Com l'extracte d'aigua de Cistanche afavoreix el peristaltisme intestinal i millora el restrenyiment?

Shuai Yan,1,2 Yin-zi Yue,1 Xiao-peng Wang,1 Hong-li Dong,1 Shu-guang Zhen,1 Ben-sheng Wu,1 i Hai-hua Qian3

Es va informar que la medicina tradicional xinesa tenia bons efectes en el tractament del restrenyiment funcional. Aquest treball va intentar demostrar els efectes dels extractes aquosos d'HerbaCistanche(AEHC) sobre el tractament de STC i per determinar els possibles mecanismes mitjançant un model de restrenyiment de trànsit lent (STC) induït per loperamida. Es va realitzar HPLC per a la identificació i confirmació dels components bioactius a l'AEHC. Es va trobar que l'AEHC va atenuar les respostes de STC en funció de l'augment de la quantitat fecal, el contingut d'humitat i la taxa de trànsit intestinal, així com els nivells sèrics de GAS, MTL, SS i CGRP. També van augmentar els nivells de proteïnes i ARNm del c-kit, etiquetatge de cèl·lules intersticials de Cajal (ICC). Mentrestant, només va augmentar el nivell de proteïnes de SCF, un lligand de ckit. L'anàlisi de les nostres dades va suggerir que, òbviament, l'AEHC podria millorar la funció de l'ICC mitjançant una via de senyalització que implica PI3K, SCF i c-kit i millorar els índexs de motilitat del còlon com GAS, MTL, SS i CGRP. És interessant assenyalar que l'AEHC semblava ser eficaç contra el restrenyiment, de manera que calen més experiments per aclarir els mecanismes exactes implicats.

Per a més informació poseu-vos en contacte amb:Joanna.jia@wecistanche.com

Els acteòsids en cistanche tenen bons efectes antioxidants

1. Introducció

El restrenyiment és una malaltia gastrointestinal funcional comú i un problema de salut pública, caracteritzat per una defecació contínuament difícil, poc freqüent o incompleta [1]. La prevalença del restrenyiment varia des del 0,7% al 81% a tot el món, especialment a la gent gran [2, 3]. El restrenyiment de trànsit lent (STC) és una queixa gastrointestinal comuna entre el 13 i el 37% dels pacients amb restrenyiment crònic resistent al tractament [4, 5]. Les dades epidemiològiques indiquen una major incidència de STC entre les dones joves que els homes [6]. El STC causa restrenyiment intractable, mostrant poca resposta al tractament conservador i una tendència al trastorn neurodegeneratiu. No és tan senzill com una malaltia funcional, requereix un tractament invasiu i agressiu [7].

Una sèrie de fàrmacs químics actuals com ara laxants osmòtics o secretors i agents de volum s'utilitzen universalment per

tractar el restrenyiment [8], tot i que les seves aplicacions són limitades a causa de les altes despeses i dels efectes secundaris abdominals com ara dolor, rampes i inflor [9]. Actualment, la regulació del tracte gastrointestinal és el focus principal de les teràpies de restrenyiment. La cisaprida es va generar primer com a agent de promotilitat per al tractament de la malaltia gàstrica, però després es va retirar a causa del risc d'arítmies cardíaques [10].

Tegaserod és un antagonista selectiu del receptor de 5-hidroxitriptamina que pot estimular el peristalsi i la secreció intestinals [11, 12]. La prucaloprida és un nou derivat de dihidrobenzofuran carboxamida i agonista del receptor 5-HT amb una alta selectivitat i especificitat, que pot millorar la motilitat gàstrica, l'intestí prim i el còlon i funciona més ràpidament en la dinàmica [13–15]. Com a derivat de la prostaglandina E1, la lubiprostona pot activar selectivament el canal CIC per promoure la secreció gastrointestinal i augmentar els efectes de la transmissió intestinal [16].

La motilitat en el restrenyiment és un problema molt estès, però la seva etiologia encara no està clara. No obstant això, evidències convincents han demostrat la contribució de les cèl·lules intersticials de Cajal (ICC) a la patogènesi del restrenyiment [17]. L'ICC es troba entre les terminacions nervioses i les cèl·lules musculars llises del tracte gastrointestinal. L'ICC és generalment reconegut com a cèl·lules marcapassos per a l'activitat gastrointestinal i com a mediadors de transmissió neuromuscular [18]. Els estudis han indicat que la densitat d'ICC al còlon dels pacients amb restrenyiment de trànsit lent és notablement més baixa en comparació amb la dels pacients normals [19]. En conseqüència, una disminució del nombre d'ICC pot provocar una escassetat d'activitat d'ona lenta, afectant així la resposta contràctil i induint un trànsit retardat en pacients amb restrenyiment de trànsit lent. Per a aquest punt, la millora de l'ICC amb productes farmacèutics pot ser crucial per curar el restrenyiment de trànsit lent.

Diversos medicaments a base d'herbes i la fórmula tradicional xinesa Mula han cridat l'atenció recentment com a terapèutiques noves per al tractament del restrenyiment crònic com a resultat de la millora de la producció de femta [20, 21]. HerbaCistancheés una medicina herbal tradicional que s'utilitza en el tractament de la malaltia renal crònica, la infertilitat femenina, la menorràgia profusa i la impotència [22, 23]. HerbaCistancheprevé l'apoptosi de les neurones cerebrals expressant factors relacionats amb l'apoptosi i factors neurotròfics a les cèl·lules MES23.5 [24]. Herba Cistanche també ha demostrat potencial farmacèutic en el tractament de la síndrome de deficiència de ronyó-yang Yang-Qi. Un estudi recent ha demostrat que HerbaCistancheaugmenta la respiració mitocondrial i l'estat antioxidant del glutatió en els cardiomiòcits H9c2 [25].

TCM creu que el restrenyiment té una estreta relació amb els ronyons. Obrint-se als genitals externs i l'anus, el ronyó regeix la micció i la defecació. El transport dels residus es basa en la promoció del qi renal i l'alimentació del yin renal. Si el yang del ronyó és deficient o s'apaga el foc de la vida, la congestió freda de l'intestí gros provocarà l'estancament dels residus. El restrenyiment també és causat per un moviment intestinal sec, ja que la deficiència d'essència renal no genera prou líquid [26].

HerbaCistancheés una herba unificant comuna, de sabor dolç i salat i de naturalesa càlida. Atribuït a l'intestí gros i als meridians renals, pot tonificar el yang del ronyó i humitejar l'intestí per alleujar el restrenyiment. Aquesta herba única i els seus preparats farmacèutics xinesos s'han utilitzat àmpliament per tractar el restrenyiment amb una eficàcia notable [27].

A la Xina, els efectes d'HerbaCistancheLes arrels del restrenyiment s'han registrat [28, 29] i es refereixen a la Materia Medica xinesa de Shen Nong com les "tiges suculentes seques delCistancheespècies" [30]; tanmateix, prova científica sobre l'efecte d'HerbaCistancheLes arrels del restrenyiment no han existit fins ara, la dosi clínicament efectiva és de 20 g per dia a la farmacopea xinesa i l'efecte clínic no augmenta més amb la dosi.

Des d'HerbaCistancheés tan escassa [31], l'estandardització de la seva dosi clínica per al tractament de la STC mitjançant un estudi experimental no només prevé el fracàs del tractament a causa d'una dosi inadequada, sinó que també allunya els pacients de pèrdues econòmiques i fins i tot d'accidents de medicació per ús excessiu. Esperem

els resultats podrien establir una base científica per a nous fàrmacs per al restrenyiment. Per tant, és important investigar l'herba aquosaCistanche'sfunció de la promoció intestinal i la seva acció sobre l'ICC en el present estudi.

2. Materials i Mètodes

2.1. Preparació d'Extracte Aquós d'Herba Cistanche.

Tot HerbaCistanchees van comprar a Nanjing Haichang Chinese Medicine Group Co., Ltd. (Nanjing, Xina), que es van collir, recollir i processar seguint les pràctiques etnobotàniques estàndard de les plantacions de la zona de Sinkiang de la Xina. La identitat de la planta va ser constatada morfològicament pel professor Tu Lin Lu de la Universitat de Medicina Xinesa de Nanjing, Nanjing, Xina. Es va dipositar un exemplar de val (NUCMCHS-2015628) a la Facultat de Ciències de la Salut de la Universitat de Medicina Xinesa de Nanjing, Nanjing, Xina.

Llesques d'herbaCistanche, amb un pes de 500 g, es van polveritzar amb una batedora elèctrica i es van extreure en 5000 ml d'aigua destil·lada, després de la qual cosa es va purificar l'extracte aquós a 100 C durant 2 h mitjançant un equip d'extracció circulant.

porus de membrana (Millipore, Billerica, MA, EUA) i el residu obtingut dels extractes es van dissoldre en 4000 ml d'aigua. Després de l'extracció per reflux, es van recollir els extractes i es van evaporar per obtenir el producte de mostra final. Els extractes aquosos es van concentrar a pellets secs (1 g/ml) mitjançant a

per al seu ús posterior. Les mostres sòlides es van reconstituir en aigua destil·lada per donar les dosis requerides de 10, 20 i 40 mg/kg de pes corporal per a l'experiment.

2.2. Animals.

El protocol experimental utilitzat en aquest estudi va ser revisat i aprovat basant-se en procediments ètics i atenció científica pel Comitè Institucional de Cura i Ús d'Animals de l'Hospital de Medicina Tradicional Xinesa de Suzhou, Suzhou, Xina (SHTCM-IACUC; número d'aprovació: PNU{{2} }). Totes les rates mascles (soca Sprague Dawley) amb ag es van comprar al Centre d'Investigació Animal de Laboratori de Xangai d'acord amb les directrius dels Instituts Nacionals de Salut. Els animals tenien accés gratuït a una dieta estàndard (AIN-93 M) i aigua de l'aixeta ad libitum i es van allotjar individualment en un percentatge d'humitat relativa d'acer inoxidable i es van exposar a 12 hores de llum natural i 12 hores de foscor diàries.

2.3 Disseny experimental.

La loperamida es va utilitzar per induir el restrenyiment a les rates d'acord amb estudis anteriors [32, 33]. Un total de 60 rates es van dividir aleatòriament en 5 grups (per grup): A: grup normal (NG), B: grup model (grup tractat amb Lop més vehicle), C: un grup de rates de restrenyiment tractades amb extracte aquós baix de Herba Cistanche (grup tractat amb Lop més LAEHC), D: un grup de rates amb restrenyiment tractades amb extracte aquós mitjà d'Herba Cistanche (grup tractat amb Lop més MAEHC) i E: un grup de rates amb restrenyiment tractades amb extracte aquós alt d'Herba Cistanche (grup tractat amb Lop més HAEHC). El grup A es va tractar amb solució salina normal (10 ml/kg); El grup B es va tractar amb loperamida

(4 mg/kg); El grup C es va tractar amb loperamida (4 mg/kg) i extracte aquós baix d'Herba Cistanche (1 g/kg); El grup D es va tractar amb loperamida (4 mg/kg) i extracte aquós mitjà d'Herba Cistanche (2 g/kg), i el grup E es va tractar amb loperamida (4 mg/kg) i extracte aquós alt d'Herba Cistanche (4 g/kg). kg). A totes les rates del grup normal se'ls va injectar un 0,9 per cent de clorur de sodi, mentre que a les altres se'ls va injectar loperamida en 0,9 per cent de clorur de sodi dues vegades al dia durant 3 dies consecutius per induir el restrenyiment. L'extracte aquós d'Herba Cistanche es va suspendre en aigua i es va administrar per via oral una vegada al dia des del dia 4 fins al dia 18 al grup C, al grup D i al grup E, mentre que els grups A i B van rebre un volum constant d'aigua mitjançant sonda.

2.4. Condició cromatogràfica.

El perfil HPLC es va realitzar al sistema cromatogràfic de líquids Shimadzu (Tòquio, Japó), que consta d'una bomba LC-20AT i una

es van controlar a 330 nm a 30 C. La fase mòbil isocràtica consistia en metanol al 0,1 per cent d'àcid fòrmic (80: 20, v/v) i funcionava a un cabal d'1,0 ml/min. . La separació cromatogràfica va ser

mida de partícula 5 m, Beijing Dikma Science and Technology Co., Ltd., Beijing, Xina).

2.5. Anàlisi de l'exercici, la ingesta d'aliments, la ingesta d'aigua, el cos

Es va administrar per via oral la goma de goma (una suspensió aquosa d'un 20 per cent de carbó vegetal i un 10 per cent de goma cultivable) a un volum de 25 ml/kg de cada animal. Després de 30 minuts, els animals van ser sacrificats humanament per luxació cervical i dissecats. Es van recórrer l'intestí prim des del pílor fins al cec i es va mesurar la distància recorreguda per la farina de carbó vegetal i la longitud total de l'intestí prim. Per a una rata individual, el percentatge de trànsit intestinal es va calcular com el percentatge de distància recorreguda pel menjar de carbó respecte a la longitud total de l'intestí prim. L'equació següent calcula la taxa de trànsit intestinal (per cent): distància recorreguda pel carbó vegetal/distància del pílor al cec 100 per cent.

2.6. Recollida de mostres de sang i teixits. Al final del període experimental, les rates van ser sotmeses a un dejuni de 12 hores, però se'ls va permetre l'accés lliure a l'aigua. Totes les rates es van anestesiar 30 minuts més tard mitjançant una injecció intraperitoneal de pentobarbital sòdic (50 mg/kg) i es van col·locar en una taula regulada per temperatura. Es van recollir mostres de sang i es van centrifugar a 3500 rpm durant 15 min per obtenir sèrum. El còlon es va dividir immediatament i es va rentar amb solució salina normal a 4 C i després es va dividir en dues peces. Un fragment es va fixar en formalina al 10 per cent i es va processar en parafina dividida per a una anàlisi immunohistoquímica (IHC) posterior, mentre que l'altre era Pes i cabell. Alteracions en l'exercici, la ingesta d'aliments, l'aigua

emmagatzemat a 80ºC fins que es van analitzar. La ingesta, el pes corporal i el cabell es van observar i registrar diàriament durant tot el període experimental. Hem observat "alteracions en l'exercici" seguint els passos específics: la caixa feta a si mateix (60 cm d'alçada, 50 cm de llarg i 80 cm d'ample amb paret perifèrica fosca) s'utilitza per a la prova de camp obert; el fons blanc estava dividit en diamants (12 cm) per la línia negra en una habitació fosca i tranquil·la; una bombeta de 100 W penjada 1 m per sobre del centre de la caixa; les rates es van col·locar al centre de la caixa els dies 4, 6, 12 i 18 del modelatge. El nombre de quadrats pels quals passaven les rates en 5 minuts es va utilitzar com a puntuació de moviment horitzontal i el temps vertical de les rates en 5 minuts es va utilitzar com a puntuació de moviment vertical. Les puntuacions horitzontals i de moviment més les puntuacions de moviment vertical indiquen la quantitat d'exercici de les rates. Cada rata es va mesurar una vegada [34, 35].

2.7. Mesura de paràmetres fecals.

L'últim dia de l'administració oral, es van recollir pellets de femta fresca de cada rata SD en tubs amb taps de fons rodó durant 6 hores i es van registrar els pesos totals de cada grup. Per determinar el contingut d'humitat fecal, vam utilitzar una balança elèctrica per assecar els pellets de femta fins a aconseguir un pes constant i es va mesurar el pes sec. El contingut d'humitat

2.8. Avaluació de GAS, MTL, SS i CGRP.

Les concentracions de gastrina (GAS), motilina (MTL), somatostatina (SS) i pèptid relacionat amb el gen de la calcitonina (CGRP) al sèrum es van estimar mitjançant ELISA mitjançant kits disponibles comercialment.

2.9. Anàlisi histològica.

Els còlons transversals recollits de rates SD es van fixar amb formalina al 10 per cent durant 12 h, incrustats

m rodanxes gruixudes que es van tenyir amb hematoxilina i eosina (H&E, Sigma-Aldrich, MO, EUA). Les característiques morfològiques d'aquestes seccions es van observar amb microscòpia de llum, després de la qual es van mesurar la longitud de les vellositats, el gruix de la cripta i el gruix del múscul mitjançant Leica Application Suite (Leica Microsystems, Suïssa).

2.10. Anàlisi immunohistoquímica.

Hem seguit els mètodes de Zhu et al. (2016) [36]; eren seccions de 5 m sense taques

tacat amb kit anti-c de conill (1: 100) a 4 C durant la nit. El mètode d'anticossos secundaris i complex avidina-biotina-peroxidasa es va utilitzar segons les instruccions del fabricant. Es va utilitzar un control negatiu d'immunoglobulines per eliminar la unió inespecífica. Nivells d'expressió de c-kit

2.11. Anàlisi de la taxa de trànsit intestinal.

La relació de trànsit intestinal es va dur a terme segons protocols informats anteriorment [36]; breument, després de 14 dies de tractament, totes les rates SD estaven sotmeses a un dejuni de 12 hores, però se'ls va permetre l'accés lliure a l'aigua.

Reacció en cadena de la polimerasa en temps real. Els nivells d'expressió gènica dels ARNm de c-kit, SCF i PI3K al còlon es van determinar mitjançant un kit d'extracció d'ARN total (TIANGEN Biotech,

Beijing, Xina) segons els protocols del fabricant. La PCR en temps real es va realitzar amb el sistema ABI StepOnePlus Real-Time PCR System (ABI). Es va utilitzar SYBR Green I Real-Time PCR Master Mix (QPK201, Toyobo, Japó) per detectar productes de PCR. Les reaccions es van realitzar per triplicat. Posteriorment, el teixit fresc del còlon de rata amb un pes de 0,5 g es va homologar.

l) es va extreure segons les instruccions del fabricant mitjançant el reactiu TRIzol (Invitrogen, EUA). Es va utilitzar un kit de PCR de transcripció inversa (Takara Biotechnology Co., Inc.) per sintetitzar la primera cadena d'ADNc d'acord amb el protocol del fabricant. Tots els paràmetres objectiu es mostren a la taula 1. El protocol de ciclisme es va realitzar en les condicions següents: 95 C durant 5 min (desnaturalització de l'ADN), seguit de 40 cicles de 95 C durant 15 s, 60 C durant 20 s i 72 C per 40 s. Es va realitzar una anàlisi de la corba de fusió al final dels cicles d'amplificació.

2.12. Anàlisi Western Blot.

Els continguts de proteïnes de c-kit i SCF en mostres de còlon homogeneïts es van avaluar mitjançant Western blot. En resum, es van determinar les proteïnes totals dels homogeneïts mitjançant un assaig d'àcid bicinconínic (Pierce Biotechnology, Rockford, IL, EUA). El gel de dodecilsulfat de sodi-poliacrilamida (SDS-PAGE) es va utilitzar per separar les proteïnes al sistema d'electroforesi BioRad (BioRad Laboratories, Hercules, CA, EUA). A continuació, les proteïnes es van transferir a membranes de difluorur de polivinilidè (PVDF). Després de 2 h de tractament amb tampó de bloqueig en TBS que conté un 5% de llet sense greix a temperatura ambient, les membranes de PVDF es van incubar durant la nit amb un kit anti-c diluït 1: 1000 (Santa Cruz, CA, EUA), 1: 500 anti-c diluït. SCF (Sigma, MO,

EUA) i anticossos anti-actina diluïts (Kangchen, Xangai, Xina) 1: 8000, respectivament. La unió de l'anticòs primari es va detectar mitjançant l'anticòs secundari conjugat amb HRP corresponent (Beyotime, Jiangsu, Xina). Es va utilitzar un kit de quimioluminiscència millorat (Pierce Biotechnology Inc., Rockford, IL, EUA) i el sistema d'imatges d'infrarojos Odyssey (Gene Company Ltd., Hong Kong) per a la detecció de quimioluminiscència. La prolactina de neteja es va utilitzar com a control de càrrega. La quantitat d'expressió de proteïnes es presenta en relació als nivells d'actina.

2.13. Anàlisi estadística.

Les dades de mesura es van informar com a error estàndard mitjà de la mitjana (SEM) i es van analitzar per SPSS

16.0 programari (SPSS, Chicago, IL, EUA). Es va utilitzar l'anàlisi unidireccional de la variància (ANOVA) seguida de les proves de rang múltiple de Duncan per determinar diferències significatives en tots els paràmetres. Els valors es van considerar estadísticament significatius a

3. Resultats

3.1. Composició i components funcionals d'Herba Cistanche.

Com es mostra a la figura 1, les arrels d'Herba Cistanche contenen altes concentracions de diversos components bioactius relacionats amb efectes laxants. Les concentracions d'echinacòsids totals i verbacòsids totals eren de 0,64 mg/g i de 0,16 mg/g, respectivament. Es van detectar dos pics que indicaven nivells elevats d'echinacòsid i verbascòsid al LP en un temps de retenció adequat mitjançant cromatografia líquida d'alt rendiment (HPLC).

3.2. Observació general.

Les rates SP no van morir al llarg de l'experiment, cosa que indica una millor seguretat i operativitat del model animal. En comparació amb el grup A, les rates del grup model van mostrar pelatge esponjós, lassitud, femta seca i

empitjora amb l'ampliació del temps de modelatge.

3.3. Efecte de l'AEHC sobre el nombre de femtes i el contingut d'humitat en rates de restrenyiment induït per loperamida.

En comparació amb les femtes normals, les femtes dels grups B, C, D i E eren seques, petites i dures i no es van brunir abans del tractament.

després de tot, les rates van ser injectades amb loperamida (els tractaments amb medicaments han alleujat els símptomes com el cos i 3 (b)).

el pes no va variar significativament entre tots els grups experimentals, tot i que el grup E va mostrar un pes corporal lleugerament inferior que els altres grups (figura 2 (a)). A més, les rates SD amb restrenyiment menjaven significativament menys aliments que el grup A ( ), mentre que les diferències entre els grups B, C, D i E (figura 2 (b)) no eren significatives. El consum d'aigua tampoc va variar entre el grup A i el grup B. A més, no es va detectar un augment significatiu del consum d'aigua en

que el tractament amb l'AEHC no va induir cap alteració. Tot i que la taxa de trànsit intestinal als grups C, D i també va ser significativament més alta, els grups C, D i E tenien proporcions significativament més baixes que el grup A.

3.4. Efecte de l'AEHC sobre la taxa de trànsit intestinal prim en rates de restrenyiment induït per loperamida.

Com es veu a la figura 4, no es van detectar diferències en el temps de trànsit intestinal prim entre els cinc grups. El grup B té una proporció de propulsió de pols de carbó visiblement més baixa en comparació amb el grup A (𝑃 < 0.01).="" tot="" i="" que="" la="" taxa="" de="" trànsit="" intestinal="" als="" grups="" c,="" d="" i="" e="" també="" va="" ser="" significativament="" superior="" a="" la="" del="" grup="" b="" (𝑃="">< 0,05),="" els="" grups="" c,="" d="" i="" e="" tenien="" proporcions="" significativament="" més="" baixes="" que="" el="" grup="">

3.5. La intervenció amb AEHC millora parcialment la funció de l'índex de motilitat del còlon.

Els nivells sèrics de GAS i MTL obtinguts de rates del grup B van disminuir significativament en comparació amb els del grup A (𝑃 <{{0}}.01, resp.).="" d'altra="" banda,="" els="" grups="" c,="" d="" i="" e="" (𝑃="">< 0.05,="" respectivament)="" tenen="" nivells="" efectivament="" més="" alts="" de="" gas="" i="" mtl="" de="" l'administració="" d'extractes="" d'herba="" cistanche="" en="" comparació="" amb="" el="" grup="" b="" els="" valors="" de="" ss="" a="" les="" rates="" del="" grup="" b="" van="" ser="" més="" alts="" en="" comparació="" amb="" el="" grup="" a="" (𝑃=""><0,01); els="" grups="" c,="" d="" i="" e="" tenen="" nivells="" atenuats="" de="" ss="" (𝑃="">< 0,05)="" (figura="" 5).="" en="" comparació="" amb="" les="" rates="" de="" restrenyiment,="" els="" nivells="" de="" cgrp="" a="" les="" rates="" normals="" del="" grup="" a="" (𝑃="">< 0,01)="" i="" als="" grups="" c,="" d="" i="" e="" administrats="" amb="" herba="" cistanche="" eren="" constants="" (𝑃=""> 0,05).

3.6. Alteració histològica del còlon.

Per investigar si el tractament amb AEHC pot induir una alteració estructural del teixit del còlon, es van mesurar la longitud de les vellositats, el gruix de la capa de la cripta i el gruix del múscul en els còlons transversals de rates dels cinc grups després de la tinció de H&E. En comparar la patologia del còlon de les rates de cada grup, la mucosa del còlon era llisa i conté petites artèries i venes petites a la submucosa i un gran nombre de cèl·lules adiposes. A més, la capa muscular estava formada per cèl·lules musculars llises i la subserosa estava completa. La longitud mitjana de les vellositats va ser significativament més curta al grup B que al grup A (𝑃 <{{0}}.01). tanmateix,="" la="" longitud="" mitjana="" de="" les="" vellositats="" del="" grup="" c="" va="" augmentar="" molt="" més="" d'un="" 30="" per="" cent="" en="" comparació="" amb="" el="" grup="" b="" (figures="" 6="" i="" 7)="" (𝑃="">< 0,05).="" mentrestant,="" la="" longitud="" mitjana="" de="" les="" vellositats="" augmenta="" molt="" als="" grups="" d="" i="" e="" en="" comparació="" amb="" el="" grup="" b="" (figures="" 6="" (a)="" i="" 6="" (b))="" (𝑃="">< 0,01).="" a="" més,="" l'alteració="" del="" gruix="" muscular="" era="" molt="" similar="" a="" la="" longitud="" de="" les="" vellositats.="" en="" el="" grup="" b,="" el="" gruix="">

era dramàticament més prim en comparació amb el grup A. Tanmateix, els nivells de gruix muscular dels grups C, D i E van augmentar entre un 30 i un 35 per cent en relació amb el del grup B (figures 6 i 7). En general, aquestes troballes indiquen que l'AEHC pot augmentar la longitud de les vellositats i el gruix muscular al còlon de les rates amb restrenyiment.

3.7. Administració del tractament AHEC Augment de l'expressió de proteïnes de c-Kit i SCF.

La seva immunoreactivitat es va detectar al còlon, ja que les cèl·lules de tots els grups van donar positiu al c-kit. Com es mostra a la figura 8, el nivell d'expressió de c-kit al grup B era inferior al del grup A (𝑃 <0.05). el="" nivell="" d'expressió="" de="" c-kit="" al="" grup="" c="" era="" més="" alt="" que="" al="" grup="" b="" (𝑃=""><0.{{20}}5), mentre="" que="" hi="" havia="" més="" c-kit="" present="" als="" grups="" d="" i="" e="" que="" al="" grup="" b="" (𝑃=""><0,05). després="" del="" tractament="" amb="" diferents="" concentracions="" d'extracte="" aquós="" d'herba="" cistanche="" durant="" 2="" setmanes,="" es="" van="" detectar="" els="" nivells="" d'expressió="" de="" proteïnes="" de="" c-kit="" i="" scf="" mitjançant="" l'anàlisi="" western="" blot.="" l'anàlisi="" de="" western="" blot="" va="" mostrar="" que="" els="" nivells="" d'expressió="" de="" c-kit="" i="" scf="" eren="" notablement="" més="" baixos="" després="" del="" tractament="" amb="" loperamida="" als="" còlons="" de="" rates="" (figura="" 9).="" la="" figura="" 8="" (e)="" demostra="" que="" la="" disminució="" del="" c-kit="" a="" les="" rates="" amb="" restrenyiment="" va="" augmentar="" significativament="" un="" 31,2="" per="" cent="" després="" de="" tractar="" les="" rates="" amb="" 500="" 𝜇g/ml="" aehc="" (𝑃=""><0,05). a="" més,="" el="" tractament="" amb="" 100="" i="" 200="" g/ml="" d'aehc="" va="" augmentar="" els="" nivells="" d'expressió="" de="" proteïna="" c-kit.="" l'expressió="" de="" la="" proteïna="" scf="" va="" augmentar="" significativament="" un="" 20,="" 1,="" 24,="" 7="" i="" 8,="" 4="" per="" cent="" en="" el="" tractament="" amb="" 100,="" 200="" i="" 500="" 𝜇g/ml="" aehc,="" respectivament="" (figura="" 9).="" 3.8.="" efecte="" de="" l'aehc="" en="" l'expressió="" d'arnm="" de="" c-kit,="" scf="" i="" pi3k.="" per="" investigar="" si="" el="" tractament="" amb="" aehc="" pot="" afectar="" la="" regulació="" de="" l'arnm="" relacionada="" amb="" la="" contracció="" muscular,="" es="" van="" observar="" alteracions="" en="" els="" nivells="" d'expressió="" de="" c-kit,="" scf="" i="" pi3k="" en="" els="" còlons="" de="" rates="" de="" restrenyiment="" mitjançant="" cebadors="" específics.="" els="" resultats="" van="" mostrar="" que="" els="" nivells="" d'arnm="" de="" c-kit="" al="" grup="" b="" eren="" significativament="" més="" baixos="" en="" comparació="" amb="" el="" grup="" a="" (𝑃="">< 0,05),="" mentre="" que="" els="" nivells="" d'arnm="" als="" grups="" c,="" d="" i="" e="" eren="" més="" alts="" que="" al="" grup="" b="" (𝑃="">< 0,05)="" (figura="" 10).="" també="" vam="" examinar="">

expressió de SCF, un lligand del kit. L'expressió d'ARNm de SCF a les rates del grup B va ser significativament menor que al grup A, mentre que el tractament amb AEHC als grups C, D i E va augmentar l'expressió d'ARNm de SCF (figura 10). A més, vam examinar l'efecte de l'AEHC sobre l'expressió del gen PI3K. El dia 14, el nivell d'expressió del gen PI3K va ser significativament més alt als grups C, D i E que al grup B (𝑃 <0,>

4. Discussió

El restrenyiment és un trastorn molt comú caracteritzat per deficiències intestinals. Disminueix molt la qualitat de vida i comporta grans càrregues econòmiques tant per als pacients com per a l'assegurança de salut nacional [32]. Els productes naturals i els aliments medicinals atrauen una atenció cada cop més gran pel seu potencial per convertir-se en nous fàrmacs utilitzats per al tractament del restrenyiment [37, 38]. Per tant, vam estudiar els efectes terapèutics de l'AEHC en rates constipades induïdes per loperamida. La loperamida, l'atropina-difenoxilat i la morfina s'utilitzen àmpliament per induir el restrenyiment en animals de laboratori. Entre els tres fàrmacs, la loperamida indueix una durada prolongada de l'evacuació de les femtes i un retard del trànsit luminal intestinal, ja que inhibeix tant la secreció d'aigua com el moviment suau a la paret intestinal [39]. L'anàlisi del pes corporal en aquest estudi no va trobar cap diferència dins de cada grup. Després de l'experiment, tampoc es va trobar cap diferència. El grup de dosis baixes d'AEHC encara va veure el pes corporal més baix, però el grup model i el grup normal van presenciar el pes corporal més alt. El restrenyiment és generalment una malaltia funcional. El restrenyiment de trànsit lent induït en aquest estudi no va afectar la captació de nutrients de les rates i el seu pes corporal durant l'experiment. Les diferències en les quantitats de femta de les rates i el seu contingut d'humitat no existien entre grups abans del modelatge; tanmateix, tots dos van disminuir notablement després del modelatge i el contingut d'humitat de les femtes va augmentar després d'utilitzar AEHC a diferents dosis. Després d'estudiar la taxa de propulsor de pols de carboni del còlon.

de rates, el grup model va veure una disminució òbvia de la taxa, mentre que es va mantenir normal en els grups de dosis baixes, mitjanes i altes d'AEHC. Els resultats van mostrar que el restrenyiment crònic de trànsit induït per la loperamida tractat amb diferents dosis d'Herba Cistanche pot recuperar la funció propulsora del còlon en diferents graus. Les hormones gastrointestinals són substàncies bioactives d'alt rendiment secretades per cèl·lules endocrines de la mucosa gastrointestinal i del pàncrees, que tenen efectes tant d'excitació com d'inhibició per regular la funció motora gastrointestinal [40, 41], de les quals el GAS, MTL i SS tenen un efecte important. Les dues primeres hormones estimulen la secreció de suc digestiu, restringeixen el múscul llis gastrointestinal, afavoreixen el moviment del contingut gastrointestinal i exciten la motilitat del gas trointestinal. El SS, per contra, inhibeix la secreció de suc digestiu, la contracció del múscul llis gastrointestinal i el buidatge gastrointestinal [42]. Es va trobar que els nivells de GAS i MTL al teixit del còlon del grup model eren els més baixos, cosa que indica que el mètode de modelatge certament va reduir la concentració de GAS i MTL al teixit del còlon. Com a principals hormones gastrointestinals de la motilitat del còlon, la concentració de GAS i MTL va augmentar amb diferents dosis d'AEHC i, per tant, va millorar la motilitat del còlon. En canvi, el nivell de SS al teixit del còlon del grup model va ser el més alt, cosa que indica que el mètode de modelatge pot promoure la concentració de SS al teixit del còlon. El CGRP és un dels vasodilatadors més potents i el seu efecte de relaxació és 10- vegades més fort que l'efecte de contracció. Com a neurotransmissor o neuromodulador important que regula les funcions digestives, el CGRP pot inhibir la majoria de la motilitat gastrointestinal i la secreció de diversos sucs digestius [43]. La concentració de CGRP al grup model va ser superior a la del grup A, cosa que indica que el mètode de modelatge pot augmentar la concentració de CGRP al teixit del còlon, que també pot ser un dels factors per a la reducció del peristalsi del còlon que provocarà restrenyiment. La concentració de CGRP al teixit del còlon dels grups AEHC era inferior a la del grup model, cosa que suggereix que l'AEHC tenia un efecte inhibidor relativament feble sobre el moviment del còlon. c-Kit és una proteïna transmembrana. El factor de cèl·lules mare (SCF) del seu lligand és produït per cèl·lules neuronals i cèl·lules musculars llises. Afavoreix el desenvolupament i la diferenciació de l'ICC i manté la seva funció fisiològica normal. L'etiquetatge de c-Kit reflecteix indirectament la quantitat i la densitat d'ICC [44, 45]. A més, la cèl·lula ICC té un paper clau en la regulació de la motilitat gastrointestinal i actua com a marcapassos del moviment gastrointestinal. Per tant, alguns trastorns de la motilitat del gas trointestinal poden trobar una disminució en la quantitat i la funció de les cèl·lules ICC. Segons estudis anteriors, es va reduir el recompte de cèl·lules al còlon de pacients amb constipació crònica de trànsit. Per tant, el present estudi va observar les cèl·lules colòniques de rates mitjançant tècniques específiques d'expressió i immunohistoquímiques. En comparació amb el grup normal, el nombre de cèl·lules del grup model va disminuir notablement, però va augmentar després del tractament. L'estudi va demostrar que les cèl·lules ICC i els factors de cèl·lules mare (SCF) estan estretament relacionats amb la via del senyal c-kit/SCF. SCF és el lligand natural del c-kit expressat en diversos teixits del cos però principalment

produït per les cèl·lules estromals de la medul·la òssia. Cada monòmer c-kit es combina amb un SCF a través dels dominis extracel·lulars 1-3. Després de la dimerització SCF, l'estructura del monòmer c-kit canvia i produeix homodimerització, que després es tradueix en l'autofosforilació dels residus d'aminoàcids a la membrana cel·lular i estimula diverses molècules de segon senyal per regular les funcions cel·lulars de l'ICC. La segona molècula senyal és la fosfatidilinositol 3-quinasa (PI3K), una apolipoproteïna que converteix el 4,5- difosfoinosítid en 3,4,{5-trifosfoinosítid mitjançant la combinació amb la tirosina 721 del c-kit. Investigacions anteriors van demostrar que els inhibidors de PI3K Wortmannin i LY294002 van donar lloc a un desenvolupament anormal d'ICC bloquejant el senyal [46]. El nostre experiment va trobar que les expressions de proteïnes i ARNm c-kit i SCF al grup model van disminuir al principi, però després van augmentar en grups AEHC de diferents dosis, encara que a nivells inferiors al normal. L'expressió d'ARNm de PI3K va augmentar notablement. Per tant, SCF/c-kit pot tenir efecte mitjançant PI3K. Els resultats van mostrar que l'AEHC podria regular el múscul llis del tracte gastrointestinal augmentant la quantitat de cèl·lules ICC. La dosi baixa d'AEHC no va tenir cap efecte significatiu sobre el restrenyiment, mentre que la seva dosi mitjana i dosi alta van escurçar el primer temps de defecació de les rates, van augmentar el contingut d'humitat de les femtes, van millorar la taxa de propulsió del còlon, van perfeccionar la quantitat de femta, van augmentar el GAS. , MTL i CCK, i va reforçar la contractilitat del còlon. La dosi efectiva d'AEHC és inicialment de 20 g/d després de la conversió, que és equivalent a la dosi mitjana i alta en aquest estudi.

5. Conclusions

L'AEHC promou la motilitat intestinal millorant la funció ICC i regulant els neurotransmissors en aquest estudi, que va demostrar que l'AEHC té el potencial de tractar i prevenir el restrenyiment. Els extractes van millorar la producció d'ona lenta del còlon i van regular el ritme de l'activitat contractiva Quantitat d'ARNm SCF Quantitat d'ARNm PI3K Quantitat d'ARNm c-Kit 12 Medicina alternativa i complementària basada en l'evidència del múscul llis augmentant la quantitat d'ICC a través del PI3K/SCF/ via del senyal de c-kit. Tanmateix, estudis experimentals més detallats podrien millorar la comprensió de les altres vies moleculars de l'AEHC en la curació de STC i ajudar a guiar estudis clínics prospectius que avaluïn els seus efectes i seguretat.

Conflictes d'interès

Els autors declaren que no hi ha conflictes d'interessos.

Aportacions dels autors

Shuai Yan i Yin-Zi Yue van contribuir per igual a aquest treball. Tots els autors han aprovat el treball final.

Agraïments

Aquest treball va comptar amb el suport d'una subvenció de la National Natural Science Foundation of China (NSFC) i el finançament del govern xinès (81573979). L'estudi també va comptar amb el suport del projecte tecnològic de l'Administració Provincial de Jiangsu de Medicina Tradicional Xinesa, Xina (núm. YB2017061), el Programa de Desenvolupament Científic i Tecnològic de Suzhou, Xina (núm. SYSD2015172), el Projecte d'Innovació Tecnològica Industrial de Suzhou, Xina ( núm. SYSD2016136, núm. SYS201775 i núm. SYS201776) i el projecte universitari de l'Hospital de Medicina Tradicional Xinesa de Suzhou, Xina (YQN2015007). Els autors agraeixen el suport financer d'un projecte finançat per la Xina Postdoctoral Science Foundation (2017M620220).

Referències

[1] JY Chang, GR Locke, MA McNally, et al., "Impact of functional gastrointestinal disorders on survival in the community", American Journal of Gastroenterology, vol. 105, núm. 4, pàgs. 822–832, 2010. [2] SM Mugie, M. A Bennington i C. Di Lorenzo, "Epidemiology of constipation in children and adults: a systematic review", Best Practice & Research Clinical Gastroenterology, vol. 25, núm. 1, pàg. 18, 2011. [3] NC Suares i AC Ford, "Prevalència i factors de risc per al restrenyiment idiopàtic crònic a la comunitat: revisió sistemàtica i metaanàlisi", American Journal of Gastroenterology, vol. 106, núm. 9, pàgs. 1582–1591, 2011. [4] A. Lembo i M. Camilleri, "Chronic constipation", The New England Journal of Medicine, vol. 349, núm. 14, pàg. 1360–1368, 2003. [5] S. Singh, S. Heady, E. Coss-Adame i SSC Rao, "Clinical utility of colonic manometry in slow-transit constipation", Neurogastroenterology & Motility, vol. 25, núm. 6, pàgs. 487–495, 2013. [6] DM Preston i JE Lennard-Jones, "Severe chronic constipation of young women: 'idiopathic slow transit constipation", Gut, vol. 27, núm. 1, pàgs. 41–48, 1986. [7] P. Kashyap, PJ Gomez-Pinilla, MJ Pozo, et al., "Immunoreactivity for Ano1 detect depletion of Kit-positive intersticial cells of Cajal in patients with slow-transit restrenyiment ," Neurogastroenterologia i motilitat, vol. 23, núm. 8, pàgs. 760–765, 2011. [8] JD Belsey, M. Geraint i TA Dixon, "Revisió sistemàtica i metaanàlisi: polietilè glicol en adults amb restrenyiment no orgànic", International Journal of Clinical Practice, vol. . 64, núm. 7, pàg. 944–955, 2010. [9] AC Ford i NC Suares, "Efecte dels laxants i les teràpies farmacològiques en el restrenyiment idiopàtic crònic: revisió sistemàtica i metaanàlisi", Gut, vol. 60, no. 2, pàg. 209–218, 2011. [10] OM Aboumarzouk, T. Agarwal, R. Antakia, U. Shariff i RL Nelson, "Cisapride for intestinal constipation", Base de dades Cochrane de revisions sistemàtiques, vol. 19, núm. 1, pàg. CD007780, 2011. [11] MA Kamm, S. Muller-Lissner, NJ Talley, et al., "Tegaserod per al tractament del restrenyiment crònic: un estudi multinacional aleatoritzat, doble cec i controlat amb placebo", American Journal of Gastroenterologia, vol. 100, no. 2, pàg. 362–372, 2005. [12] A. Shin, M. Camilleri, G. Kolar, P. Erwin, CP West i MH Murad, "Revisió sistemàtica amb metaanàlisi: altament selectiva {{80} }Agonistes de l'HT4 (prucaloprida, velusetrag o naronaprida) en el restrenyiment crònic", Alimentary Pharmacology & Therapeutics, vol. 39, núm. 3, pàgines 239–253, 2014. [13] J.-H. Chen, Q. Zhang, Y. Yu et al., "Propietats neurogèniques i miogèniques dels patrons motors pan-colònics i la seva organització espaciotemporal en rates", PLoS ONE, vol. 8, no. 4, ID de l'article e60474, 2013. [14] VL Serebruany, ME Mouelhi, H.-J. Pfannkuche, K. Rose, M. Marro i DJ Angiolillo, "Investigacions sobre l'expressió del receptor 5-HT4 i els efectes del tegaserod sobre l'agregació plaquetària humana in vitro", American Journal of Therapeutics, vol. 17, núm. 6, pàg. 543–552, 2010. [15] HS Winter, C. Di Lorenzo, MA Benninga, et al., "Prucalopride oral en nens amb restrenyiment funcional", Journal of Pediatric Gastroenterology and Nutrition, vol. 57, núm. 2, pàg. 197–203, 2013. [16] A. Bove, F. Puccini, M. Bellini, et al., "Declaració de consens AIGO/SICCR: Diagnosis and treatment of chronic constipation and obstructed defecation (part I: Diagnosis) )," Revista Mundial de Gastroenterologia, vol. 18, núm. 14, pàgines 1555–1564, 2012. [17] GL Lyford, C.-L. Ell, E. Soffer, et al., "Disminució pan-colonica de les cèl·lules intersticials de Cajal en pacients amb restrenyiment de trànsit lent", Gut, vol. 51, núm. 4, pàg. 496–501, 2002. [18] J.-P. Wang, G.-F. Ding, i Q.-Z. Wang, "Les cèl·lules intersticials de Cajal medien la neurotransmissió simpàtica excitadora a la pròstata de conillet d'índies", Cell and Tissue Research, vol. 352, núm. 3, pàgines 479–486, 2013. [19] W.-D. Tong, B.-H. Liu, L.-Y. Zhang, S.-B. Zhang i Y. Lie, "Disminució de les cèl·lules intersticials de Cajal al còlon sigmoide de pacients amb restrenyiment de trànsit lent", International Journal of Colorrectal Disease, vol. 19, núm. 5, pàg. 467–473, 2004. [20] D. Wu, X. Wang, J. Zhou, et al., "La fórmula tradicional xinesa, la píndola lubricant de l'intestí, millora el restrenyiment de rata induït per loperamida implicat en la millora de Cl- secreció a través de l'epiteli colònic distal", Journal of Ethnopharmacology, vol. 130, núm. 2, pàgs. 347–353, 2010. [21] D.-Y. Ell i S.-M. Dai, "Efectes antiinflamatoris i immunomoduladors de Paeonia lactiflora Pall., Una medicina herbal tradicional xinesa", Frontiers in Pharmacology, vol. 2, article 10, 2011. [22] Z. Li, H. Lin, L. Gu, J. Gao i C.-M. Tzeng, "Herba Cistanche (Rou Cong-Rong): Un dels millors regals farmacèutics de la medicina tradicional xinesa", Frontiers in Pharmacology, vol. 7, article 41, 2016.