PART Ⅰ: Nous efectes protectors de l'extracte de Cistanche Tubulosa contra la retinopatia degenerativa induïda per la llum blava de baixa lluminància
Mar 04, 2022
Contacte: Audrey Huaudrey.hu@wecistanche.com
Man-Ru Wu Cheng-Hui Lin Jau-Der Hob George Hsiao, Yu-Wen Cheng
Escola de Farmàcia, Col·legi de Farmàcia, Universitat Mèdica de Taipei, Taipei, Departament d'Oftalmologia, Universitat Mèdica de Taipei, Taipei, Departament de Farmacologia, Escola de Medicina, Facultat de Medicina, Universitat Mèdica de Taipei, Taipei, Institut de Postgrau de Ciències Mèdiques, Col·legi de Medicina, Universitat Mèdica de Taipei, Taipei, Ph.D. Programa d'investigació i desenvolupament en biotecnologia, Facultat de Farmàcia, Universitat Mèdica de Taipei, Taipei, Taiwan
Resum
Antecedents/Objectius:La fototoxicitat induïda per la llum del díode emissor de llum blava (BLL) té un paper important en les malalties oculars i provoca la degeneració de la retina i l'apoptosi a les cèl·lules epitelials del pigment de la retina humana (RPE).Extracte de Cistanche tubulosa (CTE)és una medicina tradicional xinesa amb moltes propietats protectores beneficioses; tanmateix, pocs estudis han examinat els papers protectors oculars de la CTE. En aquest estudi, hem investigat els mecanismes subjacents als efectes de la CTE sobre l'apoptosi induïda per BLL in vitro i in vivo. Mètodes: les cèl·lules RPE es van aplicar a l'estudi in vitro actual i la viabilitat cel·lular es va determinar mitjançant un 3-(4,5-dimetiltiazol- 2-il)-2,{{6} }assaig de bromur de difeniltetrazoli. L'expressió de proteïnes relacionada amb l'apoptosi es va determinar mitjançant l'anàlisi de western blot i la tinció d'immunofluorescència. Es van utilitzar rates marrons de Noruega per examinar l'exposició a BLL comercialment disponible in vivo. Per examinar la deformació morfològica de la retina es van utilitzar la tinció d'hematoxilina i eosina, l'etiquetatge d'extrem de nick dUTP (TUNEL) i els assaigs de western blot. Resultats: CTE va inhibir significativament el dany de l'RPE induït per peròxid d'hidrogen, hidroperòxid de tertbutil, azida de sodi i BLL. A més, el CTE va reduir l'expressió de marcadors apoptòtics com la caspasa escindida-3 i la tinció de TUNEL després de l'exposició a BLL inactivant les vies apoptòtiques, tal com es mostra mitjançant la tinció immunofluorescent. A més, CTE va inhibir la fosforilació induïda per BLL de la cinasa N-terminal c-Jun, les cinases relacionades amb el senyal addicional 1/2 i p38 a les cèl·lules RPE. In vivo, l'administració oral de CTE va rescatar 60-disminucions periòdiques del gruix de la retina induïdes per l'exposició a BLL i va reduir el nombre de cèl·lules positives per a TUNEL al model de rata marró de Noruega. Conclusió: CTE és un agent profilàctic potencial contra la fototoxicitat induïda per BLL
Introducció
Els estudis sobre la degeneració macular relacionada amb l'edat (DMAE) han informat que el 8,7% de la població mundial pateix aquesta malaltia [1]. La DMAE és una malaltia neurodegenerativa que causa la deformació dels fotoreceptors, l'atròfia de l'epiteli pigmentari de la retina (RPE), l'apoptosi de les cèl·lules ganglionars i la pèrdua de visió central en la població gran, i s'està convertint en una càrrega social global. L'AMD es classifica en una forma seca o humida [2, 3]. Les millores tecnològiques han fet que la gent passi més temps utilitzant dispositius digitals moderns i, en conseqüència, les persones estiguin exposades a emissions de llum blava (BL) durant llargs períodes. Tanmateix, el problema de la fototoxicitat induïda per BL a la retina no està ben investigat. La sobreexposició a BL de longitud d'ona curta (450-495 nm) dóna lloc a la generació d'espècies reactives d'oxigen (ROS), com els radicals superòxid i hidroxil, que provoquen augments en el consum d'oxigen i indueixen danys a l'ADN mitocondrial. L'acumulació de ROS provoca estrès oxidatiu i l'acumulació extensa d'aductes retinoides, que danyen encara més la retina [4]. La investigació ha demostrat que l'estrès oxidatiu és un factor principal en la patogènesi de la DMAE seca [5]. A més, la irradiació BL disminueix l'expressió d'enzims antioxidants de la retina, com la superòxid dismutasa i la catalasa, mitjançant la mediació de les interaccions de proteïnes Bax/Bcl-2 i la promoció de la producció endògena de ROS. Com a tal, les cèl·lules RPE i els mitocondris del segment exterior dels fotoreceptors pateixen lesions induïdes per la irradiació BL [6, 7]. A més de la generació de ROS, la irradiació BL activa les proteïnes quinases activades per mitògens (MAPK), que tenen un paper important en la supervivència cel·lular i l'apoptosi. Les proteïnes pro-apoptòtiques relacionades amb l'apoptosi depenent dels mitocondris, com ara Bax i caspasa -3, s'activen mitjançant la irradiació de llum de díodes emissors de BL (BLL) a través de les vies de la cinasa N-terminal c-Jun (JNK) i p38 a RPE i cèl·lules ganglionars de la retina [8]. A més, la fosfatidilinositol 3-quinasa (PI3K)/Akt i el factor eritroide nuclear 2-relacionat amb el factor 2 (Nrf2) depenent del factor 2 (Nrf2) vies antioxidants són components del sistema de defensa de les cèl·lules RPE [{{34} }].
Extracte de Cistanche tubulosa (CTE)conté derivats de glicòsids feniletanoides i s'ha utilitzat com a medicina tradicional xinesa durant dècades. L'echinacòsid, l'acteòsid i l'isoacteòsid són tres compostos actius principals de CTE que es caracteritzen per tenir propietats neuroprotectores, que milloren la memòria, immunoreguladores i anti-fibrosi hepàtica [13, 14]. L'equinacòsid és un eliminador de ROS i protegeix contra l'apoptosi induïda per l'ió 1-metil-4-fenilpiridini (MPP plus) en models animals de la malaltia de Parkinson [15, 16]. L'acteòsid protegeix contra la neurotoxicitat induïda per amiloide{10} i redueix la inflamació estimulada pels lipopolisacàrids, atribuïble a la translocació de Nrf2 del citoplasma al nucli i la unió als elements de resposta antioxidant. Les teràpies disponibles actuals per a la DMAE humida, com ara pegaptanib, ranibizumab, bevacizumab i aflibercept, s'utilitzen per inhibir l'angiogènesi excessiva [17, 18]. Tanmateix, no existeixen tractaments efectius per a la DMAE seca, a causa de les múltiples complicacions patològiques d'aquesta malaltia.
En aquest estudi, demostrem els efectes protectors de CTE en cèl·lules RPE i rates Brown Norway (BN). A més, vam aplicar una exposició a llarg termini de BLL de baixa luminància a models tant in vitro com in vivo per avaluar els efectes protectors de la CTE. Vam trobar que la CTE va reduir l'expressió de proteïnes relacionades amb l'apoptosi després de l'exposició a BLL. A més, el CTE va reduir el nombre de cèl·lules positives d'etiquetatge final de la desoxinucleotidil transferasa dUTP (TUNEL) a la retina de rates BN després d'una exposició a llarg termini a BLL de baixa luminància. Aquest estudi proporciona més informació sobre els nous efectes antiapoptòtics de la CTE i informació sobre una nova estratègia per al tractament de la degeneració de la retina.
Extracte de Cistanche tubulosa (CTE): glucòsid feniletanoide
Materials i mètodes
Productes i productes químics
CTE va ser proporcionat generosament per Sinphar Pharmaceutical Company (Yilan, Taiwan). Els kits de detecció de mort cel·lular in situ (núm. cat. 11-684-817-910) es van comprar a Roche (Mannheim, Alemanya).
Cultiu de cèl·lules RPE
Les cèl·lules RPE (ARPE{{0}} i ATCC® CRL-2302™) es van comprar a la American Type Culture Collection (Manassas, VA) i es van cultivar en el medi d'àguila modificat de Dulbecco (Gibco, Grand Island, NY) complementat amb un 10 per cent de sèrum boví fetal en una atmosfera humidificada d'un 5 per cent de CO2 a 37 graus. Les cèl·lules ARPE-19 al passatge 19-30 es van mantenir en plats de cultiu cel·lular de 10-cm (Orange Scientific, Braine-l'Alleud, Bèlgica). Després de passar amb un 0, 05 per cent d'àcid tetraacètic de tripsina-etilendiamina (Gibco), les cèl·lules es van replantejar en una proporció 1:4. Abans de la prova, les cèl·lules ARPE-19 es van sembrar en plaques de 48-pous (Orange Scientific) per a anàlisis de viabilitat cel·lular a una densitat d'1,0 × 105 cèl·lules/ml i en plats de 6-cm (Orange Scientific). ) per a anàlisis de Western Blotting a una densitat de 2, 0 × 105 cèl·lules/ml durant 24 h. Després que les cèl·lules ARPE-19 assoleixin el 80% de confluència, es van realitzar els experiments següents.
Tractament amb fàrmacs i assaig de viabilitat cel·lular
Les cèl·lules RPE al pas 19-30 es van sembrar a 48-plaques de pous i es van cotractar durant 24 h amb diferents concentracions de CTE, peròxid d'hidrogen (H2O2), hidroperòxid de tert-butil (t-BHP) i azida de sodi ( NaN3). A continuació, les cèl·lules es van cultivar amb 3-(4, 5-dimetiltiazol-2-il){-2, 5-bromur de difeniltetrazoli (MTT) a una concentració final d'1 mg /mL i incubat durant 30 min. A continuació, es va afegir dimetil sulfòxid (200 µL) a cada pou per dissoldre les cèl·lules. L'absorbància es va mesurar a 570 nm mitjançant un lector d'assaig immunoabsorbent vinculat a enzims amb espectrofotòmetre Sunrise™ (MRX-TC; Dynex Technologies, Chantilly, VA). Els valors es van corregir per a l'absorbància de fons restant els espais en blanc adequats. Les dades provenen de cinc assajos independents.
Protocol d'exposició a BL in vitro
La font de llum i les plaques cel·lulars es van col·locar a 25 cm de distància, tal com es descriu al nostre estudi anterior [19]. La lluminància es va mesurar amb un mesurador de llum (LM-81LX; Lutron Electronic Enterprise, Taipei, Taiwan). BLL va assolir el màxim a 46 0 nm (60 lux) durant el temps indicat (0-48 h), depenent del disseny experimental.
Western blotting
Després de 0-48- hores de cotractament amb exposició a CTE i BLL, les cèl·lules es van rentar dues vegades amb solució salina tamponada amb fosfat (PBS) freda amb gel i es van tornar a suspendre en un tampó de lisi d'assaig de radioimmunoprecipitació (1 per cent de Nonidet). P-40, 50 mM Tris-HCl pH 7,4, 150 mM NaCl, 1 mM Na3VO4, 1 mM etilenglicol-bis (-aminoetilèter)-N,N,N′,N′-àcid tetraacètic, 1 mM NaF , i còctel inhibidor de la proteasa/fosfatasa). El lisat cel·lular es va obtenir mitjançant centrifugació a 12, 000 × g durant 35 min, i el sobrenedant es va recollir per determinar les concentracions de proteïnes mitjançant el reactiu de Bradford (Bio-Rad Laboratories, Hercules, CA). Es van separar quantitats iguals de mostres de proteïnes mitjançant electroforesi en gel de dodecilsulfat de sodi-poliacrilamida del 10 al 12% i després es van transferir a una membrana de difluorur de polivinilidè. Després de bloquejar la membrana amb un 5% de llet sense greix i incubar en solució salina tamponada amb Tris amb Tween 20 (TBST) durant 1 h, es va realitzar immunoblot amb anticossos primaris específics per a la caspasa escindida -3, fosfo-JNK, JNK. , fosfo-p38, p38, quinasa relacionada amb el senyal fosfo-extracel·lular (ERK), ERK, Bcl-2, Bax, proteïna associada a Fas amb domini de mort (FADD), caspasa-8 (GeneTex, Irvine , CA), Fas-ligand (Abcam, Cambridge, Regne Unit) i b-actina (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO). A continuació, les taques es van incubar amb anticossos secundaris conjugats amb peroxidasa de rave picant (1: 6000 a TBST; Cayman Chemical, Ann Arbor, MI) durant 1 h a temperatura ambient. Mitjançant un kit de quimioluminescència millorat (Millipore, Billerica, MA), es va analitzar la intensitat de les bandes de cada taca amb el programari Image J després de normalitzar-se a b-actina.
Immunofluorescència
Les cèl·lules RPE es van fixar amb un 4% de paraformaldehid en PBS durant 15 min. A continuació, es va afegir Tritó X-100 en PBS (0,2 per cent) a les cèl·lules durant 15 min, seguit d'un sèrum boví fetal al 5 per cent en PBS durant 30 min; A continuació, les cèl·lules es van incubar amb un anticòs de caspasa -3 anti-escissió a una proporció 1:250 durant 24 h (Cell Signaling Technology, Danvers, MA). Es va utilitzar un anticòs secundari IgG anti-conill de cabra (Dylight 594) en una proporció d'1:200 (Vector Laboratories, Burlingame, CA). Els nuclis cel·lulars es van tacar amb 4′-6-diamidino-2-fenilindol (DAPI; AAT Bioquest, Sunnyvale, CA). Es van observar canvis en la fluorescència amb un sistema d'imatge de microscopi espectral confocal làser CS SP5 (Leica, Teban Gardens, Singapur).
Tinció de TUNEL
Els fragments d'ADN, que es poden detectar mitjançant un assaig TUNEL, són un segell distintiu important de l'apoptosi. Hem utilitzat un kit de detecció de mort cel·lular in situ (núm. cat. 11-684-817-910; Roche) per mesurar la mort de cèl·lules RPE programada per apoptòtica segons el protocol del fabricant. Breument, vam arreglar cèl·lules RPE amb un 4 per cent de paraformaldehid i vam marcar les ruptures de la cadena d'ADN en una reacció enzimàtica per detectar cèl·lules positives per a TUNEL, que presentaven una taca verda fluorescent. A continuació, les cèl·lules tacades es van escanejar i analitzar amb un sistema d'imatge Tissue FAXS-plus (TissueGnostics, Viena, Àustria). Es van comptar deu mil esdeveniments a la regió RPE tancada i vam analitzar les imatges pel nombre de cèl·lules positives de TUNEL amb el programari TissueQuest/HistoQuest (TissueGnostics).
Experiments amb animals
Es van comprar rates BN mascles (300-350 g de pes corporal) al National Laboratory Animal Center (Taipei, Taiwan) i es van mantenir durant 2-3 mesos. Les rates es van mantenir en un cicle de llum/foscor de 12-h/{12-h a 26 ± 1 grau, una proporció d'humitat relativa del 35-47% i accés ad libitum a aigua i aliments. Les rates no tractades es van mantenir a la foscor per servir com a controls. Els protocols d'estudi van ser aprovats pel Comitè Institucional d'Ús de Cura d'Animals de la Universitat Mèdica de Taipei (número d'aprovació: LAC-2016-0442). Tots els procediments experimentals que impliquen l'ús d'animals compleixen amb les declaracions de l'Associació per a la Recerca en Visió i Oftalmologia per a l'ús d'animals en investigacions experimentals oftàlmiques i visuals.
Model de rata induïda per BLL de degeneració de la retina
Hem utilitzat un model periòdic de degeneració de la retina induït per l'exposició a BLL a llarg termini de baixa lluminància, tal com es descriu al nostre estudi anterior [19]. Breument, les rates BN es van dividir en tres grups: un grup control, que es va mantenir en condicions fosques; un grup exposat a BLL, que va ser exposat a BLL periòdic a la foscor sense dilatació de la pupil·la (460 nm, 150 lux) durant 3 h al dia durant 60 dies; i un grup tractat amb CTE més exposat a BLL, que es va tractar prèviament amb CTE (100 mg/kg de pes corporal) durant 14 dies i després es va cotractar amb exposició periòdica a BLL durant 3 h al dia durant 60 dies. Totes les rates van ser retornades a les colònies animals i es va reprendre el cicle normal llum/foscor (250 lux, 12 h/12 h) al final del període experimental.
Anàlisi estadística
Es van calcular diferències significatives mitjançant una anàlisi de variància unidireccional seguida de la prova post hoc de Tukey i la prova de comparacions múltiples. La significació estadística es va determinar mitjançant els valors p de<>
Productes de Cistanche tubulosa
Resultats
CTE protegeix les cèl·lules RPE del dany de l'estrès oxidatiu
Per avaluar la citotoxicitat de CTE mitjançant l'assaig MTT, es van aplicar diverses concentracions de CTE ({{{{20}}}}-5{00 ug/mL) a les cèl·lules RPE. El tractament amb CTE no va tenir efectes tòxics evidents sobre la viabilitat de les cèl·lules RPE a cap de les concentracions provades (Fig. 1A). Per tant, es van utilitzar 50 i 100 ug/mL CTE en els experiments posteriors. Per investigar els efectes anti-apoptòtics de la CTE, es van coadministrar diferents inductors oxidatius (H2O2, t-BHP i NaN3) amb CTE a cèl·lules RPE durant 24 h. H2O2, NaN3 i t-BHP van disminuir la viabilitat cel·lular i van danyar les cèl·lules RPE d'una manera dependent de la dosi (barres tallades, Fig. 1B, 1C i 1D); la viabilitat cel·lular va ser significativament menor a les cèl·lules tractades amb 0,03 mM de H2O2, 0,3 mM de NaN3 i 0,3 mM de t-BHP que en el grup control.
Tanmateix, el cotractament amb 50 i 100 ug/mL de CTE va atenuar el dany cel·lular RPE induït per H2O2-, NaN{{3- i t-BHP i va revertir la disminució de la viabilitat cel·lular (barres negres, Fig. .1B, 1C i 1D). Les dades anteriors suggereixen que CTE rescata les cèl·lules RPE del dany de l'estrès oxidatiu.
CTE inhibeix la mort de cèl·lules RPE induïda per BLL
En el nostre estudi anterior, vam trobar que la BLL és citotòxica per a les cèl·lules RPE, cosa que es va atribuir als canvis en l'expressió de Bcl-2 i Bax. En el present estudi, vam examinar encara més els efectes protectors de CTE sobre el dany cel·lular RPE induït per BLL. Vam col·locar dues plaques LED elèctriques blaves en una incubadora de cultiu cel·lular. La distància entre la font de llum i les plaques cel·lulars era de 25 cm i la intensitat de BLL era de 60 lux, mesurada amb un mesurador de llum (Fig. 2A). Un assaig MTT va demostrar que l'exposició a BLL durant diferents períodes de temps (6-48 h) va provocar la mort de cèl·lules RPE de manera dependent del temps (Fig. 2B). Les reduccions de la viabilitat cel·lular induïdes per BLL després de 24 i 48 h es van atenuar significativament quan les cèl·lules van ser cotractades amb CTE (100 ug/mL) (Fig. 2C). Aquestes dades suggereixen que CTE protegeix les cèl·lules RPE de la fototoxicitat induïda per BLL.
CTE inhibeix l'apoptosi induïda per BLL a les cèl·lules RPE mitjançant la regulació de les vies Bcl-2/Bax i Fas/FasL
Sobre la base dels efectes protectors potencials del CTE a les cèl·lules RPE, vam investigar més la possible implicació del CTE en aquest procés. Es van examinar dues vies de senyalització apoptòtica, és a dir, les vies de lligand Bax/Bcl{{{{0}} i Fas/Fas (FasL), i proteïnes relacionades (per exemple, pro-caspasa{-8 i pro-caspasa). -3; Fig. 3A i 3B). Es va trobar que l'exposició a BILL (6-48 h) augmentava l'expressió de proteïnes de Bax/Bcl -2, FasL i FADD d'una manera dependent del temps (Fig. 3A). A més, BLL va regular a la baixa l'expressió de proteïnes de la procaspasa-3 i la procaspasa-8, donant lloc a més formes d'escissió de caspasa-3 i caspasa-8 després de l'exposició a BLL, cosa que és coherent amb el nostre estudi previ [19]. Per avaluar encara més els efectes protectors de CTE, es van aplicar diferents concentracions de CTE a les cèl·lules RPE exposades a BLL (Fig. 3B). Després de 48-h d'exposició a BLL, el CTE (50 µg/mL) va disminuir la relació Bax/Bcl-2. A més, el CTE (100 µg/mL) va disminuir l'expressió de proteïnes de FasL i FADD, però va augmentar significativament els nivells de procaspasa-8 i procaspasa-3 (Fig. 3C i 3D). Els estudis han demostrat que l'activació de la caspasa-3 és un marcador d'apoptosi a les cèl·lules RPE [20]. Per confirmar encara més els efectes protectors de la CTE, vam realitzar una tinció immunofluorescent de la caspasa escindida-3. Es va trobar que l'exposició a BILL durant 48 h induïa la divisió de la caspasa-3 i la translocació al nucli, donant lloc a l'apoptosi de les cèl·lules RPE (fletxes grogues, figura 4A). Tanmateix, quan les cèl·lules exposades a BLL van ser cotractades amb CTE (100 µg/mL), es va inhibir l'expressió induïda per BLL de la caspasa escindida -3. Per entendre millor els efectes antiapoptòtics del CTE, hem utilitzat la tinció de TUNEL per detectar fragments d'ADN a les cèl·lules RPE. Després de 48-h d'exposició a BLL, les cèl·lules positives per a TUNEL van augmentar d'1,78 ± 0,36 per cent a 23,82 ± 0,33 per cent; aquest efecte es va atenuar pel cotractament amb CTE (23,82 ± 0,33 per cent a 2,22 ± 0,11 per cent; Fig. 4B, 4C i 4D). Aquests resultats indiquen que el tractament amb CTE protegeix fortament les cèl·lules RPE de l'apoptosi induïda per BLL mitjançant la mediació de les vies Bax/Bcl-2 i FasL/FADD.
CTE inhibeix la fosforilació induïda per BLL de proteïnes de resposta a l'estrès a les cèl·lules RPE
Estudis anteriors han demostrat que les vies MAPK, com ERK, JNK i p38 MAP, s'activen a les cèl·lules RPE i a la retina després de l'exposició a la llum ultraviolada o BL [21, 22]. Per tant, per investigar els efectes reguladors de CTE en la via de resposta a l'estrès MAPK després de l'exposició a BLL, es va aplicar 100 µg/mL de CTE a les cèl·lules RPE en diferents temps d'exposició a BLL (Fig. 5A). L'anàlisi de Western blot va indicar que ERK, JNK i p38 fosforilats es van activar després de l'exposició a BLL, però es van inhibir significativament després del cotractament amb CTE a les cèl·lules RPE (Fig. 5B). Els resultats anteriors indiquen que CTE inhibeix el dany cel·lular RPE induït per BLL, que podria estar associat amb la inhibició de MAPK a les cèl·lules RPE.
CTE rescata el dany a la retina induït per BLL després d'una exposició periòdica a llarg termini en un model de rata
Per avaluar els efectes protectors de la CTE, vam exposar rates BN a una exposició a llarg termini de BLL durant 60 dies i vam avaluar els efectes de la CTE. Tal com es mostra a l'esquema presentat a la figura 6A, les rates BN es van dividir en tres grups: grup control, grup exposat a BLL i grup CTE més BLL (Fig. 6A). En el grup CTE més BLL, les rates BN es van complementar contínuament amb CTE (100 mg/kg de pes corporal) mitjançant sonda oral un cop al dia durant 14 dies abans de l'exposició a BLL. El dia 0, les rates BN van ser cotractades amb CTE (100 mg/kg de pes corporal) i es van exposar a BLL durant 3 h al dia durant 60 dies. Després de 60 dies d'exposició a BLL, els animals es van sacrificar per a l'anàlisi de western blot i la tinció d'immunohistoquímica. Al grup CTE més BLL, l'expressió de la proteïna procaspasa-3 en homogeneïtats d'ulls de rata va ser més alta després del tractament amb CTE que al grup BLL (Fig. 6B i 6C). Aquestes dades il·lustren que la CTE prevé a llarg termini la fototoxicitat retiniana i l'apoptosi induïda per BLL de baixa luminància mitjançant la inhibició de l'activació de la caspasa escindida-3. La tinció d'immunohistoquímica va proporcionar més evidència sobre els efectes protectors de la CTE sobre l'estructura i les vies fisiològiques de la retina (Fig. 7). A més, després de l'exposició a BLL, vam trobar que la capa de neurones interna es va reduir i vam observar deformacions morfològiques a la capa de neurones externa (ONL), inclòs el segment interior / segment extern tant a la retina central com a la perifèrica, que és coherent amb el nostre estudi anterior ( Fig. 7B). És important destacar que la CTE va prevenir la deformació de les cèl·lules RPE, el dany de les cèl·lules neuronals i l'aprimament general de la retina al grup CTE més BLL (Fig. 7C). A més, no vam observar cèl·lules positives per a TUNEL a la retina central i perifèrica de rates normals (Fig. 8Ab i 8Bb). Per contra, després d'una exposició a BLL durant 60 dies, es van detectar amb freqüència cèl·lules positives per a TUNEL a l'ONL de la retina central i perifèrica (Fig. 8Ae i 8Be). La tinció DAPI de l'ONL de la retina central va disminuir notablement en el grup BLL (Fig. 8Ad). No obstant això, la presència de cèl·lules positives TUNEL es va atenuar i la tinció de DAPI de l'ONL de la retina central i perifèrica es va incrementar al grup CTE més BLL (Fig. 8Ai i 8Bi).
Productes de Cistanche tubulosa
