Contacte:joanna.jia@wecistanche.com/ WhatsApp: 008618081934791

Si us plau, feu clic aquí per a la part 2

Cistanche té un molt bon efecte neuroprotector

Gabriel Gonzalez 1,2 , Jiˇrí Grz 1, Cosimo Walter D'Acunto 1, Petr Kaˇnovsk2 i Miroslav Strnad1,2,*

1. Laboratori de Reguladors de Creixement, Institut de Botànica Experimental de l'Acadèmia Txeca de Ciències,

i Facultat de Ciències, Universitat Palacký, Šlechtitel ˚u 27, CZ-78371 Olomouc, República Txeca;

Gonzalez.gabriel@seznam.cz (GG); jiri.gruz@upol.cz (JG); waldacun@gmail.com (CWD)

2. Departament de Neurologia, Hospital Universitari d'Olomouc i Facultat de Medicina i Odontologia,

Palacký University Olomouc, CZ-775 20 Olomouc, República Txeca; Petr.Kanovsky@fnol.cz

* Correspondència: miroslav.strnad@upol.cz; Tel.: més 420-585-634-850

Resum: Citoquininessón fitohormones a base d'adenina que regulen processos clau en les plantes, com ara la divisió i diferenciació cel·lular, el creixement d'arrels i brots, la dominància apical, la ramificació i la germinació de llavors. En estudis preliminars, també han demostrat activitats protectores contra malalties neurodegeneratives humanes. Per ampliar el coneixement de la protecció (activitat protectora) que ofereixen, hem investigat activitats de naturacitoquininescontra la toxicitat induïda pel salsolinol (SAL) (amalaltia de Parkinsonmodel) i la mort induïda per glutamat (Glu).neurona-com les cèl·lules dopaminèrgiques SH-SY5Y. Vam trobar que la cinetina-3-glucòsid, el ribòsid cis-zeatina i la N{6-isopentenil adenosina eren actius en el model de PD induït per SAL. A més, la trans-, la cis-zeatina i la cinetina juntament amb el quelant de ferro deferoxamina (DFO) i l'inhibidor de la necroptosi necrostatina 1 (NEC-1) van reduir significativament les taxes de mort cel·lular en el model induït per Glu. Els assajos de lactat deshidrogenasa van revelar quecitoquininessempre inferiorneuroprotectoractivitat que DFO i NEC-1. A més, van reduir les activitats apoptòtiques de la caspasa-3/7 amb menys força que la DFO. No obstant això, elcitoquininesva tenir efectes molt similars a DFO i NEC-1 sobre la producció de radicals superòxid. En general, van mostrar activitat protectora en el model induït per SALparkinsoniananeuronalmort cel·lular i el model de dany oxidatiu induït per Glu principalment per la reducció de l'estrès oxidatiu.

Paraules clau: citoquinina; fitohormona; neuroprotecció; cèl·lules SH-SY5Y semblants a neurones; citotoxicitat; salsolinol; glutamat; estrès oxidatiu; malaltia de Parkinson

planta de cistanchesobre els efectes sobreNeuroprotecció

1. Introducció

malaltia de Parkinson(PD) és la segona malaltia neurodegenerativa relacionada amb el motor més freqüent, i s'espera que el nombre de casos diagnosticats a nivell mundial passi de 6 milions el 2015 a més de 12 milions el 2040 [1]. Es caracteritza per símptomes motors relacionats amb la degeneració específica i la pèrdua d'aproximadament un 30-70 per cent de dopaminèrgica (DA)neuronesa la substantia nigra pars compacta i les seves projeccions a l'estriat [2,3]. Algunes de les moltes característiques moleculars conegudes de la MP inclouen l'estrès oxidatiu i nitrosatiu millorat, la disfunció mitocondrial [4–7], l'excitotoxicitat [8], la disfunció del sistema ubiquitina/proteasòmica [9] i la neuroinflamació [10]. Els tractaments actuals tenen diversos efectes secundaris adversos i només ofereixen alleujament simptomàtic [11], per la qual cosa hi ha esforços intensos per desenvolupar fàrmacs amb efectes curatius eficients sobre la DA degenerada.neurones. Els recursos que poden ajudar aquests esforços inclouen compostos naturals que tendeixen a tenir menys efectes secundaris. Entre altres, les substàncies de Ginkgo biloba (ginkgetina, ginkgolide, bilobalide), ginseng (ginsenòsids) i flavonoides (baicaleïna, kaempferol, rutina i luteolina) han demostrat una àmplia activitat protectora en diversos models in vitro (inclosa la línia cel·lular de neuroblastoma humà SH). -SY5Y) i models in vivo de PD induït per diclorur d'1,1'-dimetil-4,4'-bipiridini (paraquat), 1-metil- 4-fenil-1, 2,3,6-tetrahidropiridina (MPTP), 1-metil-4-fenilpiridini (MPP més ) i 6-hidroxidopamina (6-OHDA) [12].

L'estudi que es presenta aquí es va centrar en els efectes d'una classe de fitohormones naturals anomenadescitoquinines(CK) i els seus metabòlits, que són reguladors coneguts de la divisió cel·lular, el creixement, la diferenciació i la senescència de les fulles a les plantes [13]. Estructuralment, els CK són derivats de l'adenina substituïts en la posició N6-per una cadena lateral prenil (isopentenil) o aromàtica. Les formes naturals inclouen 6-(E)-4-hidroxi-3-metil però-2-enilaminopurina (transzeatina, tZ), el seu isòmer 6-(Z) ( cis-zeatina, cZ), N6-isopentenil adenina (iP), 6-benzil aminopurina (BAP), 6-furfurilaminopurina (cinetina, K) i orto-, meta-, i els derivats parahidroxilats o metoxilats del BAP, anomenats topolines (oT, mT, pT, MeoT, MemT, MepT). També es produeixen diversos 9-ribòsids, 9-nucleòtids, així com 7-, 9 i O-glucòsids d'aquestes formes, tal com es mostra a la taula 1. A més de les seves funcions natives en plantes, els CK han demostrat una potent activitat antioxidant cap a espècies reactives d'oxigen (ROS) que proporciona protecció en diversos models d'estrès in vitro de trastorns associats a l'envelliment [14].

Taula 1. Estructures decitoquininesi els agents de control positiu.

En particular, s'informa que els CK tenen activitat citoprotectora en models com ara la mort cel·lular induïda per H2O2- de fibroblasts humans [15] i l'estrès glioxidatiu induït per D-galactosa en astròcits de rates [16]. Més important encara, en aquest context, han demostratneuroprotectorefectes en models relacionats amb malalties neurodegeneratives com la MP familiar, la toxicitat induïda per l'inhibidor del proteasoma MG 132-o H2O2-en cèl·lules SH-SY5Y [17], dany oxidatiu induït per Glu de l'hipocamp del ratolí HT22neuronalcèl·lules [18] i el model de cèl·lules PC12 de la malaltia de Huntington [19]. Altres estudis indiquen que les activitats protectores dels CK impliquen una modulació directa [20,21] i indirecta [15,16,22] dels sistemes redox cel·lulars. A més de les activitats antioxidants característiques dels CK, es diu que tenen efectes reguladors en els mitocondris que millorenneuronalviabilitat [17]. A més, el K pot estabilitzar el potencial de la membrana mitocondrial i augmentar la producció d'ATP, mitigant així la mort induïda per Glu de les cèl·lules HT22 [18]. Tanmateix, malgrat les troballes sobre els seus efectes en diversos models, hi ha un coneixement limitat de l'activitat protectora dels CK en la forma més comuna (esporàdica) de PD.

Per abordar el buit de coneixement descrit anteriorment, vam avaluar sistemàticament els efectes dels CK naturals i els seus metabòlits en dos models in vitro: un model de dany oxidatiu induït per salsolinol (SAL) i model de dany oxidatiu induït per glutamat (Glu).neurona-com les cèl·lules SH-SY5Y. Aquesta línia es va utilitzar pel seu fenotip dopaminèrgic, la seva sensibilitat a toxines dopaminèrgiques com SAL i la formació convenient de poblacions relativament estables deneuronalcèl·lules amb taxes de proliferació reduïdes després d'una exposició de 48 h a 10 uM d'àcid retinoic all-trans (ATRA) [23–25].

NeuronaLes cèl·lules similars es van exposar a l'endo/exotoxina SAL per imitar la patologia de la PD mitjançant la disfunció del sistema redox cel·lular: esgotament del glutatió (GSH) i inhibició tant de l'enzim antioxidant (Cu/Zn superòxid dismutasa i catalasa) com de les activitats mitocondrials. complexos (I i II), que condueixen a apoptosi i necrosi [26]. En l'altre model, Glu indueix un dany oxidatiu potencialment letal per interrupció del sistema redox. Tots dos models de la línia cel·lular SH-SY5Y s'han utilitzat prèviament en estudis de neuroprotecció [26,27].

S'han provat activitats citoprotectores i/o antioxidants relacionades amb trastorns degeneratius de K, iP, BAP, iPR, tZR i les seves bases lliures, i (com s'ha indicat anteriorment) s'ha trobat que alguns CK tenen activitats protectores enneuronalcèl · lules. No obstant això, cap estudi publicat anteriorment ha examinat l'estructura-neuroprotectorrelació d'activitat (SAR) dels CK naturals (taula 1). Per tant, aquest estudi es va dur a terme per examinarneuroprotector(anti-parkinsoniana) activitats de gairebé tots els CKs naturals coneguts en els models de neurodegeneració induïts per SAL i Glu seleccionats. En primer lloc, vam avaluar la capacitat d'absorció de radicals d'oxigen (ORAC) i (en proves de seguretat) la citotoxicitat de cadascun dels CK.neurona-com les cèl·lules SH-SY5Y. A continuació, es van avaluar els efectes neuroprotectors i la influència dels compostos en els nivells d'estrès oxidatiu mesurant la producció de superòxid (O2) (dihidroetidi, assaig DHE) i les activitats apoptòtiques de la caspasa-3,7. Els resultats proporcionen les primeres indicacions sistemàtiques informades de les relacions entre les estructures dels CK naturals ineuroprotectoractivitats.

Cistanche herbaté una molt bonaneuroprotectorefecte

2. Resultats i discussió

2.1. Capacitat d'absorció de radicals d'oxigen de citoquinines (ORAC)

Com que les malalties neurodegeneratives s'associen a un estrès oxidatiu elevat, l'activitat antioxidant té un paper clau en les defenses deneuronalcèl · lules. Per avaluar el potencial biològic dels CK en aquest sentit, l'ORAC va determinar la capacitat antioxidant, que s'utilitza habitualment per determinar la capacitat antioxidant de les substàncies [28]. La capacitat antioxidant es va expressar com a equivalents de Trolox (TE), que determina l'eficàcia (de menor a major) dels compostos que el Trolox sobre una base equimolar. Els resultats, presentats a la taula 1, mostren que les topolines (oT, mT i pT) i els seus ribòsids (oTR, mTR, pTR) tenen activitats antioxidants elevades, que probablement estan estretament relacionades amb el sistema ric en electrons del seu C{{ 3}}hidroxi benzil amino substituent. Malgrat els seus alts valors ORAC, els topolins no tenien altsneuroprotectoractivitat. Tanmateix, hi ha diversos CK heteroaromàtics, inclosos K (N6-furfurilaminopurina) i cis-zeatina-O-glucòsid no aromàtic (cZOG), que té un 4-hidroxi-3-metilbut{{7} }en-1-il)amino substituent, també va mostrar una gran capacitat antioxidant (taula 2). Altres metabòlits de CK, inclòs el glucòsid de cinetina{10} (K3G), el ribòsid de cinetina 5<-monophosphate (kmp),="" kinetin-9-glucoside="" (k9g),="" and="" trans-zeatin=""><- monophosphate="" (tzmp)—had="" moderate="" antioxidant="" activity.="" all="" the="" others="" had="" detectable="" capacity="" except="" bap.="" these="" results="" confirm="" previous="" findings="" that="" ip,="" pt,="" k="" can="" act="" as="" direct="" radical="" scavengers,="" but="" conflict="" with="" the="" previously="" reported="" activity="" of="" bap="" in="" the="" orac="" test="" [20,21].="" to="" conclude,="" these="" compounds="" have="" potential="" in="" the="" treatment="" of="" neurodegenerative="" diseases="" associated="" with="" increased="" oxidative="" stress="">

beneficis de la tija del cistancheactivatanti-Alzheimer

2.2. Diferenciació de cèl·lules SH-SY5Y

Per estudiar els CKneuroprotectorefectes, les cèl·lules de neuroblastoma SH-SY5Y (escollides per motius ja descrits [23]) es van diferenciar mitjançant l'exposició a 10 uM ATRA durant 48 h com es va descriure anteriorment [23,24]. A continuació, es van tenyir mitjançant un kit de tinció de membrana per examinar les diferències morfològiques entre cèl·lules no diferenciades i diferenciades. Com es mostra a la figura 1A, elneuronaLes cèl·lules diferenciades semblants van créixer menys densament, es van prolongar més i van produir més neurites (indicades per fletxes grogues a la figura) que les cèl·lules no diferenciades. Aquests canvis morfològics associats a la diferenciació s'han observat prèviament, fins i tot després d'una exposició més curta (24 h) a ATRA [24,30]. Més important encara, el nombre de neurites augmenta dràsticament fins a un nivell quan poden crear una xarxa de neurites. Per aquest motiu, es va mesurar la viabilitat cel·lular per comparar la taxa de proliferació de cèl·lules SH-SY5Y no diferenciades i diferenciades. La viabilitat de la SH-SY5Y indiferenciada es va prendre com la taxa màxima de proliferació. Els resultats es presenten a

La figura 1B mostra que la taxa de proliferació (avaluada per l'assaig de viabilitat de Calcein AM) de SH-SY5Y es va reduir en un 23 per cent després de 48 h de tractament amb ATRA.

Figura 1. (A) Micrografies fluorescents de cèl·lules SH-SY5Y amb membranes tenyides mitjançant un kit de creixement de Neurite (Invitrogen™): control, cèl·lules indiferenciades (exposades a una solució de tractament simulada:<0.1% dmso);="" cells="" differentiated="" by="" exposure="" to="" 10="" um="" all-trans="" retinoic="" acid="" (atra)="" for="" 48="" h.="" bars="50" um.="" (b)="" proliferation="" rates="" of="" undifferentiated="" and="" differentiated="" sh-sy5y="" cells:="" numbers="" of="" viable="" cells="" after="" 48="" h="" exposure="" to=""><0.1% dmso="" and="" 10="" um="" atra,="" respectively.="" data="" were="" obtained="" from="" five="" independent="" experiments="" with="" triplicate="" cultures:="" asterisks="" show="" the="" significance="" of="" differences="" in="" numbers="" of="" viable="" cells="" (as="" percentages="" of="" numbers="" of="" undifferentiated="" cells)="" between="" the="" cultures:="" *="" p="" <="">

Taula 2. Capacitat d'absorció de radicals d'oxigen (ORAC) del provatcitoquinines(CKs) expressats com a equivalents de Trolox (TE) sobre una base equimolar. Els noms, les abreviatures i les estructures dels CK es presenten a la figura 1.

2.3. Citotoxicitat de les citoquinines cap a les cèl·lules SH-SY5Y semblants a les neurones

En les proves de citotoxicitat potencial dels CK amb l'assaig de viabilitat de Calcein AM [31], la majoria va mostrar una baixa toxicitat cap alneurona-com les cèl·lules SH-SY5Y. La disminució de la viabilitat per sota del 90 per cent es va considerar com un llindar d'efecte neurotòxic. Les dues úniques excepcions van ser KR (11,9 per cent) i pTR (10,5 per cent), d'acord amb les troballes anteriors que algunscitoquininaels metabòlits, especialment els ribòsids, poden tenir efectes citotòxics [32]. Altres ribòsids, com ara cZR, iPR, oTR, mTR, no van provocar cap reducció aparent de laneurona-com la viabilitat de les cèl·lules SH-SY5Y (taula 3). DFO [33,34] i NEC-1 [35,36] utilitzats com a controls positius en el nostre model in vitro també es van demostrar que altres estudis sobre cèl·lules SH-SY5Y no eren tòxiques. En conclusió, principalment els derivats KR i pTR van mostrar una viabilitat inferior al 90 per cent i, per tant, es van considerar menys interessants per a una avaluació posterior en ambdós models in vitro de neurodegeneració.

Taula 3. Viabilitat cel·lular deneurona-com les cèl·lules SH-SY5Y després de l'exposició acitoquininesdurant 24 h. La viabilitat s'expressa com a percentatge del control de DMSO.

2.4. Identificació de citoquinines neuroprotectores en el model de PD induït per SAL

Per a aquestes proves,neuronalLes cèl·lules SH-SY5Y es van diferenciar durant 48 h i després es van cotractar amb 500 uM SAL i cada CK a tres concentracions (0, 1, 1, 10 uM). Tal com mostra la línia de punts de la figura 2A, l'aplicació de la neurotoxina SAL a 500 uM va reduir la viabilitat de les cèl·lules SH-SY5Y diferenciades, segons l'assaig de Calcein AM, en un 30 per cent. La N-acetilcisteïna (NAC) es va utilitzar com a control positiu en aquestes proves a causa del seu efecte neuroprotector anteriorment informat en el mateix model in vitro basat en cèl·lules SH-SY5Y [37]. Es van utilitzar concentracions de 10, 100 i 1000 uM de NAC per induir una recuperació parcial o gairebé completa en el model SAL. NAC va ser capaç d'augmentar la viabilitat cel·lular a una concentració de 100 uM i 1 mM, corresponent a un 83,39 ± 1,74 per cent i un 89,21 ± 2,89 per cent, respectivament. L'activitat protectora de NAC a 100 uM (indicada per la línia discontínua a la figura 2A) es va utilitzar com a llindar de potència per seleccionar CK per a més proves. Segons aquesta configuració, les activitats neuroprotectores biològicament significatives s'han observat amb K3G a 10 uM (81,84 ± 2,36 per cent), cZR a 0,1 uM (81,14 ± 2,30 per cent) i 1 uM (81,53 ± 2,24 per cent) i iPR. uM (82,43 ± 2,51 per cent). Així, iPR i cZR eren neuroprotectors efectius a concentracions micro o submicromolars més baixes que NAC. ElcitoquininaEl cribratge també va revelar que molts altres metabòlits poden augmentar moderadament la viabilitat de cèl·lules SH-SY5Y diferenciades exposades a SAL. Tanmateix, alguns CK provats (inclosos tZR, tZMP, mT, mTR, pT i pTR) van tenir un efecte protector molt petit.

Figura 2. (A)Neuroprotectoractivitat decitoquininesi N-acetilcisteïna (NAC) en el model de PD induït per SALneurona-com les cèl·lules SH-SY5Y. La línia discontínua mostra el llindar de l'efecte NAC en quècitoquininesvan ser seleccionats per a més proves; A continuació, la línia de punts compta el nombre de cèl·lules vives en l'assaig de Calcein AM després de tractar les cèl·lules amb 500 uM de SAL; cèl·lules de control sanes (CTR, DMSO <0,1 per="" cent).="" triplicat="" en="" almenys="" tres="" dies="" separats.="" (b)="" mort="" normalitzada="" de="" cèl·lules="" sh-sy5y="" després="" de="" la="" tinció="" amb="" iodur="" de="" propidi.="" triplicat="" en="" almenys="" cinc="" dies="" independents.="" *="" p="" en="" comparació="" amb="" el="" vehicle="" amb="" 500="" um="" sal,="" #="" p="" en="" comparació="" amb="" el="" vehicle="" sense="" 500="" um="">

Per confirmar, les activitats anti-PD dels CK naturals més actives, les taxes globals de mort cel·lular es van quantificar mitjançant una tinció de iodur de propidi (PI), que (a diferència de les proves de viabilitat basades en el metabolisme cel·lular) només etiqueta cèl·lules amb una integritat de membrana deteriorada, cèl·lules moribundes. , i cèl·lules ja mortes [38]. Els resultats es van normalitzar pel que fa a la taxa de mort cel·lular després del tractament amb SAL només (establert com al 100 per cent). Com es mostra a la figura 2B, la substància de control positiu NAC va reduir significativament les taxes de mort cel·lular tant a 100 com a 1000 uM (fins al 77,3 ± 2,21 per cent i al 77,5 ± 4,44 per cent, respectivament). En general, NAC va demostrar ser unneuroprotectoragent amb activitats comparables a les registrades en altres estudis de manera dependent de la dosi (en el rang 50-5{00 uM) per a cèl·lules SH-SY5Y [37]. L'assaig PI també va demostrar que els CKs cZR, K3G i iPR tenen activitats protectores, especialment cZR, que va reduir la taxa de mort cel·lular a 71,6 ± 5,08 per cent a 0,1 uM. En contrast amb cZR, K3G va invertir els efectes dependents de la dosi, amb una activitat màxima a 10 uM (reduint la taxa de mort cel·lular a 75,0 ± 3,69 per cent) i l'activitat de NPR va assolir el màxim a 1 uM (reduint la taxa a 73,9 ± 4,99 per cent). En conjunt, com es mostra a la figura 2, els CK van proporcionar un comparableneuroprotectoractivitat a 100 uM de NAC segons els assaigs de viabilitat i citotoxicitat. A més, les concentracions efectives de CK com ara cZR i iPR eren molt inferiors a les de NAC, en els rangs submicromolar i micromolar. Observacions prèvies obtingudes després de la doble tinció amb PI i annexina V/PI indiquen que K pot reduir l'apoptosi [39], per la qual cosa també hem investigat els efectes de les CK i NAC sobre l'estrès oxidatiu i l'activació de la caspasa-3,7 (una bona marcador d'apoptosi conegut).

2.5. Les citoquinines redueixen la formació de radicals de superòxid induïda per SAL

L'estrès oxidatiu (SO) és un contribuent patològic clau a diverses malalties neurodegeneratives, i tant la SAL (a > 100 uM) com les tetrahidroisoquinolines són potents inductors de SO [26,40]. Així, també es va mesurar la formació de superòxid (un marcador ROS i important OS) en presència de SAL amb i sense CK o NAC seleccionats. Per assegurar-se que SAL causés un dany del sistema operatiu suficient a les cèl·lules SH-SY5Y per detectar respostes, les cèl·lules es van exposar a 500 uM SAL durant 24 hores, com en el treball anterior [37] i d'acord amb les troballes presentades anteriorment. A continuació, les cèl·lules es van tacar amb dihidroetidi (DHE) per detectar la formació de radicals de superòxid [41, 42]. Com es pot veure a la figura 3A, les cèl·lules es van observar visualment després de l'etiquetatge amb DHE (que proporciona senyals de fluorescència vermella després de la reacció amb superòxid). SAL va induir un clar augment de la fluorescència de DHE, en relació amb els nivells de cèl·lules control i tractades amb NAC. A més, tres CK (cZR, K3G i iPR) van tenir efectes visuals similars a NAC (100 uM) sobre la fluorescència DHE. A més, la quantificació espectrofotomètrica pel que fa als nivells detectats en cèl·lules tractades només amb SAL (establert com al 100 per cent), estava en línia amb l'observació microscòpica. Com es mostra a la figura 3B, el nivell de superòxid normalitzat a les cèl·lules de control sanes (CTR) va ser inferior al 39 per cent, i la substància de control positiu NAC va proporcionar una reducció de moderada a completa de la producció de ROS induïda per SAL a 100 i 1000 uM (fins a 76,3). ± 4,33 i 44,3 ± 5,12 per cent), cosa que suggereix que l'esgotament del glutatió (GSH) té un paper clau en el model [26]. Curiosament, SAL va induir reduccions dramàtiques del contingut de GSH de les cèl·lules SH-SY5Y acompanyades d'una elevació del sistema operatiu, a nivells similars als observats anteriorment en un estudi que també va registrar efectes mediats per NAC sobre la viabilitat cel·lular, la mort cel·lular i el contingut de glutatió [43] . Els resultats que es presenten aquí mostren que el NAC també va reduir la formació de radicals de superòxid a nivells basals (és a dir, nivells en controls tractats amb DMSO). Els ribòsids CK es van provar a concentracions actives (0,1-1 uM) juntament amb K3G i van reduir significativament el contingut de radicals superòxid de les cèl·lules als nivells següents (en relació amb els de les cèl·lules tractades només amb SAL): cZR 80,34 ± 5,99 per cent a 0,1 uM ; K3G 77,1 ± 4,89 per cent a 10 uM; iPR 79,2 ± 5,91 per cent a 1 uM, comparable als efectes de 100 uM NAC. Col·lectivament, les demostracions ortogonals indiquen fortament que una potent activitat anti-OS té un paper clau en els efectes protectors de NAC i CK en el model de PD induït per SAL. Altres autors també han observat una correlació entre la millora del sistema operatiu i la neuroprotecció [29], i diversos estudis han trobat que K i BAP poden millorar directament les activitats del sistema operatiu [44] mitjançant la formació de complexos amb ions Cu2 més, donant lloc a superòxid dismutasa. com activitat [45,46]. Tanmateix, els CK també s'han descrit com a antioxidants indirectes amb efectes mediats per la inducció del factor nuclear eritroide 2-relacionat amb el factor 2 (NRF2) la via de resposta antioxidant (iPR) [22] o la restauració parcial de la glutatió peroxidasa i les activitats SOD ( K) [16]. A més, sembla que K en téneuroprotectoractivitats contra la lesió del sistema operatiu induïda per H2O2 a les cèl·lules SH-SY5Y [17]. Ambdós tipus d'activitat anti-ROS reportada de CKs podrien explicar els efectes de cZR, K3G i iPR en la reducció de radicals superòxids en el model de PD de cèl·lules SH-SY5Y induïdes per SAL [47–50].

Figura 3. (A) Microfotografies que mostren l'estrès oxidatiu induït per SAL i les activitats de reducció de l'estrès oxidatiu decitoquininesen humans diferenciatsneurona-com les cèl·lules SH-SY5Y visualitzades per microscòpia de fluorescència després de l'etiquetatge de dihidroetidi (DHE). Barres=50 um. Les imatges mostren cèl·lules tractades amb solució de DMSO (controls), només 500 uM de salsolinol (SAL) i combinacions de 500 uM de SAL i 1000 uM de NAC (més NAC), 0,1 uM de cZR (més de cZR); 10 uM K3G (més K3G), 1uM iPR (més iPR) durant 24 h abans de la tinció amb DHE. (B) Formació de radicals superòxid induïda per SAL icitoquininao activitat protectora de la N-acetilcisteïna (NAC). El gràfic mostra la quantificació de cèl·lules tenyides de DHE mitjançant el lector de microplaques Infinite M200 Pro (Tecan, Àustria). Triplicat en almenys cinc dies independents. * P en comparació amb el vehicle amb 500 uM SAL, # P en comparació amb el vehicle sense 500 uM SAL.