Efectes protectors de les microvesícules de cèl·lules progenitores endotelials sobre la lesió de cèl·lules renals de rata induïda per Ang II
Mar 11, 2022
Resum.La hipertensió crònica pot provocardany renal,coneguda com a nefropatia hipertensiva o nefroesclerosi hipertensiva. Per a un diagnòstic i tractament eficaços és essencial conèixer més els mecanismes moleculars a través dels quals es desenvolupa la nefropatia hipertensiva. El present estudi va investigar els mecanismes pels quals les cèl·lules progenitores endotelials (EPC) reparen la rata primàriaronyócèl·lules (PRK). ELISA, Cell Counting Kit-8 i assajos de citometria de flux es van utilitzar per analitzar els efectes de les EPC o EPC-MV sobre l'estrès oxidatiu, la inflamació, la proliferació cel·lular, l'apoptosi i el cicle de PRK induïts per AngII. Es va establir un model de lesió PRK mitjançant angiotensina II (Ang II). Després de la inducció d'Ang II, la proliferació de PRK es va reduir, es va augmentar l'apoptosi i el cicle cel·lular es va bloquejar a la fase G1 abans d'entrar a la fase S. Es va trobar que es van augmentar els nivells d'espècies reactives d'oxigen i malondialdehid, mentre que es van reduir els nivells de glutatió peroxidasa i superòxid dismutasa. A més, els nivells de les citocines inflamatòries IL-1, IL-6 i TNF- van augmentar significativament. Així, Ang II va danyar les PRK estimulant l'estrès oxidatiu i promovent la resposta inflamatòria. Tanmateix, quan es van cultivar PRK amb EPC, el dany induït per Ang II es va reduir significativament. L'estudi actual va recollir les microvesícules (MV) secretades per les EPC i les va co-cultivar amb PRK induïdes per Ang II i va identificar que les EPC-MV conservaven el seu efecte protector sobre les PRK. En conclusió, els EPC protegeixen els PRK dels danys induïts per Ang II mitjançant MV secretades.
CISTANCHE MILLORARÀ LA MALALTIA RENAL/RENAL
Introducció
La hipertensió és un factor de risc per a la incidència de malalties cardiovasculars i cerebrovasculars, i la seva mortalitat associada (1). Elronyonspot causar hipertensió i són un dels òrgans objectiu del dany per hipertensió (2). Crònicamalaltia de ronyó(CKD) ha estat una de les principals causes d'augment de la mortalitat entre les persones amb hipertensió arterial a tot el món durant les últimes dues dècades (3,4). Per tant, hi ha una necessitat urgent de promoure el tractament de la nefropatia hipertensiva i estudiar el seu mecanisme patològic. Estudis anteriors han demostrat que l'angiotensina II (Ang II) va induir danys vasculars i va tenir un paper clau en les malalties vasculars a través de diversos mecanismes, com la inducció de l'apoptosi (5), l'aturada del cicle cel·lular (6), l'augment dels nivells d'espècies reactives d'oxigen (ROS). 7), promovent la resposta a l'estrès oxidatiu augmentant la secreció de malondialdehid (MDA) i reduint la secreció de glutatió peroxidasa (GSH-Px) i superòxid dismutasa (SOD) (8,9). Ang II també promou la producció de factors relacionats amb la inflamació, com ara IL-6, IL-1 i TNF- (10-12). Per tant, el dany induït per Ang II s'ha utilitzat per modelar la hipertensió in vitro, inclosa la rata primàriaronyócèl·lules (PRKs) (13,14).
Per a pacients ambfunció renalel deteriorament, el dany a les cèl·lules endotelials i la disminució de la regeneració i reparació són les principals causes de la pèrdua de microvesícules peritubulars (MV) (15). Les cèl·lules progenitores endotelials (EPC) derivades de la medul·la òssia poden promoure la reparació endotelial (16,17). Estudis anteriors han revelat que les EPC poden millorar la regeneració cardiovascular (18) i regular l'angiogènesi (19), així com exercir efectes terapèutics en aguts.renallesió per isquèmia-reperfusió (20) i en pacients ambtrasplantament renal(21). Tanmateix, segons el que sabem, no s'ha informat anteriorment de l'efecte de les EPC sobre la nefropatia hipertensiva. Vam plantejar la hipòtesi que els EPC poden tenir un efecte protector contra la nefropatia hipertensivarenalcèl · lules. Els MV són secretats contínuament per una varietat de cèl·lules del cos, com ara cèl·lules epitelials, cèl·lules tumorals i cèl·lules mare, i existeixen en diversos fluids corporals, com la sang, l'orina i la llet, on medien les funcions biològiques (22). L'evidència acumulada ha suggerit que l'efecte protector de les EPC està estretament associat amb l'alliberament de MV (23, 24) En el present estudi, es va examinar l'aplicació potencial d'EPC-MV per al tractament de la nefropatia hipertensiva investigant els efectes i els mecanismes protectors. mitjançant la qual els EPC-MV protegeixen contra la lesió PRK induïda per Ang II, per proporcionar una base teòrica biològica per al tractament de la nefropatia hipertensiva.
Paraules clau:EPC-MVs, nefropatia hipertensiva, Ang II, ROS, MVs, inflamació, ronyó, renal
Materials i mètodes
Animals.Es van obtenir un total de rates Wistar-Kyoto (WKY) mascles de 12 8 setmanes d'edat lliures de patògens específics (pes, 80-120 g) del Beijing Vital River Laboratory Animal Technology Co., Ltd. (llicència núm. SCXK, Guangdong, 2015-0063). Les rates es van col·locar en una habitació amb una temperatura i humitat constants (temperatura, 23±2˚C; humitat, 50±10 per cent), sota un cicle de llum/foscor de 12 hores amb accés ad libitum a menjar i aigua estàndard per a rates. una gàbia de poliestirè. Tots els experiments amb animals van ser aprovats pel Comitè d'ús i cura dels animals de la Universitat Mèdica de Hainan (Haikou, Xina; aprovació núm. HYLL-2021-053) i es van realitzar d'acord amb les directrius dels Instituts Nacionals de Salut (25).
CISTANCHE MILLORARÀ LA FUNCIÓ RENAL/RENAL
Aïllament i cultiu de PRK.Les rates WKY amb accés lliure a l'aigua han dejunat durant 12 hores abans de l'experiment. Els ratolins WKY van ser sacrificats mitjançant una injecció intraperitoneal de pentobarbital sòdic (200 mg/kg de pes corporal), després elronyonses van eliminar de manera asèptica i la porció cortical de laronyóes va extirpar i es va trasplantar a un petit vas de precipitats. Elrenales va tallar l'escorça en fragments de teixit de ~ 1 mm3, es va rentar tres vegades amb PBS (Gibco; Thermo Fisher Scientific, Inc.), es va centrifugar a 1,000 xg a 25 °C durant 5 min i es va descartar el sobrenedant. Els fragments de teixit es van afegir a col·lagenasa tipus I (Gibco; Thermo Fisher Scientific, Inc.) a una concentració final d'1 g/l, i els fragments de teixit es van fer oscil·lar i digerir a 37 °C durant 3 0 min. Després de la filtració a través d'una pantalla d'acer inoxidable de 200 malles (0,075 mm), les cèl·lules es van separar mitjançant centrifugació de gradient de densitat Ficoll (Sigma-Aldrich; Merck KGaA) (26). Després de la centrifugació a 1,000 xg a 25˚C durant 2 min, es va recollir la suspensió intermèdia i es va barrejar amb medi MEM/F12 (Gibco; Thermo Fisher Scientific, Inc.), inoculada en una placa de 6 pous i cultivat a 37˚C amb un 5% de CO2. Després de 24 h, es va retirar el medi i es va substituir per un mitjà nou i el no adheritrenales van descartar cèl·lules i teixits. Després de 48 h, es va tornar a eliminar el medi, les cèl·lules es van rentar dues vegades amb PBS i es van denominar PRKs (27, 28); el principal constituent eren cèl·lules mesangials glomerulars de rata. Els PRK es van cultivar durant tres generacions i es van tractar amb Ang II (1 µM; Sigma-Aldrich; Merck KGaA) a 37˚C durant 24 h per establir el PRK.dany renalmodel. La inflamació induïda per Ang II a la ratarenalLes cèl·lules epitelials tubulars es van realitzar tal com es va descriure anteriorment per Nair et al (29).
Les PRK es van identificar mitjançant un assaig d'immunofluorescència (IF).Després d'esbandir tres vegades amb PBS i fixar-les amb un 4 per cent de paraformaldehid a 25 °C durant 1 h, les cèl·lules es van incubar (25 °C) amb Triton X-100 durant 2 h, seguida d'un 5% de BSA (Beijing). Solar Science & Technology Co., Ltd.) a 25˚C durant 30 min. A continuació, els PRK es van incubar durant la nit a la foscor amb actina del múscul llis (-SMA; 1 µg/ml; núm. cat. ab7817; Abcam) i vimentina (1:250; núm. cat. ab92547; Abcam) a 4 °C. Després d'esbandir tres vegades amb PBS, les cèl·lules es van incubar amb anticossos secundaris Alexa Fluor® 488- (1:100; cat. núm. ab150077; Abcam) o 647 (1:200; cat. núm. ab150075; Abcam) a 37 anys. ˚C durant 1 h. A continuació, les cèl·lules es van tacar amb DAPI (0, 5 µg/ml; Beyotime Institute of Biotechnology) a 25 °C durant 5 min. Finalment, les imatges es van capturar mitjançant un microscopi de fluorescència (ampliació, x400; Leica Microsystems GmbH).
Cultura i identificació d'EPC.Es van disseccionar el fèmur i la tíbia de la rata i es van rentar cada tub de medul·la òssia amb PBS estèril. La mescla resultant es va centrifugar (1,000 xg; 25 °C; 15 min) i les partícules es van tornar a suspendre en medi MEM/F12. Les cèl·lules es van aïllar mitjançant centrifugació de gradient de densitat de Ficoll (Sigma-Aldrich; Merck KGaA) (1, 000 xg; 25 °C; 20 min) i es van col·locar en un matràs de cultiu de 25 cm2 recobert de fibronectina (BD Biosciences). Les cèl·lules es van mantenir en un medi complet en condicions estàndard (37 °C; 5 per cent de CO2). El medi de cultiu es va canviar al cap de 4 dies i les cèl·lules adherides es van cultivar durant 3 dies addicionals (30). Es va utilitzar la tinció de lipoproteïna de baixa densitat acetilada del complex Dil (Dil-Ac-LDL) (Beijing Solar Science & Technology Co., Ltd.) per identificar els EPC. Per al sistema de co-cultiu, es van afegir PRK (1x104 ) a la cambra inferior d'una placa de co-cultiu (Corning, Inc.) durant 24 hores i després es van afegir Ang II (1 µM) o 200 µl de PBS i EPC (3x104 ). s'ha afegit a la cambra superior i es va incubar a 37 °C durant 24 h abans de realitzar una anàlisi de la funció cel·lular. Quan es van examinar les PRK i la millor proporció d'EPC, les proporcions del nombre de cèl·lules eren 2:1, 1:1, 1:2, 1:3, 1:4, 1:5, 1:6 i 1:7.
Preparació d'EPC-MV. Els EPC es van cultivar durant 7 dies tal com es va descriure anteriorment (30), es van rentar dues vegades amb PBS i es van morir de fam durant 12 h. Posteriorment, es va recollir el medi MEM/F12 que contenia EPC cultivades i es va centrifugar a 4˚C (1,000 xg; 15 min) i el sobrenedant es va extreure a 4˚C (100,000 xg; 60 min) per a la recollida d'EPC-MV secretades. Després d'incrustar-se a la resina epoxi Pon 812 (Structure Probe, Inc.), es va col·locar a 37 °C durant la nit. A continuació, es va afegir una solució de fixació de microscopi electrònic (Wuhan Service Technology Co., Ltd.) durant 4 hores, i acetat d'urani (2 per cent; Wuhan Service Technology Co., Ltd.) i citrat de plom (Wuhan Service Technology Co., Ltd. ) es van tacar a 25ºC durant 15 min. Els MV es van confirmar mitjançant microscòpia electrònica de transmissió. Al sistema de co-cultiu, es van afegir 50 µg/ml d'EPC-MV (31) a la cambra superior d'una placa d'assaig Transwell i es van afegir parcs a la cambra inferior tal com es va descriure anteriorment i es van incubar durant 24 h.
Assaig de proliferació cel·lular.Les PRK es van digerir amb tripsina, es van inocular en plaques de 96 pous a una densitat de 3x103 cèl·lules/pou i es van cultivar durant 24 h. La densitat òptica a 450 nm es va mesurar amb 10 µl de reactiu Cell Counting Kit-8 (CCK-8; Beijing Solar Science & Technology Co., Ltd.) a 37˚C durant 60 min, segons les instruccions del fabricant, per avaluar el taxa de proliferació cel·lular.
CISTANCHE MILLORARÀ EL DOLOR RENAL/RENAL
Assaig d'apoptosi cel·lular.Es va realitzar un assaig d'apoptosi cel·lular mitjançant un kit de detecció d'apoptosi Annexin V-FITC (BD Biosciences), segons les instruccions del fabricant. Els PRK es van collir, es van rentar dues vegades amb PBS gelat (Gibco; Thermo Fisher Scientific, Inc.) i es van tornar a suspendre en tampó d'unió de 500 µl. A continuació, els PRK resuspesos es van incubar amb 5 µl d'Annexina V-FITC i 5 µl de PI a la foscor durant 15 min a 23 ± 2 °C. L'apoptosi cel·lular es va avaluar mitjançant citometria de flux (FCM; FACSCanto II; programari BD FACSChorus ™, versió: 1.0; BD Biosciences).
Fusió EPC-MV i PRK.Per observar si els EPC-MV es van fusionar amb PRK, els EPC-MV es van etiquetar amb un colorant fluorescent incrustat en membrana lipídica (PKH26) abans de la co-incubació. Breument, es van combinar 50 µg/ml d'EPC-MV amb 2 ml de PKH26 (2x10-6 M; Sigma-Aldrich; Merck KGaA) i es van barrejar a 23 ± 2 °C durant 5 min. La barreja etiquetada es va afegir a 2 ml 1 per cent de BSA (v) i es va centrifugar a 100,000 xg a 4 °C durant 60 min, després es va esbandir amb PBS fred. El precipitat es va suspendre en 1 ml de medi MEM/F12, es va afegir a PRK i es va incubar a 37 °C durant 24 h. Finalment, es va afegir 1 µg/ml de DAPI per a la tinció nuclear a 25 °C durant 15 min. Les imatges cel·lulars es van adquirir mitjançant un microscopi de fluorescència (ampliació, x400; Leica Microsystems GmbH).
Assaig del cicle cel·lular.L'assaig del cicle cel·lular es va realitzar mitjançant el kit de detecció del cicle cel·lular (BD Biosciences). Es van recollir EPC o PRK (1x106), es van rentar dues vegades amb PBS i després es van fixar en 500 µl d'etanol fred al 70 per cent durant 2 h a 25 °C. A continuació, es van rentar les cèl·lules dues vegades amb PBS fred i es van incubar en PI (400 µl) i RNasa (100 µl) durant 30 min a 37 °C a la foscor. El senyal PI es va detectar mitjançant FCM (FACSCanto II). Es van comptar i comparar els percentatges de les cèl·lules en fase G1, S i G2 mitjançant el programari FlowJo (versió 10.0.6; FlowJo LLC).
Mesura de ROS per FCM.Els PRK es van cultivar fins al 60-70% de confluència i es van collir mitjançant tripsinització. Totes les cèl·lules es van incubar amb 1,0 µM de diacetat de diclorodihidrofluoresceïna durant 15 min a 37 °C. Les cèl·lules es van rentar dues vegades amb PBS i es van analitzar mitjançant FCM per detectar ROS mitjançant un làser de 488 nm per a l'excitació i un làser de 535 nm per a la detecció.
ELISA.Després de la centrifugació (1,000 xg; 25˚C; 5 min), es va recollir el sobrenedant cel·lular de cada subgrup per analitzar els nivells de MDA, GSH-Px, SOD i els factors inflamatoris IL-6, IL- 1 i TNF-. Es van utilitzar els kits següents segons les instruccions del fabricant: kit d'assaig Micro MDA (núm. cat. BC0020; Beijing Solarbio Science & Technology Co., Ltd.), kit d'assaig GSH-Px (núm. cat. BC1195; Beijing Solarbio Science & Technology Co., Ltd.), kit de detecció d'activitat SOD (núm. cat. BC0170; Beijing Solarbio Science & Technology Co., Ltd.), kit ELISA IL-1 de rata (núm. cat. RLB{ {13}}; R&D Systems, Inc.), kit de rata IL-6 Quantikine ELISA (núm. de cat. R6000B; R&D Systems, Inc.) i kit de rata TNF Quantikine ELISA (núm. de cat. RTA00; R&D Systems, Inc. ).
Anàlisi estadística.Tots els experiments es van repetir tres vegades i totes les dades s'expressen com a mitjana ± SD. Les dades es van analitzar mitjançant el programari SPSS versió 21.0 (IBM Corp.). Es van avaluar les diferències entre diversos grups mitjançant ANOVA unidireccional i la prova post hoc de Dunnett. P<0.05 was="" considered="" to="" indicate="" a="" statistically="" significant="">
Resultats
Identification of isolated EPCs and PRKs. The isolated EPCs were identified using Dil‑Ac‑LDL staining (Fig. 1A). Microscopic counting revealed that the degree of coincidence between red (Dil‑Ac‑LDL staining) and blue (nuclear staining with DAPI) fluorescence was >90 per cent, confirmant que els EPC es van aïllar amb èxit. Els PRK aïllats es van analitzar mitjançant IF (vimentina/-SMA). Els resultats van demostrar que el nivell d'expressió de vimentina/-SMA en PRK era alt i positiu, cosa que suggereix l'èxit d'aïllament de PRK (Fig. 1B).
La proporció òptima d'EPC a PRK.Es va examinar l'efecte de combinar diferents proporcions de PRK/EPC en un sistema de co-cultiu, i es va trobar que les PRK cultivades en una proporció d'1:3 PRK/EPC no tenien un augment de les taxes de proliferació en comparació amb les PRK cultivades amb 2: Relació 1, 1:1 o 1:2 de PRK/EPC (Fig. 1C). A més, les proporcions creixents d'EPC (1:4, 1:5, 1:6 i 1:7) van donar lloc a un augment significatiu de la proliferació de PRK en comparació amb la d'EPC (1:3). Per tant, es va seleccionar una proporció d'1:3 PRK/EPC per a estudis posteriors per evitar possibles interferències d'EPC excessius en experiments posteriors.
Efecte del cocultiu EPC sobre els danys induïts per Ang II.Els PRK (1x104) es van inocular amb 24 h d'antelació al compartiment inferior d'una placa Transwell. La cambra superior contenia 200 µl de PBS al grup control i 200 µl d'EPC (3x104) al grup experimental. Per modelardany renal,Es va afegir 1 µM Ang II al compartiment inferior. Després de 24 h, es van realitzar assajos CCK-8 i FCM per mesurar la taxa de proliferació de PRK. Els PRK que van rebre Ang II en absència d'EPC tenien una disminució significativa (P<0.05) proliferation="" rate="" (fig.="" 1d),="" and="" increased="" apoptosis="" rate="" (fig.="" 1e)="" and="" cell="" cycle="" arrest="" in="" the="" g1="" phase="" (fig.="" 1f)="" compared="" with="" the="" control="" group,="" while="" prks="" co‑cultured="" with="" epcs="" receiving="" ang="" ii="" showed="" the="" reverse="" effects.="" these="" results="" indicated="" that="" co‑culture="" with="" epcs="" can="" reduce="" the="" damage="" induced="" by="" ang="" ii="" in="" a="" rat="">ronyómodel cel·lular.
Els EPC protegeixen els PRK dels danys induïts per Ang II, es van examinar els nivells d'estrès oxidatiu induïts per Ang II en PRKs co-cultivats amb EPC. Els resultats de l'assaig FCM van revelar que Ang II va augmentar significativament (P<0.05) the="" levels="" of="" ros="" in="" prks="" in="" the="" absence="" of="" epcs,="" while="" prks="" co‑cultured="" with="" epcs="" had="" comparatively="" lower="" ros="" levels="" (fig.="" 2a).="" similarly,="" the="" elisa="" results="" indicated="" that="" the="" levels="" of="" secreted="" mda="" (fig.="" 2b)="" were="" increased="" and="" gsh="" and="" sod="" (fig.="" 2c="" and="" d)="" levels="" were="" decreased="" in="" prks="" receiving="" ang="" ii,="" while="" prks="" receiving="" ang="" ii="" and="" co‑cultured="" with="" epcs="">
Figure 1. Recovery of PRKs by co‑culture with EPCs following injury induced by Ang II. (A) Confirmation of the isolation of EPCs via Dil‑Ac‑LDL staining. Magnification, x100. (B) Confirmation of the isolation of PRKs using an immunofluorescence assay. Magnification, x400. (C) CCK‑8 analysis of the effects of different proportions of co‑cultured EPCs on the proliferation of PRKs. NS P>0.05 vs. PRKs:EPC, grup 2:1; * P<0.05 vs.="" prks:epcs,="" 2:1="" group.="" (d)="" cck‑8="" analysis="" of="" the="" effects="" of="" co‑cultured="" epcs="" on="" the="" proliferation="" rate="" of="" ang="" ii‑treated="" prks.="" fcm="" analysis="" of="" the="" effects="" of="" co‑cultured="" epcs="" on="" the="" (e)="" apoptosis="" and="" (f)="" cell="" cycle="" of="" ang="" ii‑treated="" prks.="" *=""><0.05 vs.="" control;="" #=""><0.05 vs.="" ang="" ii.="" ang="" ii,="" angiotensin="" ii;="" epcs,="" endothelial="" progenitor="" cells;="" prks,="" primary="" rat="">ronyócèl · lules; FCM, citometria de flux; CCK-8, Kit de recompte de cèl·lules-8; Dil-Ac-LDL, lipoproteïna de baixa densitat acetilada del complex Dil; OD, densitat òptica; ‑SMA, ‑actina del múscul llis; NS, no significatiu. resultats oposats pel que fa a la secreció d'aquests enzims. Per tant, la generació de ROS pot estar implicada en el dany cel·lular induït per Ang II i es pot millorar mitjançant el cocultiu amb EPC.
Ang II també pot danyar les cèl·lules afavorint la secreció de citocines inflamatòries, mentre que les EPC poden prevenir la inflamació (32). A continuació, es va investigar si Ang II promou la secreció de citocines inflamatòries en PRKs i si les EPC podrien exercir el seu paper protector inhibint la secreció de citocines inflamatòries. La secreció d'IL-1, IL-6 i TNF- es va regular significativament a les PRK mitjançant l'addició d'Ang II. En canvi, en PRK co-cultivats amb EPC, els nivells d'IL-1, IL-6 i TNF- (Fig. 2E-G) eren comparativament més baixos (P).<0.05) than="" those="" in="" prks="" cultured="" alone.="" therefore,="" the="" damage="" induced="" by="" ang="" ii="" in="" prks="" was="" also="" associated="" with="" pro‑inflammatory="" cytokines,="" and="" co‑culture="" with="" epcs="" exerted="" protective="" effects="" by="" reducing="" the="" secretion="" of="" these="">
L'efecte protector dels EPC s'exerceix mitjançant MV.Els mecanismes mitjançant els quals les EPC exerceixen efectes protectors sobre la Ang II induïdaronyóles cèl·lules es van analitzar més aïllant MVs d'EPC (Fig. 3A). Els EPC-MV es van etiquetar amb PKH26 i es van afegir a PRK juntament amb Ang II en una placa Transwell, tal com es va descriure anteriorment. La fluorescència de PKH26 es va detectar al citoplasma de les PRK (Fig. 3B), cosa que indica que les EPC-MV s'havien fusionat amb les PRK. Aleshores, es va trobar que la disminució de la taxa de proliferació induïda per Ang II, la promoció de l'apoptosi i l'aturada del cicle en la fase G1 eren inhibides pels EPC-MV (Fig. 3C-E). De manera semblant a les PRK co-cultivades amb EPC, les PRK cultivades en presència d'EPC-MV i exposades a Ang II tenien nivells reduïts de ROS i MDA (Fig. 4A i B), augmentaven els nivells de GSH i SOD (Fig. 4C i D). i disminució de la secreció de les citocines inflamatòries IL-1, IL-6 i TNF- (Fig. 4E-G), en comparació amb el grup Ang II.
Discussió
Segons el que sabem, el present estudi va demostrar per primera vegada que els EPC poden protegir els PRK del dany cel·lular induït per Ang II. Aquest efecte protector està, almenys en part, mediat per MV que són secretades per EPC i es fusionen amb PRK durant el cocultiu. En afegir MV enriquits a PRK exposats a Ang II, es va trobar que els EPC-MV sols podrien protegir els PRK del dany induït per Ang II inhibint l'estrès oxidatiu i la inflamació. Els MV es defineixen com a nanodebris de membrana (0.05-1 µm) (33) i es desprenen de la superfície cel·lular després de l'activació, l'estrès o l'apoptosi. A més, els MV es poden derivar de diversos tipus de cèl·lules, com ara plaquetes, cèl·lules endotelials, EPC i glòbuls blancs (34,35). Els MV expressen marcadors específics de la superfície cel·lular, que varien amb la cèl·lula d'origen i la seva formació i poden exercir efectes antiinflamatoris, anticoagulants i angiogènics (36). Els MV alliberats dels EPC poden portar la informació biològica de la seva cèl·lula mare i, per tant, exercir una funció similar a les cèl·lules diana (33). Per exemple, els EPC-MV protegeixen els cardiomiòcits de la hipertròfia i l'apoptosi induïda per Ang II (28), milloren la funció endotelial i la capacitat de regular l'angiogènesi (37) i alleugen la disfunció endotelial induïda per l'estrès oxidatiu (38). Tanmateix, segons el que sabem, l'efecte dels EPC-MV sobre la nefropatia hipertensiva no s'ha informat anteriorment. Per tant, el present estudi pretenia investigar els efectes protectors potencials dels EPC i els EPC-MVlesió de cèl·lules renals.
En el present estudi, es va establir un model de lesió PRK induint danys amb Ang II. D'acord amb els informes anteriors (26, 39), Ang II va reduir la proliferació de PRK, va augmentar l'apoptosi i va aturar el cicle cel·lular a la fase G1 abans d'entrar a la fase S. A partir d'aquests marcadors relacionats amb la hipertensió, es va concloure que el model d'hipertensió PRK induït per Ang II es va establir amb èxit. A més, es va determinar que el co-cultiu amb EPC protegia els PRK dels danys induïts per Ang II. Després de la co-incubació d'EPC amb PRKs més Ang II, es van reduir els nivells d'enzims d'estrès oxidatiu i factors inflamatoris en els PRK. Així, els mecanismes potencials mitjançant els quals les EPC exerceixen els seus efectes protectors sobre les PRK poden implicar la regulació de l'estrès oxidatiu i la inflamació. Segons el que sabem, l'estudi actual va demostrar per primera vegada que els EPC poden millorar la resposta a l'estrès oxidatiu induït per Ang II i la inflamació en les PRK.
Els EPC protegeixen eficaçmentfunció renalen CKD (40) i tenen un paper important en el manteniment de la integritat vascular i la reparació de la lesió endotelial (15), així com en reduir les fuites vasculars, millorar la funció dels òrgans i augmentar la taxa de supervivència en la sèpsia (41). L'evidència acumulada suggereix que les EPC poden exercir un paper protector mitjançant la secreció de MV (37,42,43). Per provar l'efecte protector dels EPC-MV en PRK, els EPC-MV es van aïllar i etiquetar amb PKH26, i després els MV etiquetats es van co-incubar amb PRK més Ang II. Els EPC-MV es van fusionar amb PRK i van inhibir significativament la resposta a l'estrès oxidatiu i la inflamació induïda per Ang II, i aquests resultats són similars als de Fu et al (44). L'efecte inhibidor dels EPC-MV sobre els nivells d'enzims d'estrès oxidatiu va ser més gran que el dels EPC sols; això es pot atribuir al fet que els MV estan presents a una concentració més alta en els PRK tractats amb EPC-MV que en els co-cultivats amb EPC. Aquestes troballes suggereixen que l'efecte protector dels EPC sobre les PRK contra el dany cel·lular induït per Ang II pot dependre dels MV secretats. Una limitació del present estudi és que els mecanismes potencials mitjançant els quals els EPC-MV regulen els eixos de transducció de microRNAs / ARNm / senyals no es van examinar completament. El paper i els mecanismes a través dels quals els EPC-MV exerceixen protecció contradany renals'hauria d'avaluar en un model animal de nefropatia hipertensiva, que és una direcció prometedora per a futures investigacions. En conclusió, el present estudi va demostrar que els EPC poden protegir les PRK de l'estrès oxidatiu induït per Ang II i l'augment de la inflamació mitjançant la secreció de MV. Això proporciona una nova direcció per al tractament de la nefropatia hipertensiva i estableix un model in vitro per estudiarlesió renal.
