Part Ⅰ: Possible rellevància del receptor de l'hormona luteïnitzant soluble durant el desenvolupament i l'edat adulta en nens i homes

Resum simple

L'hormona luteïnitzant (LH) i la gonadotropina coriònica humana (hCG), ambdues agonistes del receptor de l'hormona luteïnitzant (LHCGR), són essencials per a la reproducció masculina durant el desenvolupament i l'edat adulta. LHCGR s'expressa i estimula la producció de testosterona per les cèl·lules de Leydig testiculars. En aquest estudi, demostrem que el LHCGR soluble està present a la sang, l'orina i el semen de nens i homes sans, així com en pacients amb aberracions cromosòmiques sexuals. Mostrem com els nivells circulants de sLHCGR es correlacionen amb el desenvolupament puberal, la funció testicular i la qualitat del semen, i demostrem que el LHCGR s'allibera del teixit no gonadal humà fetal. L'HCG s'allibera al sèrum a través dels testicles i altres òrgans, cosa que suggereix un possible paper extragonadal de LH o hCG en nens i homes.

Resum

L'hormona luteïnitzant (LH) i la gonadotropina coriònica humana (hCG) són agonistes del receptor de l'hormona luteïnitzant (LHCGR), que regula la funció reproductiva masculina. L'HCGR pot ser alliberat als fluids corporals. Volíem determinar si el LHCGR soluble és un marcador de la funció gonadal. Es van realitzar estudis transversals, longitudinals i d'intervenció en 195 nois i homes sans i 396 homes amb infertilitat, deficiència o síndrome de Klinefelter (KS) per vincular el LHCGR mesurat en sèrum, semen, orina i artèries hepàtiques/renyoses amb la funció gonadal. . LHCGR es va mesurar in vitro i in vivo en models de teixit testicular humà i línies cel·lulars, models de ratolí xenograft i els resultats de Western blot humans van mostrar que es van detectar fragments de LHCGR en sèrum i teixits gonadals de mida similar mitjançant tres anticossos diferents. Fins i tot després dels xenoempelts humans, el LHCGR-ELISA no va mostrar reactivitat creuada entre espècies ni reaccions inespecífiques al sèrum de ratolí. En canvi, sLHCGR es va alliberar al medi de cultiu després del cultiu de ronyó fetal humà i glàndula suprarenal. El sLHCGR sèric va ser significativament més baix en els nois sans a la pubertat (p=0.0001). En homes sans, la sLHCGR sèrica es va correlacionar negativament amb la proporció d'inhibina B/FSH ({9}}.004, p=0.027). En homes infèrtils, el sLHCGR del semen es va correlacionar negativament amb la FSH sèrica (0,006, p=0,009), la concentració d'espermatozoides (-3,5, p=0,003) i el recompte total d'espermatozoides. ({21}}.2, pàg=0.007). La injecció d'hCG va reduir el sLHCGR al sèrum i l'orina d'homes sans (p <0, 01). En conclusió, sLHCGR s'allibera als fluids corporals i s'associa amb el desenvolupament pubertal i la funció gonadal. El sLHCGR circulant en mascles d'orquídies suggereix que el sLHCGR en sèrum pot originar-se en teixits no gonadals i pot funcionar en teixits no gonadals. (Assajos clínics: NTC01411527, NCT01304927, NCT03418896).

Paraules clau

receptor de LH; pubertat; desenvolupament; infertilitat;Beneficis de Cistanche; efectes extra-gonadals; gonadotropines; ronyó fetal; glàndula suprarenal fetal; TCAM2; NTera2

Feu clic aquí per comprarExtracte d'herbes Cistanche

Introducció

L'hormona luteïnitzant (LH) i la gonadotropina coriònica humana (hCG) són ambdues agonistes del receptor de l'hormona luteïnitzant (LHCGR), que és essencial per a la reproducció masculina durant el desenvolupament i l'edat adulta [1]. L'HCG és un receptor acoblat a proteïnes G conegut per expressar-se a Leydig, luteïna granular i cèl·lules de membrana i és un potent regulador de la producció d'esteroides sexuals [1]. L'hCG és un agonista potent i persistent, però només és important fisiològicament durant el desenvolupament fetal [2]. Excepte alguns càncers de cèl·lules germinals i càncers de pàncrees, l'hCG no es produeix a l'edat adulta, tot i que un estudi anterior va trobar una baixa secreció pulsàtil d'hCG pituïtària en homes i dones adults. L'hCG s'utilitza per tractar les dones per induir l'ovulació durant el tractament de fertilitat, per als homes per estimular la síntesi de testosterona i la potencial espermatogènesi en homes hipogonadals, o com a prova diagnòstica per a la producció endògena de testosterona [4]. L'ablació del receptor LH del ratolí (LHCGR) condueix a una disminució espectacular de la testosterona i la qualitat del semen [5], i diversos grups de recerca han identificat mutacions i SNP en LHCGR, demostrant la seva importància per a la funció reproductiva humana [6-8].

El gen LHCGR es troba al cromosoma 2 i consta d'11 exons, dels quals els exons 1-10 codifiquen dominis estructurals extracel·lulars i l'exó 11 codifiquen 7 dominis estructurals transmembrana i intracel·lular [9]. Hi ha diverses isoformes de LHCGR, una de les quals es creu que es secreta perquè no té un ancoratge transmembrana [10]. Una altra possibilitat és que l'alliberament de LHCGR als fluids corporals depengui de la divisió enzimàtica de proteïnes a la membrana cel·lular, com ara ADAM, MMP i altres proteïnes transmembrana conegudes escindides. De fet, s'ha demostrat que l'hCG regula específicament la MMP-2 i la MMP{-9 [11,12], i diversos estudis han demostrat la regulació post-transcripcional de LHCGR [13,14]. L'LHCGR soluble (LHC) s'ha mesurat en sèrum femení i líquid fol·licular mitjançant la plataforma ELISA [15,16]. L'especificitat dels anticossos utilitzats en l'assaig ELISA es va validar expressant diferents fragments de LHCGR en cèl·lules CHO per a la localització d'epítops i la detecció de l'expressió a la placenta humana [15-17]. sLHCGR es va detectar en sèrum per LC-MS/MS [18]. Les concentracions sèriques de sLHCGR a les dones es van associar amb el tractament de la fertilitat, la preeclampsia, el part prematur i l'embaràs en nens amb taxes d'implantació de la síndrome de Down [15,16], però fins ara no han estat validades per altres grups de recerca. Segons el nostre coneixement, mai s'ha descrit sLHCGR en els fluids corporals d'homes sans, adolescents en desenvolupament o homes amb aberracions cromosòmiques sexuals. sLHCGR pot funcionar a la circulació masculina com a marcador de la funció gonadal mitjançant el transport d'unió d'alta afinitat o l'alteració de l'activitat de LH o hCG.

Materials i mètodes

1. Cohorts

Joves de la població general

A Dinamarca, tots els homes joves sans majors de 18 anys s'han de sotmetre a un examen físic per determinar la seva aptitud per al servei militar. Des de 1996, aproximadament 300 reclutes, que representen la població general, han estat examinats per a la qualitat del semen cada any. Tots van proporcionar mostres de semen, van completar un qüestionari, van fer exàmens ecogràfics dels testicles i van extreure mostres de sang. En l'estudi actual es van incloure mostres de sèrum i semen del biobanc, així com avaluacions d'ecografia i informació sobre IMC i edat de 148 homes enquestats el 2013 i el 2014 (aprovació del Comitè d'Ètica: H-KF-289428).

Nois sans pre i postpuberal

El Copenhaguen Adolescence Study és un estudi combinat transversal i longitudinal de nens danesos sans [20]. De escoles públiques seleccionades aleatòriament, 6203 nens van ser convidats a participar. El nombre total de participants va ser de 2020 nens. El seguiment longitudinal de 209 nens (101 nois) es va realitzar cada 6 mesos i va incloure examen físic, avaluació de Tanner de les etapes pubertals i mostres de sang i orina. En aquest estudi es van incloure trenta-sis nois amb seguiment longitudinal per avaluar sLHCGR durant la pubertat (assaig clínic: NTC01411527).

Homes infèrtils sense comorbilitat greu

El Copenhaguen-Bone-Gonad Study és un estudi de cohort de 307 homes infèrtils sense comorbiditats greus que van assistir a la nostra clínica masculina entre 2011 i 2015, incloent un total de 1427 homes [21,22]. Tots els homes van ser derivats a la nostra clínica a causa de la baixa qualitat del semen i el desig de paternitat. Tots es van sotmetre a un examen físic, inclosa una ecografia testicular, se'ls van extreure mostres de sang i van proporcionar mostres de semen. Un especialista va obtenir la seva història clínica detallada. Els investigadors van seguir els homes durant 150 dies i van prendre vitamina D o un placebo tal com es va descriure anteriorment. Totes les dades proporcionades en aquest estudi eren de la visita inicial prèvia a la intervenció i totes les variables incloses estaven predefinides (assaig clínic: NCT01304927).

Cistanche estandarditzada

Homes i nens amb síndrome de Klinefelter i pacients amb anòrquia

Vam identificar 64 nois i homes amb síndrome de Klinefelter (KS), 47 postpuberals i 16 prepuberals, definits segons l'estadificació de Tanner, de la nostra clínica masculina. Teníem aberracions cromosòmiques exactes, historial mèdic, estat d'inici puberal i informació sèrica disponible per a tothom. 7 nois es van fer un seguiment longitudinal amb avaluació clínica regular i mostres de sang abans i durant l'inici de la pubertat.

També es van incloure 8 homes amb un recompte de cromosomes normal als quals se'ls va extirpar testicles bilaterals per afeccions anteriors: carcinoma de cèl·lules germinals testiculars (n=4), càncer de pròstata difús (n=1), criptorquidisme bilateral i orquiectomia pediàtrica ( n=1), neoplàsia bilateral de cèl·lules germinals in situ (n=1) i càncer testicular avançat després de l'extirpació dels testicles restants a causa d'un trauma (n=1).

Adults sotmesos a mesura de cabal d'Splanchnicus

Es van incloure tres homes i tres dones postmenopàusiques amb funció hepàtica normal que van ser ingressats per sospita d'isquèmia mesentèrica i van ser referits per mesurar el flux sanguini visceral però no van mostrar isquèmia mesentèrica. Es van recollir mostres de sang simultàniament del fetge, el ronyó, la vena femoral i l'artèria corresponent (aprovació del Comitè d'Ètica: H.18048245)

Estudi d'intervenció: homes sans exposats a la gonadotropina de corió humana

Onze homes sans van ser reclutats per participar en la intervenció clínica mitjançant un anunci del Rigshospitalet danès. Els voluntaris van ser tractats amb gonadotropina coriònica humana de 5000 UI i es va mesurar la seva producció màxima de testosterona endògena comparant mostres de sang i orina de referència amb mostres de seguiment recollides 8, 24 i 72 hores després de la injecció de hCG (assaig clínic: NCT03418896).

2. Ratolins, teixit humà i línies cel·lulars

Es van utilitzar i cultivar dues soques de cèl·lules canceroses de testiculars humans NTera-2 i TCam{-2, que representaven el carcinoma embrionari i el seminoma, respectivament, com es va descriure anteriorment [23].

Els sèrums es van recollir de ratolins nus sense tumors (WT) i de ratolins nus amb xenograft TCam-2 tractats amb vector, LH o hCG, respectivament (Inspecció d'Experimentació Animal, Copenhaguen, Dinamarca, número de llicència: 2012-15-2934-00051) .

Els teixits fetals humans del primer trimestre es van recollir de teixits de dones donats després d'avortaments planificats. El ronyó fetal i el teixit suprarenal fetal es van cultivar en models de gota de suspensió tal com es va descriure anteriorment i es va recollir el medi per a l'anàlisi [24, 25] (aprovació del Comitè d'Ètica: H-1-2012-007).

Es van obtenir mostres de testiculars adults d'homes ovariectomitzats amb càncer testicular (aprovació del Comitè d'Ètica: H{{0}}). El teixit peritumoral que contenia àrees no malignes es va emmagatzemar a - 80◦ C o es va fixar durant la nit a 4◦ C en formalina o un fixador de Stieve modificat (200 ml de formaldehid al 37 per cent, 40 ml d'àcid acètic en 1 L de fosfat 0,05 M). tampó, pH 7,4).

3. Anàlisis Bioquímiques

La detecció de sLHCGR total en sèrum, semen, orina i diversos medis de cultiu es va realitzar en un procés de validació mitjançant kits ELISA del New Dutch Biomarker Catalyst Laboratory (NBCL) utilitzant l'anticòs LHR029 contra LHCGR humà i mesurant tots els d'aquests repetidament. l'assaig ELISA tenia un límit de detecció de 0,01 pmol/mL i un nivell màxim de 15,55 Sis homes de la població general amb nivells de sLHCGR per sobre del límit superior de detecció es van diluir i tornar a mesurar les mostres, mostrant nivells de fins a 30 pmol/mL. el rendiment de la plataforma ELISA s'ha descrit amb detall anteriorment [15-17].

Suplements de cistanche

També vam establir dos ELISA interns diferents, creats pels nostres tècnics de laboratori, i tots els altres reactius van ser proporcionats per Origin Biomarkers Ltd, Regne Unit, segons la seva configuració suggerida [26]. En primer lloc, es va detectar sLHCGR circulant unit a hCG mitjançant kits d'ELISA sandvitx amb anticossos 5A10C9 (ProMab) i am0{{20}}9{04pun ( OriGene) dirigida contra LHCGR i hCG, respectivament. En segon lloc, vam utilitzar ELISA intern de manera similar per determinar mostres arterials i venoses de fetge, ronyó i extremitats inferiors de sis adults sLHCGR, on vam utilitzar el mateix anticossos LHR029 (NBCL Holland) contra sLHCGR. Es van provar dos protocols diferents. Totes les mesures de sLHCGR descrites en aquest document es van realitzar mitjançant ELISA NBCL, excepte el complex hCG-sLHCGR i les mostres arterials/venoses dels òrgans descrits anteriorment. En nens sans, es va analitzar la testosterona mitjançant el kit RIA recobert de DPC (Diagnostic Products, Los Angeles, CA) amb un límit de detecció (LOD) de 0,23 nmol/L i un CV del 8,6% mitjançant immunofluorescència resolta en el temps. (Delfia; Wallac, Turku, Finlàndia), el límit de detecció era de 0,20 nmol/l amb un CV del 6,4 per cent. En adults, la testosterona i la globulina d'unió a les hormones sexuals (SHBG) es van analitzar mitjançant un immunoassaig de quimioluminescència (Access, Beckman Coulter, EUA) amb LOD de 0,35 nmol/L i 0,33 nmol/L, respectivament. Els nivells de FSH i LH en sèrum i orina es van mesurar mitjançant immunofluorescència resolta en el temps (Delfia; Wallac, Turku, Finlàndia) amb límits de detecció de 0,06 i 0,05 IU/L, respectivament, i CV i lt; tots dos al 5 per cent. L'assaig d'inhibina B es va realitzar mitjançant un immunoassaig enzimàtic bilateral específic (inhibina B genII, Beckman Coulter, EUA) CV <11 per cent. Per a AMH, hem utilitzat l'immunoassaig enzimàtic Beckman Coulter (Immunotech, Beckman Coulter, Marsella, França) i un CV <8 per cent. Finalment, IGF1 i IGF-BP3 es van determinar mitjançant l'assaig de quimioluminescència del sistema d'immunodiagnòstic IDS-iSYS amb CV del 10% i 9%, respectivament. L'estradiol lliure es va calcular mitjançant la constant de Mazer i la testosterona lliure (FT) es va calcular mitjançant la fórmula de Vermeulen [27, 28].

Anàlisi de semen

Els homes joves sans i els participants adults infèrtils van proporcionar mostres de semen i van obtenir informació autoinformada sobre la durada de l'abstinència ejaculatòria. L'anàlisi de semen va ser realitzada per tècnics entrenats tal com es va descriure anteriorment [19]. El volum de semen es va estimar mitjançant el pes. Per a l'avaluació de la viabilitat dels espermatozoides, es van col·locar 10 μ L de rèpliques de semen ben barrejats en portaobjectes i es van examinar amb un microscopi × 4{00x a una secció escalfada de 37 ◦ C. Els espermatozoides es van classificar com a viable avançat (classe OMS a més B), viable no progressiu (classe C) o inactiu (classe D). Es va utilitzar la mitjana de les dues avaluacions de viabilitat. Per avaluar la concentració d'espermatozoides, les mostres es van diluir en una solució d'aigua destil·lada de 0,6 moL/L de NaHCO3 i 0,4% (v/v) de formaldehid i després es van avaluar mitjançant un hemocitòmetre Bürker-Türk i es va utilitzar la mitjana de les avaluacions. Només es van comptar els espermatozoides amb cua. Finalment, es van preparar frotis i es van tacar amb tinció de Papanicolau i es va avaluar la morfologia dels espermatozoides estrictament segons els criteris de [29].

Western Blotting

El teixit testicular humà es va homogeneïtzar en tampó de lisi, es va diluir en tampó de càrrega SDS i després es va escalfar a 95 ◦ C durant 5 min. Les mostres es van carregar en gels de poliacrilamida prefabricats del 4-20 per cent (BioRad, cat # 456-8096) i es van executar a 100 V durant 1 h per separar les proteïnes. Per detectar sLHCGR en sèrum, es van eliminar l'albúmina i la IgG mitjançant el kit d'eliminació d'albúmina / IgG de Pierce (Thermo Scientific, Waltham, MA, EUA, cat # 89875) abans de carregar mostres al gel. després de l'electroforesi en gel, les proteïnes es van transferir a membranes de difluorur de polivinilidè mitjançant un secant humit (BioRad). Les membranes es van tancar en solució salina tamponada amb tris i llet seca desnatada al 5% durant 1 h, després es van incubar durant la nit a 4 ◦ C amb anticossos primaris i durant 1 h a RT amb anticossos secundaris. Les membranes es van rentar amb quimioluminescència millorada (Thermo Scientific Super Signal West Femto Maximum Sensitive Substrate, Cat # 34095) i un fotodetector amb un sistema d'imatge chemiDoc MP (BioRad, Cat # 17001402). Es van utilitzar tres anticossos diferents per detectar LHCGR en teixit i sèrum: Aviva System Biology (OASG04237); NBCL Holland, el mateix anticòs que al kit d'ELISA sèric (LHR029) i Santa Cruz Biotechnology (Dallas, TX, EUA, SC- 26341). Es va utilitzar -2 microglobulina com a control de càrrega.

Immunohistoquímica

La immunohistoquímica es va realitzar tal com es va descriure anteriorment [25]. Breument, les seccions es van arreglar amb un fixador Stiff modificat, es van desparafinar i es van rehidratar. L'extracció d'antigen es va realitzar en un autoclau que contenia tampó d'extracció de citrat (10 mM, pH 6.0). La peroxidasa endògena es va bloquejar amb un 3% (v/v) d'H2O2 en metanol durant 30 min. Entre cada pas, es van rentar seccions a TBS. Les seccions es van incubar amb sèrum de cavall BSA al 0,5 per cent durant 30 minuts, seguit d'una incubació durant la nit amb dos anticossos primaris diferents durant 1 hora a temperatura ambient (LHR029 per a WB/ELISA, Santa Cruz Biotechnology SC- 25828). Les seccions es van incubar amb anticossos secundaris durant 30 minuts. Les imatges es van visualitzar amb aminoetil carbazol (AEC, Invitrogen, Life Technologies/Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, EUA). Els controls negatius eren sense anticossos primaris. Cap dels controls negatius es va tacar. La contratinció es va realitzar amb hematoxilina de Mayer i el muntatge es va realitzar amb Aquatex. Les seccions es van avaluar amb un microscopi Nikon Microphot-FXA (Nikon Corporation, Melville, NY, EUA). L'anàlisi final es va realitzar mitjançant el programari NDPview versió 1.2.36 (Hamamatsu Photonics, Iwata City, Japó.

Beneficis de l'extracte de Cistanche per al ronyó

REFERÈNCIES

1. Dufau, ML El receptor de l'hormona luteïnitzant. Ann. Reverent Physiol. 1998, 60, 461–496.

2. Rao, CV Propietats diferencials de la gonadotrofina coriònica humana i l'hormona luteïnitzant humana que s'uneixen a les membranes plasmàtiques dels cossos llúteos bovins. Acta Endocrinol. 1979, 90, 696–710.

3. Odell, WD; Griffin, J. Secreció pulsàtil de gonadotropina coriònica humana en adults normals. N. Anglès. J. Med. 1987, 317, 1688–1691.

4. Bang, AK; Nordkap, L.; Almstrup, K.; Priskorn, L.; Petersen, JH; Rajpert-De Meyts, E.; Andersson, A.-M.; Juul, A.; Jørgensen, N. Proves de GnRH dinàmica i hCG: establiment de nous nivells de referència diagnòstics. Eur. J. Endocrinol. 2017, 176, 379–391.

5. Zhang, FP; Poutanen, M.; Wilbertz, J.; Huhtaniemi, I. Desenvolupament sexual prenatal normal, però aturat postnatal de ratolins de ratolins de eliminació del receptor de l'hormona luteïnitzant (LuRKO). Mol. Endocrinol. 2001, 15, 172–183.

6. Bruysters, M.; Christin-Maitre, S.; Verhoef-Post, M.; Sultan, C.; Auger, J.; Faugeron, I.; Larue, L.; Lumbroso, S.; Themmen, APN; Bouchard, P. Una nova mutació d'empalmament del receptor de LH és responsable de l'hipogonadisme masculí amb una producció subnormal d'espermatozoides a la proposició i d'infertilitat amb cicles regulars en una germana afectada. Brunzit. Reprod. 2008, 23, 1917–1923.

7. Latronico, AC; Arnhold, IJP Mutacions inactivadores del receptor de l'hormona luteïnitzant humana en ambdós sexes. Semin. Reprod. Med. 2012, 30, 382–386.

8. Simoni, M.; Tüttelmann, F.; Michel, C.; Böckenfeld, Y.; Nieschlag, E.; Gromoll, J. Polymorphisms of the luteinizing hormone/chorinic gonadotropin receptor gen: Association with mal-descended testicles and male infertility. Pharmacogenet. Genoma. 2008, 18, 193–200.

9. Ascoli, M.; Fanelli, F.; Segaloff, DL El receptor de lutropina/coriogonadotropina, una perspectiva de 2002. Endocr. Rev. 2002, 23, 141–174.

10. Tena-Sempere, M.; Zhang, FP; Huhtaniemi, I. Expressió persistent d'una forma truncada de l'àcid ribonucleic missatger del receptor de l'hormona luteïnitzant al testicle de rata després de la destrucció selectiva de cèl·lules de Leydig per sulfonat d'etilè metà. Endocrinologia 1994, 135, 1018–1024.

11. Fluhr, H.; Bischof-Islami, D.; Krenzer, S.; Licht, P.; Bischof, P.; Zygmunt, M. La gonadotropina coriònica humana estimula les metaloproteinases de la matriu-2 i -9 a les cèl·lules citotrofoblàstiques i disminueix l'inhibidor tissular de les metaloproteinases-1, -2 i -3 en les decidualitzades cèl·lules estromals endometrials. Fèrtil. Esteril. 2008, 90, 1390–1395.

12. Licht, P.; Fluhr, H.; Neuwinger, J.; Wallwiener, D.; Wildt, L. La gonadotropina coriònica humana està directament implicada en la regulació de la implantació humana? Mol. Cèl·lula. Endocrinol. 2007, 269, 85–92.

13. Li, Y.-X.; Guo, X.; Gulappa, T.; Menon, B.; Menon, KMJ SREBP té un paper regulador en l'expressió d'ARNm del receptor LH/hCG a les cèl·lules humanes de granulosa-luteïna. J. Clin. Endocrinol. Metab. 2019.

14. Menon, KMJ; Menon, B.; Wang, L.; Gulappa, T.; Harada, M. Regulació molecular de l'expressió del receptor de gonadotropina: relació amb el metabolisme dels esterols. Mol. Cèl·lula. Endocrinol. 2010, 329, 26–32.

15. Cambres, AE; Griffin, C.; Naif, SA; Mills, I.; Mills, WE; Syngelaki, A.; Nicolaides, KH; Banerjee, S. ELISA quantitatius per al complex LHCGR soluble en sèrum i hCG-LHCGR: diagnòstics potencials en el cribratge de l'embaràs del primer trimestre per a mortinat, síndrome de Down, part prematur i preeclampsia. Reprod. Biol. Endocrinol. 2012, 10, 113.

16. Cambres, AE; Nayini, KP; Mills, WE; Lockwood, GM; Banerjee, S. El receptor circulant de LH/hCG (LHCGR) pot identificar pacients amb FIV abans del tractament amb risc de SHO i implantació deficient. Reprod. Biol. Endocrinol. 2011, 9, 161.

17. Chambers, AE; Stanley, PF; Randeva, H.; Banerjee, S. Alliberament mediat per microvesícules del receptor soluble de LH/hCG (LHCGR) de cèl·lules transfectades i explantes de placenta. Reprod. Biol. Endocrinol. 2011, 9, 64.

18. Gao, HJ; Chen, YJ; Zuo, D.; Xiao, MM; Li, Y.; Guo, H.; Zhang, N.; Chen, RB Anàlisi proteòmica quantitativa per al cribratge d'alt rendiment de glicoproteïnes diferencials en sèrum de carcinoma hepatocel·lular. Càncer Biol. Med. 2015, 12, 246–254.

19. Priskorn, L.; Nordkap, L.; Bang, Alaska; Krause, M.; Holmboe, SA; Egeberg Palme, DL; Ala, SB; Mørup, N.; Carlsen, E.; Joensen, ONU; et al. El recompte mitjà d'espermatozoides es manté sense canvis malgrat la reducció del tabaquisme matern: resultats d'un gran estudi transversal amb investigacions anuals durant 21 anys. Brunzit. Reprod. 2018, 33, 998–1008.

20. Sørensen, K.; Aksglaede, L.; Petersen, JH; Juul, A. Canvis recents en el moment de la pubertat en nois danesos sans: associacions amb l'índex de massa corporal. J. Clin. Endocrinol. Metab. 2010, 95, 263–270.

21. Blomberg Jensen, M.; Lawaetz, JG; Petersen, JH; Juul, A.; Jørgensen, N. Efectes de la suplementació de vitamina D sobre la qualitat del semen, les hormones reproductives i la taxa de naixement viu: un assaig clínic aleatoritzat. J. Clin. Endocrinol. Metab. 2018, 103, 870–881.

22. Blomberg Jensen, M.; Gerner Lawaetz, J.; Andersson, A.-M.; Petersen, JH; Nordkap, L.; Bang, Alaska; Ekbom, P.; Joensen, ONU; Prætorius, L.; Lundstrøm, P.; et al. La deficiència de vitamina D i el baix calci ionitzat estan relacionats amb la qualitat del semen i els nivells d'esteroides sexuals en homes infèrtils. Brunzit. Reprod. 2016, 31, 1875–1885.

23. Lorenzen, M.; Nielsen, JE; Andreassen, CH; Juul, A.; Toft, BG; Rajpert-De Meyts, E.; Daugaard, G.; Blomberg Jensen, M. El receptor de l'hormona luteïnitzant s'expressa en els tumors de cèl·lules germinals testiculars: possibles implicacions per al creixement i pronòstic del tumor. Càncers 2020, 12, 1358.

24. Eldrup, E.; Theilade, S.; Lorenzen, M.; Andreassen, CH; Poulsen, KH; Nielsen, JE; Hansen, D.; El Fassi, D.; Berg, JO; Bagi, P.; et al. Hipercalcèmia després de les injeccions d'olis cosmètics: etiologia, patogènesi i gravetat descobertes. J. Bone Miner. Res. 2020, 36, 322–333.

25. Jørgensen, A.; Macdonald, J.; Nielsen, JE; Kilcoyne, KR; Perlman, S.; Lundvall, L.; Langhoff Thuesen, L.; Juul Hare, K.; Frederiksen, H.; Andersson, A.-M.; et al. La senyalització nodal regula el desenvolupament de cèl·lules germinals i l'establiment de cordons seminífers al testicle fetal humà. Cell Rep. 2018, 25, 1924–1937.e4.

26. Cambres, AE; Fairbairn, C.; Gaudoin, M.; Mills, W.; Woo, jo.; Pandian, R.; Stanczyk, FZ; Chung, K.; Banerjee, S. Receptor soluble de LH-HCG i estradiol com a predictors de l'embaràs i el part viu en la FIV. Reprod. Biomed. En línia 2019, 38, 159–168.

27. Vermeulen, A.; Verdonck, L.; Kaufman, JM Una avaluació crítica de mètodes simples per a l'estimació de la testosterona lliure en sèrum. J. Clin. Endocrinol. Metab. 1999, 84, 3666–3672.

28. Mazer, NA Un nou mètode de full de càlcul per calcular les concentracions sèriques lliures de testosterona, dihidrotestosterona, estradiol, estrona i cortisol: amb exemples il·lustratius de poblacions masculines i femenines. Esteroides 2009, 74, 512–519.

29. Menkveld, R.; Stander, FS; Kotze, TJ; Kruger, TF; van Zyl, JA L'avaluació de les característiques morfològiques dels espermatozoides humans segons criteris més estrictes. Brunzit. Reprod. 1990, 5, 586–592.

Li Juel Mortensen¹, Mette Lorenzen¹, Anne Jørgensen², Jakob Albrethsen², Niels Jørgensen²,Søren Møller^3,4, Anna-Maria Andersson², Anders Juul^2,4i Martin Blomberg Jensen^1,5

1. Grup d'Endocrinologia Esquelètica, Mineral i Gonadal, Departament de Creixement i Reproducció de la Universitat, Rigshospitalet, 2100 Copenhaguen, Dinamarca; li.juel.mortensen@regionh.dk (LJM); mette.lorenzen.01@regionh.dk (ML)

2. Departament de Creixement i Reproducció i Centre Internacional de Recerca i Formació en Investigació en Disrupció Endocrina de la Reproducció Masculina i la Salut Infantil (EDMaRC), Rigshospitalet, Universitat de Copenhaguen, Blegdamsvej 9, 2100 Copenhaguen, Dinamarca; Anne.Joergensen.02@regionh.dk (AJ); Jakob.Christian.Albrethsen@regionh.dk (JA); Niels.Joergensen@regionh.dk (NJ); Anna-Maria.Andersson@regionh.dk (A.-MA); Anders.Juul@regionh.dk (AJ)

3. Centre d'Imatge i Recerca Funcionals i Diagnòstiques, Departament de Fisiologia Clínica i Medicina Nuclear 260, Hospital Hvidovre, 2650 Copenhaguen, Dinamarca; Soeren.Moeller@regionh.dk

4. Departament de Medicina Clínica, Facultat de Ciències de la Salut, Universitat de Copenhaguen, 2200 Copenhaguen, Dinamarca

5. Division of Bone and Mineral Research, Harvard School of Dental Medicine/Harvard Medical School, Boston, MA 02115, EUA