Efecte protector de l'extracte de Djulis (Chenopodium Formosanum) contra l'envelliment de la pell induït pels UV i l'edat mitjançant l'alleujament de l'estrès oxidatiu i la degradació del col·lagen Part 2

3. Discussió

Els fibroblasts tenen un paper crucial en la rotació de la matriu extracel·lular dèrmica, inclosa la síntesi de col·lagen, fibra elàstica i glicosaminoglicà per formar teixit connectiu dens [33]. L'acumulació d'estrès UV i AGE provoca la degradació del col·lagen i interfereix entre si durant l'envelliment intrínsec i extrínsec [3,34]. El desenvolupament de productes o materials naturals amb activitats antioxidants, anti-fotoenvelliment i antiglicació per a la millora de l'envelliment de la pell ha estat constant en els últims anys.

El glicòsid de cistanche també pot augmentar l'activitat de la SOD en els teixits del cor i del fetge, i reduir significativament el contingut de lipofuscina i MDA a cada teixit, eliminant eficaçment diversos radicals reactius d'oxigen (OH-, H₂O₂, etc.) i protegint contra els danys de l'ADN causats. per radicals OH. Els glucòsids feniletanoides de Cistanche tenen una forta capacitat d'eliminació dels radicals lliures, una capacitat reductora superior a la de la vitamina C, milloren l'activitat de SOD en la suspensió d'esperma, redueixen el contingut de MDA i tenen un cert efecte protector sobre la funció de la membrana espermàtica. Els polisacàrids de Cistanche poden millorar l'activitat de SOD i GSH-Px en eritròcits i teixits pulmonars de ratolins senescents experimentalment causats per D-galactosa, així com reduir el contingut de MDA i col·lagen al pulmó i el plasma, i augmentar el contingut d'elastina. un bon efecte d'eliminació de DPPH, allarga el temps d'hipòxia en ratolins senescents, millora l'activitat de SOD al sèrum i retarda la degeneració fisiològica del pulmó en ratolins senescents experimentalment Amb la degeneració morfològica cel·lular, els experiments han demostrat que Cistanche té la bona capacitat antioxidant. i té el potencial de ser un fàrmac per prevenir i tractar malalties de l'envelliment de la pell. Al mateix temps, l'echinacòsid a Cistanche té una capacitat significativa per eliminar els radicals lliures de DPPH i té la capacitat d'eliminar espècies reactives d'oxigen i prevenir la degradació del col·lagen induïda pels radicals lliures, i també té un bon efecte reparador sobre el dany anònic dels radicals lliures de timina.

Feu clic a Anti-Aging Cistanche Para Que Serve

【Per a més informació:george.deng@wecistanche.com/WhatApp:8613632399501】

Chenopodium formosanum (CF) és una planta de gra autòctona cultivada a Taiwan, conreada principalment a zones residencials aborígens. A part de l'ús de cereals, l'aplicació de CF basada en propietats antioxidants ha cridat una atenció creixent [28–30,35]. Els polifenols són antioxidants i protectors de la pell coneguts perquè posseeixen una forta activitat d'eliminació de radicals lliures [36], redueixen la inflamació i absorbeixen la radiació UV per proporcionar fotoprotecció de la pell [37,38]. La rutina és un flavonoide àmpliament distribuït en fruites i verdures i el polifenol representatiu en CF indicat per estudis anteriors [21,22]; diversos informes han demostrat els efectes biològics de la rutina sobre l'envelliment de la pell induït per ROS [39] i van suggerir que la rutina inhibeix eficaçment la formació d'AGE en la síntesi de col·lagen [40]. S'ha indicat que la FQ protegeix la pell contra el dany epidèrmic i la inflamació induïda per UV en queratinòcits i models de ratolí, i la rutina és el component principal de la FQ que va contribuir a l'efecte protector [19]. En aquest estudi, els resultats van mostrar que el tractament amb cèl·lules HaCaT amb CF tenia una taxa de supervivència més alta i una menor producció d'interleucina-6, MMP-1 i ROS en condicions d'irradiació UVB. Un estudi anterior va utilitzar queratinòcits exposats a la radiació UVB per imitar un model de fotoenvelliment de la pell, i els fibroblasts es van utilitzar en el present estudi per explorar els mecanismes i els efectes dels factors intrínsecs (AGE) i els factors extrínsecs (UV) sobre l'envelliment de la pell de la dermis. Els resultats d'aquest estudi van demostrar que la CF va disminuir la citotoxicitat induïda per UV i va proporcionar una bona activitat d'eliminació de ROS, i els resultats van ser coherents amb l'estudi de Hong [19]. Aquest estudi va considerar més factors de l'envelliment de la pell i va investigar l'efecte antiglicació de la FC sobre l'envelliment intrínsec, i les troballes van confirmar encara més que la FC té una excel·lent eficàcia en la protecció de la pell mitjançant l'alleujament de l'estrès oxidatiu i la degradació del col·lagen.

20-La hidroxiecdisona és un compost bioactiu que pertany als fitoecdisteroides, que es troba habitualment a Chenopodium formosanum [21–24]. Microsorum grossum (Polypodiaceae) és una de les falgueres més utilitzades a la medicina tradicional polinèsia, i els seus extractes de fronda i rizoma contenen 20-hidroxiecdisona com a components bioactius principals. Se sabia que Microsorum grossum tenia efectes protectors dels UVB sobre els fibroblasts dèrmics humans mitjançant la regulació de l'enzim antioxidant HO -1 i la inhibició de la senescència prematura induïda per l'estrès [41]. Chenopodium quinoa (Amaranthaceae) és el cultiu de llavors conegut com el "gra daurat" pels pobles andins nadius d'Amèrica del Sud, inclosa la 20-hidroxiecdisona, que s'ha demostrat que inhibeix la producció intracel·lular de ROS i l'activitat de MMPs [42]. A més, la 20-hidroxiecdisona aïllada de les llavors de C. quinoa té una forta activitat inhibidora contra la col·lagenasa i els radicals lliures DPPH, i una potent capacitat per quelar els ions de ferro [43]. Molts estudis anteriors han informat que l'extracte de CF conté rutina i 20-hidroxiecdisona com a ric ingredient bioactiu, altres plantes que contenen aquests compostos també tenen activitats similars i potencial per a la cura de la pell. El principal avantatge dels botànics és la seva complexa composició i l'efecte sinèrgic de compostos relacionats amb múltiples activitats per obtenir una major eficàcia [44]. Els extractes de plantes representen un futur prometedor en la cura de la pell pel seu atractiu com a productes naturals, la percepció com a segurs i l'abundància i la sostenibilitat.

Les ROS són subproductes de la funció normal de les cèl·lules oxidatives en la cadena de transport d'electrons de la reacció del metabolisme aeròbic. L'exposició excessiva als raigs UV i altres estressors ambientals desborden la capacitat antioxidant cutània induint encara més la producció de ROS, la fragmentació de l'ADN, la peroxidació lipídica i l'apoptosi [45,46]. Els alts nivells de ROS inicien cascades de senyals d'envelliment a les cèl·lules de la pell, promovent així la senescència cel·lular, fins i tot la mort [47]. Segons els resultats de l'assaig cel·lular, l'extracte de CF sense efectes citotòxics sobre els fibroblasts va rescatar significativament la citotoxicitat cel·lular induïda per UV i va mostrar una bona activitat fotoprotectora. A més, la ROS formada en fibroblasts va augmentar significativament ja sigui per radiació UV o pel tractament amb AGEs i tots dos van ser inhibits eficaçment per l'extracte de CF. La forta activitat d'eliminació de radicals de CF també es va verificar mitjançant diferents assajos antioxidants. Els polifenols són capaços de donar electrons als radicals lliures i convertir-los en espècies no reactives més estables a causa de la presència de grups hidroxil a l'estructura de l'anell [48,49]. El CF ric en polifenols pot prevenir lesions cutànies induïdes per ROS acabant la reacció en cadena dels radicals lliures. Els múltiples compostos relacionats amb els antioxidants de l'extracte de CF proporcionen un efecte sinèrgic per millorar l'activitat general de l'extracte de CF i fan que l'extracte de CF sigui un fort antioxidant per protegir la pell de l'estrès oxidatiu.

La pell posseeix un sistema de defensa antioxidant endogen per fer front a l'estrès oxidatiu induït per l'envelliment. Nrf2 és un factor de transcripció que actua contra l'estrès oxidatiu, i Keap1 és un sensor de pressió que regula l'expressió de Nrf2 [8]. Quan el desequilibri de pressió intracel·lular provoca el canvi de configuració de Keap1 i perd la seva capacitat d'unir-se a Nrf2, Nrf2 es trasllada al nucli i millora el nivell d'enzims antioxidants intrínsecs per prevenir el dany oxidatiu i exercir activitat fotoprotectora [50,51]. Els resultats van demostrar que l'extracte de CF podria iniciar la via de senyalització Nrf2 i el sistema de defensa antioxidant quan les cèl·lules eren estimulades per l'estrès oxidatiu induït pels UV. L'extracte de CF va regular l'expressió de Nrf2 i HO-1. Les propietats defensives cel·lulars dels extractes de CF es poden explicar per la seva capacitat de neutralitzar directament ROS o de regular indirectament l'expressió de proteïnes defensives cel·lulars. A partir dels resultats anteriors, l'extracte de CF pot reduir l'estrès oxidatiu intracel·lular i s'utilitza com a fotoprotector. A més del seu efecte directe sobre la generació de ROS, l'extracte de CF també va protegir els fibroblasts contra els danys UV millorant els mecanismes de defensa antioxidant intracel·lular mitjançant Nrf2 i el seu factor objectiu, HO-1.

El fotoenvelliment és causat per un desequilibri entre l'acumulació i la degradació de l'ECM després d'una absorció repetitiva d'UV. La radiació UV danya les alternances de col·lagen cutani i accelera la generació de ROS, que al seu torn actuen sobre les cèl·lules i els components de la matriu per mediar una nova rotació [33,47]. Les ROS i l'estrès oxidatiu donen lloc a la pell danyada mitjançant l'activació de la senyalització AP-1 i l'elevació de múltiples MMP. Durant el manteniment normal dels teixits, el col·lagen experimenta una rotació contínua. Tanmateix, se sap que la radiació UV indueix tres MMP diferents, col·lagenasa (MMP-1), estromelisina (MMP{-3) i gelatinasa (MMP{-9), per trencar el col·lagen i les fibres elàstiques, resultant en fragmentació i desorganització [52,53]. Els TIMP són inhibidors de les MMP, i l'homeòstasi entre aquestes dues proteïnes té un paper important en la integritat funcional i estructural de l'ECM [54–56]. En aquest estudi, l'extracte de CF va inhibir l'AP-1 induïda per UVB i la fosforilació de proteïnes ERK i p38 en fibroblasts de pell humana. A més, el tractament amb extracte de CF va bloquejar la degradació del col·lagen induïda per UVB inhibint l'expressió de MMP-1, -3 i -9 en fibroblasts de pell humana i induint l'expressió de TIMP-1 contra l'activitat de les MMP . La via del TGF és la via principal que regula la biosíntesi del procol·lagen i la producció de ROS [57]. L'estrès oxidatiu inhibeix la senyalització de TGF regulant a la baixa Smad3, que contribueix a la pèrdua de contingut de col·lagen a la pell envellida [4]. Els resultats van mostrar que l'extracte de CF va augmentar l'expressió de TGF i Smad3 per millorar el contingut total de col·lagen. A partir dels resultats anteriors, l'extracte de CF va millorar la degradació del col·lagen induïda per UVB mitjançant l'eliminació de ROS, la inhibició de MMP i la regulació de TGF.

Un dels factors de l'envelliment intrínsec de la pell és l'acumulació progressiva d'AGEs al llarg de la vida. RAGE pertany a la superfamília d'immunoglobulines dels receptors de la superfície cel·lular, que interacciona amb diversos lligands, especialment CML, un dels productes de glicació de la reacció de Maillard [58]. La RAGE s'expressa altament en queratinòcits i fibroblasts de la pell per interacció amb AGE seguida de radiació UVB [59] i regulada a la pell exposada al sol [60]. L'oxidació induïda per UV accelera la formació d'elastina de la pell humana en elastosi actínica i els AGE s'acumulen al col·lagen i l'elastina de la pell, que interfereixen amb la funció normal de la pell [61]. L'activació de RAGE disminueix la síntesi de col·lagen de tipus I i la producció de matriu en fibroblasts [62]. Un estudi anterior va esmentar que l'extracte de CF va inhibir la formació d'AGEs en el sistema lliure de cèl·lules [32], però el mecanisme detallat d'antiglicació en fibroblasts dèrmics encara no està clar. A partir dels resultats d'aquest estudi, vam suposar que la prevenció de la degradació del col·lagen bloquejant la interacció AGE-RAGE i la disminució de la producció de ROS dins de les cèl·lules són les possibles vies d'antiglicació de l'extracte de CF.

Se sap que els productes biològics induïts per la glicació estan associats amb l'envelliment de la pell, la diabetis i la progressió d'alguns tumors. Durant el procés d'envelliment, l'acumulació d'AGEs canvia les propietats mecàniques de la pell augmentant la rigidesa [34]. Per tant, es considera que la presència d'AGEs és un dels factors de retard en la cicatrització de les ferides i la pèrdua d'elasticitat de la pell curada. La conversa creuada entre RAGE i TGF- 1 afecta la cicatrització de ferides a la diabetis mitjançant la regulació de la rotació de col·lagen i la producció de citocines a les cèl·lules de fibroblasts tractades amb AGEs [63]. En aquest estudi, l'extracte de CF no només promou la síntesi de pro-collagen en fibroblasts, sinó que també millora la degradació del col·lagen causada per l'envelliment intrínsec i extrínsec de la pell. A més, l'extracte de CF va augmentar l'expressió de TGF i l'expressió de RAGE regulada a la baixa. A partir dels resultats de la investigació anteriors, el paper de la CF en els mecanismes de cicatrització de ferides relacionats amb l'estrès de glicació es pot explorar més en el futur.

4. Materials i Mètodes

4.1. Materials i productes químics

Els reactius utilitzats en el cultiu cel·lular, inclòs el medi d'àguila modificat de Dulbecco (DMEM), sèrum boví fetal (FBS), penicil·lina-estreptomicina i tripsina-EDTA, es van obtenir de Gibco, Thermo Fisher Scientific, Inc. (Waltham, MA, EUA) . CML es va comprar a Cayman Chemical (Ann Arbor, MI, EUA). Dodecil sulfat de sodi (SDS), 3-(4,5-Dimetil-2-tiazolil){-2,{5-difenil-2bromur de H-tetrazoli ( MTT) i hidròxid de potassi i fosfat de potassi (KH2PO4-KOH) es van comprar a USB Corporation (Cleveland, OH, EUA). 2,2-Difenil-1-picrilhidrazil (DPPH), ferricianur de potassi (III) (K3Fe(CN)6), clorur fèrric (FeCl3), àcid ascòrbic, fenazina metosulfat (PMS), - nicotinamida adenina dinucleòtid ( FeCl2), àcid etilendiaminotetraacètic (EDTA), 20, 70 -diacetat de diclorofluorescina (H2DCFDA), 2-propanol i 20-hidroxiecdisona es van comprar a Sigma-Aldrich (Saint Louis, MO, EUA) . La rutina es va obtenir d'ACROS Organics (Morris Plains, NJ, EUA). L'acetonitril i l'àcid fòrmic de grau HPLC es van obtenir de JT Baker, Thermo Fisher Scientific, Inc. (Waltham, MA, EUA). Tots els altres productes químics utilitzats eren de grau analític o de grau superior.

4.2. Preparació de l'extracte de CF

El CF utilitzat en aquest estudi es va comprar al comtat de Pingtung, Taiwan, i l'extracte de CF va ser subministrat per TCI Co., Ltd. (Taipei, Taiwan). El mètode de preparació de l'extracte de CF s'ha informat anteriorment [32]. Breument, el Chenopodium formosanum sense pelar es va afegir a l'aigua en una proporció d'1:10 (p/v) i es va extreure a tres temperatures diferents, primer a 25 ◦C, després a 50 ◦C i finalment a 70 ◦C. La mescla es va centrifugar a 4600 × g durant 20 min i es va recollir el sobrenedant. La pols d'extracte de CF es va obtenir després d'eliminar el dissolvent del sobrenedant per liofilització i emmagatzemat a temperatura ambient.

4.3. Anàlisi quantitativa HPLC-ESI-MS/MS i MRM

L'anàlisi espectromètrica de masses HPLC-ESI es va realitzar mitjançant cromatografia líquida Dionex Ultimate 3{{10}}00 (Thermo Scientific, Waltham, MA, EUA) juntament amb una trampa d'ions espectròmetre de masses (HCT Ultra, Bruker Daltonics, Bremen, Alemanya). El mètode de separació es va realitzar tal com descriu Chen et al., amb petites modificacions [22]. L'extracte de CF es va injectar a la columna Atlantis T3 C18 (2,1 mm ID × 150 mm, mida de partícula de 3 µm, Waters Corp., Milford, MA, EUA), que es va connectar amb una columna de protecció (SecurityGuard™ C). 18 2,0 mm ID × 4,0 mm, Phenomenex Inc., Torrance, CA, EUA). Les fases mòbils emprades van ser: 0,1 per cent d'àcid fòrmic en aigua (solvent A) i 0,1 per cent d'àcid fòrmic en acetonitril (solvent B) a un cabal de 0,3 ml/min. L'elució de gradient de diversos passos es va dur a terme amb un 5-45 per cent de B en 15 min, un 45-95 per cent de B en 5 min i, finalment, una elució isocràtica del 95 per cent de B durant 5 min.

L'espectrometria de masses es va dur a terme pel programa Esquire Control (V6.2) i la LC/MS va ser controlada per Hystar (V3.2) (Bruker Daltonics, Bremen, Alemanya). Els paràmetres de funcionament de l'espectròmetre de masses es van establir de la següent manera: pressió del nebulitzador 30 psi, gas sec 12 L/min, temperatura seca 300 ◦C, tensió capil·lar de 3600 V amb una placa final de -500 V. MS/MS es va aplicar a tots els ions principals del rang de massa seleccionat. El perfil de monitorització de reaccions múltiples (MRM) es va realitzar mitjançant l'anàlisi de les transicions iòniques següents: la transició de l'ió precursor a m/z 481 a la producció a m/z 371 de 20-hidroxiecdisona i la transició de l'ió precursor. a m/z 611 a la producció a m/z 303 per a rutina. L'amplada d'aïllament d'ions es va establir a 4 m/z amb una amplitud de fragmentació de 0,5 V. El compost es va identificar i quantificar comparant els espectres de masses obtinguts per ESI-MS/MS amb estàndards de referència comercials.

4.4. Mesura de la capacitat antioxidant

4.4.1. Assaig d'eliminació de radicals lliures DPPH

Les mescles de reacció que contenien una solució de metanol de DPPH i dilucions d'extracte de CF en sèrie de 50-500 µg/mL es van col·locar en una microplaca 96-pou i es van incubar durant 30 min. L'absorbància es va determinar a 517 nm mitjançant un lector de microplaques (Sunrise, Tecan, Salzburg, Àustria). L'àcid ascòrbic (10 µg/mL) es va utilitzar com a control comparatiu [64].

4.4.2. Assaig de reducció de potència

Les concentracions en sèrie d'extracte de CF (100-1000 µg/mL) es van barrejar amb tampó fosfat i K3Fe (CN) 6 i després es van incubar a 50 ◦ C durant 20 min. Es va afegir TCA i la barreja de reacció es va centrifugar a 3000 rpm durant 10 min. La solució de FeCl3 es va barrejar amb el sobrenedant i es va mesurar l'absorbància a 700 nm mitjançant un lector multimode (Synergy HTX, BioTek Instruments, Winooski, VT, EUA). L'àcid ascòrbic (100 µg/mL) es va utilitzar com a control comparatiu [64].

4.4.3. Assaig d'eliminació de radicals anions superòxids (O2 −).

Les mescles de reacció que contenien PMS, NADH i NBT es van preparar en tampó fosfat i dilucions d'extracte de CF en sèrie de 100-1000 µg/mL. La barreja es va fer reaccionar durant 5 min i l'absorbància es va llegir a 560 nm mitjançant un lector de microplaques (Sunrise, Tecan, Salzburg, Àustria). Es va utilitzar BHA (250 µg/mL) com a control comparatiu [65].

4.4.4. Assaig d'eliminació de peròxid d'hidrogen (H2O2).

L'activitat de l'extracte de CF per eliminar H2O2 es va realitzar tal com es va descriure anteriorment [65]. Es van afegir diverses concentracions d'extracte de CF (200-1500 µg/mL) a la solució d'H2O2 i es van fer reaccionar a la foscor durant 10 min. L'absorbància de la barreja de reacció es va registrar a 230 nm mitjançant un lector multimode (Synergy HTX, BioTek Instruments, Winooski, VT, EUA) i es va utilitzar BHA (250 µg/mL) com a control comparatiu.

4.4.5. Assaig d'eliminació de radicals hidroxil (· OH).

L'assaig es va realitzar barrejant dilucions d'extracte de CF (100–1000 µg/mL), tampó KH2PO4- KOH, 2-desoxi-D-ribosa, FeCl3, àcid ascòrbic, EDTA, H2O2 i aigua desionitzada. . Després de la incubació a 37 ◦ C durant 1 h, es van afegir TBA i TCA a la barreja, i la barreja es va incubar a 100 ◦ C durant 15 min i després es va centrifugar a 4000 rpm i 25 ◦ C durant 10 min. Posteriorment, es va mesurar l'absorbància del sobrenedant a 532 nm mitjançant un lector de microplaques (Synergy HTX, BioTek Instruments, Winooski, VT, EUA). Es va utilitzar manitol (2500 µg/mL) com a control comparatiu [64].

4.4.6. Assaig quelant d'ions ferrosos (Fe2 plus).

La quelació d'ions ferrosos per extracte de CF es va dur a terme segons el procediment descrit anteriorment [65]. L'extracte de CF (100-1000 µg/mL) es va barrejar amb una solució de FeCl2 i es va iniciar la reacció afegint ferrozina. Després que la mescla hagués assolit l'equilibri, es va controlar l'activitat quelant Fe2 més de l'extracte CF mesurant l'absorbància del complex Fe2 més -ferrozina a 562 nm mitjançant un lector multimode (Synergy HTX, BioTek Instruments, Winooski, VT, EUA). Es va utilitzar EDTA (100 µM) com a control comparatiu.

4.5. Cultiu cel·lular

Les cèl·lules Hs68 es van comprar al Centre de Recollida i Recerca de Biorecursos (BCRC, Hsinchu, Taiwan). Les cèl·lules es van mantenir en plats de cultiu cel·lular de 10-cm i es van cultivar en DMEM suplementat amb un 10% de FBS, 100 U/ml de penicil·lina i 100 µg/mL d'estreptomicina a 37 ◦C en una incubadora que contenia un 5% de CO2. A prop de la confluència (80-90 per cent), les cèl·lules es van desagregar en tripsina-EDTA i es van subcultivar [55].

4.6. Exposició UV i tractament AGEs

La selecció de la dosi d'exposició UV per a les cèl·lules Hs68 es va referir a estudis anteriors [55,56]. Abans del tractament, les cèl·lules es van esbandir amb PBS dues vegades i es van irradiar amb diferents dosis d'UVB (mJ/cm2). L'espectre d'energia UVB (280-320 nm) va ser subministrat per UV Crosslinker CL-1000M (UVP, Upland, CA, EUA) amb un pic d'emissió a 302 nm i el temps d'exposició va ser de 15-30 s. Les dosis de radiació UVB en l'assaig de viabilitat cel·lular eren de 20 a 100 mJ/cm2 per avaluar la dosi d'exposició UVB adequada per induir la citotoxicitat. Les cèl·lules Hs68 es van irradiar amb una dosi alta d'UVB (80 mJ/cm2) durant 2 h per investigar la capacitat ràpida d'eliminació de radicals de l'extracte de CF contra ROS intracel·lulars sobreproduïts a curt termini. Altres experiments utilitzen radiació UVB (40 mJ/cm2) en cèl·lules Hs68 durant 24 h per imitar cèl·lules en condicions d'estrès oxidatiu a llarg termini. El CML es va subministrar com un sòlid cristal·lí i es van preparar solucions aquoses de CML dissolent el compost en tampó PBS. Les cèl·lules es van tractar amb 100 µg/mL de CML.

4.7. Assaig de viabilitat cel·lular

Les cèl·lules Hs68 es van sembrar en plaques 24-pous (4 × 104 cèl·lules/pou), es van deixar connectar durant la nit i es van tractar amb 1 ml de diverses concentracions d'extracte de CF (50-250 µg/mL) dissolt en DMEM durant 24 h. Es va afegir una solució MTT a les plaques seguida de la incubació a 37 ◦ C durant 4 h. A continuació, es va afegir 2-propanol per dissoldre els cristalls de formazà MTT i es va mesurar l'absorbància a 570 nm mitjançant un lector de microplaques (Sunrise, Tecan, Salzburg, Àustria) [56].

4.8. Mesura de ROS intracel·lular

L'assaig es basa en l'ús d'un sistema establert no fluorescent (H2DCFDA)/fluorescent (DCF) que mesura l'activitat de ROS a la cèl·lula. Les cèl·lules Hs68 es van sembrar en plaques de 24-pou (4 × 104 cèl·lules/pou) i es van deixar connectar durant la nit. Les cèl·lules es van incubar en un medi sense sèrum en presència de diverses concentracions d'extracte de CF (100-250 µg/mL) després de la radiació UVB o el tractament de CML. Les cèl·lules es van rentar amb PBS i es va afegir el reactiu de detecció de ROS DCFDA a cada pou durant 30 min. Les imatges es van capturar mitjançant un microscopi de fluorescència (Leica DM IL LED, Leica Microsystems, Wetzlar, Alemanya) i es va mesurar la fluorescència (excitació/emissió: 488 nm/520 nm) mitjançant un lector de microplaques (Synergy HTX, BioTek Instruments, Winooski, VT, EUA) [55].

4.9. Expressió de proteïnes mitjançant anàlisi Western Blot

Després dels tractaments indicats, es van recollir cèl·lules Hs68 (5 × 105 cèl·lules/plat) i es van homogeneïtzar amb tampó d'extracció de proteïnes sobre gel. Els lisats cel·lulars es van vortexar durant 30 min a 4 ◦ C i es van centrifugar per obtenir el sobrenedant com a proteïna intracel·lular. Les mostres preparades que contenien quantitats iguals de proteïna total es van separar mitjançant electroforesi en gels de poliacrilamida SDS i es van transferir a membranes de difluorur de polivinilidè. La unió inespecífica es va bloquejar amb llet sense greix al tampó TBST. La membrana es va incubar amb anticossos primaris contra, c-Jun, c-Fos, MMP-1, MMP-3, TGF-, Smad3 i pro-COL1A1 (Santa Cruz Biotechnology, Inc., Dallas, TX, EUA), MMP-9, TIMP{-1 i HO-1 (GeneTex, Inc., Irvine, CA, EUA). Nrf2, Keap1, RAGE, pc-Jun, p-p38, p-ERK i -actina (Cell Signaling Technology, Inc., Danvers, MA, EUA) a 4 ◦C durant la nit. Posteriorment, es van rentar les membranes amb tampó TBST diverses vegades i es va utilitzar la corresponent anti-immunoglobulina G-peroxidasa de rave picant com a anticossos secundari. Les taques es van incubar amb un reactiu de detecció de quimioluminescència. Les bandes immunoreactives es van detectar amb el sistema de detecció de Western Blotting ECL (LAS-4000, Fujifilm, Tòquio, Japó) i la intensitat del senyal es va quantificar mitjançant el programari ImageJ (National Institutes of Health, Bethesda, MD, EUA) [56] .

4.10. Tinció d'immunofluorescència

Les cèl·lules es van sembrar en diapositives en una placa de 6-pou (cèl·lules Hs68: 1 × 105 cèl·lules/pou) i es van deixar enganxar durant la nit. Les cèl·lules es van irradiar amb UVB (40 mJ/cm2) i es van tractar amb 1 mL d'extracte de CF dissolt en DMEM. Les cèl·lules es van rentar amb PBS, es van fixar amb paraformaldehid durant 30 min i es van bloquejar amb llet sense greix amb tampó Triton X-100/PBS (Thermo Fisher Scientific, Inc., Waltham, MA, EUA) durant 60 min. Les mostres es van incubar amb anticossos primaris anti-Nrf2 de conill durant la nit a 4 ◦ C. Les diapositives es van rentar amb PBS i després es van incubar amb un anticòs secundari anti-conill durant 2 h a temperatura ambient. Les diapositives es van muntar amb ProLong® Gold Antifade Mountant amb DAPI (Invitrogen, Waltham, MA, EUA). Totes les mostres es van analitzar mitjançant un sistema d'imatge de microscopi espectral confocal (Leica Microsystems, Wetzlar, Alemanya) [51].

4.11. Determinació del contingut total de col·lagen

El contingut total de col·lagen es va quantificar mitjançant el kit de detecció de col·lagen vermell Sirius (Chondrex Inc., Redmond, WA, EUA). Es va recollir el medi de cultiu cel·lular i es va barrejar amb el reactiu de concentració. La barreja es va vortexar i es va incubar a 4 ◦ C durant 24 h. Després de la incubació, la barreja es va centrifugar a 10 000 rpm i es va descartar el sobrenedant. Després d'això, es va afegir àcid acètic al microtub per dissoldre el pellet i la solució obtinguda es va utilitzar com a mostra de prova. La solució Sirius Red, per a la tinció de col·lagen, es va afegir a cada tub, es va vortexar, es va incubar durant 20 minuts a temperatura ambient i es va centrifugar. El sobrenedant es va eliminar pipetant acuradament sense pertorbar el pellet. La solució de rentat es va afegir a cada tub i els passos anteriors es van repetir una vegada. Finalment, es va afegir un tampó d'extracció i es va mesurar l'absorbància a 540 nm mitjançant un lector de microplaques (Sunrise, Tecan, Salzburg, Àustria).

4.12. Anàlisi estadística

Les dades es presenten com a mitjana ± desviació estàndard en almenys tres experiments independents. Totes les anàlisis estadístiques es van realitzar mitjançant GraphPad Prism 5 (GraphPad Software Inc., San Diego, CA, EUA). Les diferències significatives entre grups en els experiments es van analitzar mitjançant ANOVA unidireccional, seguit de la prova post-hoc de Tukey. Les diferències amb p < 0,05 es van considerar estadísticament significatives.

5. Conclusions

El present estudi revela els mecanismes moleculars responsables de l'efecte protector de la CF contra la generació intracel·lular de ROS induïda per UV i AGEs i la degradació del col·lagen en fibroblasts de la pell. Com a conseqüència, el nostre estudi proporciona comprensió i informació actuals sobre el paper de l'extracte de CF en el sistema de defensa cel·lular contra l'estrès oxidatiu mitjançant l'activació de la via de senyalització Nrf2/HO-1. A més, la CF no només modula les vies de senyalització MAPK/AP-1/MMP i TGF per prevenir la pèrdua de col·lagen induïda per l'estrès oxidatiu, sinó que també atenua la regulació positiva dels receptors dels AGE. L'extracte de CF es pot convertir en aliments saludables o aplicar-se a productes per a la cura de la pell i cosmètics com a agent antioxidant, anti-fotoenvelliment i antiglicació per retardar l'envelliment en el futur. Els mecanismes reguladors de l'extracte de CF a les cèl·lules Hs68 es mostren a la figura 13.

Materials complementaris:La següent informació de suport es pot descarregar al lloc web, figura S1: el cromatograma iònic MRM i l'espectre de masses en el mode positiu ESI de 20-hidroxiecdisona i estàndard de rutina. Figura S2: el cromatograma iònic total (TIC) i el cromatograma iònic extret (EIC) de 20-hidroxiecdisona (m/z 481) i rutina (m/z 611) a l'extracte de CF sota control MRM.

Contribucions de l'autor:Conceptualització, J.-LL, K.-CW, C.-YC, Y.-HL i H.-MC; Metodologia, J.-LL, C.-YC i H.-MC; Investigació, J.-LL i Y.-JL; Recursos, Y.-HL; Curació de dades, J.-LL i Y.-JL; Redacció—esborrany original, J.-LL i H.-MC; Redacció—revisió i edició, J.-LL, Y.- JL; K.-CW, C.-YC i H.-MC; Visualització, J.-LL; Supervisió, K.-CW; Administració del projecte, H.-MC Tots els autors han llegit i acceptat la versió publicada del manuscrit.

Finançament: aquesta investigació va ser finançada per la Universitat de Medicina de la Xina (CMU106-ASIA-20, CHM106-5- 2 i CMU108-MF{-38).

Declaració de la Junta de Revisió Institucional:No aplicable.

Declaració de consentiment informat:No aplicable.

Declaració de disponibilitat de dades:No aplicable.

Agraïments: L'extracte de Chenopodium formosanum va ser subministrat per TCI Co., Ltd. (Taipei, Taiwan). Els experiments i l'anàlisi de dades es van realitzar parcialment mitjançant l'ús de les instal·lacions bàsiques de recerca mèdica, Oficina d'Investigació i Desenvolupament de la Universitat Mèdica de la Xina (Taichung, Taiwan). L'anàlisi espectromètrica de masses la va realitzar el Proteòmic Research Core Laboratory, Oficina d'Investigació i Desenvolupament de la Universitat Mèdica de la Xina (Taichung, Taiwan).

Conflictes d'interès:Els autors declaren no conflicte d'interessos.

Referències

1. Zouboulis, CC; Makrantonaki, E. Aspectes clínics i diagnòstic molecular de l'envelliment de la pell. Clin. Dermatol. 2011, 29, 3–14. [CrossRef] [PubMed]

2. Helfrich, YR; Sachs, DL; Voorhees, JJ Visió general de l'envelliment de la pell i el fotoenvelliment. Dermatol. Infermeres. 2008, 20, 177–183. [PubMed]

3. Gkogkolou, P.; Böhm, M. Productes finals de glicació avançada: actors clau en l'envelliment de la pell? Dermatoendocrinologia 2012, 4, 259–270. [CrossRef] [PubMed]

4. Tu, Y.; Quan, T. Estrès oxidatiu i envelliment del teixit connectiu de la pell humana. Cosmètica 2016, 3, 28. [CrossRef]

5. Shin, J.-W.; Kwon, S.-H.; Choi, J.-Y.; Na, J.-I.; Eh, C.-H.; Choi, H.-R.; Parc, K.-C. Mecanismes moleculars de l'envelliment dèrmic i enfocaments antienvelliment. Int. J. Mol. Ciència. 2019, 20, 2126. [CrossRef]

6. Dupont, E.; Gómez, J.; Bilodeau, D. Beyond UV radiation: A skin under challenge. Int. J. Cosmet. Ciència. 2013, 35, 224–232. [Ref creuat]

7. D'Orazio, J.; Jarrett, S.; Amaro-Ortiz, A.; Scott, T. La radiació UV i la pell. Int. J. Mol. Ciència. 2013, 14, 12222–12248. [Ref creuat]

8. G ˛egotek, A.; Skrzydlewska, E. El paper del factor de transcripció Nrf2 en el metabolisme cel·lular de la pell. Arc. Dermatol. Res. 2015, 307, 385–396. [Ref creuat]

9. Silva-Palacios, A.; Ostolga-Chavarría, M.; Zazueta, C.; Königsberg, M. Nrf2: Regulació molecular i epigenètica durant l'envelliment. Envelliment Res. Rev. 2018, 47, 31–40. [Ref creuat]

10. Fisher, GJ; Kang, S.; Varani, J.; Bata-Csorgo, Z.; Wan, Y.; Datta, S.; Voorhees, JJ Mecanismes de fotoenvelliment i envelliment cronològic de la pell. Arc. Dermatol. 2002, 138, 1462–1470. [Ref creuat]

11. Pittayapruek, P.; Meephansan, J.; Prapapan, O.; Komine, M.; Ohtsuki, M. Paper de les metaloproteinases de la matriu en el fotoenvelliment i la fotocarcinogènesi. Int. J. Mol. Ciència. 2016, 17, 868. [CrossRef] [PubMed]

12. Wautier, M.-P.; Chappey, O.; Corda, S.; Stern, DM; Schmidt, AM; Wautier, J.-L. L'activació de la NADPH oxidasa per AGE enllaça l'estrès oxidant amb l'expressió gènica alterada mitjançant RAGE. Am. J. Physiol. Endocrinol. Metab. 2001, 280, E685–E694. [CrossRef] [PubMed]

13. Oliveira, MIA; Souza, EMd; Pedrosa, FdO; Réa, RR; Alves, AdSC; Picheth, G.; Rego, receptor FGdM RAGE i les seves isoformes solubles en les complicacions de la diabetis mellitus. J. Bras. Patol. Med. Laboratori. 2013, 49, 97–108. [Ref creuat]

14. Reddy, S.; Bichler, J.; Wells-Knecht, KJ; Thorpe, SR; Baynes, JW N epsilon-(carboximetil)lisina és un antigen de producte final de glicació avançada (AGE) dominant a les proteïnes dels teixits. Bioquímica 1995, 34, 10872–10878. [Ref creuat]

15. Ikeda, K.; Higashi, T.; Sano, H.; Jinnouchi, Y.; Yoshida, M.; Araki, T.; Ueda, S.; Horiuchi, l'adducte proteic S. N (epsilon)-(carboximetil)lisina és un epítop immunològic important en proteïnes modificades amb productes finals de glicació avançada de la reacció de Maillard. Bioquímica 1996, 35, 8075–8083. [Ref creuat]

16. Crisan, M.; Taulescu, M.; Crisan, D.; Cosgarea, R.; Parvu, A.; Cãtoi, C.; Drugan, T. Expressió de productes finals de glicació avançada en llocs cutanis exposats al sol i no exposats durant el procés d'envelliment en humans. PLoS ONE 2013, 8, e75003. [Ref creuat]

17. Jeanmaire, C.; Danoux, L.; Pauly, G. Glycation durant l'envelliment intrínsec i actínic dèrmic humà: un estudi de model in vivo i in vitro. Br. J. Dermatol. 2001, 145, 10–18. [Ref creuat]

18. Tsai, P.-J.; Chen, Y.-S.; Sheu, C.-H.; Chen, C.-Y. Efecte de la mòlta nano sobre el pigment i la bioactivitat de Djulis (Chenopodium formosanum Koidz.). J. Agric. Química dels Aliments. 2011, 59, 1814–1820. [Ref creuat]

19. Hong, Y.-H.; Huang, Y.-L.; Liu, Y.-C.; Tsai, P.-J. L'extracte d'aigua de Djulis (Chenopodium formosanum Koidz.) i els seus components bioactius milloren el dany dèrmic en models de pell irradiats amb UVB. BioMed Res. Int. 2016, 2016, 7368797. [CrossRef]

20. Hsu, B.; Lin, S.; Inbaraj, BS; Chen, B. Determinació simultània d'àcids fenòlics i flavonoides a Chenopodium formosanum Koidz. (juli) per HPLC-DAD-ESI-MS/MS. J. Pharm. Biomed. Anal. 2017, 132, 109–116. [Ref creuat]

21. Chyau, C.-C.; Chu, C.-C.; Chen, S.-Y.; Duh, P.-D. Els efectes inhibidors de Djulis (Chenopodium formosanum) i els seus compostos bioactius sobre l'adipogènesi en els adipòcits 3T3-L1. Molècules 2018, 23, 1780. [CrossRef] [PubMed]

22. Chen, S.-Y.; Chu, C.-C.; Chyau, C.-C.; Yang, J.-W.; Duh, P.-D. Djulis (Chenopodium formosanum) i els seus compostos bioactius afecten la vasodilatació, l'activitat de l'enzim convertidor de l'angiotensina i la hipertensió. Biosciència alimentària. 2019, 32, 100469. [CrossRef]

23. Chu, C.-C.; Chen, S.-Y.; Chyau, C.-C.; Wu, Y.-C.; Chu, H.-L.; Duh, P.-D. Activitat anticancerígena i mediació de l'apoptosi en cèl·lules de carcinoma d'hepatoma induïdes per Julio i els seus compostos bioactius. J. Funct. Aliments 2020, 75, 104225. [CrossRef]

24. Tu, D.-G.; Chyau, C.-C.; Chen, S.-Y.; Chu, H.-L.; Wang, S.-C.; Duh, P.-D. Efecte antiproliferatiu i mediació de l'apoptosi en les cèl·lules HepG2 d'hepatoma humà induïdes per la closca de Djulis i els seus compostos bioactius. Aliments 2020, 9, 1514. [CrossRef]

25. Hsu, B.-Y.; Pan, S.-Y.; Wu, L.-Y.; Ho, C.-T.; Hwang, LS Activitat hipoglucèmica de Chenopodium formosanum Koidz. components mitjançant un assaig de captació de glucosa amb adipòcits 3T3-L1. Biosciència alimentària. 2018, 24, 9–16. [Ref creuat]

26. Chen, S.-Y.; Chu, C.-C.; Lin, Y.-C.; Duh, P.-D. Djulis (Chenopodium formosanum) i els seus compostos bioactius per a la gestió de la hiperlipèmia i la hiperglucèmia en ratolins alimentats amb dieta alta en greixos. J. Food Nutr. Res. 2019, 7, 452–457. [Ref creuat]

27. Chu, C.-C.; Chen, S.-Y.; Chyau, C.-C.; Fu, Z.-H.; Liu, C.-C.; Duh, P.-D. Efecte protector de Djulis (Chenopodium formosanum) i els seus compostos bioactius contra la lesió hepàtica induïda pel tetraclorur de carboni, in vivo. J. Funct. Aliments 2016, 26, 585–597. [Ref creuat]

28. Chyau, C.-C.; Chu, C.-C.; Chen, S.-Y.; Duh, P.-D. Djulis (Chenopodium formosaneum) i els seus compostos bioactius protegeixen contra l'estrès oxidatiu a les cèl·lules humanes HepG2. J. Funct. Aliments 2015, 18, 159–170. [Ref creuat]

29. Lin, T.-A.; Ke, B.-J.; Cheng, C.-S.; Wang, J.-J.; Wei, B.-L.; Lee, C.-L. Els extractes de segó de quinoa vermella protegeixen contra la lesió hepàtica induïda pel tetraclorur de carboni i la fibrosi en ratolins mitjançant l'activació dels sistemes enzimàtics antioxidants i el bloqueig de la via del TGF- 1. Nutrients 2019, 11, 395. [CrossRef]

30. Lee, C.-W.; Chen, H.-J.; Xie, G.-R.; Shih, C.-K. Djulis (Chenopodium Formosanum) prevé la carcinogènesi del còlon mitjançant la regulació de les vies antioxidants i apoptòtiques a les rates. Nutrients 2019, 11, 2168. [CrossRef]

31. Lee, C.-W.; Chen, H.-J.; Chien, Y.-H.; Hsia, S.-M.; Chen, J.-H.; Shih, C.-K. La combinació sinbiòtica de Djulis (Chenopodium formosanum) i Lactobacillus acidophilus inhibeix la carcinogènesi del còlon a les rates. Nutrients 2020, 12, 103. [CrossRef] [PubMed]

32. Lin, Y.-K.; Chung, Y.-M.; Lin, Y.-H.; Lin, Y.-H.; Hu, W.-C.; Chiang, C.-F. Propietats funcionals per a la salut del Juliol vermell sense pelar (Chenopodium formosanum) en anti-envelliment. Int. J. Food Prop. 2021, 24, 833–844. [Ref creuat]

33. Naylor, EC; Watson, RE; Sherratt, MJ Aspectes moleculars de l'envelliment de la pell. Maturitas 2011, 69, 249–256. [CrossRef] [PubMed]

34. Fournet, M.; Bonté, F.; Desmoulière, A. Dany de glicació: un possible centre per a grans trastorns fisiopatològics i envelliment. Envelliment Dis. 2018, 9, 880. [CrossRef] [PubMed]

35. Tsai, P.-J.; Sheu, C.-H.; Wu, P.-H.; Sol, Y.-F. Estabilitat tèrmica i del pH del pigment de betacianina de Djulis (Chenopodium formosanum) a Taiwan i la seva relació amb l'activitat antioxidant. J. Agric. Química dels Aliments. 2010, 58, 1020–1025. [Ref creuat]

36. McClain, GE; Watson, RR El paper dels polifenols en la salut de la pell. En Factors dietètics bioactius i extractes vegetals en dermatologia; Springer: Berlín/Heidelberg, Alemanya, 2013; pàgines 169–175.

37. Nichols, JA; Katiyar, SK Fotoprotecció de la pell per polifenols naturals: mecanismes antiinflamatoris, antioxidants i de reparació de l'ADN. Arc. Dermatol. Res. 2010, 302, 71–83. [Ref creuat]

38. Afaq, F.; Katiyar, SK Polifenols: fotoprotecció de la pell i inhibició de la fotocarcinogènesi. Mini Rev. Med. Chem. 2011, 11, 1200–1215.

39. Choi, SJ; Lee, S.-N.; Kim, K.; Joo, DH; Shin, S.; Lee, J.; Lee, HK; Kim, J.; Kwon, SB; Kim, MJ Efectes biològics de la rutina sobre l'envelliment de la pell. Int. J. Mol. Ciència. 2016, 38, 357–363. [Ref creuat]

40. Cervantes-Laurean, D.; Schramm, DD; Jacobson, EL; Halaweish, I.; Bruckner, GG; Boissonneault, GA Inhibició de la formació de productes finals de glicació avançada sobre col·lagen per rutina i els seus metabòlits. J. Nutr. Bioquímica. 2006, 17, 531–540. [Ref creuat]

41. Ho, R.; Teai, T.; Meybeck, A.; Raharivelomanana, P. Efectes de protecció UV dels fitoecdysteroids d'extractes de Microsorum grossum en fibroblasts dèrmics humans. Nat. Prod. Commun. 2015, 10, 1934578X1501000110. [Ref creuat]

42. Graf, BL; Cheng, DM; Esposito, D.; Shertel, T.; Poulev, A.; Plundrich, N.; Itenberg, D.; Dayan, N.; Lila, M.; Raskin, I. Els compostos lixiviats de llavors de quinoa inhibeixen l'activitat de la metaloproteinasa de la matriu i les espècies reactives d'oxigen intracel·lular. Int. J. Cosmet. Ciència. 2015, 37, 212–221. [CrossRef] [PubMed]

43. Nsimba, RY; Kikuzaki, H.; Konishi, Y. Els ecdysteroids actuen com a inhibidors de la col·lagenasa de la pell del vedell i l'estrès oxidatiu. J. Biochem. Mol. Toxicol. 2008, 22, 240–250. [Ref creuat]

44. Schmidt, B.; Ribnicky, DM; Poulev, A.; Logendra, S.; Cefalu, WT; Raskin, I. Una història natural de la terapèutica botànica. Metabolisme 2008, 57, S3–S9. [CrossRef] [PubMed]

45. Poljšak, B.; Dahmane, R. Radicals lliures i envelliment extrínsec de la pell. Dermatol. Res. Practiqueu. 2012, 2012, 135206. [CrossRef] [PubMed]

46. ​​De Jager, T.; Cockrell, A.; Du Plessis, S. Generació d'espècies reactives d'oxigen induïda per llum ultraviolada. Adv. Exp. Med. Biol. 2017, 996, 15–23.

47. Rittié, L.; Fisher, cascades de senyal induïdes per llum UV GJ i envelliment de la pell. Envelliment Res. Rev. 2002, 1, 705–720. [Ref creuat]

48. Leopoldini, M.; Russo, N.; Toscano, M. La base molecular del mecanisme de treball dels antioxidants polifenòlics naturals. Química dels Aliments. 2011, 125, 288–306. [Ref creuat]

49. Sandoval-Acuña, C.; Ferreira, J.; Speisky, H. Polifenols i mitocondris: una actualització de les seves accions independents de recuperació de ROS cada cop més emergents. Arc. Bioquímica. Biofísica. 2014, 559, 75–90. [Ref creuat]

50. Wu, P.-Y.; Liu, J.-L.; Liu, Y.-J.; Chien, T.-Y.; Hsu, H.-C.; Wen, K.-C.; Chiang, H.-M. La fisetina regula l'expressió de Nrf2 i la via de senyalització relacionada amb la inflamació per prevenir els danys a la pell induïts per UVB en ratolins sense pèl. Int. J. Mol. Ciència. 2017, 18, 2118. [CrossRef]

51. Kuo, Y.-H.; Chiang, H.-L.; Wu, P.-Y.; Chu, Y.; Chang, Q.-X.; Wen, K.-C.; Lin, C.-Y.; Chiang, H.-M. Protecció contra l'apoptosi i la carcinogènesi de la pell induïdes per l'ultraviolat A mitjançant els efectes de reducció de l'estrès oxidatiu de la N-(4-bromofenetil) cafeamida, un derivat del pròpolis. Antioxidants 2020, 9, 335. [CrossRef]

52. Quan, T.; Qin, Z.; Xia, W.; Shao, Y.; Voorhees, JJ; Fisher, GJ Metaloproteinases que degraden la matriu en el fotoenvelliment. J. Investig. Dermatol. Symp. Proc. 2009, 14, 20–24. [CrossRef] [PubMed]

53. Brenneisen, P.; Sies, H.; Scharffetter-Kochanek, K. Irradiació ultraviolada-B i metaloproteinases de la matriu: des de la inducció mitjançant la senyalització fins als esdeveniments inicials. Ann. NY Acad. Ciència. 2002, 973, 31–43. [CrossRef] [PubMed]

54. Kanaki, T.; Makrantonaki, E.; Zouboulis, CC Biomarcadors de l'envelliment de la pell. Rev. Endocr. Metab. Desordre. 2016, 17, 433–442. [CrossRef] [PubMed]

55. Wu, P.-Y.; Lin, T.-Y.; Hou, C.-W.; Chang, Q.-X.; Wen, K.-C.; Lin, C.-Y.; Chiang, H.-M. 1,2-Bis[(3-Metoxifenil)Metil]Età{-1,2- L'àcid dicarboxílic redueix el fotodany induït per UVB in vitro i in vivo. Antioxidants 2019, 8, 452. [CrossRef] [PubMed]

56. Lin, T.-Y.; Wu, P.-Y.; Hou, C.-W.; Chien, T.-Y.; Chang, Q.-X.; Wen, K.-C.; Lin, C.-Y.; Chiang, H.-M. Efectes protectors de la sesamina contra la inflamació cutània induïda per UVB i el fotodany in vitro i in vivo. Biomolecules 2019, 9, 479. [CrossRef] [PubMed]

57. Kim, YI; Kim, KS; Ahn, HJ; Kang, IH; Shin, MK Reducció de la metaloproteinasa de la matriu i la transcripció del col·lagen mediada per la via TGF-/Smad en fibroblasts dèrmics humans normals. J. Cosmet. Dermatol. 2020, 19, 1211–1218. [Ref creuat]

58. Kislinger, T.; Fu, C.; Huber, B.; Qu, W.; Taguchi, A.; Du Yan, S.; Hofmann, M.; Yan, SF; Pischetsrieder, M.; Stern, D. N(epsilon)-(carboximetil)lisina adductes de proteïnes són lligands per al receptor de productes finals de glicació avançada que activen les vies de senyalització cel·lular i modulen l'expressió gènica. J. Biol. Chem. 1999, 274, 31740–31749. [Ref creuat]

59. Han, AR; Nam, MH; Lee, KW Plantamajoside inhibeix l'expressió de MMP-1 induïda pels UVB i els productes finals de glicació avançada suprimint les vies MAPK i NF-κB a les cèl·lules HaCaT. Fotoquímica. Fotobiol. 2016, 92, 708–719. [Ref creuat]

60. Lohwasser, C.; Neureiter, D.; Weigle, B.; Kirchner, T.; Schuppan, D. El receptor de productes finals de glicació avançada està altament expressat a la pell i regulat per productes finals de glicació avançada i el factor de necrosi tumoral alfa. J. Investig. Dermatol. 2006, 126, 291–299. [Ref creuat]

61. Mizutari, K.; Ono, T.; Ikeda, K.; Kayashima, K.; Horiuchi, S. Modificació fotogràfica de l'elastina de la pell humana en elastosi actínica per N(epsilon)-(carboximetil)lisina, un dels productes de glioxidació de la reacció de Maillard. J. Invertir. Dermatol. 1997, 108, 797–802. [Ref creuat]

62. Owen, WF, Jr.; Hou, F.; Stuart, RO; Kay, J.; Boyce, J.; Chertow, GM; Schmidt, AM Beta 2-microglobulina modificada amb productes finals de glicació avançada modulen la síntesi de col·lagen per fibroblasts humans. Ronyó Int. 1998, 53, 1365–1373. [CrossRef] [PubMed]

63. Serban, AI; Stanca, L.; Geicu, OI; Munteanu, MC; Dinischiotu, A. RAGE i TGF- 1 diafonia regulen la rotació de la matriu extracel·lular i la síntesi de citocines en cèl·lules fibroblasts exposades a AGEs. PLoS ONE 2016, 11, e0152376.

64. Liu, Y.-J.; Lyu, J.-L.; Kuo, Y.-H.; Chiu, C.-Y.; Wen, K.-C.; Chiang, H.-M. L'efecte anti-melanogènesi de 3, 4-dihidroxibenzalacetona mitjançant la regulació a la baixa de la maduració i el transport dels melanosomes en B16F10 i melanòcits epidèrmics humans. Int. J. Mol. Ciència. 2021, 22, 2823. [CrossRef] [PubMed]

65. Huang, Y.-H.; Wu, P.-Y.; Wen, K.-C.; Lin, C.-Y.; Chiang, H.-M. Efectes protectors i mecanismes de l'extracte metanòlic de Terminalia catappa L. sobre l'estrès oxidatiu induït per peròxid d'hidrogen en fibroblasts de pell humana. BMC Complement Altern. Med. 2018, 18, 266. [CrossRef]

【Per a més informació:george.deng@wecistanche.com/WhatApp:8613632399501】