Determinació simultània per HPLC d'agents blanquejants hidròfils en productes cosmètics
Mar 22, 2022
Contacte:joanna.jia@wecistanche.com/ WhatsApp: 008618081934791
Miaw-Ling Chang a, Chur-Min Chang b,*
Resum
Un mètode cromatogràfic líquid d'alt rendiment per quantificar quatre dels hidrofílics més utilitzatsblanqueigagent*/àcid glicòlic (GA), àcid ascòrbic (AA),arbutina(ART) i fosfat d'ascòrbil Mg (MAP), s'han desenvolupat. La separació isocràtica es va realitzar mitjançant una columna C18 amb l'agent de parell d'ions com a fase mòbil. Els analits es van detectar mitjançant l'absorció de llum ultraviolada a la longitud d'ona de 220 i 240 nm, respectivament. Es va trobar que les corbes de calibratge eren lineals a 8,0-36 mg/ml (GA), 10,0-300 mg/ml (AA i ART) i 5,6-451 mg/ml ( MAPA). El coeficient de correlació de l'anàlisi de regressió lineal va ser amb el rang 0.9974-0,9997. Les recuperacions dels quatre analits van ser entre el 94,8 i el 100,1% i la precisió d'aquest mètode va ser millor que la desviació estàndard relativa (RSD) del 6,9% (n=3). Es va trobar que l'AA es degradava en una solució aquosa. Per assegurar-se que l'AA era estable durant l'anàlisi HPLC, tots els analits es van dissoldre en aigua destil·lada i aquestes solucions es van purgar amb gas nitrogen per eliminar l'oxigen i es van emmagatzemar a 25 8C. Els resultats de les proves mostren que el procediment és el mètode ràpid, senzill i selectiu i és adequat per a anàlisis rutinàries de comercialscosmètics.# 2003 Elsevier BV Tots els drets reservats.
Paraules clau: Producte cosmètic; Agent blanquejador hidròfil; àcid glicòlic; Àcid ascòrbic; Arbutina; Mg fosfat d'ascòrbil; HPLC
Cistanche herbaés un agent blanquejador natural.
1. Introducció
Els occidentals consideren la pell bronzejada sana i bella. Per contra, la pell clara es considera bella als països orientals. Per tant, les locions blanquejadores són molt populars a l'oriental. S'apliquen per blanquejar la pell. El peeling químic s'acostuma a utilitzar en el tractament clínic de la pell facial danyada derivada de l'acne, melasma, berrugues comunes, etc. En aquesta tècnica,cosmèticaEls productes que contenen un agent quimioterapèutic s'apliquen a la pell per estimular la renovació de les cèl·lules de la pell. El color de la pell es torna més clar. Així, aquest agent quimioterapèutic també s'anomena ablanqueigagent [1-6]. S'ha informat que un agent blanquejador com l'àcid glicòlic (GA), un dels hidroxiàcids, augmenta la hidratació de la pell i, per tant, dóna un aspecte més suau, donant lloc a menys línies i arrugues facials [7,8]. Hi ha dos tipus d'agents blanquejants: agents blanquejants lipòfils i agents hidròfils. Exemples d'agents blanquejants lipòfils són l'àcid cògic, l'àcid salicílic, el palmitat d'ascorbil, l'àcid azelaic i l'adapalè. Exemples d'agents blanquejants hidròfils són l'àcid glicòlic (GA), l'àcid ascòrbic (AA),arbutina(ART), i fosfat ascòrbil de magnesi (MAP). Els agents blanquejants hidròfils s'estudien aquí perquè els seus grups polars tenen una poca afinitat amb la columna C18 utilitzada en HPLC i és difícil separar-los en HPLC. Hem utilitzat un mètode de parells d'ions per resoldre aquest problema.
Les estructures químiques i la màxima concentració d'aquests hidròfilsblanqueigEls agents es mostren a la taula 1. A Taiwan, no hi ha límit en la concentració de GA i AA utilitzats en productes cosmètics. ART, però, es pot utilitzar fins a 7 pes. per cent i MAP fins a 3 pes. Tot i que no hi ha límit a la concentració d'AG utilitzat en productes cosmètics, l'Administració d'Aliments i Medicaments dels EUA va informar que aquest agent blanquejador pot causar cremades greus o inflor de la pell [9]. En general, aproximadament 30-40 pes. el percentatge de GA s'utilitza en elcosmèticsper utilitzar-lo als salons de bellesa i una concentració més alta, 50-70pes. per cent, s'utilitza en els productes cosmètics per ser utilitzats pels metges [10].
L'objectiu d'aquest estudi és desenvolupar un mètode d'anàlisi quantitativa per mesurar amb precisió el nivell d'agents blanquejants en productes cosmètics. Aquest treball és de gran importància per a la seguretat ciutadana. Tot i que hi ha moltes publicacions que descriuen l'estimació dels blanquejadors en formulacions cosmètiques [11-16], els mètodes d'anàlisi simultàniament quantitatius encara no s'han informat a la literatura. Aquest estudi està relacionat amb un mètode analític, que candetec i simultàniament quantifica l'hidrofílicblanqueigagents.
El hidròfilblanqueigEls agents no sempre són estables en una solució aquosa. Estan sotmesos a oxidació. Tot i que s'havien informat diversos estudis sobre l'estabilitat de l'AA [17-19], l'entorn de l'AA en aquests informes no és adequat per a l'HPLC per a la determinació simultània dels blanquejadors hidròfils. És important assegurar-se que els blanquejadors hidròfils són estables durant l'anàlisi per a la precisió dels resultats.
2. Experimental
2.1. Reactius i estàndards
GA, AA, ART i MAP i el comercial es van comprar a Alfa Co. (americà), AlfaCo. (americà), Wako (japonès) i Lipo. Co. (americà), respectivament. El metilparaben i l'U-13 s'obtenen d'Induchem. Co. (Suïssa). L'àcid cítric, l'hidròxid de tetrabutilamoni (TBAH), el sorbitol, l'àcid fosfòric i el dihirofosfat de potassi es van comprar a AldrichCo. (americà). Tots els productes químics eren de grau de reactiu analític. ComercialcosmèticaEls productes, de diversos fabricants, es van comprar a botigues minoristes i a una farmàcia local. Els dissolvents i l'aigua es van filtrar a través d'una membrana de 0,45 mm i es van desgasificar.
2.2. Instrumentació
L'aparell HPLC (Hitachi Co., Japó) consistia en un sistema cromatogràfic modular. Al qual una bomba (Model I-7100), un detector UV (Model I{-7420; longitud d'ona variable) i una vàlvula d'injecció es va adjuntar un bucle de mostra de 25 ml (Model7725, Rheodyne, Cotati, EUA). L'adquisició i el processament de dades es van realitzar amb un ordinador personal mitjançant el programari SISC (Taiwan). Les injeccions de mostres es van realitzar amb una xeringa de 25 ml (Hamilton, Suïssa). S'ha utilitzat una columna Mightysil RP-18GP d'acer inoxidable de 5 mm, 250 mm /4,60 mm.
2.3. Condicions cromatogràfiques
L'anàlisi cromatogràfica es va realitzar amb un mètode de fase inversa isocràtica d'una sola columna. En el mètode d'aparellament d'ions, la fase mòbil era una0.{{10}}solució tampó de dihidrofosfat de potassi 05 M que inclou tres substàncies químiques: TBAH, metanol i àcid fosfòric. La quantitat d'aquests tres productes químics té un gran efecte en la separació i la resolució de l'espectre de l'HPLC. La concentració de TBAH va variar d'1 a 10 mM; metanol d'1 a 10 vol. per cent. Es va afegir una quantitat variada d'àcid fosfòric a la solució tampó per ajustar els valors de pH de 2,5 a 5,0. Els resultats de les proves permetran escollir una fase mòbil adequada per a una bona resolució. Totes les fases mòbils es van filtrar a través d'un Milliporefilter, mida de porus de 0,45 mm, i es van desgasificar per sonicació abans de ser utilitzades. Es va utilitzar un cabal d'1,1 ml/min. Els analits es van detectar per absorció UV a 220 o a 240 nm. La identitat dels quatre ingredients es va assignar per cromatografia amb estàndards autèntics. La quantificació es va dur a terme mitjançant la integració del pic mitjançant el mètode d'estandardització externa.
avantatges de cistanchedeblanquejar la pell eficaç
2.4. Corba de calibratge
Es van preparar solucions d'emmagatzematge ponderant amb precisió els agents i després dissolent-los a l'aigua. Cinc solucions de treball dels quatre analits es van preparar recentment a partir de les seves solucions stock en una proporció de {{0}} amb aigua destil·lada. La dilució adequada d'aquestes solucions de treball va donar concentracions de 10/300 mg/ml, excepte per a GA i MAP, on les concentracions eren de 8,0-36,0 mg/ml i 5,6/451 mg/ml, respectivament. Les corbes de calibratge es van construir traçant les àrees pics de cada component en funció de la concentració i van donar els valors del pendent, juntament amb el coeficient d'intercepció i correlació per a cada corba de calibratge. Les corbes de calibratge van ser per a la quantificació dels quatreblanqueigagents en quatre mostres de comercialscosmètics.
2.5. Estudi de recuperació
Una mostra de crema que conté númblanqueigEls agents es van utilitzar com a control en l'estudi de recuperació. La quantitat variada dels quatre agents blanquejants hidròfils, GA, AA, ART i MAP, es va afegir a aquesta crema de control. La concentració es va indicar a la Taula 4. Es va pesar aproximadament 1 g de cada una de les mostres preparades en un matràs de vidre i es van afegir 30 ml d'aigua destil·lada i després es va submergir el matràs en un bany d'ultrasons durant 15 minuts termostat a 25 8C. La solució resultant es va portar a un volum de 100 ml amb aigua destil·lada i després es va filtrar i desoxigenar amb N2 durant uns 3 min i després es va tancar amb un tap de rosca de baquelita i un anell de silicona.
3. Resultats i discussió
3.1. Cromatografia i resolució
L'estructura de quatreblanqueigagents, GA,AA, ART i MAP, es mostra a la taula 1. Tots ells són molècules molt polars. Per als analits polars, el metanol o l'acetonitril s'acostumen a utilitzar com a component de la fase mòbil a la columna C18 o a la columna de cianopropil de HPLC. Tanmateix, la coelució d'aquests analits polars es va trobar quan es va utilitzar metanol o acetonitril. Per tant, és impossible separar aquests analits. Per resoldre aquest problema de la coelució, es va utilitzar el mètode d'aparellament d'ions per reduir el seu caràcter polar per obtenir un temps de retenció acceptat. A més, és important trobar una condició de separació adequada per a l'anàlisi simultània de quatre analitscosmèticaproductes. Per tal d'obtenir les condicions òptimes analítiques, aquí es considera la influència de la fase mòbil i els seus valors de pH. Els resultats obtinguts es mostren a la figura 1. La concentració de TBAH en la fase mòbil es va variar d'1 a 10 mM. El factor de capacitat calculat disminueix a mesura que augmenta la concentració del TBAH (vegeu la figura 1 (a)). Aquesta caiguda dels valors del factor de capacitat és forta per a MAP, però molt lleu per a GA, ART i AA. La diferència significativa del factor de capacitat entre MAP i els altres pot ser deguda al fort caràcter iònic de MAP. Una diferència més petita en el factor de capacitat proporciona un temps de retenció raonable en HPLC. Per tant, es va triar que la concentració de TBAH fos de 10 mM per a la fase mòbil. L'efecte de la quantitat de metanol sobre el factor de capacitat es va mostrar a la figura 1 (b). Es van trobar resultats similars als de TBAH. Una concentració més alta de metanol, una diferència menor en el factor de capacitat i un temps de retenció més curt en HPLC. En aquest cas, es va triar el deu per cent de metanol en volum.
Es va afegir una quantitat variada d'àcid fosfòric a la solució tampó esmentada anteriorment per alterar els valors de pH de 2,5 a 5.0. A un valor de pH de 5.0, es van observar pics amplis i múltiples als resultats del cromatògraf. Els pics del cromatògraf per a GA, AA i ART es superposen entre si. A diferència dels resultats anteriors, el factor de capacitat augmenta amb l'augment dels valors de pH per a MAP (vegeu a la figura 1 (c)). El canvi en el factor de capacitat a causa dels valors de pH és molt petit per a GA, AA i ART. És fonamental escollir un valor de pH que doni prou diferències en els valors del factor de capacitat per a una bona resolució a l'HPLC. Per aquests motius, es va triar un valor de pH igual a 2,5. Com a resultat, una fase mòbil adequada per a l'anàlisi HPLC és una solució tampó de dihidrofosfat de potassi 0,005 M que conté 10 mM de TBAH, 10 vol. percentatge de metanol i àcid fosfòric. L'àcid fosfòric es va utilitzar per ajustar el valor de pH de la solució tampó a 2,5.
3.2. Determinació de la longitud d'ona per al detector UV
L'espectre UV d'aquestsblanqueigEls agents dissolts en la fase mòbil es van obtenir mitjançant un espectrofotòmetre UV. El pic d'absorció màxim es troba a 220 nm per a GA, a 243 nm per a AA, a 227 nm per a ART i a 238 nm per a MAP. A 240 nm, el detector UV té una alta sensibilitat per detectar AA i MAP, però una sensibilitat molt baixa per a GA. i ART (vegeu la figura 2 (b)). Mentre que a 220 nm, es van mostrar pics clars al cromatògraf HPLC per a tots els quatre agents blanquejants (vegeu la figura 2 (a)). Per obtenir una millor sensibilitat per a tots els analits, la longitud d'ona del detector es va ajustar a 220 nm per a la detecció i quantificació de quatre analits. El procediment és relativament ràpid amb un temps d'execució analític de 12,1 min a temperatura ambient (al voltant de 26 8C).
3.3. Estudi d'estabilitat d'agents blanquejants
L'AA es descompone en àcid deshidroascòrbic (DHA) quan es dissol en una aigua. Per tant, és important mantenir l'àcid ascòbic estable durant l'anàlisi per a la precisió dels resultats. Fernandes et al. va informar que els principals factors que afecten la degradació són l'oxigen i la temperatura [19]. En el seu estudi, la degradació va ser significativa en 1 h, i l'efecte dels valors de pH de la solució sobre la degradació només es va esmentar a pH 5.0 i 5.6. En el nostre estudi, l'estabilitat de l'AA es va avaluar utilitzant el canvi de concentració de AA en diferents condicions ambientals, com ara solució tractada o no tractada amb N2, valor de pH i temperatura. Com més llarg sigui el temps per a un canvi significatiu, més estable és l'ascòrbic.
Els resultats, resumits a la taula 3, demostren una forta correlació entre l'estabilitat i la solució tractada o no tractada amb N2. La pèrdua de solució AA no tractada és més ràpida que la solució tractada. Tal com es mostra a la Taula 3, a 10 8C i pH2, el temps necessari per a la degradació de l'10 per cent de l'AA va ser d'unes 10 hores sense tractament i d'unes 48 hores per a la solució tractada. Això pot ser degut al fet que hi ha molt menys oxigen disponible per a l'oxidació. S'observa que, en presència d'oxigen i a 25 8C, es va observar el nivell d'AA de 8,7 i 71,2 per cent després de 10 h per a pH 6,9 i 2,0. Aquest resultat es pot explicar per la major quantitat d'AA dissociat a pH 6,9 i aquesta forma hauria de ser menys estable que la forma no dissociada [19]. Per contra, en absència d'oxigen i a 25 o 10 8C, la solució aquosa d'AA és molt més estable a pH 6,9. El motiu pel qual l'AA és més estable encara no s'ha investigat més. En relació amb la temperatura de la solució, en solucions no tractades, l'AA és menys estable a una temperatura més alta (25 8C) que a una temperatura més baixa (10 8C). Tanmateix, per a les solucions tractades, la solució aquosa d'AA és estable i no es va veure afectat per la temperatura.
3.4. Validació de linealitat i assaig de precisió
Utilitzant les condicions cromatogràfiques descrites, es va aconseguir una resolució raonable entre aquests analits i els altres compostos delcosmèticaproducte. El mètode es va validar per linealitat i precisió. Es va aplicar l'ajust de corba lineal per calcular les corbes de calibratge per a cadascunablanqueigagent. Els resultats es mostren a la taula 4. Es va obtenir una excel·lent linealitat en l'interval de 5,6 a 451 mg/ml per a tots els estàndards, excepte per a la GA, per a la qual el rang va ser de 8 a 36 mg/ml. El coeficient de correlació oscil·la entre 0 De .9974 a 0.9997. La precisió del mètode es va calcular com la desviació estàndard relativa (RSD, n{{10}}) dels assaigs que contenien els blanquejadors de quatre hidròfils en el mateix rang de concentració. Es va trobar que el rang RSD era del 0,3 al 6,43 per cent.
3.5. Recuperació
Una crema que conté númblanqueiges van utilitzar agents com a control en l'estudi de recuperació. Es van afegir petites quantitats dels quatre agents blanquejants a aquesta crema de control. La cromatografia HPLC mostra que no s'ha detectat cap pic d'absorció UV per a una crema de control (vegeu la figura 3 (a)) i es van trobar quatre pics d'absorció per a una crema de mostra que conté aquests quatre agents blanquejants. A la fig. 3 (b), el pic 1 és el pic d'absorció d'UV per GA; pic 2 per a AA; pic 3 per a ART; pic 4 forMAP. Cada agent blanquejador té el seu propi temps de retenció. Aquest caràcter s'utilitzarà per identificar aquests agents blanquejants més endavant. Els resultats es resumeixen a la taula 2. Es va obtenir un interval de 94-100 percentatge de recuperació per als quatre agents tant a concentracions baixes com altes. Els coeficients de variància calculats a partir de tres rèpliques eren tots inferiors al 6,9 per cent. Els cromatogrames HPLC de quatre analits extrets de la formulació experimental es van mostrar a la figura 3 i no es va observar cap interferència.
planta de cistanchetéanti edat, antioxidant, iefectes per a la cura de la pell
3.6. Aplicació
Quatre disponibles comercialmentcosmèticaS'han analitzat els productes. Ells sónblanqueigcrema (número cosmètic 1), gel blanquejador C20 (número cosmètic 2), loció d'essència (número cosmètic 3) i loció per a la pell (número cosmètic 4), respectivament. Aquests cosmètics es van analitzar mitjançant el procediment descrit en aquest estudi. Els cromatògrafs d'aquests quatre cosmètics es mostren a la figura 4 (a/d). El cromatògraf 4 (a) dóna un petit pic d'absorció del pic 4, és a dir, el cosmètic número 1 conté MAP. El cromatògraf 4 (b) mostra un pic del pic 2, que és una indicació que el cosmètic número 2 conté AA. A partir del cromatògraf 4 (c) i (d), ART es va identificar al cosmètic número 3 i tant GA com AA es van identificar al cosmètic número 4. Hi ha un cromatògraf de pic no marcat 4 (d). Aquest pic d'absorció UV té un temps de retenció més llarg que el pic 3, però molt més curt que el pic 4. És evident que aquest pic d'absorció no marcat no es deu als agents blanquejants sinó a altres ingredients incosmètics número 4. La quantificació d'aquests agents blanquejants es va dur a terme pel integració dels pics en la cromatografia mitjançant el mètode d'estandardització externa. El nivell dels agents blanquejants en aquests quatrecosmèticses mostra a la Taula 5. S'observa que els resultats obtinguts confirmen l'exactitud i mostren el compliment de l'afirmació etiquetada.
4. Conclusió
El test HPLC desenvolupat és senzill i ràpid per a l'anàlisi simultània de l'hidrofílicblanqueigagents. Es va utilitzar un factor de capacitat per triar una fase mòbil adequada per a HPLC. Hem de triar una condició que doni una diferència menor en el factor de capacitat per a un temps de retenció raonable. És essencial que la condició escollida doni prou diferències en els valors del factor de capacitat per a una bona resolució en el cromatògraf de HPLC. Com a resultat, una fase mòbil adequada per a l'anàlisi HPLC és una solució tampó de dihidrofosfat de potassi de 0,005 Mpotassi que conté TBAH 10 mM, 10 vol. percentatge de metanol i àcid fosfòric. L'àcid fosfòric es va utilitzar per ajustar el valor de pH de la solució tampó a 2,5. Millor longitud d'ona de detecció per alblanqueigagents està a 220 nm per a l'HPLC. A més, s'ha obtingut un mètode convenient per estabilitzar AA en el procediment analític. La qual cosa és important per a la precisió dels resultats.
cistanche tubulosarodanxes
