PART Ⅱ: paper del fibroblast renal primari humà en dispositius que imiten la fibrosi mediada per TGF- 1-

Contacte: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 Correu electrònic:audrey.hu@wecistanche.com

PART Ⅱ: Paper del fibroblast renal primari humà en dispositius que imitan la fibrosi mediada per TGF- 1-

Seong-Hye Hwang, Yun-Mi Lee i et al.

Resum

Fibrosi renalés una malaltia renal crònica progressiva que, finalment, condueix a una insuficiència renal terminal. Malgrat diversos enfocaments de combatfibrosi renal, un model experimental per avaluar els fàrmacs disponibles actualment no és ideal. Hem desenvolupat models d'imitació b mitjançant dispositius de co-cultiu tridimensional (3D) dissenyats amb tres capes separades d'interstici dels túbuls, és a dir, capes epitelials, fibroblàstiques i endotelials. Vam introduir cèl·lules epitelials tubulars proximals renals humanes (HK-2), cèl·lules endotelials de la vena umbilical humana i fibroblasts renals derivats del pacient, i vam avaluar els efectes detfactor de creixement transformador- (TGF-) iTGF-tractament inhibidor sobre aixòrenalfibrosimodel. L'expressió de lafibrosimarcador alfa-muscular llis sobre actinaTGF- 1El tractament es va augmentar en cèl·lules HK-2 cultivades en monocapa en un model de malaltia en 3D. En el compartiment vascular derenalfibrosimodels, la densitat dels vaixells va augmentar i disminuir en elTGF--grup tractat iTGF--grup de tractament amb inhibidors, respectivament. ELISA multiplex utilitzant sobrenedants en elTGF--els models 3D estimulants van demostrar que els nivells de citocines i factors de creixement proinflamatoris, incloent la interleucina-1 beta, el factor de necrosi tumoral-alfa, el factor bàsic de creixement de fibroblasts iTGF- 1, TGF- 2, iTGF- 3van augmentar, cosa que va imitar els microambients fibròtics dels ronyons humans. Aquest estudi pot permetre la construcció d'un humàrenalfibrosi-Imitar el model de dispositiu més enllà dels experiments de cultura tradicional.

Paraules clau: fibroblast renal; fibrosi; TGF- 1

Beneficis per a la salut de cistanche tubolosa: tractament de malalties renals cròniques

FEU CLIC AQUÍ PER PART Ⅰ

3. Discussió

TGF- 1té un paper important en l'acumulació de matrius en la fibrogènesi renal i inhibeix la proliferació a la majoria de cèl·lules, incloses les cèl·lules epitelials i endotelials glomerulars, així com les cèl·lules epitelials tubulars 【1】. Tanmateix, el TGF-ß1 indueix la proliferació en fibroblasts renals humans mitjançant la inducció del factor de creixement bàsic de fibroblasts (FGF-2) [8].

En el present estudi, hem establert afibrosi-Dispositiu imitador que utilitza tres components cel·lulars essencials, inclosos fibroblasts renals primaris humans, cèl·lules epitelials tubulars renals i cèl·lules endotelials humanes i el va avaluar com arenalfibrosimodel basat enTGF- 1estimulació. Generarrenalfibrosi-en un xip, vam establir un nou sistema de cultiu en 3D dissenyat amb tres parts separades de teixit, amb l'objectiu de superar els obstacles associats al modelatge de la malaltia renal. El nostre estudi ho va demostrarTGF- 1respostes cel·lulars induïdes, inclosa la transició tubular epitelial-mesenquimal (EMT) de cèl·lules epitelials, alteració microvascular de cèl·lules endotelials i canvis de citocines en fibroblasts renals. Aquest és el primer estudi que introdueix afibrosi-Dispositiu imitador que inclou fibroblasts primaris derivats de ronyons humans i fibroblasts estimulats aïllats de pacients ambTGF- 1, un conegut inductor de respostes fibròtiques que s'utilitza generalment com a estàndard per imitarfibrosien cultius cel·lulars [9]. Aquests resultats suggereixen queTGF- 1Les cèl·lules epitelials tractades es converteixen en un fenotip semblant a una cèl·lula mesenquimal. QuanTGF- 1s'administra als fibroblasts, s'alteren diverses citocines per reflectir la inducció de processos fibròtics. És evident que en elrenalfibrosimodel, els fibroblasts són la força principal darrere del desenvolupament del sistema de cultiu establert mitjançant l'estimulació del TGF.

Davis et al, van informar que el cultiu 3D de cèl·lules endotelials és suficient perquè les cèl·lules envaeixin i formin una xarxa de lumens i tubs, seguint un organisme intacte in vivo [10,11]. Diversos grups han informat que els models de cultiu 3D presenten nivells més alts de nefrotoxicitat que els models de cultiu cel·lular 2D [12]. A més, l'expressió de gens relacionats amb la nefrotoxicitat i la inflamació va ser significativament més alta en el model de cultiu cel·lular 3D renal que en un cultiu 2D típic [13].

En aquest estudi, els mitjans culturals de l'ésser humàrenalfibrosi-on-a-chip tenia un nivell significativament més elevat de citocines en comparació amb el de 2Dculture. El nostre grup ha demostrat que els fibroblasts derivats del pacient poden recrear teixits renals natius, incloses les capes de cèl·lules endotelials i epitelials, a través del nostre suggerit.fibrosimodel -on-a-chip. En conseqüència, aquestes troballes indiquen que elrenalfibrosiEl model -on-a-chip simula amb precisió l'entorn microfísic del ronyó humà. A més, com que els fibroblasts cultivats al xip es deriven de pacients, altres models de pacients clínicament rellevants es poden obtenir fàcilment i de manera clara i segura. Per tant, l'humàrenalfibrosiEl sistema de model -on-a-chip pot permetre el desenvolupament de medicina personalitzada amb mesures sensibles de les funcions epitelials i endotelials. En els nostres experiments,fibrosii l'angiogènesi es va reduir a laTGF-grups tractats amb inhibidors. Els inhibidors del TGF- són antagonistes naturals del TGF-, que s'han demostrat mitjançant diversos models de malaltia renal. Sembla que és possible realitzar experiments per confirmar l'eficàcia del tractament en models de malaltia utilitzant agents terapèutics com aquest inhibidor del TGF. Per tant, aquest xip ha proporcionat un mitjà per desenvolupar un model millorat de fibrosi renal per mesurar la morfologia i la funció cel·lular i podria ser útil per realitzar avaluacions de nefrotoxicitat per a productes farmacèutics.

TGF-és el factor profibròtic predominant en diverses malalties renals [14] i té un paper en l'angiogènesi [15]. Els efectes angiogènics del TGF- són molt complexos i poden tenir activitat proangiogènica o antiangiogènica depenent de l'entorn i de diversos factors reguladors [16]. Els factors de creixement angiogènics com VEGF i FGF-2indueixen l'angiogènesi in vivo semblen tenir un paper central en la modulació de l'angiogènesi in vivo [17-20]. Algunes evidències indiquen que aquests dos factors poden actuar de manera sinèrgica per promoure esdeveniments morfogenètics de cèl·lules endotelials [21,22]. Hem proporcionat proves que l'expressió d'ARNm de VEGF i la secreció de proteïnes FGF-2 s'eleven significativament pel TGF- 1 en xips 3D en comparació amb el cultiu 2D.

La limitació del nostrefibrosiEls models podrien ser que es van crear en un període de temps relativament curt, 24 h. El TGF-beta té propietats pro-fibròtiques i antiinflamatòries en un primer momentfibrosiprocés, no en el procés crònic. Convencionalment,TGF-s'ha utilitzat principalment en citocinesfibrosimodels. Tanmateix, com que només una citocina no es pot representar in vivo,fibrosimodels d'inducció que utilitzen diverses substàncies candidates addicionals, com araTGF-i s'han proposat BMP7. Tanmateix, dues o tres citocines encara no són suficients per reproduir-se in vivo. Hem utilitzatTGF-com a punt de partida; tanmateix, vam intentar implementar un microentorn in vivo al xip induint una tempesta de citocines més diversa. El fibroblast, un component cel·lular important defibrosi, es va introduir i l'estimulació secundària de citocines més diverses (IL-1 , TNF- , b-FGF,TGF- 1, TGF-2, iTGF-3) es va induir en fibroblasts estimulats ambTGF-. Així, un entorn semblant afibrosien el cos humà es va reproduir.

extracte de cistanche deserticola: tractament de malalties renals

4. Materials i Mètodes

4.1.Cultius cel·lulars

Kidney fibroblasts(KFs)were isolated from biopsies of the normal tissue portion of renal cell carcinoma patients with an estimated glomerular filtration rate (eGFR)>60 mL/minut/1,73 m2 després que els pacients hagin donat el seu consentiment per a una segona biòpsia amb finalitats d'investigació. Els KF es van cultivar en un medi de creixement de fibroblasts (FGM-2, Lonza, Suïssa) i es van utilitzar els passos 3 a 4 per als experiments. Els fibroblasts renals es van eliminar del cultiu durant 1-2 setmanes fins que les cèl·lules van formar una monocapa. Per eliminar les cèl·lules epitelials que contaminaven el cultiu, es van seleccionar fibroblasts mitjançant perles magnètiques anti-fibroblast (Miltenyi Biotec Inc., Auburn, CA, EUA) després del primer pas. Les cèl·lules es van separar mitjançant 0.05 per cent d'àcid tripsina-etilendiaminotetraacètic (EDTA) (Welgene, Gyeongsan, Corea), es van incubar amb perles anti-fibroblast i es van separar mitjançant una columna magnètica, i el flux- a través es va recollir. Els fibroblasts primaris purificats es van caracteritzar mitjançant l'anàlisi de classificació de cèl·lules activades per fluorescència (FACS) mitjançant anticossos anti-fibroblasts conjugats amb PE. El dissociador de classificació cel·lular activada per magnètica (MACS) es va utilitzar per a una picada suau del teixit renal. A Miltenyi Biotec Inc. (Auburn, CA, EUA) es va comprar un separador magnètic Octo MACSTM amb columnes MACS LS (amb èmbols) aplicades per a la purificació de cèl·lules marcades amb microbis. Es van utilitzar tubs MACS C suaus (Miltenyi Biotec Inc., Auburn, CA, EUA) per a la picada de ronyó per a la separació cel·lular. Els coladors MACS Smart Strainers (70 um) es van obtenir de Miltenyi Biotec Inc. (Auburn, CA, EUA). El tampó de columna es va utilitzar per rentar columnes i resuspendre els pellets cel·lulars. El tampó es va preparar com una solució que contenia un 0,5 per cent d'albúmina sèrica bovina (BSA) amb EDTA 2 mM en solució salina tamponada amb fosfat (PBS) (pH7,4) i es va comprar a Miltenyi Biotec Inc. (Auburn, CA, EUA). Les cèl·lules endotelials de la vena umbilical humana que expressen proteïnes fluorescents verdes (GFP-HUVECs, Lonza, Suïssa) es van cultivar en un medi de creixement endotelial (EGM-2, Lonza, Suïssa) i es van utilitzar cèl·lules dels passatges 3 a 4. Línia cel·lular tubular proximal humana (les cèl·lules de ronyó humà-2(HK{-2) es van obtenir de l'American Type Culture Collection (ATCC). La línia cel·lular es va cultivar en medi d'àguila modificat de Dulbecco (DMEM) d'alta glucosa. complementat amb un 10% de sèrum fetal boví (FBS), penicil·lina (100 U/ml) i estreptomicina (100 ug/ml). Els reactius es van comprar a Gibco (Rockville, MD, EUA). Totes les cèl·lules es van separar utilitzant un 0,05% de tripsina. EDTA i es va mantenir en una incubadora humidificada a 37 graus i 5 per cent de CO2. Els KF es van tornar a suspendre en FGM-2 a una concentració cel·lular de 4 × 10 graus cèl·lules/ml. Cèl·lules epitelials tubulars de ronyó humà (HK{{49} }}) es van tornar a suspendre a una concentració de 2 × 10 graus de cèl·lules/mL en DMEM d'alta glucosa.

4.2.Reactius

La matriu estava formada per gels de fibrina, incloent fibrinogen disponible comercialment del plasma boví, aprotinina del pulmó boví i trombina del plasma boví. Els tres materials esmentats es van comprar a Sigma (St. Louis, MO, EUA). El fibrinogen es va dissoldre en l × PBS en un bany d'aigua (37 graus) durant 3 0 min a una concentració de 10 mg/mL. La trombina i l'aprotinina es van dissoldre en aigua desionitzada a una concentració de 50 unitats/ml i 4 TIU/ml. Les tres solucions es van esterilitzar filtrant a través d'un filtre de 0,22 μm. Human recombinantTGF- 1es va obtenir de PeproTech EC Ltd. (Londres, Regne Unit). Es va comprar un inhibidor específic de la cinasa del receptor TGF-beta, SB431542, a Tocris Cookson, Inc. (Ellisville, MO, EUA).

4.3. Patró de cel·les al dispositiu

Abans de la sembra de cèl·lules per facilitar l'enllaç estret, el dispositiu es va tractar durant 1 min en una màquina de plasma (Femto Science Inc., Suwon, Corea) amb una potència de 70 W, 50 Hz. La hidrofilicitat superficial induïda pel tractament amb plasma i va ajudar a facilitar el model de gel i la càrrega dels mitjans. Per evitar canvis en la hidrofilicitat, es van realitzar experiments dins dels 30 minuts posteriors al tractament amb plasma. Es poden fer diferents patrons cel·lulars dins dels dispositius d'una manera altament personalitzable. Era important determinar prèviament la composició i concentració dels diferents tipus de cèl·lules a modelar. Per a les suspensions d'hidrogel cel·lular, es van preparar immediatament 37,5 μL de suspensió cel·lular i una alíquota separada de 12,5 μL de solució de fibrinogen a 10 mg/mL (250 μL de solució de fibrinogen a 10 mg/mL amb 40 μL de 4 TIU/mL d'aprotinina). abans de la càrrega. Immediatament abans de la càrrega, els 37, 5 μL de suspensió cel·lular es van barrejar amb 12, 5 μL de fibrinogen de 10 mg/mL fins que es van homogeneïtzar. Els 50 uL d'hidrogel es van barrejar amb una gota d'1 uL de trombina (0,5 unitats/ml). Immediatament després de la barreja, es va injectar trombina amb una suspensió de fibrina de GFP-HUVECs (concentració cel·lular de 2 × 10' cèl·lules/ml) a la vora exterior del canal exterior (figura 3, Gel A). Vam esperar 3 minuts perquè la reticulació del fibrinogen es completés. Immediatament després de la barreja, es va col·locar trombina amb una suspensió de fibrina de KFs (concentració cel·lular de 4 × 10 graus de cèl·lules/ml) a cada costat del terra del dipòsit per pou (figura 3, Gel C). Es va deixar que aquesta suspensió de fibrina de KFs es reticulés a temperatura ambient durant 3 min. Es va injectar una suspensió cel·lular de 10 μL de cèl·lules epitelials tubulars renals proximals humanes (HK-2) al port d'injecció del canal interior (Figura 3, Gel B). Per connectar HK-2 a la paret del canal interior. gel de fibrina al canal GFP-HUVECs, el dispositiu es va girar 90 graus i es va col·locar al 5 per cent de CO, una incubadora durant 30 minuts a 37 graus. L'HK-2 es va assentar i va formar una làmina cel·lular al costat del gel de fibrina.

Després d'adjuntar l'HK-2, el dispositiu es va omplir amb EGM-2. El dispositiu es va incubar durant 3 dies a 37 graus en una incubadora al 5% de CO. El medi es va canviar amb o sense 5 ng/mLTGF- 1i amb 5ng/mlTGF- 1i 10 umTGF- 1inhibidor després de tres dies d'incubació (figura 3).

què és cistanche

4.4. Imunocitofluorescència

Els teixits conreats al dispositiu es van fixar amb una solució de paraformaldehid al 4% (p/v) (Biosesang, Seongnam, Corea) en PBS (Welgene, Gyeongsan, Corea) durant 2 0 min, seguit de permeabilització amb un 20 immersió mínima al 0,15 per cent de Triton X-100(Sigma, St. Louis, MO, EUA). A continuació, es van tractar les mostres amb un 3% de BSA (Sigma, EUA) durant 1 h. Les cèl·lules es van incubar amb anticossos comprats a Abcam. Els anticossos primaris eren anti-citoqueratina 8 i anti-o-SMA, deixats durant 2 dies a temperatura ambient (RT). Es va utilitzar com a anticossos secundaris la IgG anti-conill conjugada Alexa Fluor 647 (H més L). L'etiquetatge d'ADN es va realitzar amb una dilució 1:250 de Hoechst33342 (Thermo Scientific, Rockford, IL, EUA) durant 3 h a temperatura ambiente. Les imatges es van recollir mitjançant un microscopi làser confocal Zeiss LSM 710. La intensitat de fluorescència mitjana (MFI) es va mesurar mitjançant ImageJ i un analitzador d'intensitat de fluorescència.

4.5. Anàlisi múltiplex de citocines

El kit MSD V-Plex Cytokine and Angiogenesis Panel 1 Human (Rockville, MD, EUA) es va utilitzar per mesurar les concentracions d'interleucina-1 beta (IL{-1ß) i factor de creixement bàsic de fibroblasts (b-FGF) en mostres individuals, segons les instruccions del fabricant. Es van avaluar totes les mostres per determinar els nivells totals de proteïnes d'IL-1 i b-FGF. La quantitat (en pg/mL) es va quantificar a partir de la corba estàndard de cada mesura.

4.6. Immunoassaig de perles multiples

Les concentracions de citocines es van analitzar mitjançant un sistema d'immunoassaig de perles multiplex (Procarta Cytokine Assay Kit; Affymetrix, Inc., Santa Clara, CA, EUA), basat en la tecnologia de multiplexació (xMAP; Luminex, Austin, TX, EUA), segons el instruccions del fabricant. Les dades es van adquirir mitjançant una estació de treball compatible amb Luminex i el seu programari de gestió (estació de treball Bio-Plex i programari versió 6.0; Bio-Rad, Tòquio, Japó), segons les instruccions del fabricant. TGF- 1, TGF- 2 i TGF- 3 humans relacionats amb elfibrosies van analitzar simultàniament el procés en les mostres diluïdes. Les isoformes deTGF-es van detectar mitjançant els sistemes Bio-Plex 200 i Bio-Plex ProTM Human disponible comercialmentTGF-assaigs (Bio-Rad Laboratories, Inc); basat en la informació proporcionada pel fabricant. El kit d'assaig múltiplex pot mesurar quantitativament múltiples citocines del sobrenedant amb un límit inferior de detecció d'1 pg/mL per citocina. Cada mostra es va executar com a mesura única per a una quantitat limitada del sobrenedant recollit.

4.7.PCR en temps real

L'extracció d'ARN es va realitzar mitjançant TRIzol Reagent (Invitrogen Life Technologies, Carlsbad, CA, EUA). Master Mix i un kit de síntesi d'ADNc Revert Aid First Strand es van utilitzar per a la transcripció inversa de l'ARN total. La qPCR es va realitzar mitjançant l'Applied BiosystemsTM PowerUpTM SYBRTM Green Master Mix (Thermo Fisher Scientific, Inc.). Els primers específics van ser preparats per Bioneer (Daejeon, Corea) i utilitzats en aquest experiment de la següent manera. Les seqüències d'encebadors es resumeixen a la taula 1.

Es van utilitzar deu microlitres de PowerUp SYBR Green Master Mix, 4 μL d'ADNc i 2 pmol de cada imprimació per a la PCR en temps real en un volum final de 20 μL. La reacció es va dur a terme a 95 graus durant 1 s i 60 graus durant 20 s durant 45 cicles després de la desnaturalització a 95 graus durant 20 s. La PCR es va realitzar per duplicat o triplicat per a cada mostra. Els nivells d'ADNc es van determinar mitjançant una corba estàndard de llindars de cicle. Totes les dades de cada ADNc es trobaven dins de la corba estàndard corresponent. Les dades obtingudes es van normalitzar a ADNc de -actina.

4.8. Anàlisi estadística

Les dades quantitatives es presenten com a mitjana ± SD o SE d'almenys tres experiments independents. Les anàlisis estadístiques es van realitzar mitjançant una prova t de Student de dues cues. Hem considerat una diferència significativa només a un nivell de confiança del 95 per cent o superior (pàg<>

5. Conclusions

En resum, els protocols d'aquest estudi van permetre la construcció humanarenalfibrosi-imitar dispositius com a model i va mostrar diversos efectes que no són possibles en experiments de cultura 2D. Creiem que l'estratègia d'avaluació proposada en aquest estudi permetrà una millor comprensió del detallfibrosimecanismes implicats en els canvis patològics durantmalaltia renal. La fibrosi renal 3D desenvolupada en xip es podria utilitzar com a model potencial in vitro, que ens aproparà a crear un model millorat de ronyó en xip.

cistanche phelypaes: tractament de les malalties renals

Referències

1. Frontera, W.; Noble, N. Factor de creixement transformador en teixitfibrosi.N. Anglès. J. Med.1994, 331,1286-1292.

2. Wang, W.;Huang, XR;Li,AG;Liu, F;Li,J.; Truong, LD; Wang, XJ; Lan, HYMecanisme de senyalització de TGF-betal en la prevenció de la inflamació renal: paper de Smad. Jo sóc. Soc. Nephrol.2005, 16, 1371-1383. [Ref creuat]

3. Liu, Y.Renalsfibrosi: nous coneixements sobre la patogènesi i la terapèutica. Kidney Int.2006,69,213-217. [CrossRef][PubMed]

4. Andes, D.; Craig, WA Farmacocinètica i farmacodinàmica del model animal: una revisió crítica. Int. J.Antimicrob.Agents 2002, 19,261-268. [Ref creuat]

5. Kim, S.; Takayama, S.Organ-on-a-xip i el ronyó. ronyó Res. Clin. Pract.2015, 34, 165-169.[CrossRef][PubMed]

6. Jang, KJ; Mehr, AP; Hamilton, GA; McPartlin, LA; Chung, S.; Suh, KY; Ingber, túbul proximal del ronyó DEHuman en un xip per al transport de fàrmacs i l'avaluació de la nefrotoxicitat. Enter. Biol. 2013,5,1119-1129. [CrossRef[PubMedl

7. Reardon, S. 'Organs-on-xips' es fan corrent. Natura 2015, 523, 266. [CrossRef]

8. Strutz, F; Zeisberg, M; Renziehausen, A.; Raschke, B.; Becker, V; Kooten, CV; Muller, GATGF- 1indueix la proliferació en fibroblasts renals humans mitjançant la inducció del factor bàsic de creixement de fibroblasts (FGF-2). Kidney Int. 2001, 59, 579-592.[CrossRef][PubMed]

9. Zanotti, S.; Bragato, C.; Zucchella, A.; Maggi, L.; Mantegazza, R.; Morandi, L.; Mora, M. Efecte antifibròtic de la pirfenidona en fibroblasts derivats del múscul de pacients amb distròfia muscular de Duchenne. Ciència de la vida. 2016, 145,127-136. [Ref creuat]

10. Davis, GE.:Camarillo. C, W. Un mecanisme pinocític depenent de la integrina alfa 2 beta 1 que implica la formació de vacúols intracel·lulars i la coalescència regula la formació del lumen capil·lar i del tub en una matriu de col·lagen tridimensional. Exp. Res cel·lular 1996, 224, 39-51.[CrossRef]

11. Bayless, KJ; Davis, G. Les GTPases Cdc42 i Race són necessàries per a la formació del lumen capil·lar en matrius extracel·lulars tridimensionals. J. Cell Sci. 2002,115,1123-1136. [CrossRef [PubMed]

12. DesRochers, TM; Suter, L.; Roth, A.; Kaplan, DL Bioengineered teixit renal humà 3D, una plataforma per a la determinació de la nefrotoxicitat. PLoS ONE 2013, 8, e59219. [Ref creuat]

13. Astashkina, AI; Mann, BK; Prestwich, GD; Grainger, DW Comparació de biomarcadors predictius de nefrotoxicitat de fàrmacs en cultiu d'organoides primaris 3-D renals i línies cel·lulars immortalitzades. Biomaterials 2012, 33, 4712-4721. [CrossRef] [PubMed]

14. Meng, XM; Nikolic-Paterson, DJ; Lan, HY TGF-beta: el regulador mestre defibrosi. Nat.Rev.Nephrol.2016,12, 325-338. [Ref creuat]

15. Pardali, E.;Goumans, MJ;ten Dijke,P. Senyalització per part dels membres de la família TGF-beta en la morfogènesi vascular i la malaltia. Trends Cell Biol.2010, 20, 556-567. [CrossRef] [PubMed]

16. Cunha, SL; Pietras, K. ALK1 com a objectiu emergent per a la teràpia antiangiogènica del càncer. Blood 2011,117,6999-7006.[CrossRef]

17.Klagsbrun, M.;D'Amore, PA Reguladors de l'angiogènesi. Ann. Rev. Physiol.1991,53, 217-239. [Ref creuat]

18. Folkman, J.;Shing, Y.Angiogènesi. J.Biol. Chem.1992, 267,10931-10934. [Ref creuat]

19. Shweiki, D. Itin, A.Soffer, D.Keshet, E. El factor de creixement endotelial vascular induït per la hipòxia pot mediar l'angiogènesi iniciada per la hipòxia. Nature 1992, 359, 843-848. [Ref creuat]

20. Kim, KJ; Li, B.; Winer, J.; Armani, M; Gillett, N.; Phillips, HS; Ferrera, N. La inhibició de l'angiogènesi induïda pel factor de creixement endotelial vascular suprimeix el creixement del tumor in vivo. Natura 1993, 362, 841-844. [CrossRefl]

21. Pebre, MS; Ferrara, N.; Orci, L.; Montesano, R. Potent sinergisme entre el factor de creixement endotelial vascular i el factor de creixement de fibroblast bàsic en la inducció de l'angiogènesi in vitro.Biochem. Biofísica. Res. Commun.1992,189,824-831.[CrossRefl

22. Goto, F.; Goto, K.; Weindel, K.; Folkman, J. Efectes sinèrgics del factor de creixement endotelial vascular i del factor de creixement de fibroblast bàsic sobre la proliferació i formació de cordó de cèl·lules endotelials capil·lars bovines dins de gels de col·lagen. Laboratori. Investig.1993,69, 508-551.[PubMed]

FEU CLIC AQUÍ PER PART Ⅰ