Progrés de la investigació sobre la classificació del limfoma difús de cèl·lules B grans

Contacte:joanna.jia@wecistanche.com/ WhatsApp: 008618081934791

El limfoma difús de cèl·lules B grans (DLBCL) representa entre el 25 i el 35 per cent de tots els limfomes no Hodgkin i és un grup heterogeni i agressiu amb diferents característiques clíniques, patològiques i biològiques. limfoma. Estudis clínics anteriors han identificat rituximab, ciclofosfamida, doxorubicina, vincristina i prednisona (R-CHOP) com el tractament estàndard de primera línia per als pacients amb DLBCL, dels quals entre el 50 i el 70 per cent dels pacients poden, però, un gran nombre de pacients mostren remissió refractària o completa i després recaiguda, mentre que només el 10% dels pacients refractaris i en recaiguda es poden curar mitjançant la immunoquimioteràpia de salvament tradicional combinada amb el trasplantament de cèl·lules mare hematopoètiques autòlegs, i el 90% restant dels pacients tenen mals resultats del tractament. Per tant, com millorar el pronòstic d'aquests pacients s'ha convertit en un gran repte. Actualment, també hi ha estudis clínics que discuteixen la combinació d'altres fàrmacs (com la lenalidomida, ibrutinib, etc.) sobre la base de R-CHOP per millorar encara més l'eficàcia, però no s'ha fet cap avenç significatiu. El DLBCL té una heterogeneïtat important, de manera que com fer diagnòstics estratificats precisos i guiar un tractament individualitzat també és un dels punts de recerca actuals. Aquest article resumeix el progrés de la classificació DLBCL.

cistamcheAugmenta la proliferació cel·lular

1. Tipatge COO de DLBCL mitjançant xip de perfil d'expressió gènica

DLBCL té una heterogeneïtat òbvia en la morfologia cel·lular i el pronòstic. L'any 2000, ALIZADEH i altres van aplicar la tecnologia de xips gènics per detectar i detectar 3 186 gens que tenen un paper important en el desenvolupament, la diferenciació i la carcinogènesi dels limfòcits i van cartografiar l'expressió gènica de DLBCL. El perfil d'expressió gènica (GEP) va mostrar que DLBCL es va originar a partir de limfòcits B en diferents etapes de diferenciació. Segons GEP, el DLBCL es pot dividir en dos subtipus: tipus semblant a cèl·lules B del centre germinal (GCB) i tipus semblant a cèl·lules B activades (ABC). Estudis posteriors de ROSENWALD et al. també va confirmar aquest resultat. Els estudis posteriors van incloure més casos i més tipus de cribratge genètic i van trobar que alguns pacients no podien determinar l'origen de les cèl·lules, que es van caracteritzar entre dos subtipus, anomenats tipus 3, també coneguts com a no classificats. Per a DLBCL de diferents orígens, l'estudi va trobar que mostrava diferents pronòstics, entre els quals DLBCL derivat de GCB podria obtenir un temps de supervivència més llarg. La tipificació cel·lular d'origen (COO) va revelar l'heterogeneïtat de DLBCL i, sota el tractament R-CHOP, hi va haver diferències significatives en la supervivència entre els subtipus, proporcionant una base teòrica per avaluar el pronòstic i la selecció del règim. Els resultats de la prova GEP basats en la tecnologia de xips genètics es reconeixen actualment com l'estàndard d'or per jutjar l'origen de les cèl·lules DLBCL. Els resultats de les proves són els més fiables, però són cars i requereixen mostres altes, normalment mostres de teixit viu congelades, de manera que l'operabilitat no és forta. No s'utilitza àmpliament en la pràctica clínica.

2. Ús de la tecnologia NanoString per escriure COO de DLBCL

NanoString (Fluorescent Barcode Labeled Single-Molecule Detection) és una nova tecnologia de perfil d'expressió gènica de detecció d'alt rendiment basada en la mesura directa de codis de barres moleculars fluorescents a les sondes després que les molècules d'àcid nucleic s'hibridiquin a sondes. Cada etiqueta de codi de barres correspon a una seqüència d'ARNm específica i es poden mesurar fins a 800 codis de barres a la mateixa mostra, mentre que el volum de mostra requerit pot ser tan baix com 100 ng d'ARN. La tecnologia de quantificació digital de NanoString elimina la necessitat de transcripció, amplificació o construcció de biblioteques, eliminant procediments experimentals llargs i recursos humans, i minimitzant el biaix potencial introduït per reaccions enzimàtiques. Per a mostres clíniques amb mostres escasses, la tecnologia NanoString pot utilitzar directament mostres incrustades en parafina per quantificar l'ARN sense extracció d'ARN. Aquest avantatge tècnic el fa més pràctic en la pràctica clínica. SCOTT et al. va examinar 20 gens basats en les dades de la tipificació GEP i va utilitzar la tecnologia NanoString per realitzar la tipificació COO en 119 mostres DLBCL. La coherència entre els resultats de la investigació i el "estàndard d'or" va assolir el 95 per cent, i els pacients també es poden dividir en tipus GCB, tipus ABC i tipus no classificat, els dos últims es coneixen col·lectivament com a tipus no GCB, que també mostra que el El pronòstic del tipus GCB és millor que el del tipus no GCB. Altres estudis basats en la tecnologia NanoString han confirmat encara més el valor d'aquesta tecnologia en l'escriptura COO de DLBCL.

Herba de medicina tradicional xinesacistamche, també es coneix com el "ginseng del desert"

3. Tipatge COO de DLBCL mitjançant tecnologia de PCR quantitativa

Tant la tipificació de xips genètics com la tipificació NanoString requereixen un equip especial car, que és difícil d'aplicar àmpliament a la pràctica clínica. La PCR quantitativa és un mètode utilitzat habitualment per verificar l'expressió gènica. Té les característiques d'un funcionament senzill, alta sensibilitat i precisió, i es pot obtenir a partir d'exemplars incrustats en parafina. L'equip de Li Xiaoqiu va utilitzar per primera vegada la PCR quantitativa per dur a terme una validació clínica a gran escala en poblacions de pacients xinesos i va desenvolupar un producte adequat per a proves genètiques clíniques, a saber, l'assaig DLBCL-COO. En aquest estudi, es van examinar 32 gens significativament relacionats amb la tipificació DLBCL-COO a la base de dades pública i es van inscriure 160 pacients, i després es van utilitzar els mètodes d'immunohistoquímica, PCR quantitativa i xip gènic per detectar els seus exemplars incrustats en parafina i els corresponents frescos. Espècimens de teixit, els resultats van mostrar que els resultats de la tipografia de l'assaig DLBCL-COO eren un 92 per cent coherents amb el "estàndard d'or"; L'anàlisi de supervivència va mostrar que els resultats d'escriptura de l'assaig DLBCL-COO estaven significativament correlacionats amb la supervivència global i el pronòstic del tipus GCB era significativament millor que el del tipus ABC (P =0.023), que és molt coherent amb el domèstic. i resultats de recerca estrangers. Relativament parlant, la plataforma de mètodes per escriure amb tecnologia de PCR quantitativa és més oberta, l'operació és més senzilla i és adequada per al desenvolupament rutinari a la majoria de laboratoris de patologia molecular.

4. Tipatge COO de DLBCL per immunohistoquímica

Per a algunes àrees on els fons i les tecnologies són escassos, la tecnologia de mecanografia basada en GEP és difícil d'utilitzar àmpliament, de manera que el més utilitzat clínicament segueix sent el mètode de mecanografia basat en la immunohistoquímica (IHC). El 2005, HANS i altres van aplicar la tecnologia de microarrays de teixits per escriure i van establir un model de mecanografia IHC detectant CD10, BCL6 i MUM-1. DLBCL es pot dividir en tipus GCB i tipus no GCB. El pronòstic del primer és significativament millor que el del segon. (Pàg<0.001), the="" agreement="" of="" this="" typing="" method="" with="" the="" gold="" standard="" was="" 84%.="" in="" order="" to="" further="" improve="" the="" accuracy="" of="" prognostic="" judgment,="" new="" typing="" systems,="" such="" as="" choi="" and="" tally,="" have="" been="" proposed="">

L'escriptura Choi es basa en cinc biomarcadors que inclouen CD10, BCL6, MUM-1, FOXP1 i GCET1, i dos marcadors, FOXP1 i GCET1 s'afegeixen al mètode d'escriptura de Hans, que és un 93 per cent coherent amb el "or". estàndard". Estudis anteriors han demostrat que FOXP1 s'expressa molt en el tipus ABC i que l'expressió alta s'associa amb un pronòstic deficient. Quan el valor crític de FOXP1 és del 80 per cent, es pot distingir específicament el tipus ABC DLBCL. Tanmateix, GCET1 s'expressa molt a les cèl·lules B derivades del centre germinal, de manera que afegir GCET1 a la tipificació de Hans és útil per distingir DLBCL de tipus GCB i de tipus ABC. Pel que fa a la predicció del pronòstic, la classificació Choi es va utilitzar per predir la 3-taxa de supervivència als anys dels pacients, dels quals el tipus GCB era del 88%, el tipus ABC era del 44% i els resultats de predicció de la classificació GEP "estàndard d'or" (El tipus GCB era del 92 per cent, el tipus ABC era del 44 per cent) 44 per cent) és bastant proper. Li Min et al. va comparar la capacitat predictiva de la classificació de Choi i la de Hans i també va demostrar que la primera era més precisa. La supervivència global del grup GCB i del grup no GCB sota la classificació de Hans no va mostrar cap diferència significativa (P=0.102), mentre que la classificació Choi no va mostrar cap diferència significativa en la supervivència global (P=0 .102). El pronòstic del grup GCB va ser significativament millor que el del grup no GCB (3-les taxes de supervivència anuals eren del 61,8 per cent i del 42,5 per cent, respectivament, P<0.05). however,="" it="" is="" worth="" noting="" that="" in="" recent="" years,="" with="" the="" high="" inconsistency="" of="" bcl6="" found="" by="" different="" research="" centers,="" the="" inclusion="" of="" bcl6="" in="" the="" improved="" classification="" of="" choi="" and="" hans="" has="" been="" canceled.="" operation="" and="" result="">

Com s'ha esmentat anteriorment, la mecanografia Hans i la mecanografia Choi basada en IHC tenen funcions similars, i els resultats de diversos anticossos es jutgen en un ordre determinat, donant lloc a que alguns anticossos tinguin una prioritat més alta que altres. El mètode del tipus permet excloure els resultats d'anticossos posteriors si es compleixen les condicions anteriors. Tanmateix, l'escriptura GEP no segueix un ordre determinat ni exclou determinats resultats. Per tal de reduir aquestes diferències, MEYER et al. va desenvolupar un mètode d'escriptura que no jutja els resultats d'anticossos en un ordre específic, és a dir, el mètode de mecanografia Tally. La concordança més alta amb el "estàndard d'or" va ser del 93 per cent, mentre que tant en Hans com en Choi eren el 87 per cent. El mètode del tipus de comptatge inclou quantitats iguals d'anticossos GCB (GCET1 i CD10) i ABC (FOXP1 i MUM-1), i la classificació ve determinada pel parell immunofenotípic que és més positiu per a l'antigen. S'utilitzen dos anticossos per a cada tipus, de manera que, en el cas del mateix resultat positiu per a cada tipus, es necessita LMO2 per determinar l'immunofenotip (LMO2 superior o igual al 30 per cent és el valor de tall). Els estudis han confirmat que LMO2 s'expressa específicament en limfòcits o limfomes B derivats de GCB, i la seva alta expressió s'associa significativament amb un bon pronòstic en DLBCL.

En conclusió, tot i que el mètode d'escriptura COO de DLBCL basat en IHC no és tan bo com l'escriptura NanoString i l'escriptura quantitativa per PCR, la coherència amb el "estàndard d'or" també és del 74 per cent -93 per cent. Té els avantatges de requisits baixos i altres avantatges, que són convenients per al desenvolupament rutinari de diversos hospitals. Entre ells, els mètodes de mecanografia de Choi i Tally són més coherents amb el "estàndard d'or", però GCET1, FOXP1 i LMO2 no són anticossos permanents, la qual cosa limita la seva àmplia aplicació fins a cert punt.

cistamche rodanxes per al consum diari per millorar la proliferació cel·lular i reduir l'apoptosi cel·lular

5. Exploració de la tipificació DLBCL basada en la mutació gènica

Gairebé tots els pacients amb DLBCL tenen mutacions genètiques, i els pacients amb determinades mutacions poden afectar l'eficàcia de fàrmacs específics dirigits i, per tant, afectar el pronòstic. Per tant, la subtitografia DLBCL basada en signatures mutacionals té utilitat clínica. SCHMITZ et al. va seleccionar mostres congelades fresques de 574 pacients amb DLBCL i va utilitzar la seqüenciació d'exoma i transcriptoma per analitzar el número de còpia d'ADN del xip del gen. Entre ells, es van seleccionar 372 gens per a l'amplificació i la reseqüenciació dirigides per identificar aquells amb gens reproductibles. Gens mutats sexualment. Els resultats de l'estudi van dividir DLBCL en 4 genotips: tipus MCD (principalment co-mutació MYD88L265P i CD79B), tipus BN2 (principalment fusió BCL6 i mutació NOTCH2), tipus N1 (principalment mutació NOTCH1) i tipus EZB (principalment mutació EZH2) Mutació i BCL2 translocació), entre els quals els tipus MCD i N1 es deriven principalment d'ABC, el tipus EZB es deriva principalment de GCB i el tipus BN2 representa una certa proporció de pacients ABC, GCB i no classificats respectivament (el tipus GCB representava el 19 per cent, l'ABC). el tipus representava el 41 per cent, i el tipus no classificat representava el 40 per cent). L'estudi també va trobar que els nous genotips poden determinar millor el pronòstic, entre els quals els tipus BN2 i EZB tenen un millor pronòstic que els tipus MCD i N1. Els tipus MCD, N1, BN2 i EZB prediuen 5-taxes de supervivència anual del 26 per cent, 36 per cent, 65 per cent, 68 per cent, l'anàlisi multivariant també va mostrar que el nou genotip era un factor independent que afectava el pronòstic i no es va veure afectat. per la puntuació IPI. L'equip d'investigació va crear l'algorisme LymphGen per classificar DLBCL en 7 genotips basats en investigacions anteriors, afegint A53 (amb inactivació de TP53), ST2 (amb mutacions SGK1 i TET2) i altres inclassificables. Aquest mètode de genotipat podria identificar el 63,1 per cent dels genotips DLBCL. . Entre ells, el subtipus BN2 té el millor pronòstic en el tipus ABC, i el subtipus ST2 en el tipus GCB té un millor pronòstic que el subtipus EZB. Per tant, es creu que el nou genotipat revela encara més la patogènesi de DLBCL, amb una patogènesi diferent entre els subtipus, i els diferents genotips responen de manera diferent a la immunoquimioteràpia, cosa que pot afectar l'elecció de la teràpia dirigida, però la limitació més gran d'aquest mètode de classificació és que alguns els pacients no es poden classificar en cap subtipus, la qual cosa mereix un estudi addicional.

Mitjançant la seqüenciació de l'exoma sencer de 3{{30}}4 pacients amb DLBCL, CHAPUY et al. va obtenir dades sobre mutacions de baixa freqüència, mutacions recurrents, canvis en el nombre de còpies somàtiques i variants estructurals, i van definir els pacients com cinc genotips: tipus C1 (principalment BCL10, TNFAIP3, UBE2A, mutació CD70 i translocació BCL6, majoritàriament d'origen ABC), tipus C2 (hi ha una inactivació bial·lèlica de TP53, que afecta l'estabilitat cromosòmica i el cicle cel·lular, i no té res a veure amb l'origen ABC/GCB), tipus C3 (principalment mutacions BCL2, CREBBP2, EZH2, KMT2D, TNFRSF14, principalment l'origen GCB), tipus C4 (principalment mutacions SGK1, HIST1H1E, NFKBIE, BRAF i CD83, principalment origen GCB), tipus C5 (principalment mutacions CD79B, MYD88L265P, ETV6), PIM1 i TBL1XR1, majoritàriament d'origen ABC, freqüents al sistema nerviós central primari i DLBCL testicular) i tipus C0 (manca de controladors genètics clars). L'estudi també va analitzar més la relació entre els nous genotips i el pronòstic. Els resultats van mostrar que C0, C1 i C4 tenien millors pronòstics, mentre que C3 i C5 tenien un pronòstic dolent. Entre els pacients derivats de l'ABC, el pronòstic del tipus C1 va ser significativament millor que el del tipus C5. , mentre que el tipus C4 era significativament millor que el tipus C3 en els pacients derivats de GCB. El nou genotipat també defineix DLBCL tipus ABC de baix risc (tipus C1), les cèl·lules del qual poden originar-se a la zona marginal extrafol·licular; i DLBCL tipus GCB d'alt risc amb variants estructurals BCL2 i PETN i enzims epigenètics. Alteracions (tipus C3), mentre que el DLBCL de tipus GCB de baix risc s'associa a alteracions en cinases i proteïnes recombinants múltiples de múltiples vies (BCR/PI3K, JAK/STAT, BRAF) (tipus C4); tipatge no relacionat amb l'origen ABC/GCB Amb inactivació bial·lèlica de TP53, inestabilitat de 9p21.3/CDKN2A i gens relacionats (tipus C2). Les característiques genètiques clau d'aquests DLBCL inclouen mutacions, canvis en el nombre de còpies somàtiques i variacions estructurals, i alteracions en aquestes tres classes d'informació genètica que es poden utilitzar per explicar les diferències en els resultats de la malaltia i el tractament.

A partir de la seqüenciació dirigida de 293 gens, LACY et al. va analitzar les característiques de mutació gènica de 928 pacients amb DLBCL i va dividir els pacients en 5 subtipus: tipus MYD88 (principalment mutacions MYD88L265P, PIM1, CD79B, principalment origen ABC, la majoria dels pacients DLBCL originals amb sistema nerviós central, testicles i mama pertanyen a aquest subtipus). ); Tipus BCL2 (amb EZH2, BCL2, CREBBP, T

Les mutacions de NFRSF14, KMT2D i MEF2B són principalment, principalment de GCB, alguns pacients amb limfoma d'alt grau i DLBCL transformats de limfoma fol·licular pertanyen a aquest tipus); Tipus SOCS1/SGK1 (incloent principalment SOCS1, CD83, SGK1, NFKBIA, HIST1H1E i STAT3 mutacions derivades principalment de GCB, i la majoria de DLBCL primaris mediastínics pertanyen a aquest tipus); Tipus TET2/SGK1 (incloent principalment mutacions TET2, SGK1, KLHL6, ZFP36L1, BRAF, MAP2K1 i KRAS, principalment l'origen GCB); tipus NOTCH2 (incloent principalment mutacions NOTCH2, BCL10, TNFAIP3, CCND3, SPEN, TMEM30A FAS i CD70, compostes per ABC, GCB i origen no classificat, amb característiques similars al limfoma de la zona marginal); subtipus no classificat (no classificat en cap altre lloc, NEC). L'estudi va analitzar la relació entre diferents genotips i el pronòstic, i els resultats van mostrar que MYD88 tenia el pitjor pronòstic, amb una taxa de supervivència 5-any del 42%; BCL2, SOCS1/SGK1 i TET2/SGK1 tenien un bon pronòstic, amb una 5-taxa de supervivència anual del 64,9%, respectivament, del 62,5% i del 60,1%; mentre que el pronòstic dels tipus NOTCH2 i NEC estava entre els dos, i les taxes de supervivència 5-anys eren del 48,1 per cent i del 53,6 per cent, respectivament.

En resum, es pot observar que els tres sistemes de classificació no només són diferents sinó que també tenen alguns continguts superposats. Entre ells, els tipus MYD88, C5 i MCD estan relacionats amb la font d'ABC. El sistema nerviós central primari i els limfomes testiculars es produeixen majoritàriament en aquests tres tipus, i el pronòstic és dolent. El tipus C2 es caracteritza per la mutació/deleció de TP53, i la majoria té un pronòstic dolent, i A53 correspon a C2. Els tipus BCL2, C3 i EZB estan associats a la font de GCB, tenen la mateixa signatura mutacional que el limfoma fol·licular i, tot i que els limfomes de doble èxit i d'alt grau són més freqüents en aquest tipus, el pronòstic global és bo. Els tipus SOCS1/SGK1 i C4 són principalment DLBCL derivats de GCB, que tenen característiques genètiques similars al limfoma primari de cèl·lules B grans del mediastí i tenen el millor pronòstic. Tanmateix, la tipificació actual de la mutació és complexa i els mètodes i resultats de diferents estudis són diferents. Per tant, el procés d'anàlisi encara s'ha de simplificar en el futur per aclarir encara més l'impacte dels gens de mutació bàsics en el pronòstic i el tractament.

cistamcheconté rics echinacòsids i acteòsids que poden nodrir i prevenir el cos de virus i malalties

Resum

L'escriptura de COO basada en GEP és el "estàndard d'or", però requereix mostres elevades, és cara i no és fàcil de dur a terme de manera rutinària a la pràctica clínica. Com a alternativa, l'escriptura de COO basada en NanoString, PCR quantitativa i tècniques immunohistoquímiques s'ha optimitzat encara més pel que fa als requisits d'exemplars, dificultat tècnica i costos experimentals, però la precisió del judici pronòstic i el paper de guiar el tractament encara és superior a la estàndard d'or. Hi ha un cert buit. Els estudis actuals també han demostrat que gairebé tots els pacients amb DLBCL contenen mutacions genètiques, i les mutacions genètiques desfavorables poden afectar significativament el pronòstic. La teràpia dirigida d'algunes mutacions específiques també pot millorar el pronòstic, de manera que la nova classificació basada en mutacions gèniques té una importància clínica important. La tipificació de mutacions gèniques és complementària a la tipificació de COO, la qual cosa explica que també hi ha una heterogeneïtat significativa dins del mateix subtipus de COO. Tanmateix, la tipificació de mutacions gèniques no pot incloure a tots els pacients, i es necessiten més investigacions per confirmar la importància rector del pronòstic clínic i si els fàrmacs dirigits tradicionals i nous que s'utilitzen actualment poden guiar el tractament a través d'aquesta tipificació.