l'expressió gènica eucariota de manera eficient. Un altre element crític és una seqüència de Kozak (ACCATGG) que té un paper vital en la traducció del ribosoma eucariota. A més, és necessari afegir una o dues seqüències de codons stop per evitar una traducció incorrecta del gen inserit a la cèl·lula hoste (Becker et al. 2008; Williams 2013). Comparació de les plataformes de vacunes d'ADN i ARNm Tot i que les vacunes d'ADN i ARNm s'han desenvolupat des de la dècada de 1990 i el desenvolupament recent i la llicència de diverses vacunes d'ADN veterinari, un entusiasme considerable s'ha convertit en l'ARNm. Tots dos necessiten esforços per millorar la seva antigenicitat, estabilitat i eficàcia manipulant l'ADN plasmidi i l'ARNm directament o afegint immunomoduladors o adjuvants i formulacions i sistemes de lliurament (Liu 2019). La durada d'estabilitat de l'ARNm és inferior a la del DNA plasmidi. S'ha descobert que les vacunes d'ADN generen la proteïna codificada ràpidament, sent quantitats més elevades que les vacunes d'ARNm a causa de la major estabilitat intrínseca de l'ADN plasmídic. S'ha trobat que l'ADN plasmídic persisteix al múscul fins a 6 mesos en un mode no integrat (Ledwith et al. 2000). Tot i que se suposa que les vacunes d'ADN i ARNm són un sistema d'expressió de la proteïna preferida, cap és immunològicament inert. A més, els plasmidis d'ADN i l'ARNm estimulen la immunitat innata (Campbell 2017). La tecnologia de vacuna basada en l'ADN i l'ARNm pot no ser del tot general. L'ARNm és més complicat que l'ADN plasmidi a causa dels nucleòsids modificats i les formulacions necessàries per al lliurament, l'estabilitat i la necessitat de controlar l'activitat immunoestimuladora intrínseca de l'ARNm. No obstant això, beneficia una producció que eludeix la demanda de cada producte cel·lular o animal. La promesa és que els assoliments clínics seran factibles després que es resolguin els reptes de la vacuna de l'ADN plasmidi i l'ARNm, especialment mitjançant l'aplicació de tecnologies avançades per prevenir i tractar malalties (Liu 2019).

Fig. 3 El procés d'expressió de la vacuna d'ADN COVID-19 a les cèl·lules presentadores d'antigen (cèl·lules dendrítiques o DC). L'ADN plasmídic entra al nucli DC i expressa antígens in vivo (1) A continuació, els antígens es presenten a les cèl·lules T (receptors de cèl·lules T o TCRs) mitjançant molècules MHC-I i MHC-II. La presentació d'antígen es produeix mitjançant les molècules DC CD80/86 i les molècules CD{8+T CD28 juntament amb el MHC-I-TCR i també mitjançant les CD40 DC i les cèl·lules CD{4+T CD40L al costat del Interaccions MHC-II-TCR (2a, 3 i 4) L'activació i proliferació de les cèl·lules T CD8+ i l'alliberament de citocines condueixen a respostes immunitàries efectives com l'activació dels macròfags (2b) A més, l'activació del CD 4+Les cèl·lules T després de la unió i els efectes de les citocines dels DC s'associen amb l'activació, proliferació i secreció d'anticossos de cèl·lules B (5)

Avenços en el lliurament de la vacuna d'ADN i ARNm

L'absorció d'ADN i ARN estranger per part de cèl·lules eucariotes no és eficient en comparació amb els vectors virals. S'han establert molts enfocaments de lliurament físic per augmentar la capacitat d'absorció cel·lular (Mellott et al. 2013). Els mètodes físics de transfecció de gens inclouen sistemes de lliurament que transfereixen material genètic mitjançant procediments mecànics, inclosos dispositius EP i projectors (Gulce-Iz i Saglam-Metiner 2019). Els dispositius biojectors utilitzen la pressió de CO2 per transportar terapèutica a través de l'administració IM (intramuscular), ID (intradèrmica) i també SC (subcutània) sense el requisit d'agulla (Jorritsma et al. 2016), donant avantatges considerables respecte a la injecció d'agulla convencional, inclosa la mitigació de efectes adversos, contaminació creuada de l'agulla i danys per punxada d'agulla (Zhang et al. 2015). De manera rellevant, s'han avaluat dues vacunes d'ADN contra el virus del Zika en l'assaig de fase I, demostrant un augment de les respostes cel·lulars després de l'administració sense agulles en comparació amb l'ús d'agulles (Gaudinski et al. 2018). A més, una plataforma de lliurament de vacuna d'ARNm contra la ràbia utilitzant un projector va revelar respostes d'anticossos millorades (Alberer et al. 2017). L'augment de l'eficiència de la vacuna a través de la injecció de raig es pot atribuir a una distribució més àmplia de vacunes, donant lloc a una major absorció mitjançant APC (Williams et al. 2000; Alberer et al. 2017). Actualment, les injeccions d'ID o IM seguides d'EP s'utilitzen normalment per al lliurament de vacunes d'ADN en estudis clínics (Sardesai i Weiner 2011). L'EP inclou la formació de porus a les cèl·lules de la pell per augmentar l'absorció cel·lular del material genètic mitjançant polsos elèctrics (Pushparajah et al. 2021). El mètode IM EP es va aplicar principalment el 1998 (Aihara 1998) millorant la penetrabilitat de les cèl·lules musculars per al lliurament de vacunes d'ADN (Rizzuto et al. 1999; Dupuis et al. 2000; Sokołowska i Błachnio-Zabielska 2019). Nombrosos informes han revelat una millor expressió d'antigen i un augment de les respostes immunes específiques d'antigen in vivo mitjançant EP (Yan et al. 2008; Yan et al. 2009). S'ha informat que una vacuna d'ADN del VIH, ADVAX, va augmentar la immunogenicitat després de la transferència a través de l'EP (Vasan et al. 2011), en comparació amb l'administració IM (Vasan et al. 2010). No obstant això, l'enfocament EP pateix un risc de mort cel·lular a causa de la utilització d'alts voltatges (Gulce-Iz i Saglam-Metiner 2019). Encara s'estan investigant nous enfocaments de lliurament, com ara l'EP, per al lliurament de la vacuna d'ARN.

Beneficis de cistanche per a homes que enforteixen el sistema immunitari

L'eficàcia de l'EP per al lliurament de vacunes autoamplificadores ha estat similar a la de les vacunes d'ADN plasmidi en termes d'expressió gènica i respostes immunitàries en ratolins (Cu et al. 2013). Tanmateix, l'EP no ha millorat l'eficàcia de lliurament de les vacunes tradicionals d'ARN no replicants (Johansson et al. 2012), reduint possiblement la seva eficàcia en la duplicació de vectors d'ARN. En conseqüència, els injectors EP i bio són avantatjos per a la injecció parenteral de vacunes d'ADN/ARN de COVID-19. Aquests enfocaments contribueixen a una major producció i lliurament de candidats a la vacuna d'ADN i milloren notablement els resultats (Pushparajah et al. 2021).

Beneficis i limitacions de les vacunes basades en àcids nucleics

Com a mètodes d'immunització nous i prometedors, les vacunes basades en àcids nucleics proporcionen informació sobre el desenvolupament de vacunacions segures i protectores (Choi i Chang 2013), tal com van demostrar milions de persones durant la pandèmia de COVID-19. Les vacunes basades en àcids nucleics tenen cicles de desenvolupament curts, facilitant la distribució ràpida durant una pandèmia. La utilització de vacunes d'ADN recombinant necessita una transferència eficient del vector d'ADN al nucli, la transcripció i després la traducció a l'antigen desitjat (Leitner et al. 1999). A causa de la manipulació còmoda i la producció de baix cost, l'ADN plasmidi nu és un vector fascinant per presentar antígens (Williams 2013). Normalment, un ADN plasmídic comprèn elements genètics bàsics, incloent el gen que codifica l'antigen, un promotor, potenciadors i seqüències de terminació de la transcripció/poliadenilació (Vogel i Sarver 1995). La plataforma d'ADN plasmidi és una construcció biofarmacèutica prometedora replicada en alts nivells dins de cèl·lules procariotes barates encara que requereix purificació (Prazeres et al. 1999; Ferreira et al. 2000; Suschak et al. 2017). Les vacunes d'ARN estan compostes per molècules d'ARNm que contenen un ARN d'antigen envoltat de terminals 3', poli-A i 5' i no tenen el requisit de transcripció. (Zhang et al. 2019). Diverses vacunes d'ARN es sotmeten a una autoamplificació coneguda com a nova tecnologia en desenvolupament. En conseqüència, la molècula d'ARN es pot replicar i traduir a l'hoste després del lliurament, malgrat la possibilitat d'inestabilitat de l'ARN nu, augmentant així l'expressió de pèptids immunogènics (Pardi et al. 2018; Zhang et al. 2019; Wadhwa et al. 2020) . L'ARNm és degradat per enzims de ribonucleasa omnipresents (Wadhwa et al. 2020; Xu et al. 2020). L'addició d'una cua de poli-A de 3' i una tapa de 5'–7-metilguanosina és fonamental per augmentar l'estabilitat i la traducció de l'ARNm al citosol (Gallie 1991; Schlake et al. 2012). Les estratègies per augmentar l'absorció i l'expressió de la vacuna s'han avaluat principalment per a vacunes d'ADN que per a vacunes d'ARN, ja que l'ADN requereix creuar dues membranes cel·lulars per arribar al nucli. En canvi, l'ARN penetra al citoplasma a través d'una única membrana (Rauch et al. 2018). L'estructura de l'ADN té una estabilitat comparablement més alta. Durant 7 anys, es va trobar que l'ADN plasmídic es va mantenir intacte sense diferències amb l'ADN proporcionat recentment a -20 graus (Walther et al. 2013; Pushparajah et al. 2021). El pH i la temperatura baixos són fonamentals per mantenir la integritat de l'ADN durant molt de temps. Per contra, l'ARN és extremadament sensible a la temperatura i s'ha de mantenir a -70 graus en el medi lliure d'enzims per millorar la seva vida mitjana (Jones et al. 2007).

Reptes en el desenvolupament de vacunes basades en àcids nucleics

És ben sabut que les vacunes contra la COVID-19 han de ser prou eficients i protectores (Graham 2020) i generar una immunitat de llarga vida. Tanmateix, la vacunació anual pot ser possible basant-se en les experiències anuals de vacunació contra la grip (Randolph i Barreiro 2020; van Riel i de Wit 2020). El desenvolupament de la vacuna contra la COVID-19 planteja reptes fins i tot amb noves plataformes. Malgrat l'elevada immunogenicitat i protecció de la vacuna contra la proteïna de l'espiga del coronavirus, l'aparició de mutacions provoca preocupacions i la reaparició del virus. Per tant, el pronòstic del moment i la ubicació de l'aparició de la malaltia juntament amb l'adopció precisa de la seqüència de proteïnes objectiu és l'etapa capdavantera del procés de desenvolupament que necessita una implementació adequada dels assaigs clínics (Lurie et al. 2020). El principal repte de les vacunes d'ADN és provocar respostes immunitàries relativament més baixes en humans i animals grans que en sistemes d'animals petits (Grunwald i Ulbert 2015; Suschak et al. 2017). Notablement, encara s'han d'abordar més reptes pel que fa a les vacunes contra la COVID-19, com ara la durabilitat de la protecció, l'eficàcia en subgrups específics, la prevenció de la transmissió viral i l'acceptació pública (Pushparajah et al. 2021). L'expressió retardada de l'antigen a les vacunes d'ARNm autoamplificades podria limitar l'eficàcia d'aquestes vacunes. Tanmateix, aquesta plataforma ofereix rendiments més alts i, per tant, proporciona una protecció equivalent a dosis significativament més baixes (Vogel et al. 2018; Strizova et al. 2021).

Avenços recents en vacunes d'ADN i ARNm COVID-19

En el desenvolupament de vacunes contra la COVID{{{0}}, nombrosos estudis s'han centrat en les plataformes de vacunes d'ARNm (Verbeke et al. 2{021) que han portat a l'aprovació de diverses vacunes (Vitiello i Ferrara 2{{ 94}}21) com els de les empreses Moderna i Pfizer/BioNtech. La vacuna Moderna inclou tota la codificació de l'ARNm de la glicoproteïna de punta de COVID-19, mentre que Pfizer/BioNtech conté la seqüència d'ARNm RBD (Brüssow 2020). Els nivells d'eficàcia de les vacunes Pfizer/BioNTech i Moderna inclouen el 95% i el 94,5%, respectivament (Rauch et al. 2021; Widge et al. 2021). La temperatura d'emmagatzematge de la vacuna Moderna està entre -25 i -15 graus, mentre que la de la vacuna Pfzer està entre -80 i -60 graus (Meo et al. 2021; Rauch et al. 2021). En comparació amb la vacuna Moderna, la vacuna Pfizer/BioNTech té menors costos i efectes secundaris (Rauch et al. 2021). Investigadors xinesos van desenvolupar una altra vacuna d'ARNm contra la COVID-19 i va utilitzar ARNm que codificava RBD termoestable (almenys una setmana a 25 graus) (Brüssow 2020). En una altra enquesta, CureVac s'ha utilitzat com a plataforma d'ARNm de proteïna S de longitud completa dissenyada per al desenvolupament de vacunes COVID-19 amb substituts en dos residus de prolina per millorar l'estabilitat de la proteïna (Rauch et al. 2021). Ruklanthi de Alwis et al. (2021) van desenvolupar una vacuna d'ARNm d'autotranscripció i replicació per a COVID-19 utilitzant proteïna S de longitud completa i un replicó (de Alwis et al. 2021) amb el potencial d'aplicació com a vacuna d'una sola dosi eficaç i segura. per combatre la COVID- 19 (de Alwis et al. 2021). De la mateixa manera, es va utilitzar un ARN autoamplificador que codificava la proteïna COVID-19 S encapsulada dins d'una nanopartícula lipídica (LNP) i es va descriure títols elevats d'anticossos i respostes immunes cel·lulars (McKay et al. 2020). S'han desenvolupat alguns candidats a vacunes d'ADN com les vacunes basades en proteïnes S, N i M per al SARS-CoV. Entre aquestes, la vacuna d'ADN basada en proteïnes S ha induït eficaçment un efecte protector contra la infecció per COVID-19, possiblement a causa del paper vital de la proteïna S en la unió al receptor (Zhao et al. 2020). INO-4800 és un candidat a vacuna d'ADN COVID{-19 que codifica la proteïna S de COVID{-19 (Sarwar et al. 2020; Smith et al. 2020). Els resultats preclínics en ratolins i conillets d'índies van demostrar respostes immunes humorals i cel·lulars. En els estudis clínics de la fase I, es van injectar dues dosis d'INO-4800 a través del camí ID, complementades amb EP mitjançant CELLECTRA®2000 Inovio Pharmaceutical (Diehl et al. 2013; Amante et al. 2015). Es va explicar una resposta immune completa basada en les respostes d'anticossos i cel·lulars en 34 dels 36 participants en el seu assaig clínic de fase I. Es van observar deu efectes adversos (EA) reportats sense cap esdeveniment advers greu (SAE) (fase). Es va iniciar un assaig clínic de fase I/II per avaluar la immunogenicitat, la seguretat i la tolerabilitat de l'INO- 4800 (Tebas et al. 2019). L'INO-4800 té condicions d'emmagatzematge similars (Smith et al. 2020), amb l'esperança d'una distribució més senzilla de la vacuna. A més, alguns altres grups de vacunes d'ADN COVID-19 han posat en marxa assajos. El juny de 2020, un assaig clínic de fase I i IIa per al GX-19 va iniciar la contractació. Una vacuna d'ADN, AG0301-COVID{-19, produïda pels intents cooperatius de la Universitat d'Osaka (Japó), Takaro Bio i AnGes, va llançar la contractació per als assaigs clínics de fase I i II el juliol de 2020 per avaluar la seva immunogenicitat i seguretat (Speiser i Bachmann 2020). Es van realitzar assaigs clínics de fase I i II per avaluar la immunogenicitat i la seguretat de tres dosis de ZyCoV-D (Kumar et al. 2021). Aquesta vacuna oral codificava la proteïna de punta a l'ADN plasmidi, amplificada dinàmicament en el Bifidobacterium longum viu, un bacteri probiòtic intestinal ben reconegut. Es va iniciar un altre assaig clínic de fase I per avaluar CORVax12, una vacuna d'ADN que codifica la proteïna espiga. Es va investigar l'eficiència de CORVax12 electroporat sol o en combinació amb un altre plasmidi que codifica la interleucina 12 (IL-12). S'estan desenvolupant diverses vacunes d'ARNm COVID-19 i han donat a conèixer resultats prometedors (Leitner et al. 1999; Croyle et al. 2001). Un enfocament divers per desenvolupar RQ3013-VLP (que codifica proteïnes S, E i M) va ser eficient in vivo mitjançant un còctel d'ARNm. Aquesta vacuna d'ARNm es va integrar amb nucleòsids canviats i després es va empaquetar en LNP i va revelar la capacitat d'obtenir fortes respostes immunes cel·lulars i humorals en ratolins (Le et al. 2020; Lu et al. 2020a). Una vacuna d'ADN del domini d'àcid arginil-glicil-aspártic (RGD) dissenyada en dues dosis de 60 µg mitjançant electroporació va millorar els efectes en ratolins BALB/cJ (Guo et al. 2021). La injecció IM + jet d'una vacuna d'ADN en una sola dosi (0,2 mg) podria immunitzar els hàmsters sirians (Brocato et al. 2021). Una altra vacuna d'ADN utilitzant la proteïna S sotmesa en tres dosis va protegir els macacs Rhesus (Yadav et al. 2021). La fusió de RBD amb l'aminoterminal preS1 del virus de l'hepatitis B i la injecció IM durant tres dosis (setmanes 0, 2 i 4) en ratolins C57BL/6 va provocar respostes immunes humorals i cel·lulars (Jeong et al. 2021). A més, la injecció IM d'ADN plasmidi de proteïna S i subunitat S1 (proteïna recombinant) en tres dosis a les setmanes 0, 2 i 8 en macacs Rhesus va estimular els anticossos neutralitzants (Prompetchara et al. 2021). La injecció IM + EP de proteïna S en tres dosis (setmanes 0, 2 i 4) en ratolins ICR va estimular respostes humorals i cel·lulars (Li et al. 2021). Altres vacunes d'ADN en assaigs clínics han inclòs la proteïna S en les fases I/II el juny de 2022 (NCT04445389, via IM en adults de 18 a 50 anys), juliol de 2021 (NCT04463472, via IM en adults de 20 a 60 anys), Setembre de 2021 (NCT04527081, via IM en adults de 20 a 65 anys) i fase I (NCT04336410, ruta ID en 18 anys o més), febrer de 2022 (NCT04334980, oral en adults de 18 anys o més) i juny de 2021 ( NCT04591184, ruta IM en adults de 18 a 84 anys). A més, les vacunes d'ARNm dels assaigs clínics van incloure les de la fase II el novembre de 2021 (NCT04515147, IM, 18-60 anys), la fase II-III el desembre de 2022 (NCT04368728, IM en adults de 18-85 anys) i la fase I. el juny de 2021 (NCT04566276, IM en adults de 18 a 75 anys). COVID-eVax va ser una vacuna basada en RBD que va provocar suficients respostes immunes en ratolins, fures i rates després de 38 dies (Conforti et al. 2022). Es van avaluar dues vacunes d'ADN (X{-19 i GX{-19N) que codifiquen proteïnes d'espiga i nucleocàpsida en assaigs de fase I entre adults de 19 a 49 anys i els anticossos d'unió es van detectar a la segona dosi de vacunació. Es va confirmar la seguretat i la tolerabilitat d'aquestes vacunes, on el GX-19N va induir nivells més alts de cèl·lules T i respostes d'anticossos (Ahn et al. 2022). Una vacuna d'ADN de fusió d'espiga Xcl1-SARS-CoV-2 va provocar una taxa més alta de respostes mediades per anticossos i cèl·lules T en comparació amb un gen espiga que conté plasmidis individualment in vitro i in vivo (Qi et al. 2022). Una vacuna recent baculoviral COVID-19 Delta DNA podria protegir el 100% dels ratolins contra COVID{-19 (Jang et al. 2023). Un ADN lineal (linDNA) que codifica el SARS-CoV-2 RBD (Lin-COVIDeVax) va poder provocar respostes d'anticossos i cèl·lules T i proporcionar seguretat i no tenien efectes adversos (Conforti et al. 2023). La taula 1 representa els assaigs clínics i les vacunes aprovades a base d'àcid nucleic contra la COVID-19. Segons dades actualitzades, 229.820.324 persones han rebut vacunes contra la COVID-19 a tot el món, entre les quals, les dels països africans han tingut taxes de vacunació més baixes (https://www.usnews.com/news/coronavirus-and). -vaccine-news, https://www.bloomberg.com/graph ics/covid-vaccine-tracker-global-distribution/). En conseqüència, la taxa de vacunació està associada a les condicions econòmiques de diverses regions/àrees.

Potencials problemes de seguretat per a les vacunes COVID-19

El seguiment de la seguretat en cada vacuna preventiva o profilàctica desenvolupada és un dels aspectes essencials. L'ús de productes químics tòxics o cultiu cel·lular no és necessari en els processos de producció de vacunes d'ARNm, per la qual cosa es coneix com una plataforma segura. El curt temps de fabricació també redueix el risc de contaminació per microorganismes (Wang et al. 2020). Els efectes més freqüents inclouen mal de cap, fatiga i altres esdeveniments sistèmics greus, com ara febre, calfreds, miàlgies, vòmits, dolor abdominal i informes rars de diarrea. Tanmateix, no s'ha observat cap mort en receptors de la vacuna d'ARNm (Chapin-Bardales et al. 2021; Skowronski i De Serres 2021). Alguns efectes secundaris sistèmics, com ara l'anafilaxi, s'acostumen a informar en individus amb antecedents d'al·lèrgia i s'estima entre 2,5 i 11,1 casos per milió de dosis (Shimabukuro et al. 2021). La resposta immune forta en persones més joves que altres pot provocar esdeveniments sistèmics elevats i es reporten més efectes secundaris després de la injecció d'una segona dosi de vacuna en comparació amb la primera dosi (Male 2021; Skowronski i De Serres 2021). A més, el dolor al lloc d'injecció, l'envermelliment i la inflor es descriuen com els efectes secundaris més locals (Anand i Stahel 2021). A partir de proves suficients de vacunes d'ARNm aprovades, com ara Pfizer/BioNTech i Moderna, no s'ha demostrat cap risc d'avortament involuntari durant l'embaràs (taxa=0%) (Masculí 2021). Notablement, les vacunes d'ADN són prou segures, però no sempre immunogèniques; per tant, una resposta immune suficient necessita dosis addicionals. La resposta immune humoral no ha estat consistent en els assaigs humans, mentre que la immunitat cel·lular sembla més freqüent. En conseqüència, la seguretat de les vacunes d'ADN entre les poblacions més grans i més joves és més auspiciosa (Ledgerwood et al. 2011; Houser et al. 2018; Carter et al. 2019). Les preocupacions de seguretat indiquen la possible integració de l'ADN transfectat a la línia germinal i les cèl·lules somàtiques de l'hoste. En aquests casos, la desregulació de l'expressió gènica possiblement es produeix juntament amb múltiples mutacions considerables. No obstant això, només s'utilitzen plasmidis d'integració cromosòmica extracromosòmica i deficient en el desenvolupament de vacunes d'ADN. A més, la majoria de plasmidis romanen al lloc d'administració (Schalk et al. 2006). Una revisió sistemàtica i una metaanàlisi recents van demostrar que les vacunes d'ARNm s'associen a esdeveniments adversos més elevats en comparació amb altres plataformes (Kouhpayeh i Ansari 2022). Recentment, es va observar un cas rar de miositis associada a la vacuna d'ARNm BNT162b2 en una dona de 34-anys (Magen et al. 2022). La metilació de l'ADN i les alteracions epigenètiques corresponents també pertorben l'eficàcia de les vacunes d'ADN i ARNm (Pang et al. 2022). Notablement, diverses vacunes d'àcid nucleic aprovades (ZyCoV-D, vacuna plasmídica d'ADN utilitzada per via intradèrmica, Índia), BNT162b2 (ARNm, 2 dosis, Alemanya), ARNm- 1273 (Moderna, EUA, 2 dosis), ARCoV (WALVAX, Xina) i assaigs clínics inclosos 302-COVID19 (vacuna plasmídica d'ADN, fase II/III intramuscular, Japó), INO-4800 (plasmidi d'ADN, fase II/III, intradèrmica, Xina), GX{{36} }}N (vacuna d'ADN, Genexine, fase II/III), Covigenix VAX-001 (vacuna d'ADN, Entos Pharmaceuticals, fase I/II, intramuscular), COVID-eVax (vacuna d'ADN, fase I/II, intramuscular) , Roma) i bacTRL-Spike (vacuna d'ADN, fase I, oral, Symvivo) (Sheridan 2021; Liu i Ye 2022a). Aquestes vacunes han estimulat la immunitat tant humoral com cel·lular, tret de GX-19N i AG0302- COVID-19. Alguns efectes adversos de les vacunes basades en àcids nucleics COVID-19 inclouen dolor, limfadenopatia, eritema, enrogiment, inflor, nàusees, fatiga, artràlgia, miàlgia, febre, aturada cardiorespiratòria, ictus, reacció d'hipersensibilitat, malaltia hepàtica alcohòlica, paràlisi de Bell. , arítmia ventricular paroxística i mort (Norquist et al. 2012; McNeil i DeStefano 2018; Baden et al. 2021; Momin et al. 2021; Liu i Ye 2022b, 2022a).

El glucòsid de feniletanol és el principal component actiu de Cistanche deserticola

Conclusió

La ràpida pandèmia de COVID-19 ha generat una necessitat insatisfeta de desenvolupar vacunes eficients per prevenir la malaltia. Tot i que la immunogenicitat de les vacunes d'ADN en animals és acceptable, la validació clínica està justificada en humans. Les vacunes d'ARN poden proporcionar característiques immunològiques adequades i avantatges considerables sobre les vacunes d'ADN. Els problemes amb la naturalesa inestable de l'ARN s'han abordat mitjançant enfocaments i formulacions d'emmagatzematge adequats per aturar la seva degradació. La seguretat de les vacunes també és important i no es pot comprometre per a una major eficiència. Hi ha vacunes basades en àcids nucleics aprovades per controlar la propagació de la COVID-19. S'ha de continuar el seguiment dels participants. Cal aprendre sobre els efectes secundaris de la vacuna COVID-19 basada en àcids nucleics. A més, la reavaluació de vacunes i el desenvolupament de vacunes polivalents, o estratègies de pan-coronavirus són prometedores tenint en compte la reaparició de noves variants de preocupació.

Taula 1 Assajos clínics i vacunes COVID-19 aprovades i les seves característiques

Referències

Abdelmageed MI et al (2020) Disseny d'una vacuna peptídica basada en multiepítops contra la proteïna E de la COVID humana -19: un enfocament immunoinformàtic. Int J Biomed Clin Anal. https://doi.org/ 10.1155/2020/2683286

Abera G, Berhanu G, Tekewe A (2012) Ribozimes: enzims d'àcid nucleic amb aplicacions farmacèutiques potencials: una revisió. Farmàcòfor 3:164–178

Ahn JY et al (2022) Seguretat i immunogenicitat de dues vacunes d'ADN recombinant COVID-19 que contenen les regions codificants de les proteïnes espiga o espiga i nucleocàpsida: una anàlisi provisional de dos assaigs de fase 1 oberts, no aleatoris en adults sans. Lancet Microbe 3: e173–e183. https://doi.org/10.1016/ S2666-5247(21)00358-X

Aihara H (1998) Miyazaki J. transferència de gens al múscul per electropo ració in vivo. Nat Biotechnol 16:867–870. https://doi.org/10. 1038/nbt0998-867

Alberer M et al (2017) Seguretat i immunogenicitat d'una vacuna contra la ràbia d'ARNm en adults sans: un assaig clínic de fase 1 obert, no aleatori, prospectiu i primer en humans. The Lancet 390: 1511–1520.https://doi.org/10.1016/s0140-6736(17)31665-3

Amante DH et al (2015) Patrons de transfecció de la pell i cinètica d'expressió del lliurament de plasmidis millorat per electroporació mitjançant el CELLECTRA-3P, un dispositiu d'electroporació dèrmica portàtil de nova generació. Mètodes de teràpia gènica humana 26:134–146. https:// doi.org/10.1089/hgtb.2015.020

Anand P, Stahel VP (2021) Revisar la seguretat de les vacunes d'ARNm Covid-19: una revisió. Patient Saf Surg 15:20. https://doi.org/10.1186/ s13037-021-00291-9

Baden LR et al (2021) Eficàcia i seguretat de la vacuna d'ARNm-1273 SARS CoV-2. N Engl J Med 384:403–416. https://doi.org/10. 1056/NEJMoa2035389

Becker PD, Noerder M, Guzmán CA (2008) Immunització genètica: bacteris com a vehicles de lliurament de vacuna d'ADN. Hum Vaccin 4:189–202.https://doi.org/10.4161/hv.4.3.6314

Borah P et al (2021) Perspectives on RNA vaccine candidates for COVID-19. Front Mol Biosci. https://doi.org/10.3389/fmolb. 2021.635245

Brocato RL et al (2021) Eficàcia protectora d'una vacuna d'ADN SARS-CoV-2 en hàmsters sirians de tipus salvatge i immunosuprimits. Vacunes Npj 6:1–7.https://doi.org/10.1038/s41541-020-00279-z

Brüssow H (2020) Esforços cap a una vacuna contra la COVID-19. Environ Microbiol 22:4071–4084. https://doi.org/10.1111/1462-2920. 15225

Buchholz UJ et al (2004) Contribucions de les proteïnes estructurals del coronavirus de la síndrome respiratòria aguda severa a la immunitat protectora. Proc Natl Acad Sci 101:9804–9809. https://doi.org/ 10.1073/pnas.0403492101

Campbell JD (2017) Desenvolupament de l'adjuvant CpG 1018: un estudi de cas. Vacuna Adjuv. https://doi.org/10.1007/ 978-1-4939-6445-1-2

Carter C et al (2019) Seguretat i immunogenicitat de la vacuna d'ADN d'hemaglutinina de grip estacional en investigació seguida d'una vacuna inactivada trivalent administrada per via intradèrmica o intramuscular en adults sans: un assaig clínic de fase 1 aleatoritzat obert. PLoS One 14:e0222178. https://doi.org/10.1371/ journal.pone.0222178

Chapin-Bardales J, Gee J, Myers T (2021) Reactogenicitat després de la recepció de vacunes COVID-19 basades en ARNm. JAMA. https://doi. org/10.1001/jama.2021.5374

Chen Y, Cheng L, Lian R, Song Z, Tian J (2021) La investigació sobre la vacuna COVID-19 se centra en la seguretat, l'eficàcia, la immunoinformàtica i la producció i lliurament de vacunes: una anàlisi bibliomètrica basada en VOSviewer. Tendències de Biosci. https://doi.org/10.5582/bst.2021. 01061

Choi Y, Chang J (2013) Vectors virals per a aplicacions de vacunes. Clin Exp Vaccine Res 2:97.https://doi.org/10.7774/cevr.2013.2.2.97

Chowdhury MA, Hossain N, Kashem MA, Shahid MA, Alam A (2020) Immune response in COVID-19: A review. J Infectar la Salut Pública. https://doi.org/10.1016/j.jiph.2020.07.001

Coban C, Kobiyama K, Jounai N, Tozuka M, Ishii KJ (2013) ADN vac cines: a simple DNA sensing matter? Hum Vaccin Immunother 9:2216–2221.https://doi.org/10.4161/hv.25893

Conforti A et al (2022) COVID-eVax, un candidat a una vacuna d'ADN electroporat que codifica el SARS-CoV-2 RBD, provoca respostes protectores en models animals. Mol Ther 30:311–326. https://doi. org/10.1016/j.ymthe.2021.09.011

Conforti A, Sanchez E, Salvatori E, Lione L, Compagnone M, Pinto E et al (2023) Un candidat a una vacuna d'ADN lineal que codifica el domini d'unió al receptor SARS CoV -2 provoca una resposta immune potent i anticossos neutralitzants en gats domèstics. Mol Ther-Metho Clinic Dev 28:238–248. https://doi.org/10.1016/j.omtm.2022. 12.015

Croyle M, Cheng X, Wilson J (2001) Desenvolupament de formulacions que milloren l'estabilitat física dels vectors virals per a la teràpia gènica. Gene Ther 8:1281–1290.https://doi.org/10.1038/sj.gt.3301527

Cu Y et al (2013) Lliurament i potència millorats de vacunes d'ARNm autoamplificadores mitjançant electroporació in situ. Vacunes 1:367–383. https://doi.org/10.3390/vaccines1030367