Compostos fenòlics de fulles i flors d'hibiscus roseus: possibles aplicacions cosmètiques de la pell d'una espècie poc investigada

Siusplau contactaoscar.xiao@wecistanche.comper a més informació

Resum:L'ús d'extractes vegetals en la cosmètica per a la cura de la pell és una tendència moderna per la seva riquesa en polifenols que actuen com a molècules anti-envelliment. La rosa hibisc és una espècie perenne naturalitzada a Itàlia, amb unes flors precioses de color rosa suau; la seva composició fenòlica i les seves activitats biològiques encara no s'han estudiat. L'objectiu d'aquest estudi va ser caracteritzar i quantificar els fenòlics i avaluar l'activitat antioxidant, factor de protecció solar (SIPF) i anticolagenasa dels extractes etanòlics de fulles (HL) i flors (HE) de H. roseus.p- Els derivats dels àcids cumàric, clorogènic i transferúlic, així com els flavonoides de quercetina i kaempferol, van ser els principals compostos fenòlics detectats. S'han detectat catequina, epicatequina, kaempferol-3-O-rutinósid, kaempferol-3-O-glucòsid, kaempferol-7-O-glucòsid, salidroside, oenina i peonidina-3-O-glucòsid només en HF, mentre que la floridzina era exclusiva del HL, que també mostrava majors quantitats de derivats de l'àcid hidroxicinàmic. L'HF era més ric en flavonoides i fenòlics totals, mostrant també una major capacitat antioxidant.bioflavonoidesL'activitat SPF i anti-collagenasa d'ambdós extractes eren similars i comparables a les dels estàndards sintètics. Els resultats globals demostren que els extractes de H. roseus són fonts prometedores de compostos fenòlics bioactius que es podrien aplicar potencialment com a agents anti-envelliment en cosmètics per a la cura de la pell.

Paraules clau:anti-colagenasa; antioxidant; flavonoides; flors; cosmètics a base d'herbes; àcids hidroxicinàmics; LC-MS/MS-MRM; fulles; cura de la pell; protecció solar

1. Introducció

L'ús de la cosmètica és antic i la seva història es configura paral·lelament a la de la humanitat [1,2]. Els cosmètics per a la cura de la pell són alguns dels productes més importants, és la categoria principal d'aquesta indústria [1,3]. Per tant, l'interès per la cura de la pell s'ha generalitzat, provocant la demanda de productes efectius derivats de fonts naturals [2].

Feu clic aquí per saber-ne més

La consciència recent sobre el medi ambient, la salut i el menor ús de productes químics sintètics va provocar un interès creixent per la cosmètica d'origen vegetal, que ara representen un terç de tot el sector cosmètic [1A]. Així, l'ús d'extractes de plantes i els seus fitoconstituents com a ingredients actius és un enfocament "proecològic" modern [5,6]. L'augment de la demanda d'aquests productes pot ser degut als seus efectes secundaris reduïts, al seu ampli espectre d'acció combinat amb una alta eficàcia i als seus preus generalment baixos [7,8].

Les plantes són riques en diverses classes de compostos bioactius, sent una de les fonts més abundants de nous ingredients responsables de tractar moltes malalties [9,10]. A més, les plantes també són fonts d'humectants, aromatitzants i pigments naturals, la qual cosa les fa molt interessants per a aplicacions de cosmètica per a la pell [5]. Finalment, els extractes de plantes generalment es consideren segurs i compleixen els requisits de les autoritats reguladores [10,11].

Entre els compostos presents en extractes de plantes, els fenòlics han guanyat una atenció especial com a ingredients actius[12,13], principalment perquè destaquen com a agents antiinflamatoris, antimicrobians i antioxidants[14,15]. Aquestes propietats els converteixen en molècules preventives i curatives ideals per als trastorns de la pell, sent aplicades en cosmetologia i dermatologia [16]. La notable activitat antioxidant dels fenòlics també és parcialment responsable dels seus efectes anti-envelliment, que possiblement es deuen a la seva capacitat per reduir la degradació del col·lagen i proporcionar protecció UV [16]. Per tant, s'ha investigat i fomentat l'ús d'extractes naturals rics en fenòlics amb alta capacitat antioxidant per a la substitució d'antioxidants sintètics en productes per a la pell [12].

Cistanche pot anti-envelliment

Els productes naturals extrets de plantes de la família de les Malvaceae s'utilitzen a tot el món, i el gènere Hibiscus ha guanyat una gran atenció per les múltiples activitats farmacològiques dels seus extractes i per la seva gran abundància fenòlica [17-19]. Hibiscus spp. conté unes 240 espècies d'herbes, arbustos o arbres amb flors anuals o perennes, que es distribueixen en diferents regions del món [20]. Els extractes d'hibisc s'han aplicat a la medicina tradicional com a emol·lients per al tractament de molts trastorns de la pell i cremades[19,21].comprar cistancheA partir d'aquestes dades de la literatura, extractes d'Hibiscus sp. Les plantes poden ser ingredients actius interessants per a les formulacions cosmètiques de la pell, protegint les cèl·lules de l'estrès oxidatiu, la degradació del col·lagen i els efectes nocius de la radiació UV.

Tot i que el gènere Hibiscus comprèn moltes espècies, fins ara s'han investigat menys del 10% d'elles [17]. Hibiscus roseus Thore (syn. H.palustris L., H.moscheutos subsp. palustris (L.) RT Clausen.) és una espècie herbàcia perenne naturalitzada a Itàlia [22,23]La identificació i descripció d'H. roseus encara estan en discussió[ 20,23]. Segons la literatura, l'espècie H. moscheutos subsp. palustris s'ha introduït molt aviat a Europa, mentre que a França, Thore havia descrit com una nova espècie, H. roseus, el 1807 [23]. Aquesta espècie no ha estat caracteritzada per la seva composició fenòlica i estudiada per les seves activitats biològiques, cosa que la converteix en una font potencial no revelada de compostos bioactius per a productes per a la cura de la pell.

L'ús popular en tractaments de la pell i l'ampli espectre de bioactivitats de les espècies Hibiscus justifiquen la importància de nous estudis centrats en aquest gènere de plantes [17]. Per tant, l'objectiu d'aquest estudi va ser caracteritzar la composició fenòlica i avaluar la capacitat antioxidant, la protecció solar i l'activitat inhibidora de la col·lagenasa dels extractes etanòlics de fulles i flors d'H. roseus. Els nostres resultats presenten per primera vegada la composició fenòlica i les bioactivitats relacionades amb l'anti-envelliment d'H. roseus, indicant el potencial d'aquesta espècie poc investigada en les aplicacions medicinals i cosmètiques com a additiu antioxidant i anti-envelliment.

2. Resultats i discussió

2.1.Caracterització i quantificació fenòlica

Es va realitzar una anàlisi diana, basada en LC-MS/MS-MRM (cromatografia líquida combinada amb espectrometria de masses en tàndem que treballa en mode de monitorització de reaccions múltiples), per identificar provisionalment els compostos fenòlics presents en extractes etanòlics de H. roseus des de la composició fenòlica de aquesta espècie encara no s'ha informat a la literatura. Dinou compostos fenòlics descrits anteriorment al gènere Hibiscus es van utilitzar com a estàndards (taula suplementària S1) per desenvolupar el mètode MRM, dissenyant la selecció de les millors transicions mitjançant l'optimització dels paràmetres instrumentals i les dades de la literatura [24].

The main classes of compounds detected in H.roseus leaf and flower extracts were chlorogenic, p-coumaric, and trans-ferulic acids derivatives and flavonoid derivatives (Figure 1,Table 1), similarly to the previous phytochemical characterization of other Hibiscus species[25-29]. Although the phenolic profile was quite similar, some qualitative differences were observed between flowers (HF) and leaves (HL)(Figure 1 and Table 1). While leaves showed richness in p-coumaric acid derivatives (Figure 1, blue line, peaks with Rt from 2 to 9 min), flowers were especially rich in flavonoid derivatives such as catechins, dihydrochalcones, and anthocyanins (Figure 1, red line, Rt>9,3 min, taula 1).

Tretze dels dinou compostos fenòlics objectiu es van identificar autènticament en els extractes analitzats per LC-MS/MS en el mode MRM (taula 1).cistanchEl MRM és una manera potent per a la determinació simultània de diversos components, basant-se en la relació massa-càrrega (m/z) de l'ió molecular (((MH] )i el seu ió fill corresponent. Permet la millora de la selectivitat i sensibilitat de les anàlisis LC-MS/MS [30]Aquesta metodologia és molt fiable i adequada per a anàlisis d'extractes de plantes i altres mescles complexes que condueixen a la màxima especificitat, una excel·lent sensibilitat i una capacitat de multiplexació extrema gràcies a la possibilitat de distingir compostos que tenen els mateixos ions progenitors però fragments diferents [31, 32] Amb aquest mètode hem obtingut una reducció important de les tirades cromatogràfiques, una major especificitat i precisió proporcionada per una bona separació dels compostos detectats amb les mateixes transicions, tot evitant una pèrdua de sensibilitat. en el cas de diferents compostos coeluents o per a compostos presents en molt baixa concentració [24,334].

Entre els 13 compostos fenòlics identificats mitjançant estàndards autèntics (taula suplementària S1), deu estaven presents exclusivament en extractes de flors (figura 1 línia vermella, taula 1 HF): catequina i epicatequina (pics 16b i 23), àcid clorogènic (pic 18), peonidina-3-O-glucòsid i oenina (pics 21 i 22), àcid transferúlic (pic 27), tres derivats de glicòsids de kaempferol (kaempferol-3-O-rutinósid, kaempferol-7-O- glucòsid i kaempferol-3-O-glucòsid; pics 30, 31b i 32), i salidrosid (pic 34). A més, la floridzina (pic 33b) només es va detectar en extractes de fulles (figura 1 línia blava, taula 1 HL), mentre que la rutina i la quercetina -3-O-glucòsid (pics 26b i 28a) es van identificar en ambdós tipus d'extractes (figura 1, Taula 1HF/HL). Derivats similars de la quercetina, com la quercetina-3-O-sambubiòside i la isoquercitrina, es van observar anteriorment a H. sabdariffa [26,29,35,36] i en extractes de H. rosa-sinensis [18]. Alguns d'aquests glucòsids podrien correspondre als derivats de la quercetina que vam detectar a H. roseus. A més, també s'ha detectat prèviament tiliròsid en extractes fenòlics d'H. flors de sabdariffa [37,38]. L'oenina (malvidina-3-O-glucòsid) i la peonidina-3-O-glucòsid, les dues antocianines identificades aquí per primera vegada a les flors d'H. roseus, eren diferents de les descrites anteriorment a les flors de H. sabdariffa, delfinidina 3-sambubiòsid, delfinidina-3-glucòsid i cianidina-3-O-sambubiòsid [27,35,39,40]. Tanmateix, és important esmentar que la part més estudiada de la flors de H. sabdariffa és el calze (sèpals), no els pètals com s'ha investigat aquí per a H.roseus.

A més dels compostos identificats i confirmats pels estàndards objectiu autèntics, altres 27 compostos es van identificar putativament en extractes de fulles i flors d'H.roseus basats en el seu MRM (m/z) i els seus ions fills, considerant així els productes de fragmentació obtinguts. del precursor (taula suplementària S1). En particular, es va trobar la presència de derivats d'àcid p-cumàric, transferúlic i clorogènic i derivats de quercetina, així com de derivats de floretina i flloridzina en ambdós extractes (taula 1).

La quantificació dels fenòlics identificats en aquests extractes es va realitzar mitjançant anàlisi HPLC-DAD (cromatografia líquida d'alt rendiment acoblada a detecció de matrius de díodes; Taula 2). El contingut de derivats de l'àcid hidroxicinàmic (THC) era més gran a les fulles que a les flors, mentre que es van trobar majors quantitats de flavonoides (TFC) a les flors que a les fulles (p.<0.001,table 2).catechin="" derivatives(tcd),dihydrochalcones(tdc),and="" anthocyanins="" (tac)="" were="" quantified="" only="" in="" flower="" extracts(table=""><0.001).therefore, flowers="" represent="" a="" greater="" source="" of="" phenolics="" compared="" to="" leaves="" (tpc,p="0.02," table="" 2).="">cistanche AustràliaDe manera similar als extractes de H. sabdariffa, les classes principals de compostos que es troben a les fulles de H. roseus eren derivats de l'àcid clorogènic i p-cumàric, així com els àcids cafeoilquínic i p-cumaroilquínic [26,40,41]. A més, les antocianines es van informar exclusivament a Hibiscus spp. flors i calzes, juntament amb catequines [19,28,35].

Per contra, l'àcid ferúlic i els seus derivats es van informar menys com a constituents d'Hibis-cus spp. extractes, però poden ser de gran importància per a les seves activitats biològiques [6,42-44]. De fet, els derivats de l'àcid ferúlic obtinguts a partir de diferents espècies d'Hibiscus van mostrar propietats farmacològiques importants com ara activitats inhibidores de l'enzim convertidor d'angiotensina i antivirals [43,44]. A més, l'àcid ferúlic es va descriure com una molècula activa en extractes de H. mutabilis, H. taivanensis [45, 46] i en extractes de calze de H. sabdariffa [28, 38].

Pel que fa a les possibles aplicacions cosmètiques, s'ha demostrat que l'àcid ferúlic inhibeix la formació de melanina [6,42], mentre que els derivats de l'àcid p-cumàric posseeixen activitats de despigmentació [47,48], antiinflamatòries i inhibidores de la tirosinasa [49]. A més, moltes investigacions destaquen els papers addicionals dels flavonols i les antocianines, que poden actuar com a compostos protectors de la pell, en particular inhibint la melanogènesi [50,51] i mitjançant la seva acció com a compostos anti-envelliment i prevenció del melanoma [52,53]. A més, les aplicacions potencials dels extractes de H. roseusleaf per als trastorns de la pell també es podrien millorar amb la presència de flloridzina, que ha demostrat que disminueix l'expressió de citocines proinflamatòries induïdes per UVB a la pell exposada als UV [54].

2.2.Assajos d'activitat antioxidant

Avui en dia, està àmpliament demostrat que l'acumulació d'espècies reactives d'oxigen (ROS) és responsable dels processos d'envelliment de la pell, que condueixen a la sequedat, la pèrdua de teixit subcutani i la formació d'arrugues [55,56]. Per tant, trobar compostos antioxidants potencials naturals que es puguin aplicar en productes per a la cura de la pell és molt important per a les indústries cosmètiques.

Els nostres resultats van mostrar que els extractes de fulles de H. roseus tenien una activitat antioxidant més baixa (expressada com a valors ECso) que les flors (taula 3). 3). Aquests resultats coincideixen amb la composició i el contingut fenòlic d'aquests extractes (Figura 1, Taules 1 i 2), ja que els extractes d'HF eren més rics en compostos fenòlics (Taula 2). De fet, l'anàlisi de correlació entre els valors d'ECso i el contingut de les diferents classes de fenòlics es va mostrar significativa i negativa per a tots els compostos excepte per al THC. Com a tal, quantitats més elevades de flavonoides, catequines, antocianines, dihidrochalcones i contingut fenòlic total contribueixen a una major capacitat antioxidant (valors més baixos de EC50—Taula 4).

Entre els flavonoides, la quercetina i els seus derivats són els antioxidants i els eliminadors de radicals lliures més ben establerts, i també actuen com a inhibidors efectius d'oxidases i lipoxigenases [57]. A més, les dihidrochalcones, com la floretina, també s'han descrit com a potents antioxidants en assajos d'eliminació de 2,2-difenil{-1-picrilhidrazil (DPPH) i d'eliminació d'OH[58]. A més, les antocianines aïllades d'extractes d'hibiscus van demostrar que eren compostos antioxidants principals a les cèl·lules humanes [59].

Els extractes de diferents parts d'espècies d'hibiscus han mostrat una gran capacitat antioxidant [18,21,27,35,40]. Les fraccions d'extractes etanòlics d'H. sabdariffa van mostrar valors d'EC50 molt baixos en assajos antioxidants, que es van correlacionar amb l'alt contingut en àcid protocatecuic [21,59], àcid clorogènic, flavonoides i antocianines [24,60]. A més, un estudi sobre H. esculentus va mostrar el potencial antioxidant in vitro dels derivats de la quercetina i les catequines presents en els seus extractes[61]. Finalment, a H.acetosella, l'activitat antioxidant es va correlacionar fortament amb el contingut d'antocians [62].

Els resultats del nostre estudi sobre extractes etanòlics d'H. roseus van mostrar una activitat antioxidant cent vegades superior a la reportada per als extractes aquosos de calze de H. sabdariffl, per als quals la CE era propera als 45 mg mL- en un DPPH similar in vitro model [56]No obstant això, a diferència de les nostres troballes, el contingut total de flavonoides i la capacitat antioxidant dels extractes de fulles de H. sabdariffa eren superiors als de les flors[63,64]. 2.3.Factor de protecció solar in vitro (SPF)

La radiació ultraviolada és un dels factors ambientals més nocius que influeixen en la salut i la fisiologia de la pell, sent una important causa extrínseca d'envelliment de la pell [65,6] L'exposició constant a la radiació ultraviolada augmenta el risc de trastorns de la pigmentació i fotoenvelliment de la pell[67]. Això es deu principalment a l'augment dels nivells de ROS, que condueix a l'estimulació de la producció de col·lagenasa i provoca un dany considerable a les funcions cel·lulars de la pell [56]. Per tant, els ingredients protectors dels UV, inclosos els presents en extractes de plantes, s'apliquen àmpliament en cosmètics per evitar la penetració de la radiació ultraviolada a la pell, però també prevenir la producció de ROS actuant com a antioxidants [56,

Un mètode senzill per verificar l'eficàcia de diferents components naturals com a filtres UV és l'assaig del factor de protecció solar (SPF), que és un mètode in vitro ràpid i fiable basat en el cribratge de l'absorbància dins de la regió espectral UV-B (entre 290 i 320 nm), sent útil en una fase inicial de selecció dels ingredients actius de fotoprotecció [69].

L'alt contingut fenòlic i l'activitat antioxidant de H.avantatges de cistancheroseus extracts suggest that they may have also an UV absorbing activity. Both leaf and flower extracts of H. roseus at 0.1 mgmL-1 showed comparable SPF results (p>{{0}}.05): 2,6±0,15 per a HL i 2,4±0,19 per a HF. Aquests resultats són prometedors, ja que una formulació de protecció solar estàndard que conté un 8% d'homosalat (un protector solar químic àmpliament aplicat) va mostrar un valor SPF de 4 [69,70]. Els resultats trobats aquí per a H.roseus eren similars als trobats per a altres espècies vegetals[68,69,71,72] i són importants tenint en compte la baixa concentració dels extractes utilitzats per provar aquest efecte.

Els extractes de H. rosa-Sinensis ja han demostrat efectes positius contra el dany de la radiació ultraviolada a la pell del ratolí mitjançant la protecció antioxidant [73]. Els productes naturals que presenten SPF juntament amb altes capacitats antioxidants i la inhibició de la col·lagenasa i l'elastasa són candidats importants per ser utilitzats per protegir la pell del fotodany i prevenir l'aparició d'arrugues[66,71]. De fet, l'associació entre el sol tradicional homologat els filtres i els derivats de fonts naturals representa una tendència a la indústria cosmètica, ja que els consumidors perceben aquests productes com a més segurs, a causa dels efectes secundaris dels filtres UV sintètics[72].

El contingut més elevat de compostos fenòlics totals dels extractes d'HF (TPC; Taula 2) podria indicar la seva major activitat absorbent d'UV. Tanmateix, tant els extractes de fulles com de flors van mostrar resultats molt similars, indicant que més que el contingut total de fenòlics, el perfil fenòlic dels extractes estaria relacionat amb la protecció contra els UV. La taula 2) pot contribuir a augmentar el seu valor SPF, ja que aquests compostos tenen una absorció UV al voltant de 300-320 nm [74] que, per tant, es centra a la regió UV-B. Per contra, els flavonoides i antocians, presents principalment en extractes de flors, tenen un espectre d'absorbància més ampli en el qual hi ha almenys dues bandes, amb la banda principal dins o prop del rang visible, al voltant de 350 nm per als flavonols i 505-550 nm per a antocians [53,69]. De fet, els derivats de l'àcid hidroxicinàmic són produïts per les plantes, especialment per a la seva protecció contra la radiació UV [75]. Per tant, aquests derivats de l'àcid hidroxicinàmic podrien contribuir en gran mesura a l'absorció d'UV-B per la pell humana [6]. No obstant això, tenint en compte la presència d'antocianines i flavonoides que cobreixen un rang límit d'absorció de longituds d'ona, també incloses les regions UV-A i visibles, els extractes de flors de H. roseus podrien ser prometedors per a més anàlisis i el desenvolupament de productes cosmètics protectors solars. A més, la major activitat antioxidant observada per a HF (taula 3) podria millorar els efectes de protecció solar en possibles formulacions addicionals[69].

2.4.Activitat d'inhibició de la col·lagenasa

Both H.roseus extracts showed high collagenase inhibitory activity (>80%)at0.25mg mL-1, which is comparable to that of the synthetic inhibitor 1,10-phenanthroline 1M (Figure 2). The IC50 value of both extracts were very similar( >{{0}}.05),IC50extractes de flors =0,14 ± 0,02 mg mL-1 i fulla IC50 extractes =0,13±0,01 mg mL-1, malgrat les seves diferències en la composició i el contingut fenòlics (Taules 1 i 2). Això podria ser degut a les interaccions sinèrgiques entre els fenòlics i la col·lagenasa, que podria tenir un paper important en el mecanisme d'inhibició. A més, altres compostos possiblement presents als extractes de H. roseus i no analitzats aquí podrien participar en l'activitat anti-collagenasa, incloent la vitamina E i l'àcid ascòrbic [71,7]. A més, els dos compostos estàndard provats, l'àcid clorogènic i la quercetina, els derivats dels quals estan presents en extractes de fulles i flors de H. roseus (taula 1), van mostrar una inhibició de col·lagenasa molt elevada, amb valors d'ICso de 5,8 ± 0,5 i 5,6 ± 0,7 ug mL. -l respectivament. Per tant, aquests compostos podrien ser responsables de l'activitat anti-collagenasa observada. És rellevant observar que diferents classes de fenòlics, que també estan presents en els nostres extractes de plantes, ja han demostrat activitat anti-envelliment mitjançant la inhibició de la degradació del col·lagen i contribuint a la humidificació de la pell [78]. Per exemple, s'ha demostrat que l'àcid ferúlic i els seus derivats humecten la pell i estimulen la síntesi de fibres de col·lagen, sent utilitzats en cosmètics com les cremes antiarrugues [6]. A més, els flavonols, en particular els derivats de la quercetina, són forts inhibidors de l'enzim col·lagenasa [79].

Els nostres resultats mostren l'efecte prometedor dels extractes d'H. roseus contra la degradació del col·lagen, que és una de les proteïnes més grans responsables de la pèrdua d'elasticitat i integritat de la pell i de la formació d'arrugues [80,81]. L'enzim col·lagenasa inhibeix la retenció de l'elasticitat de la pell i la resistència a la tracció [82]. De fet, diferents estudis han demostrat la importància dels antioxidants naturals a causa de la seva eficàcia per retardar l'envelliment prematur mitjançant la inhibició de l'activitat de la col·lagenasa [78,83].

S'han realitzat estudis previs que avaluen els efectes de les espècies d'Hibiscus en l'estimulació de la producció de col·lagen i en la inhibició de l'activitat de la col·lagenasa [56,84,85]. La inhibició de l'activitat de la col·lagenasa dels extractes aquosos de H. sabdariffa s'ha descrit recentment a la literatura [56]. De manera similar a les nostres troballes, els autors no van observar els efectes de la inhibició de la col·lagenasa a baixes concentracions dels extractes, sinó només a concentracions significativament altes [56]. En un estudi diferent, el valor ICso en la inhibició de la col·lagenasa dels extractes etanòlics de H. sabdariffin va ser de 0,75±0,04 mg mL-1[65], que és una activitat que és gairebé sis vegades inferior a les descrites aquí per a H. roseus.

3. Materials i Mètodes

3.1.Material Vegetal

Deu plantes d'Hibiscus roseus Thore, comprades a un viver comercial de Florència (Itàlia), es van plantar en tests de 10-litre plens de terra sorrenca (sorra/torba, 60:40, v/v) i es van mantenir a l'hivernacle de el Departament d'Agricultura, Alimentació, Medi Ambient i Silvicultura (DAGRI)—la Universitat de Florència (UNIFD, Sesto Fiorentino (Itàlia, 43949/N,1137/E) Les plantes es van conrear a l'hivernacle de gener a juliol de 2019, de manera manual. reg a la capacitat d'aigua de l'olla D'aquestes deu plantes diferents es van recollir fulles i flors amb dos ajuntaments a finals de juliol durant el període de floració i es van emmagatzemar immediatament a -80 grau fins a l'extracció. 3.2.Extracció assistida per ultrasons.

Es van triturar mostres liofilitzades (900 mg) de flors de H.roseus (HF) i fulles (HL) en nitrogen líquid i es van extreure amb 3 × 15,0 ml d'etanol al 75 per cent (pH2,5 ajustat amb HCOOH) mitjançant un extracció assistida per ultrasons (EAU). Els Emirats Àrabs Units es van realitzar en un bany d'ultrasons (BioClass@ CP104) amb una freqüència constant de 39 kHz i una potència d'entrada de 100 W, durant 30 min, a 5 graus. Després de la centrifugació (5 min, 9000 rpm, 5 graus; ALC@4239R, Milà, Itàlia), els sobrenedants es van repartir amb 3 × 15 ml de n-hexà per eliminar els compostos lipòfils que podrien interferir amb l'anàlisi. La fase etanòlica es va reduir a sequedat, es va ponderar en una balança analítica digital (Precisa [125A) i el residu es va tornar a suspendre amb una solució acidificada de metanol/aigua (1:1 v/v, pH 2,5 ajustat amb HCOOH). El procés d'extracció es va dur a terme per triplicat.

3.3.Anàlisi LC-MS: Perfil fenòlic dels extractes

L'anàlisi LC-MS es va realitzar mitjançant un espectròmetre de masses de triple quadripol ABSciex API3000 (AB Sciex LC, Framingham, MA, EUA) juntament amb un sistema HPLC Agilent 1100 amb bomba binària i mostreig automàtic (Agilent Technologies, Inc, Santa Clara, CA, EUA). ). L'adquisició i la reducció de dades es van realitzar mitjançant el programari Analyst 1.6.2 (AB Sciex LLC, Framingham, MA, EUA).

La separació per HPLC es va dur a terme en una columna de fenil Agilent (3 × 10 mm; 2,7 um), i els eluents eren (A) aigua acidificada (a pH 2,5 ajustat amb HCOOH) i (B)acetonitril/ aigua (90/10, a pH 2,5 ajustat amb HCOOH). Es va utilitzar un sistema de dissolvent de gradient de la següent manera: 0-3 min, 5 per cent de B;3-18 min, 5-40 per cent de B; 18-28 min, 40 per cent B;28-38min, 40-80 per cent B; 38-43min, 80 per cent de B,43-45min, 80-5 per cent de B, a un cabal de 0,4 mLmin -l. L'anàlisi MS es va dur a terme en les condicions experimentals següents: pressió atmosfèrica Ionització química (APCI) mitjançant la interfície del nebulitzador escalfat; Corrent de l'agulla （NC）, -5 μA; Nebulitzador de gas (aire), 10 (unitats arbitràries); Gas auxiliar (aire), 3L min-l; Temperatura del gas auxiliar (TEM), 550 graus; Curtain Gas (CUR, nitrogen), 6 (unitats arbitràries); Gas de col·lisió (CAD, nitrogen), 9 (unitats arbitràries, corresponents a la pressió de la cel·la de col·lisió de 2,6 × 10 ~ Torr).

La identificació dels diferents components fenòlics es va realitzar mitjançant un enfocament dirigit, mitjançant un mètode de monitorització de reaccions múltiples (MRM), optimitzat amb estàndards per a 19 compostos diana (triats a partir d'estudis anteriors de la composició polifenòlica d'Hibiscus spp.[25,35] ): dos flavan-3-ols (catequina i epicatequina), set flavonols (quercetagetina-7-O-glucòsid, rutina, quercetina-3-O-glucòsid, kaempferol-3-O. rutinoside , kaempferol-7-O-glucòsid, kaempferol-3-O-glucòsid i quercetina), un èster de cinamat (àcid clorogènic), dos àcids hidroxicinàmics (àcids p-cumàric i trans-ferúlic), dues dihidrochalcones ( phloridzina i phloretina), una oxiflavona (salidroside) i quatre antocianines (mirtil·lina, kuromanina, peonidina-3-O-glucòsid i oenina). El temps de retenció i les transicions MRM relatives (quantificador i qualificador) es van informar a la taula complementària S1. A més, s'han suggerit identificacions provisionals addicionals mitjançant un enfocament no dirigit, escanejant el quadrupol de m/z 100 a 100 Da.

3.4.Anàlisi HPLC-DAD: Quantificació de fenòlics

Es va realitzar una anàlisi HPLC-DAD per quantificar les diferents classes de fenòlics (derivats de l'àcid hidroxicinàmic, catequines, dihidrochalcones, flavonoides i antocianines) en els extractes. Es van injectar alíquotes de les mostres (15 μL) en un líquid Perkin Elmer equipat amb un cromatògraf Flexar. una bomba quaternària 200Q/410 i un detector de matriu de díodes (DAD) LC 200 (tots de Perkin Elmer", Bradford, CT, EUA). Les condicions cromatogràfiques eren les mateixes que les utilitzades per a les anàlisis HPLC-MS/MS (Secció 3.3) .

Els cromatogrames es van adquirir a 280, 330.350 i 520 nm (per a la quantificació d'antocians). La identificació i quantificació dels compostos fenòlics es va dur a terme a partir del temps de retenció, les característiques espectrals UV i la comparació amb estàndards, així com a partir de dades de la literatura [25] i en l'anàlisi LC-MS anterior. Es van utilitzar corbes de calibratge de cinc punts amb diferents estàndards (àcid clorogènic, p-cumàric, rutina, epicatequina, naringina i peonidina-3-O-glucòsid, tots de Sigma-Aldrich"-Merck KGaA, Darmstadt, Alemanya) per quantificar els diferents polifenols detectats i identificats en els extractes.Si no es disposava d'un estàndard comercial, la quantificació es va realitzar mitjançant la corba de calibratge d'estàndards de la mateixa classe fenòlica, donant un contingut estimat.La linealitat de les corbes es va determinar pel coeficient de determinació (R4), sent superior a 0,99 per a tots els estàndards.

Tots els extractes es van analitzar per triplicat i els resultats quantitatius dels fenòlics es van donar en mg gl de pes sec (mg gl DW), expressat com a contingut total de derivats de l'àcid hidroxicinàmic (THC), contingut total de flavonoides (TFC), derivats totals de catequina. contingut (TCD), contingut total de dihidrochalcones (IDC), contingut total d'antocianines (TAC) i contingut fenòlic total (TPC), que es van estimar com la suma dels compostos individuals identificats que pertanyen a cada classe.

3.5.Assajos d'activitat antioxidant

L'assaig d'activitat antioxidant es va realitzar mitjançant dos mètodes diferents: DPPH (2,2-difenil-1-picrilhidrazil) i els assaigs d'eliminació de radicals hidroxil (OH) (HRS).

El mètode de Khandi i Charles [{{0}}] es va aplicar per a l'assaig DPPH. Breument, es van afegir mostres diluïdes dels extractes (0,5 mL) a 0,5 mL de solució de DPPH (0,1 mM en metanol; Sigma-Aldrich@,St. Louis, MI, EUA), i la barreja es va deixar reaccionar a temperatura ambient durant 40 min a la foscor. Aquest temps (40 min) es va definir a partir dels resultats de les anàlisis cinètiques de cada extracte i dels estàndards d'àcid clorogènic i rutina. Després del temps de reacció, es va mesurar l'absorbància a 518 nm mitjançant un espectrofotòmetre PerkinElmer§ Lambda 25UV/VIS. També es van avaluar les absorbències del blanc (0,5 mL de metanol i 0,5 mL de mostres) i del control negatiu (0,5 mL de metanol i 0,5 mL de solució de DPPH). Totes les anàlisis es van fer per triplicat. El percentatge d'activitat antioxidant es va calcular de la següent manera (1).

4. Conclusions

Els metabòlits secundaris són ingredients actius potencials per a noves formulacions cosmètiques. Entre aquests, els compostos fenòlics extrets de les plantes poden tenir grans propietats antioxidants i anti-envelliment, sent efectius en la inhibició d'enzims dèrmics (per exemple, col·lagenasa) i en l'absorció dels UV. Per tant, els extractes de plantes poc investigats, com els de H. roseus, poden representar fonts no revelades de molècules bioactives.

Hem demostrat que les fulles i flors d'H.roseus són riques en derivats de l'àcid hidroxicinàmic i flavonoides, amb flors que tenen major quantitat de glicòsids de kaempferol, catequines, dihidrochalcones i antocianines, tots aquests compostos encara no estan descrits a la literatura per a aquesta espècie. . La gran capacitat antioxidant, especialment dels extractes de flors, juntament amb l'activitat de protecció solar i anti-collagenasa dels extractes de fulles i flors, assenyalen la prometedora utilització d'aquesta espècie poc investigada en aplicacions de cura de la pell. En conclusió, els nostres resultats van mostrar el potencial de les flors i fulles de H. roseus com a fonts de fenòlics, així com l'activitat dels seus extractes com a agents anti-envelliment que es podrien utilitzar com a ingredients per a productes cosmètics funcionals.

Aquest article està extret de Plants 2021, 10, 522. https://doi.org/10.3390/plants10030522 https://www.mdpi.com/journal/plants