Marcadors de qualitat de Cistanches Herba basats en la relació espectre-efecte antioxidant Ⅱ

3 resultats

3.1 Establiment del mapa d'empremtes dactilars

Prepareu 10 lots de solucions d'assaig segons el mètode de 2.1, utilitzeu les condicions cromatogràfiques de 2.2 per a la detecció, obteniu les empremtes dactilars de cada lot de mostres (figura 1) i seleccioneu el pic núm. 11 (C11) com a pic de referència del empremta digital. Importeu les dades de la fase líquida. Fitxer AIA de l'empremta digital del producte de prova Cistanche deserticola al programari "Sistema d'avaluació de similitud cromatogràfica d'empremtes digitals de medicina tradicional xinesa" (versió 2012). Es van calibrar disset pics cromatogràfics comuns en el mode comú i, en comparació amb l'espectre estàndard de referència mixt (figura 2), es van identificar un total de 10 pics comuns.

3.2 Investigació sobre l'efecte antioxidant de Cistanche deserticola

3.2.1 Efecte de Cistanche deserticola sobre la viabilitat de les cèl·lules HEK 293.

En comparació amb les cèl·lules del grup normal, Cistanche deserticola no va produir citotoxicitat a una concentració de massa de 50 ~ 100 ug·mL–1, i les taxes de supervivència cel·lular eren superiors al 90%. A mesura que augmentava la concentració de Cistanche deserticola, la viabilitat cel·lular va disminuir. Per tant, es va seleccionar Cistanche deserticola amb una concentració de massa de 100 µg·mL–1 per a la seva administració posterior.

3.2.2 Efecte de Cistanche deserticola sobre les ROS induïdes per H2O2 a les cèl·lules HEK 293

El ROS IC50 de Cistanche deserticola a diferents concentracions es va calcular mitjançant el programari GraphPad Prism 8. Els resultats es mostren a la figura 3 i a la taula 2.

Per obtenir més coneixements sobre el cistanche, fem una ullada a com distingir la qualitat del cistanche. La qualitat de Cistanche depèn del contingut dels ingredients actius Echinacoside i Acteoside, el contingut més alt significa una funció més forta, avui prenem com a exemple els suplements de Cistanche d'un 30% d'Echinacoside i un 12% d'Acteoside per donar-nos una explicació, generalment anomenem cistanche en aquest article.

QUANT TEMPS TREGA A FUNCIONAR CISTANCHE?

3.2.3 Efecte de Cistanche deserticola sobre la SOD induïda per H2O2-de cèl·lules HEK 293

Com es mostra a la figura 4, en comparació amb el grup normal, l'activitat SOD a les cèl·lules del grup model es va reduir significativament i l'activitat SOD del grup d'administració de Cistanche deserticola va augmentar en diferents graus (P<0.001), indicating that Cistanche deserticola can increase the intracellular SOD enzyme activity.

3.2.4 Efecte de Cistanche deserticola sobre la CAT induïda per H2O2-a les cèl·lules HEK 293

Com es mostra a la figura 5, H2O2 pot causar una disminució significativa de l'activitat de l'enzim CAT intracel·lular (P<0.001), with the activity only reaching 30% of the normal group, indicating that H2O2 has seriously damaged the antioxidant system of cells. After Cistanche deserticola administration, intracellular CAT enzyme activity decreased significantly (P<0.001). The enzyme activity was significantly increased (P<0.001).

3.3 Cribratge del marcador Q de Cistanche deserticola basat en l'anàlisi de correlació d'eficiència espectral

3.3.1 La PCA utilitza el valor propi > 1 i la taxa de contribució de la variància acumulada > 85% com a estàndard per extreure 4 components principals. La trama de tartera (figura 6) dels tres primers components principals té una corba més pronunciada, la qual cosa significa que la seva taxa de contribució és més alta. gran. La taxa de contribució de la variància acumulada dels quatre components principals és del 87,640%, la qual cosa indica que aquests quatre components principals poden representar el 87,640% de la informació de les variables originals. Els valors propis inicials i les taxes de contribució a la variància es mostren a la taula 3. La matriu de components rotats s'obté mitjançant el mètode de normalització de la variància màxima de Kaiser, vegeu la taula 4. Segons el valor de càrrega de cada pic cromatogràfic en els quatre components principals, la informació reflectida per cadascun es pot extreure el component principal. És a dir, com més gran sigui el valor de càrrega, més gran serà la influència del pic cromatogràfic sobre el component principal. Al component principal 1, els pics 1 a 3, 5, 7, 11 i 13 a 15 tenen les càrregues absolutes més grans; al component principal 2, els pics 6 i 16 tenen les càrregues absolutes més grans; El pic 17 explica la informació del component principal 3, el pic 8 té el major impacte sobre el component principal 4, de manera que els 13 components químics dels pics 1~3, 5~8, 11, 13~17 es van seleccionar com a base material principal de Cistanche. deserticola per a l'anàlisi d'eficiència espectral posterior.

3.3.2 PCC

ROS IC50 és un indicador negatiu de l'eficàcia del fàrmac, de manera que un coeficient de correlació negatiu significa que la variable dependent està positivament correlacionada amb l'eficàcia del fàrmac. Els coeficients de correlació dels 13 pics cromatogràfics de Cistanche deserticola són tots negatius, cosa que indica que tots estan relacionats positivament amb l'eliminació de ROS IC50, entre els quals els pics 14 i 3, 7, 11, 1 i 13 es van correlacionar molt fortament amb ROSIC50. (Pàg<0.01), and peaks 2, 5, and 15 were strongly correlated (P<0.05); the 13 chromatographic peaks were all positively correlated with SOD, among which peaks 13 and 3 , 15, 11, 2 were extremely strongly correlated with SOD (P<0.01), and peaks 1, 14, 7, 5, and 6 were strongly correlated (P<0.05); 11 peaks were positively correlated with CAT, and peak 5 was positively correlated with CAT. There was a strong correlation (P<0.05). The results are shown in Table 5.

Combinant els resultats de PCC de ROS IC50, SOD i CAT, es van seleccionar els pics 1 ~ 3, 5, 7, 11 i 13 ~ 15 com a grup d'ingredients actius per a Cistanche deserticola per exercir efectes antioxidants.

3.3.3 PLS

In PLS, the ROS IC50 regression coefficients of 13 chromatographic peaks are all negative and positively correlated with the pharmacodynamic activity. Among them, the chromatographic peaks with VIP>1 are: 14, 3, 11, 1, 7, 13, 2, 5, 15 (Figure 7A); in the study of SOD enzyme activity, the coefficients of all peaks are positive, that is, all peaks are positively correlated with drug efficacy. Among them, the chromatographic peaks with VIP>1 are: 13, 3, 15, 11, 2, 1 , 14, 7 (Figure 7B); in the study of CAT enzyme activity, except for peaks 6 and 16, the other chromatographic peaks are positively correlated with drug efficacy, among which the chromatographic peaks with VIP>1 són: 5, 13, 14, 11, 7 (Fig. 7C). Els compostos representats pels pics 1 ~ 3, 5, 7, 11 i 13 ~ 15 es van seleccionar com a components actius antioxidants potencials en el model PLS.

3.4 Verificació de l'activitat del marcador Q de Cistanche deserticola

3.4.1 Efecte dels ingredients actius sobre la citotoxicitat de HEK 293

A partir dels resultats de l'anàlisi de correlació d'efectes d'espectre, es van seleccionar 6 ingredients que inclouen àcid genipínic, 8-àcid epistricnoic, equinaceòsid, verbascòsid, antocinòsid A i isorbascòsid per a la verificació de l'activitat. Els sis ingredients actius de Cistanche deserticola no van mostrar citotoxicitat a concentracions que van des de 0,781 a 3,125 µmol·mL–1, i les taxes de supervivència cel·lular eren totes superiors al 90%. A mesura que augmenta la concentració, la viabilitat cel·lular s'inhibeix. Per tant, les concentracions de dosificació posteriors es van seleccionar com a 0,781, 1,563 i 3,125 µmol·mL–1.

3.4.2 Parelles d'ingredients actius

L'efecte antioxidant de les cèl·lules HEK 293 induïdes per H2O2-es va verificar detectant l'efecte eliminador de cada ingredient actiu sobre les ROS intracel·lulars i la capacitat de regular l'activitat dels enzims SOD i CAT per verificar si té un efecte antioxidant. A l'experiment d'eliminació de ROS, les diferències entre els grups d'àcid genipínic de dosis mitjana i alta i el grup model eren estadísticament significatives (P<0.01, P<0.001, Figure 8A). Compared with the model group, there were statistically significant differences between the low, medium and high dose groups of inulin, anthoside A, verbascoside and isorbascoside (P<0.001, Figure 8B, Figure 8C), indicating that the six monomers All have a certain degree of ROS scavenging effect; in the SOD and CAT enzyme activity measurement test, the enzyme activities of the low, medium and high dose groups of active ingredients were all higher than the model group, indicating that all 6 monomers can increase SOD and CAT Enzyme activity.