Reversió mitjançant extractes aquosos de Cistanche Tubulosa de dèficits de comportament en el model de rata semblant a la malaltia d'Alzheimer: rellevància per a la deposició d'amiloide i la funció del neurotransmissor central

Fons

La malaltia d'Alzheimer (MA), un trastorn neurodegeneratiu progressiu, es caracteritza per dèficits cognitius i tres signes neuropatològics: pèrdua neuronal, plaques senils i embulls neurofibril·lars [1]. La patogènesi principal de la MA inclou la hipòtesi colinèrgica i la hipòtesi de la cascada amiloide [2]. La característica principal de la hipòtesi de la cascada amiloide és la formació del pèptid amiloide subproducte (A) a partir de la proteïna precursora de l'amiloide mitjançant la via amiloidogènica [1,2]. Quan A es diposita al cervell, s'associa amb la pèrdua neuronal cerebral, especialment la degeneració dels circuits neuronals colinèrgics al prosencèfal basal (hipòtesi colinèrgica) [2,3]. Una sèrie d'estudis van suggerir que la infusió intracisternal d'A 1-42 a les rates es va dipositar principalment a l'escorça frontal i l'hipocamp, provocant dèficits de memòria en tasques de comportament, incloses les tasques d'evitació inhibitòria i el laberint d'aigua de Morris [3,4]. Així, la infusió intracisternal A 1-42 al ventricle lateral ha induït canvis patològics i de comportament semblants a l'AD en models animals [3].

Cistanche tubulosa(Schenk) R. Wight (abreujat com CT) és utilitzat habitualment permetges tradicionals xinesos per tractar l'oblit, impotència i restrenyiment senil [5]. Estudis recents han demostrat que el pretractament amb glicòsids feniletanoides totals de TC podria millorar el deteriorament de la resposta d'evitació inhibitòria i l'apoptosi neuronal causada per l'àcid quinolínic, A 25-35 o la lligadura de l'artèria caròtida comuna en ratolins [6-8] mitjançant la seva activitat antioxidant i augmentant les activitats dels enzims antioxidants intracel·lulars com la superòxid dismutasa i la glutatió peroxidasa [9]. Els glucòsids feniletanoides totals inclouen principalment 2'-acetilacteòsids, acteòsids, cistanòsids, equinacòsids i isoacteòsids [10]. L'echinacòsid i l'acteòsid poden prevenir el deteriorament de la memòria causat per l'escopolamina en ratolins [11,12]. Per tant, vam plantejar la hipòtesi que la TC pot tenir efectes beneficiosos en pacients amb AD. Per provar aquesta hipòtesi, es va utilitzar un extracte de TC en què es va quantificar el contingut de glicòsids fenilpropanoides per investigar els efectes contra els canvis histopatològics i de comportament induïts per l'amiloide en un model de rata similar a l'AD. Segons una metaanàlisi de Myhrer sobre quatre tasques de comportament [13], les activitats acetilcolinèrgiques i catecolaminèrgiques tenen una gran influència en l'aprenentatge i la memòria. El model de rata similar a l'AD provoca la disfunció dels neurotransmissors centrals com l'acetilcolina i les catecolamines, que estan estretament relacionats amb dèficits de memòria [3,14]. Per tant, vam demostrar encara més el paper de la funció del neurotransmissor central en la reversió induïda per l'extracte de TC del deteriorament de la memòria causat per la infusió A 1-42 mesurant els nivells de neurotransmissors centrals i les activitats dels enzims relacionats.

TUBULOSA NATURAL DE CISTANCHE PER PREVENIR L'ALZHEIMER PHGS75% ECH 30% ACT 12%

Mètodes

Preparació d'extracte vegetal

Els materials secs de Cistanche tubulosa (Schenk) Wight (Citu970429) van ser identificats pel Centre de Desenvolupament de Biotecnologia (Taipei, Taiwan, ROC) i dipositats a Sinphar Tian-Li Pharmaceutical Co., Ltd. (Hangzhou, Xina). L'extracte aquós de CT en conté tresglicòsids feniletanoides, equinacòsid (25,4%), acteòsid (3,8%) i isoacteòsid(4, 1%), que es van quantificar mitjançant cromatografia líquida d'alt rendiment més detector de matriu de fotodíodes segons el mètode de Jiang et al [9]. L'extracte CT es va preparar recentment amb aigua destil·lada estèril.

Matèries

En el present estudi es van utilitzar rates Sprague-Dawley mascles amb un pes de 300-350 g, obtingudes de BioLASCO Taiwan Co. Ltd. Es van allotjar aleatòriament a una densitat de quatre rates per gàbia de malla de filferro (39 × 26 × 21 cm) en un entorn regulat amb temperatura (23 ± 1 grau) i humitat (60%) amb accés lliure als aliments estàndard en pellets. i aigua de l'aixeta i, en un cicle clar/fosc de 12 h - 12 h (fase clar: 08:00 a 20:00 h). El protocol experimental (Protocol núm. 99- 127-B) va ser aprovat pel Comitè Institucional de Cura i Ús d'Animals (IACUC) de la Universitat Mèdica de la Xina i la cura dels animals es va dur a terme d'acord amb els Principis rectors per a la cura i l'ús de Animals de laboratori. Després d'1 setmana d'aclimatació, es van utilitzar rates per als experiments següents.

Model de rata semblant a l'AD

El model de rata semblant a l'AD es va desenvolupar infusionant A 1-42 al ventricle cerebral [4]. Breument, les rates es van anestesiar amb fenobarbital (45 mg/kg, ip) i es van col·locar en un instrument estereotàxic David Kopf. Es va implantar una cànula d'infusió al ventricle cerebral esquerre (AP -1.5, ML +0.9, V -3.6 de bregma) i una infusió contínua de A {{10 }} (300 pmol/dia) es va mantenir durant almenys dues setmanes connectant una cànula d'infusió a una bomba miniosmòtica (Alzet 2002; Alza, Palo Alto, CA, EUA).

Horari experimental

Després de la implantació de la cànula i la fixació de la bomba mini-osmòtica, es va iniciar una infusió 1-42, i aquest dia es va designar com a dia 0. L'endemà (dia 1), les rates van rebre per via oral aigua destil·lada estèril, extracte de CT (100, 200 mg/kg) o donepezil (0,75 mg). /kg) durant el període d'infusió A 1-42. L'extracte de TC (100, 200 mg/kg) o donepezil (0,75 mg/kg) també es va donar a rates 1 h abans de les proves de comportament, incloses les proves de camp obert i la prova de forats (dia 7 després de la infusió A 1-42) , prova d'evitació inhibitòria (dia 8-9 després de la infusió A 1-42) i laberint d'aigua de Morris (dia 10-14 després de la infusió A 1-42). El dia 15 després de la infusió A 1-42, les rates van ser assassinades 1 h després de l'última administració d'extracte CT (100, 200 mg/kg) o donepezil (0,75 mg/kg) per a la mesura de l'acetilcolinesterasa (AChE) i Activitats de la monoaminooxidasa (MAO) al cervell i els nivells de neurotransmissors centrals i els seus metabòlits. El calendari de cirurgia, tractament farmacològic i proves de comportament es mostra a la figura 1.

Activitats locomotores i exploratòries

Les activitats locomotores i exploratòries es van mesurar mitjançant una tasca de camp obert (Coulbourn Instruments LLC, PA, EUA). Cada animal es va col·locar individualment a l'aparell i es va observar durant 10 minuts per registrar el temps de moviment, la longitud i la velocitat (activitat locomotora), les entrades al forat i el temps dedicat (activitat exploratòria) pel programari TruScan v 2.07 (Coulbourn Instruments LLC, PA, EUA) [15].

Prova d'evitació inhibitòria Es va utilitzar l'aparell d'evitació inhibitòria per a rates (Coulbourn Instruments LLC, PA, EUA). La sala estava fosca durant les sessions experimentals que es van dur a terme entre les 09:00 i les 12:00. Durant la prova d'entrenament (dia 8), cada rata es va col·locar al compartiment de llum amb l'esquena a la porta de la guillotina i es va mesurar el temps (latència de pas) fins que la rata va entrar al compartiment fosc. Després que la rata va entrar al compartiment fosc,

la porta estava tancada. Es va lliurar un cop de peu ineludible (0,8 mA durant 2 s) a través del terra de la xarxa. La rata es va treure del compartiment fosc 5 segons després del xoc. Aleshores, la rata es va tornar a posar a la seva gàbia domèstica fins a la prova de retenció. Vint-i-quatre hores més tard, es va dur a terme la prova de retenció (dia 9). La rata es va tornar a col·locar al compartiment de llum, es va obrir la porta i es va registrar la latència de pas com a mesura de retenció de memòria [15]. Es va establir un temps de tall superior de 300 segons.

Tasca de laberint d'aigua de Morris Per a l'avaluació de la funció de rendiment espacial, les rates es van provar en un laberint d'aigua de Morris, que consistia en una piscina circular negra d'acer inoxidable (un diàmetre de 165 cm i una alçada de 60 cm), plena. amb aigua de 23 ± 1 grau a una profunditat de 35 cm. El laberint es va dividir geogràficament en quatre quadrants iguals i incloïa punts d'alliberament a cada quadrant. La posició de la rata blanca a la piscina negra es va registrar amb una càmera de vídeo i un dispositiu de sistema de seguiment de vídeo automatitzat equipat amb el programari EthoVision XT (Noldus Information Technology, Leesburg, VA, EUA). El camí de natació i la latència d'escapada per trobar la plataforma es van registrar per a cada prova. Cada rata va rebre dues proves al dia durant quatre dies consecutius (dia 10 - 13 després d'una infusió 1-42) per trobar la plataforma oculta de plexiglàs (un diàmetre de 10 cm) que estava situada al centre del nord-est. quadrant i submergit 1,0 cm per sota de la superfície de l'aigua. Es va iniciar un assaig col·locant la rata a l'aigua de cara a la paret de la piscina en un dels quatre quadrants. Per a cada assaig, es va permetre a la rata nedar durant un màxim de 120 segons per trobar la plataforma. Quan va tenir èxit, la rata va tenir un 30-segon període de descans a la plataforma. Si no tenia èxit durant el període avortat, se li donava a la rata una puntuació de 120 segons i després es col·locava físicament a la plataforma i se li permetia el període de descans de 30-segons. En qualsevol cas, la rata va rebre immediatament el següent assaig després del període de descans [15]. L'endemà de quatre sessions diàries (dia 14), es va realitzar la prova de la sonda com a mesura de la memòria de referència. La plataforma de plexiglàs es va treure de la piscina i cada rata es va alliberar del quadrant oposat a on s'havia situat la plataforma. Els paràmetres mesurats a partir de la prova de la sonda durant 60 s van ser el temps i la distància a cada quadrant, especialment dedicats a la recerca de la plataforma al quadrant d'entrenament i la velocitat de natació [15].

TUBULOSA NATURAL DE CISTANCHE PER AL TRACTAMENT DE LA MALALTIA D'ALZHEIMER PHGS75% ECH 30% ACT 12%

Una 1-42 taca immunohistoquímica

Les rates es van anestesiar amb pentobarbital sòdic (45 mg/kg) i es van perfondre amb solució salina a través del ventricle cardíac esquerre, seguit de paraformaldehid al 4% en solució salina fisiològica. Després de la postfixació, es va extreure tot el cervell i es va preparar per a rodanxes de parafina. Es van obtenir tres seccions cerebrals (10 μm) de cada rata en un micròtom (Leica 2030 Biocut). Els teixits es van incubar durant la nit a 4 graus amb un anticòs monoclonal de la proteïna amiloide humana 17-24 del ratolí (dilució 1:300, Dakopatts A/C; Glostrup, Dinamarca). Les seccions immunomarcades es van desenvolupar amb un 0,05% de diaminobenzidina mitjançant un kit Vectastain (Vector Laboratories, Burlingame, CA, EUA). Les seccions cerebrals es van mesurar amb un augment de 40 x i es van comptar almenys 20 camps de cada secció cerebral mitjançant un analitzador d'imatges (Leica, Q500MC, Nussloch, Alemanya).

Mesura dels nivells de neurotransmissors corticals i hipocampals

Per a la mesura dels nivells d'acetilcolina, es van sacrificar rates per irradiació de microones. Per a la mesura dels nivells de catecolamines, les rates van ser decapitades. Els seus cervells es van treure ràpidament del crani i es van separar immediatament a l'escorça i l'hipocamp sobre gel segons el protocol de Glowinski i Iversen [16]. Aleshores, tots els teixits cerebrals es van homogeneïtzar amb àcid perclòric 0.2 M fred i es van centrifugar a 14,000 rpm durant 15 min a 4 graus. Els sobrenedants es van recollir, es van posar en unitats de filtre centrífug Ultrafree MC de 0.22 μM (Millipore, EUA) i es van centrifugar de nou durant 5 min a 4 graus. Les mostres recollides es van emmagatzemar a -80 graus per a la mesura de les concentracions de neurotransmissors centrals i el seu metabòlit mitjançant cromatografia líquida d'alt rendiment amb detecció electroquímica (EICOM HTEC-500, Japó).

Determinació de l'activitat AChE i MAO cortical i hipocampal

Cada còrtex i hipocamp es van homogeneïtzar en solució salina tamponada amb fosfat de 9-volts. Els homogeneïts es van centrifugar a 12 000 rpm durant 15 min a 4 graus, i els sobrenedants es van emmagatzemar a -80 graus fins al seu ús. L'activitat de l'AChE es va mesurar mitjançant el mètode Ellman [17]. Els homogenats cerebrals es van incubar amb 5,5'-ditiobis (2-àcid nitrobenzoic) a 25 graus durant 10 min i després es va afegir acetiltiocolina per al desenvolupament del color. La producció d'àcid 5-tio-2-nitrobenzoic es va mesurar a 412 nm. L'activitat d'AChE es va expressar com a U AChE per mg de proteïna. Les activitats de MAO-A i MAO-B es van determinar incubant la barreja de reacció incloent homogeneïtats de cervell de rata, 5 U/ml de peroxidasa de rave picant, 100 μM de vermell amplex i el substrat (5 mM de serotonina per a MAO-A o 5 mM de benzilamina per a MAO-). B) a 25 graus durant 60 min. L'activitat enzimàtica es va expressar com el percentatge de l'activitat en relació amb les rates infusionades amb vehicles [18]. El contingut de proteïnes es va determinar amb un kit d'assaig de proteïnes BioRad utilitzant albúmina sèrica bovina com a estàndard.

Anàlisi estadística

Les dades de la prova d'evitació inhibitòria es van analitzar mitjançant una anàlisi de variància no paramètrica de Kruskal-Wallis, seguida de la prova U de Mann-Whitney. Les dades del rendiment espacial, la prova de la sonda, la proporció de deposició d'amiloide, les activitats d'AChE i MAO i els nivells de neurotransmissors centrals i els seus metabòlits es van sotmetre a una anàlisi de variància unidireccional (ANOVA) seguida de la prova de Scheff. El criteri de significació estadística va ser P < 0,05 en totes les avaluacions estadístiques.

Resultats

Efectes de TC o donepezil sobre les activitats locomotores i exploratòries

No hi va haver cap diferència en el temps de moviment, la longitud o la velocitat entre els grups infusió amb vehicle i A 1-42-(P > 0.05). L'extracte de TC (100, 2{{20}}0 mg/kg) o donepezil (0,75 mg/kg) no van alterar el temps de moviment, longitud o velocitat de les rates infusionades A 1-42- (P > 0,05) (Figura 2 (A) - (C)). Hi va haver una lleugera disminució, però no estadísticament significativa, del temps passat al forat i de les entrades al forat entre els grups infusió amb vehicle i A 1-42- 42- (P > 0,05). L'extracte CT (100, 200 mg/kg) no va alterar el temps passat al forat ni les entrades al forat de rates infusionades A 1-42- (P > 0, 05). Tanmateix, el donepezil a 0, 75 mg/kg va augmentar el temps passat al forat i el recompte d'entrades al forat de rates infusionades A 1-42- (P <0, 05) (Figura 2 (D) i (E)).

Efectes de TC o donepezil sobre la tasca d'evitació inhibitòria i el laberint d'aigua de Morris

En l'assaig d'adquisició de la prova d'evitació inhibitòria, no hi va haver cap diferència en la latència pas a pas entre cap dels grups de tractament (dades no mostrades). Tanmateix, es va observar una reducció significativa de la latència pas a pas en l'assaig de retenció en els grups amb infusió A 1-42-en comparació amb el grup infusió amb vehicle (P <0.0{{12). }}1). L'extracte CT (100, 200 mg kg) o donepezil (0, 75 mg / kg) van augmentar la latència pas a pas de l'assaig de retenció en rates infusionades A 1-42- (P <0, 001) (Figura 3 (A)).

El rendiment espacial durant vuit assaigs de quatre dies d'entrenament (des del dia 10 fins al dia 13 després de la infusió A 1-42), particularment els assaigs 3 ~ 7, al grup A 1-42-infusió va ser significativament deteriorada en comparació amb la del grup amb infusió de vehicles (P <{{10}}.01). L'extracte de TC (200 mg/kg) o donepezil (0,75 mg/kg) després de la infusió d'A 1-42 va millorar el deteriorament del rendiment espacial causat per la infusió d'A 1-42 (P <0,05, P <0,01) (figura 3 (B)).

En comparació amb el grup amb infusió de vehicles, el grup 1-42-infusió va mostrar una disminució significativa del temps passat al quadrant de la plataforma durant l'entrenament (P <0.001). ). Totes les dosis d'extracte de CT i donepezil (0, 75 mg/kg) van augmentar significativament el temps passat al quadrant de la plataforma en relació amb el grup A 1-42- infusió (P <0, 001) (Figura 3 (C) ). En la velocitat de natació, no hi va haver diferències entre el grup infusió amb vehicle, el grup A 1-42- o els grups de tractament amb extracte de CT o donepezil (P > 0, 05) (Figura 3 (D)).

Efectes de TC o donepezil sobre la deposició A 1-42

La deposició de proteïna amiloide al cervell de rates infusionades amb A {{{0}} va ser més que la de rates infusionades amb vehicles (figura 4 (A) i (B)). L'extracte de TC (10{{20}}, 2{00 mg/kg) o donepezil (0,75 mg/kg) van disminuir la deposició de proteïna amiloide al cervell d'A 1-42-rates infusionades (Figura 4 (C) - (E)). A la figura 4 (F) es mostren els efectes de l'extracte de TC o del donepezil sobre la proporció de deposició d'A 1-42 al cervell de rates amb infusió d'A 1-42-. En comparació amb el grup amb infusió de vehicles, el grup 1-42-infusió va mostrar una proporció significativament més gran de deposició A 1-42 al cervell (P <0, 01). L'extracte de TC (100, 200 mg/kg) o el donepezil (0,75 mg/kg) van disminuir la proporció de deposició d'A 1-42 al cervell de rates infusionades d'A 1-42- (P < 0, 05, P < 0, 01) .

Efectes de TC o donepezil sobre els neurotransmissors cerebrals i els seus metabòlits

Una infusió contínua de {{{0}} va disminuir els nivells d'acetilcolina corticals i hipocampals (P < 0.05 per a l'escorça, P < 0.001. per a l'hipocamp), però només va disminuir els nivells de colina de l'hipocamp (P <0, 01). L'extracte CT (200 mg/kg) o el donepezil (0,75 mg/kg) van revertir aquesta disminució dels nivells d'acetilcolina corticals i hipocampals en rates infusionades amb A 1-42- (P <0,05) (taula 1).

La infusió contínua d'A {{0}} va disminuir els nivells de DA cortical i de l'hipocamp (P <0.01), però només va disminuir els nivells de NE de l'hipocamp (P <{{1{{ 13}}}}.05). L'extracte de TC (100 i 200 mg/kg) només va revertir la disminució dels nivells de DA a l'hipocamp de rates infusionades amb A 1-42- (P <0, 05). Donepezil no va alterar la disminució dels nivells de DA de l'hipocamp (P > 0, 05), però va exagerar la disminució dels nivells de NE de l'hipocamp en rates infusionades amb A 1-42- (P < 0, 01) (taula 1).

Efectes de TC o donepezil sobre l'activitat de l'AChE cerebral, la MAO-A i la MAO-B

La infusió contínua d'A {{0}} va augmentar les activitats AChE corticals i hipocampals (P <0.{05 per a l'hipocamp, P <0.0 1 per a còrtex). L'extracte de CT (200 mg/kg) o el donepezil (0,75 mg/kg) només van revertir l'augment de l'activitat d'AChE cortical en rates infusionades amb A 1-42- (P <0,05 per donepezil, P <0,01 per a TC) (Figura 5 ( A) i (B)).

La infusió contínua de A {{0}} va augmentar l'activitat cortical de MAO-A i MAO-B (figura 5 (C) i (E), P <0.05, P <0.01), però va disminuir les activitats MAO-A i MAO-B de l'hipocamp a les rates (figura 5 (D) i (F), P <0.05) . L'extracte de TC a 200 mg/kg només va revertir l'augment de l'activitat cortical de MAO-A en rates infusionades A 1-42- (figura 5 (C), P <0, 01). Donepezil (0, 75 mg/kg) no va canviar l'alteració de les activitats de MAO-A i MAO-B en rates infusionades A 1- 42- (Figura 5 (C) - (F), P > 0, 05).

Discussió

Molts informes d'assaigs de cultiu cel·lular i experiments amb animals van evidenciar que A és la proteïna clau en pacients amb AD [2,3]. A 1-42 va induir dany neuronal i apoptosi mitjançant estrès oxidatiu in vitro [2,3]. La injecció intracisternal d'A 1-42 a rates va produir un deteriorament de la memòria, canvis en la morfologia del cervell i degeneració neuronal colinèrgica [3,4]. En aquest estudi, la infusió contínua d'A 1-42 al ventricle cerebral mitjançant una bomba osmòtica (Alzet 2002) va provocar dèficits de comportament inclòs el comportament exploratori,

resposta d'evitació inhibitòria i rendiment espacial del laberint d'aigua de Morris en rates. Aquests símptomes eren similars als informes anteriors [3,4]. Donepezil, un inhibidor selectiu de l'AChE, té activitat neuroprotectora contra la toxicitat induïda per A in vitro i in vivo [19,20]. Les nostres dades actuals són coherents amb l'informe anterior [20] que mostra que el donepezil va millorar els dèficits de comportament causats per la infusió d'A 1-42 a rates. L'administració intragàstrica d'extracte de TC (100, 200 mg/kg) durant el període d'infusió A 1-42 va millorar els dèficits de comportament observats causats per A 1-42. Aquest efecte de millora de la memòria és coherent amb altres informes que mostren que els glucòsids feniletanoides totals de les espècies de Cistanche podrien protegir el deteriorament de la resposta d'evitació inhibitòria causada per la injecció intracisternal aguda d'A 25-35 en ratolins [6]. Informes clínics recents també van indicar que els pacients amb AD que van rebre glucòsids TC durant 48 setmanes no van mostrar cap exacerbació de la funció cognitiva [21]. A més, l'extracte CT a la dosi utilitzada (100, 200 mg/kg) contenia echinacòsid (25,4, 50,8 mg), acteòsid (3,8, 7,6 mg) i isoacteòsid (4,1, 8,2 mg) segons la quantitat realitzada en aquest estudi.Echinacòsid (50 mg/kg) i acteòsid(1 mg/kg) pot prevenir els problemes de memòria causats per l'escopolamina en ratolins [11,12]. Així, suggerim queLa TC és una planta potencial antiamnèsica i antidemènciaquan es quantifica i s'estandarditza mitjançant els seus glucòsids feniletanoides, en particular l'equinacòsid, l'acteòsid i l'isoacteòsid.

TUBULOSA NATURAL DE CISTANCHE PER A LA MALALTIA ANTIALZHEIMER PHGS75% ECH 30% ACT 12%

Segons la hipòtesi de la cascada amiloide, els dèficits de memòria causats per A es deuen a l'estrès oxidatiu intracel·lular i a l'apoptosi neuronal promoguda per la formació d'A i la posterior agregació i deposició [2,3]. Una deposició està estretament associada amb la disfunció dels circuits neuronals colinèrgics centrals al prosencèfal basal [2, 3]. La disfunció dels sistemes neuronals colinèrgics centrals, inclosa la disminució dels nivells d'acetilcolina cerebral i una regulació a l'alça de l'activitat d'AChE, està relacionada amb els graus d'amnèsia i la deposició d'A al cervell d'AD [2, 3]. Segons els nostres resultats anteriors, vam investigar més a fons els efectes de l'extracte de TC o donepezil sobre A -

canvis patològics induïts en rates. Vam trobar que la infusió contínua d'A 1-42 va provocar un canvi patològic important en la deposició d'A al voltant de l'hipocamp i l'escorça prefrontal i en una alteració bioquímica associada significativa: una disminució dels nivells d'acetilcolina i colina i una regulació positiva de l'activitat d'AChE, especialment en zones de l'hipocamp. Aquests símptomes patològics eren similars a altres informes [4,22] que mostraven que la injecció intracisternal d'A 1-42 durant 2 setmanes provoca la deposició d'A al cervell de rata mitjançant una taca immunohistoquímica i, a continuació, provoca una regulació positiva de l'activitat d'AChE dins i al voltant. plaques senils. Aquesta regulació afavoreix l'acoblament d'A en fibril·les, i aquestes fibril·les A, finalment, condueixen a la neurotoxicitat A i, en particular, a la disfunció colinèrgica [23]. En rates amb infusió d'A 1-42-, donepezil va disminuir la proporció de deposició d'A i l'alteració de l'activitat cortical d'AChE i va restaurar els nivells d'ACh a totes les àrees del cervell. Les nostres dades actuals eren coherents amb un altre informe [19,20] que mostra que el donepezil podria inhibir l'activació de l'AChE per produir efectes neuroprotectors i de millora de la memòria contra A 1-42. L'extracte CT (100, 200 mg/kg) també va disminuir la deposició d'A, especialment a les zones de l'hipocamp, però només la dosi de 200 mg/kg va revertir les alteracions en l'activitat cortical d'AChE i la disminució dels nivells d'acetilcolina cortical i hipocampal. A partir d'aquests resultats patològics i bioquímics, vam suggerir que l'extracte de TC a 200 mg/kg va invertir la funció colinèrgica cortical i hipocampal disminuint la deposició d'A. Altres informes van indicar que els glucòsids feniletanoides totals de l'espècie Cistanche o l'acteòsid podrien protegir els dèficits de memòria o el dany neuronal causat per A 25-35 mitjançant un mecanisme antioxidant i disminuint la proporció de Bax/Bcl2 in vivo o in vitro [6,24] . Un informe recent va indicar a més que l'acteòsid va inhibir l'agregació A 1-42 de manera dependent de la dosi mitjançant l'assaig de tioflavina-T [25].Echinacòsidva disminuir l'activitat d'AChE en ratolins SAMP/8 [12]. Per tant, suggerim que els efectes de millora de la memòria de l'extracte de TC podrien estar relacionats amb la disminució de la deposició d'A i la neurotoxicitat, la qual cosa condueix a una inversió dels canvis negatius en la funció colinèrgica cortical i de l'hipocamp.

Els investigadors clínics van trobar que els pacients amb AD tenen trastorns neuroquímics complexos, inclosos els sistemes neuronals catecolaminèrgics, colinèrgics i glutaminèrgics [26]. Alguns informes també van trobar que els pacients amb AD han augmentat l'activitat MAO-B en comparació amb els controls sans, i aquest augment de l'activitat MAO-B podria reflectir anomalies en els sistemes dopaminèrgics [27]. En models de rata semblant a AD, A 1-42 també causa disfunció catecolaminèrgica [14]. Alguns nootròpics o selegilina van millorar els dèficits de memòria induïts per A mitjançant la millora de l'activitat catecolaminèrgica o la modulació de les activitats de la MAO [4,28]. En aquest estudi, una infusió contínua 1-42 també va provocar una disminució dels nivells de DA cortical i hipocampal i dels nivells de NE de l'hipocamp. També vam trobar que la infusió contínua d'A 1-42 va provocar una alteració diferencial de les activitats de MAO corticals i hipocampals, que incloïa una regulació a l'alça de les activitats corticals MAO-A i MAO-B i una regulació a la baixa en MAO-A i MAO de l'hipocamp. -Activitats B. Aquests símptomes patològics de disfunció catecolaminèrgica eren similars a altres informes [14, 27]. Donepezil no va alterar aquests canvis catecolaminèrgics causats per la infusió A 1-42, però va disminuir els nivells de NE i MHPG a l'hipocamp en comparació amb les rates infusionades A 1-42-. Aquestes dades són coherents amb un altre informe [19,20] que mostra que el donepezil posseeix efectes de millora de la memòria contra A 1-42 que actuen principalment mitjançant els seus efectes inhibidors selectius de l'AChE, però possiblement provoca canvis específics de la regió en alguns neurotransmissors. L'extracte de TC només va revertir la disminució dels nivells de DA de l'hipocamp i la regulació a l'alça de l'activitat cortical de MAO-A causada per la infusió A 1-42. Per tant, suggerim que l'extracte de TC a 200 mg/kg va revertir els efectes negatius sobre la funció dopaminèrgica de l'hipocamp principalment disminuint la deposició d'A a les zones de l'hipocamp. Tanmateix, el donepezil també va disminuir la deposició d'A, però no va afectar la funció dopaminèrgica de l'hipocamp.

Conclusió

La TC és una planta potencial antiamnèsica i antidemència basada en les nostres dades actuals i altres informes [6-8,21]. El contingut d'echinacòsid i acteòsid en aquesta dosi utilitzada d'extracte de CT és suficient per produir efectes de millora de la memòria en ratolins SAMP/8 o amnèsia induïda per escopolamina [11,12]. Per tant, suggerim a més que, com a planta anti-demència, és important estandarditzar el rang de contingut d'echinacòsid, acteòsid i isoacteòsid en l'extracte de TC. A més, el mecanisme de millora de la memòria de l'extracte de TC, que és diferent del del donepezil, va disminuir la deposició d'A i la disfunció colinèrgica inhibint l'activació de l'AChE i activant els receptors nicotínics i les vies de la fosfoinosítid 3-quinasa/Akt [19,20] , es deu a la disminució de la deposició d'A i la reversió de la disfunció dopaminèrgica colinèrgica i hipocampal. A més, altres informes ho han indicatglucòsids feniletanoides totals de l'espècie Cistanchetenen efectes neuroprotectors i que milloren la memòria a través de les seves activitats antioxidants i neurotròfiques [9,29,30]. L'echinacòsid i l'acteòsid també tenen efectes neuroprotectors en la neurotoxicitat induïda per H2O2- MPTP o A 25-35- mitjançant activitats antioxidants i neurotròfiques [24,31,32]. Per tant, s'hauria d'investigar en el futur si l'efecte protector de l'extracte de CT en un model de rata semblant a l'AD actua mitjançant efectes anti-agregació, neuroprotectors o neurotròfics contra A.

TUBULOSA NATURAL DE CISTANCHE PER al tractament de la malaltia d'AlzheimerPHGS75% ECH 30% ACT 12%