Part 2|L'acteòsid suprimeix l'osteoclastogènesi mediada per RANKL mitjançant la inhibició de la inducció de C-Fos i la via NF-kB i atenuant la producció de ROS
Mar 06, 2022
Per obtenir més informació, poseu-vos en contacte amb ali.ma@wecistanche.com
Part 2|Com els acteòsids afavoreixen el creixement ossi?
Feu clic a Cistanches amb Acteoside
Discussió
La remodelació òssia està estretament regulada per l'equilibri entre la formació òssia per part dels osteoblasts i la reabsorció òssia per part dels osteoclasts. La reabsorció òssia prolongada i excessiva provoca un desequilibri del recanvi esquelètic, donant lloc a malalties de reabsorció òssia. Per explorar els efectes deacteòsida l'osteoclastogènesi, vam utilitzar dos macròfags, BMM de cultiu primari i cèl·lules RAW264.7. Aquestes cèl·lules es van estimular amb RANKL per diferenciar-se en osteoclasts en presència i absència deacteòsid. Ho vam demostrar per primera vegadaacteòsidinhibeix la diferenciació i formació d'osteoclasts.ActeòsidEl mateix a les concentracions examinades no va provocar una disminució de la viabilitat dels macròfags cultivats primaris tant en condicions de creixement com de diferenciació.ActeòsidEl tractament també va disminuir l'activitat de reabsorció dels osteoclasts madurs. Aquests resultats suggereixen que l'acteòsid suprimeix la formació d'osteoclàstics dels macròfags i l'activitat de reabsorció dels osteoclasts. Els resultats del nostre sistema de cultiu, que no incloïa osteoblasts ni cèl·lules estromals, també suggereixen que l'acteòsid prevé la formació d'osteoclasts actuant directament sobre els precursors dels osteoclasts. RANKL activa els MAPK inclosos p38, ERK i JNK. Aquestes tres quinases estan implicades en la diferenciació osteoclàstica precoç i, per tant, la seva inhibició farmacològica o amb una transfecció de JNK dominant-negativa suprimeix l'osteoclastogènesi induïda per RANKL [29]. Els nostres resultats ho van revelaracteòsidEl pretractament va inhibir totes aquestes cinases, cosa que indica una regulació a la baixa inespecífica de les MAPK. Aquest resultat difereix en part de l'informe anterior que l'EGCG, el principal compost antiinflamatori de la camiseta verda, va atenuar específicament l'activació de JNK sense afectar o l'activació de p38 en els BMM estimulats per RANKL [7]. També s'ha informat que el paeonol, un compost antiinflamatori derivat d'una herba xinesa, inhibeix la fosforilació ERK i p38, però no brossa, a les cèl·lules RAW264.7 estimulades per RANKL[30]. En canvi, la silibinina, un nou inhibidor a l'os, va atenuar l'activació induïda per rangs de p38, ERK i JNK [31]. Aquestes troballes suggereixen que els efectes dels compostos anti-resorpció sobre l'activació de MAPK per RANKL depenen del compost, tot i que els tres MAPK estan implicats en l'osteoclastogènesi primerenca. Tenint en compte l'observació que l'acteòsid va atenuar els nivells de p-JNK en els BMM estimulats per RANKL, fins i tot a 1 mm, el bloqueig de JNK en lloc de p38 MAPK o ERK semblava ser un esdeveniment més específic en elacteòsid-anti-osteoclastogènesi mediada a les cèl·lules. Tot i que l'acteòsid a la mateixa concentració no va reduir el nombre d'osteoclasts en BMM, hi va haver una disminució significativa de la formació de pous mitjançant el tractament amb acteòsid. També vam trobar que el pretractament amb SP600125, un inhibidor farmacològic específic de JNK, va prevenir de manera espectacular la formació d'osteoclasts (dades no mostrades). Col·lectivament, aquestes troballes suggereixen que la senyalització mediada per JNK està estretament relacionada amb la supressió de l'osteoclastogènesi mediada per acteòsids estimulada per RANKL. La senyalització NF-kB regula els esdeveniments cel·lulars, com ara l'apoptosi, la progressió del cicle cel·lular, l'adhesió cel·lular, la producció de citocines i la supervivència als macròfags [32]. La senyalització NF-kB també és necessària per al desenvolupament dels osteoclasts, que s'ha demostrat per l'aparició d'osteopetrosi en ratolins NF-kB-knockout [33,34]. Per tant, es proposa que la inhibició de NF-kB sigui un objectiu eficaç per als agents anti-resortius per regular a la baixa l'activitat dels osteoclasts i tractar l'osteoporosi. La modificació posterior a la traducció de les proteïnes de la subfamília NF-kB és crucial per modular l'activitat de NF-kB. Especialment, la fosforilació de la subunitat p65 i la cinasa IkB és fonamental perquè NF-kB indueixi l'osteoclastogènesi [7]. Les nostres troballes actuals van demostrar que l'estimulació RANKL va augmentar l'activitat d'unió a l'ADN de NF-kB i la fosforilació de la subunitat p65 i Ikea tant a les cèl·lules BMM com a RAW264.7. El pretractament amb acteòsid va inhibir aquests augments induïts per RANKL, donant lloc a una activitat de NF-kB regulada a la baixa. En conseqüència, aquests resultats suggereixen que, a més dels MAPK, la senyalització NF-kB és l'objectiu principal de l'acteòsid en la inhibició de la diferenciació i formació d'osteoclasts a partir de macròfags estimulats per RANKL. A més de la senyalització NF-kB, la via c-Fos/c-Jun/NFATc1 juga un paper clau en el desenvolupament dels osteoclasts, per la qual cosa la manca de qualsevol d'aquestes proteïnes pot aturar l'osteoclastogènesi [35,36]. En aquest estudi, vam trobar que l'acteòsid va prevenir l'expressió de c-Fos i NFATc1 induïda per RANKL a nivells d'ARNm i proteïnes. JNK és una quinasa aigües amunt de c-Jun, que es requereix per a l'expressió NFATc1 i l'osteoclastogènesi en resposta a RANKL [29] . El bloqueig de la via JNK/c-Jun amb un inhibidor de JNK va disminuir la formació d'osteoclasts induïda per RANKL i l'expressió c-Fos i NFATc1 [7]. Els nostres resultats i troballes anteriors suggereixen que la inhibició de la senyalització mediada per JNK per acteòside està estretament associada amb la prevenció de c-Fos i NFATc1 mediada per RANKL.
expressió, que suprimeix la diferenciació dels osteoclasts en els macròfags. Diferències en els efectes deacteòsida les cèl·lules BMM i RAW264.7 es deuen almenys en part a diferències en la sensibilitat a la inhibició de JNK. El TNF-a pot induir l'osteoclastogènesi independentment de la senyalització RANKL-RANK [37]. IL-1 és un potent mediador de la destrucció òssia patològica induïda per la deficiència d'estrògens o la inflamació[7]. La interrupció del receptor IL-1 tipus I o la senyalització IL-1 pot revertir la pèrdua òssia induïda per l'ovariectomia [38] o l'artritis reumatoide [39]. Aquest estudi va demostrar la capacitat deacteòsidper reduir la producció de citocines inflamatòries com el TNF-a, IL-1b i IL-6 als macròfags. Es creu que l'acteòsid inhibeix la producció de citocines inflamatòries suprimint la senyalització p38 cinasa i ERK perquè l'activació d'ERK1/2, p38 MAPK o totes dues es requereix per a la producció d'aquestes citocines induïda per lipopolisacàrids als macròfags [40,41]. També s'ha informat que la luteolina, un compost inflamatori, suprimeix la producció de mediadors inflamatoris mitjançant la inhibició de l'activació de p38 MAPK [42]. En aquest estudi, també vam trobar que l'acteòsid atenuava la pèrdua òssia en ratolins ovariectomitzats, com ho demostra la força màxima de fractura restaurada. a la diàfisi mitjana del fèmur dret i la desaparició de l'os cortical osteoporòtic. L'administració oral d'acteòsids va regular a la baixa els augments induïts per l'ovariectomització dels nivells sèrics d'IL-1b i IL-6, però no ALP. L'augment dels nivells sèrics de calci, TRAP i OC a OVX també es va inhibir pel tractament oral amb acteòsid, cosa que suggereix que l'acteòsid atenua l'alteració dels biomarcadors específics per a la formació òssia i la reabsorció. Com que l'osteoporosi es caracteritza per una densitat de massa reduïda i una microarquitectura òssia trabecular deteriorada, la pèrdua d'os trabecular induïda per OVX i l'alteració dels paràmetres morfomètrics es van inhibir significativament per l'administració oral d'acteòsids. Aquestes troballes suggereixen queacteòsides pot utilitzar com a agent anti-resortiu per tractar l'osteoporosi revertint l'activació desequilibrada dels osteoclasts. Tanmateix, els osteoblasts són el principal factor responsable de la formació d'os nous. Per tant, es necessita un agent capaç d'augmentar la proliferació o diferenciació dels osteoblasts per millorar la formació òssia [30]. En canvi, vam trobar que l'acteòsid no va afectar la diferenciació o la mineralització dels osteoblasts a les cèl·lules de medul·la òssia tractades amb DAG. En conjunt, els nostres resultats suggereixen que l'acteòsid té un efecte anti-resorció, però no afecta directament la formació òssia. Es necessiten experiments més detallats que analitzin paràmetres específics de l'os in vivo i in vitro per aclarir si l'acteòsid beneficia o no l'osteoblastogènesi. El present estudi destaca l'efecte inhibidor de l'acteòside sobre la diferenciació dels osteoclasts i la reabsorció òssia mitjançant la supressió de MAPK i diversos factors transcripcionals com NF-kB. , c-Fos i NFATc1. Les dades suggereixen dos possibles mecanismes pels quals l'acteòsid té aquests beneficis. Una possibilitat és queacteòsid.
inhibeix l'osteoclastogènesi pel seu potencial antioxidant. Nombrosos estudis han demostrat que la producció de ROS mediada pel receptor pot servir com a mediador de senyalització aigües avall [43–45]. Algunes quinases i factors de transcripció són sensibles a l'estat redox cel·lular, que afecta diversos esdeveniments cel·lulars. RANKL estimula la producció de ROS, que media les respostes cel·lulars induïdes per RANKL per a la diferenciació dels osteoclasts [24]. El pretractament amb antioxidants, com la N-acetil cisteïna i el glutatió, va prevenir la generació de ROS mediada per RANKL, cosa que indica que els antioxidants redueixen la pèrdua òssia reduint la reproducció induïda per RANKL [24]. D'acord amb aquestes troballes, el present estudi ho revelaacteòsidatenua les ROS intracel·lulars produïdes en BMM durant la diferenciació dels osteoclasts de manera dependent de la dosi. Aquesta observació suggereix que la inhibició de l'osteoclastogènesi es deu almenys en part al potencial antioxidant de l'acteòsid. També suggerim que l'acteòsid podria regular a la baixa el Ca2 més l'afluència, suprimint així l'osteoclastogènesi. Recentment s'ha informat que l'acteòsid inhibeix les al·lèrgies de tipus I mitjançant la regulació a la baixa / senyalització NFAT i JNK a les cèl·lules basòfiles [46]. El receptor sensible al calci està estretament relacionat amb la regulació de l'osteoclastogènesi [47]. Aquesta relació suggereix que hi participa un canal de calciacteòsid-inhibició induïda de la diferenciació i formació d'osteoclasts. Tanmateix, calen estudis addicionals per explorar els mecanismes exactes pels quals l'acteòsid actua com a agent anti-resorció mitjançant la modulació del Ca2 més l'homeòstasi.
En conclusió, les nostres troballes actuals mostren que l'acteòsid inhibeix la diferenciació d'osteoclasts induïda per RANKL dels macròfags BMM i RAW264.7 i suprimeix la reabsorció òssia per part dels osteoclasts madurs.Acteòsidtambé impedeix l'activació induïda per RANKL de tres MAPK i factors de transcripció coneguts com NF-kB, c-Fos i NFATc1, així com la producció de citocines inflamatòries com TNF-a, IL-1b, i IL-6. A més, l'administració oral d'acteòsid atenua l'osteoporosi induïda per l'ovariectomia, tot i que no afecta l'osteoblastogènesi de les cèl·lules de la medul·la òssia. Col·lectivament, aquestes troballes suggereixen que el costat CTE té papers beneficiosos en la reducció de la formació i l'activitat dels osteoclasts com a potent agent anti-resorció.
Informació de suport
Figura S1 Estructura química de l'acteòsid.
(TIF) Figura S2Acteòsidevita la formació de pous induïda per RANKL en BMM. Els BMM es van pretractar amb les dosis indicades deacteòsiddurant 2 h en plaques de pou 24- recobertes d'os i estimulades amb 50 ng/ml M-CSF i 100 ng/ml RANKL durant 7 dies. Es va observar la formació de pous sota microscòpia òptica. B, els BMM es van cultivar amb M-CSF i RANKL en presència de diversosacteòsidconcentracions ({{0}}–20 mM), i 7 dies després, l'àrea resorbida es va quantificar a partir de 3 experiments independents i es va expressar com a percentatge de control (n=4 per experiment). *p,0,05, **p,0,01 i ***p,0,001 vs. cèl·lules cultivades amb M-CSF i rang.
La figura S3 L'acteòsid atenua la producció de citocines inflamatòries a les cèl·lules RAW264.7 estimulades per RANKL.
Les cèl·lules es van pretractar amb les concentracions creixents (0-10 mM) deacteòsiddurant 2 h seguit d'estimulació amb 100 ng/ml RANKL durant 48 h. Els nivells de TNF-a, IL-1b i IL{-6 es van determinar mitjançant kits ELISA. ***p,0,001 vs. cèl·lules sense RANKL i acteòsid. #p,0.05 i ##p,0.01 vs. cèl·lules estimulades només amb RANKL.
Aportacions de l'autor
Va concebre i dissenyar els experiments: S-YL J-CL. Realitzat els experiments: S-YL K-SL S-HK SHY. S'han analitzat les dades: K-SL S-YL J-CL. Reactius/materials/eines d'anàlisi aportats: S-YL SHY J-CL. Va escriure el treball: S-YL SHY J-CL.
Referències
1 Rho J, Takami M, Choi Y (2004) Osteoimmunologia: interaccions dels sistemes immunològic i esquelètic. Molècules i cèl·lules 17: 1–9.
2. Del Fattore A, Capannolo M, Rucci N (2010) Os i medul·la òssia: el mateix òrgan. Arxius de Bioquímica Biofísica 503: 28–34.
3. Rachner TD, Khosla S, Hofbauer LC (2011) Osteoporosis: now and the future.Lancet 377: 1276–1287.
4. Sturge J, Caley MP, Waxman J (2011) Metàstasi òssia en càncer de pròstata: estratègies terapèutiques emergents. Nature Reviews Clinical Oncology 8: 357–368.
5. Goltzman D (2002) Descobriments, drogues i trastorns esquelètics. Nature ReviewsDrug Discovery 1: 784–796.
6. Rodan GA, Martin TJ (2002) Enfocaments terapèutics a les malalties òssies. Ciència289: 1508–1514.
7. Lee JH, Jin H, Shim HE, Kim HN, Ha H, et al. (2010) L'epigalocatequina -3-gallat inhibeix l'osteoclastogènesi mitjançant la regulació a la baixa de l'expressió de c-Fos i la supressió del senyal del factor nuclear-kappaB. Molecular Pharmacology 77: 17–25.
8. Kim HN, Lee JH, Jin WJ, Ko S, Jung K, et al. (2012) MS-275, un inhibidor de la benzamida histona desacetilasa, prevé l'osteoclastogènesi mitjançant la regulació a la baixa de l'expressió de Fos i suprimeix la pèrdua òssia en ratolins. Revista Europea de Farmacologia 691: 69–76.
9. Kim T, Ha H, Shim KS, Cho WK, Ma JY (2013) L'efecte anti-osteoporòtic de Yijung-tang en un model de rata ovariectomitzada mediat per la inhibició de la diferenciació d'osteoclasts. Journal of Ethnopharmacology 146: 83–89.
10. Nakanishi A, Litsuka N, Tsukamoto J (2013) L'oli de peix suprimeix la reabsorció òssia mitjançant la inhibició de l'osteoclastogènesi mitjançant la disminució de l'expressió de M-CSF, PU.1, MITF i RANK en rates ovariectomitzades. Informes de medicina molecular 7:1896–1903.
11. Bar-Shavit Z (2007) L'osteoclast: una cèl·lula osteoimmune multinucleada, d'origen hematopoètic, que reabsorbeix els ossos. Journal of Cellular Biochemistry 102: 1130–1139.
12. Takahashi N, Maeda K, Ishihara A, Uehara S, Kobayashi Y (2011) Mecanisme regulador de l'osteoclastogènesi per senyals RANKL i Wnt. Fronteres en biociència 16: 21–30.
13. Jules J, Zhang P, Ashley JW, Wei S, Shi Z, et al. (2012) Bases moleculars del requisit de l'activador del receptor de la senyalització del factor nuclear kB per a l'osteoclastogènesi mediada per interleucina 1-. The Journal of Biological Chemistry 287: 15728–15738.
14. Li C, Yang Z, Li Z, Ma Y, Zhang L, et al. (2011) L'àcid maslínic suprimeix l'osteoclastogènesi i prevé la pèrdua òssia induïda per l'ovariectomia mitjançant la regulació de les vies de senyalització NF-kB i MAPK mediades pel rang. Journal of Bone and Mineral Research 26: 644–656.
15. Tomoda M, Miyamoto H, Shimizu N (1994) Característiques estructurals i activitat anti-complementària de rehmannan SA, un polisacàrid de l'arrel de Rehmannia glutinosa. Chemical and Pharmaceutical Bulletin (Tòquio) 42: 1666–1668.
16. Kim H, Lee E, Lee S, Shin T, Kim Y, et al. (1998) Efecte de Rehmannia glutinosa sobre una reacció al·lèrgica de tipus immediat. International Journal of Immunopharmacology 20: 231–240.
17. Schapoval EE, Vargas MR, Chaves CG, Bridi R, Zuanazzi JA, et al. (1998) Activitats antiinflamatòries i antinociceptives d'extractes i compostos aïllats de Stachytarpheta cayennensis. Revista d'Etnofarmacologia 60:53–59.
18. Xiong Q, Hase K, Tezuka Y, Tani T, Namba T, et al. (1998) Activitat hepatoprotectora dels feniletanoides deCistanche deserticola. Planta Medica 64: 120–125.
19. Chun JC, Kim JC, Hwang IT, Kim SE (2002) L'acteòsid del gluten de Rehmannia sanulifica l'activitat del paraquat a Cucumis sativus. Bioquímica i fisiologia dels pesticides 72: 153–159.
20. Kim SS, Son YO, Chun JC, Kim SE, Chung GH, et al. (2005) Propietat antioxidant d'un component actiu purificat de les fulles de Rehmannia glutinosa tolerant al paraquat. Informe Redox 10: 311–318.
21. Son YO, Lee SA, Kim SS, Jang YS, Chun JC, et al. (2011) L'acteòsid inhibeix la melanogènesi a les cèl·lules B16F10 mitjançant l'activació d'ERK i la regulació a la baixa de la tirosinasa. The Journal of Pharmacy and Pharmacology 63: 1309–1319.
22. Yu JY, Lee SY, Son YO, Shi X, Park SS, et al. (2012) La presència contínua d'H2O2 indueix la inhibició del creixement i la citotoxicitat mediada per mitocondrials, MAPK i caspases independents en fibroblasts gingivals humans. Toxicologia In Vitro 26: 561–570.
23. Lu J, Yu JY, Lim SS, Son YO, Kim DH, et al. (2013) Mecanismes cel·lulars dels efectes citotòxics dels metabòlits de zearalenona a-zearalenona i b-zearalenona en macròfags RAW264.7. Toxicologia in vitro 27: 1007–1017.
24. Ha H, Kwak HB, Lee SW, Jin HM, Kim HM, et al. (2004) Les espècies reactives d'oxigen medien la senyalització RANK en osteoclasts. Investigació cel·lular experimental301: 119–127.
25. Cho ES, Kim MK, Son YO, Lee KS, Park SM, et al. (2012) Els efectes de la rosiglitazona sobre la diferenciació osteoblàstica, la formació d'osteoclasts i la reabsorció òssia. Molècules i cèl·lules 33: 173–181.
26. Son YO, Jang YS, Heo JS, Chung WT, Choi KC, et al. (2009) El factor inductor de l'apoptosi té un paper crític en la mort cel·lular picnòtica independent de la caspasa a les cèl·lules exposades al peròxid d'hidrogen. Apoptosi 14: 796–808.
27. Kook SH, Jeon YM, Park S, Lee JC (2013) Els fibroblasts periodontals modulen la proliferació i la diferenciació osteogènica de cèl·lules mare embrionàries mitjançant la producció de factors de creixement de fibroblasts. Revista de Periodontologia en premsa
28. Qi W, Yan YB, Lei W, Wu ZX, Zhang Y, et al. (2012) Prevenció de l'osteoporosi en desús en rates mitjançant extracte de Cordyceps Sinensis. Osteoporosis International 23:2347–2357.
29. Ikeda F, Nishimura R, Matsubara T, Tanaka S, Inoue J, et al. (2004) Els papers crítics de la senyalització c-Jun en la regulació de la família NFAT i RANKL regula la diferenciació dels osteoclasts. The Journal of Clinical Investigation 114: 475–484.
30. Tsai HY, Lin HY, Fong YC, Wu JB, Chen YF, et al. (2008) El paeonol inhibeix l'osteoclastogènesi induïda per RANKL mitjançant la inhibició de la via ERK, p38 i NF-kappa B. Revista Europea de Farmacologia 588: 124–133.
31. Kim JH, Kim K, Jin HM, Song I, Youn BU, et al. (2009) La silibinina inhibeix la diferenciació dels osteoblasts mediada pels membres de la família del TNF. Molècules i cèl·lules 28: 201–207.
32. Napetschnig J, Wu H (2013) Base molecular de la senyalització NF-kB. Revisió anual de biofísica 42: 443–468.
33. Franzoso G, Carlson L, Xing L, Poljak L, Shores EW, et al. (1997) Necessitat de NF-kappaB en el desenvolupament d'osteoclasts i cèl·lules B. Gens i desenvolupament11: 3482–3496.
34. Iotsova V, Caamano J, Loy J, Yang Y, Lewin A, et al. (1997) Osteopetrosi en ratolins sense NF-kappaB1 i NF-kappaB2. Nature Medicine 3: 1285–1289.
35. Teitelbaum SL (2004) RANKing c-Jun en el desenvolupament dels osteoclasts. The Journal of Clinical Investigation 114: 463–465.
36. Takayanagi H (2005) Coneixement mecanicista de la diferenciació d'osteoclasts en osteoimmunologia. Journal of Molecular Medicine (Berl) 83: 170–179.
37. Cho ES, Lee KS, Son YO, Jang YS, Lee SY, et al. (2010) La força mecànica compressiva augmenta l'osteoclastogènesi dels macròfags de la medul·la òssia mitjançant l'activació de la senyalització mediada per c-Fms. Journal of Cellular Biochemistry 111: 1260–1269.
38. Lorenzo JA, Naprta A, Rao Y, Alander C, Glaccum M, et al. (1998) Els ratolins que no tenen el receptor d'interleucina-1 tipus I no perden massa òssia després de l'ovariectomia. Endocrinology 139: 3022–3025.
39. Abramson SB, Amin A (2002) El bloqueig dels efectes de la IL-1 en l'artritis reumatoide protegeix els ossos i el cartílag. Reumatologia (Oxford) 41: 972–980.
40. Hwang JM, Yu JY, Jang YO, Kim BT, Hwang KJ, et al. (2010) Un compost d'àcid fenòlic d'urea inhibeix la producció d'òxid nítric i citocines proinflamatòries induïda per lipopolisacàrids en cultiu cel·lular. InternationalImmunopharmacology 10: 526–532.
41. Fang M, Lee SY, Park SM, Choi KC, Lee YJ, et al. (2011) Potencial antiinflamatori de Phaseolus calcaratus Roxburgh, una medicina oriental, en macròfags 264,7 crus simulats amb LPS. The Journal of Pharmacy and Pharmacology 63:120–128.
42. Lee JW, Ahn JY, Hasegawa S, Cha BY, Yonezawa T, et al. (2009) Efecte inhibidor de la luteolina sobre la diferenciació i funció dels osteoclasts. Citotecnologia 61:125–134.
43. Cosentino-Gomes D, Rocco-Machado N, Meyer-Fernandes JR (2012) Cell signaling through protein kinase C oxidation and activation. International Journal Molecular Sciences 13: 10697–10721.
44. Lee JC, Son YO, Pratheeshkumar P, Shi X (2012) Estrès oxidatiu i carcinogènesi metàl·lica. Biologia i medicina radicals lliures 53: 742–757.
45. Nguyen Ngoc TD, Son YO, Lim SS, Shi X, Kim JG, et al. (2012) El fluorur de sodi indueix l'apoptosi a les cèl·lules mare embrionàries del ratolí mitjançant vies depenents de ROS i mediades per caspasa i JNK. Toxicologia i farmacologia aplicada 259: 329–337.
46. Motojima H, Villareal MO, Iijima R, Han J, Isoda H (2013) L'acteòsid inhibeix l'al·lèrgia de tipus I mitjançant la regulació a la baixa de les vies de senyalització Ca/NFAT i JNK MAPK a les cèl·lules basòfiles. Revista de medicina natural a la premsa
47. Caudrillier A, Hurtel-Lemaire AS, Wattel A, Cournarie F, Godin C, et al. (2010) El ranelat d'estronci disminueix l'activador del receptor de la diferenciació osteoclàstica induïda pel lligand kB del factor nuclear in vitro: implicació del receptor sensible al calci. Molecular Pharmacology 78: 569–576.
