SLC37A2, una molècula relacionada amb el fòsfor augmenta en cèl·lules musculars llises a l'aorta calcificada Ⅱ

Resultats

Cerca de molècules candidates acalcificat induït per fosfatsAoSMC. Per cercar molècules l'expressió de les quals augmenta en AoSMC calcificat, es va realitzar una anàlisi de microarrays d'ADN d'uns 26,000 gens mitjançant AoSMC calcificat i ARNm AoSMC no calcificat. La figura 1 mostra el HeatMap de diferents gens expressats entre AoSMC no cultivats amb 2,6 mM i els cultivats amb 2,6 mM P durant 12 dies. Un total de 3.066 gens van augmentar més del doble en AoSMC cultivat i no cultivat. Els gens amb una expressió augmentada eren molècules relacionades amb la formació d'osteoblasts com l'osteopontina, el factor específic de l'osteoblast de periostina (POSTN), Wnt3, la interleucina-6 (IL-6) ifactor de creixement dels fibroblasts23 (FGF23), així com diverses molècules de la superfamília SLC (taula 1). Entre aquestes molècules, ens vam centrar en SLC37A2 per al qual l'ARNm va augmentar unes 3,1 vegades en AoSMC cultivat amb 2,6 mM P durant 12 dies en comparació amb AoSMCno cultivat amb 2,6 mM P. S'ha informat que SLC37A2 està relacionat amb la regulació de P, però la seva funció detallada és un efecte desconegut. d'inflamació en l'expressió de SLC37A2.Calcificació vasculars'ha informat que està promogut per la inflamació, de manera que vam examinar si l'ARNm de SLC37A2 es veu afectat per la resposta inflamatòria. A les 24 hores després del tractament amb LPS, IL-6 va augmentar significativament en comparació amb l'AoSMC no tractat amb LPS (Fig. 2A). Aquests resultats també es van veure 72 h després del tractament amb LPS. No hi va haver diferències significatives entre els grups en l'expressió de l'ARNm SLC37A2 (Fig. 2B).

FEU CLIC AQUÍ PER OBTENIR EXTRACTE DE CISTANX ORGÀNIC NATURAL AMB 25% ECHINACOSIDE I 9% ACTEOSIDE PER A LA FUNCIÓ RENOLÓ

Servei de suport de Wecistanche: el major exportador de cistanche a la Xina:

Correu electrònic:wallence.suen@wecistanche.com

WhatsApp/Tel:+86 15292862950}

Compreu per obtenir més detalls de les especificacions:

https://www.xjcistanche.com/cistanche-shop

Expressió de SLC37A2 en AoSMC calcificat induït per fosfat. Per determinar si SLC37A2 està implicat en la calcificació, es va examinar l'expressió de l'ARNm de SLC37A2 en AoSMC no calcificat i calcificat (Fig.3). Es va observar calcificació en AoSMC cultivada amb 2,6 mM de P durant 6 dies, i es va observar una calcificació més avançada en AoSMC cultivada amb 2,6 mM de P durant 12 dies (Fig. 3A). L'ARNm de Runx2 va augmentar significativament en AoSMC calcificat en comparació amb AoSMC no calcificat (Fig. 3B). L'ARNm SLC37A2 va començar a augmentar significativament el dia 3 en AoSMC calcificat, i el dia 9, AoSMC calcificat va augmentar significativament aproximadament dues vegades en comparació amb AoSMC no calcificat (Fig. . 3C). L'expressió de la proteïna SLC37A2 va augmentar significativament aproximadament dues vegades el dia 6 en AoSMC calcificat en comparació amb AoSMC no calcificat (Fig. 3D).

Expressió de SLC37A2 en rates model CKD.

Per revelar si SLC37A2 està implicat en la calcificació vascular in vivo, vam examinar l'expressió d'ARNm de SLC37A2 en vasos de rates CKD induïdes per adenina. Les rates CKD induïdes per adenina es van crear segons el protocol que es mostra a la figura 4A. La taula 2 mostra el pes corporal i les dades bioquímiques el dia del sacrifici. El pes corporal deERC induïda per adeninarates va ser significativament menor en comparació amb les rates no CKD. En comparació amb el grup sense ERC, els grups amb ERC tenien nivells plasmàtics de P i Cr més alts, i Calevels plasmàtics més baixos i excreció urinària de 24-hora de P, Ca i Cr. A més, aquests resultats van ser més destacats en el grup CKD-HP, com s'ha vist en estudis anteriors.37,39) Així, la funció renal va disminuir en el grup CKD, especialment en el grup CKD-HP. Es va examinar l'expressió d'ARNm als vasos aòrtics de rates CKD (Fig. 4). Tot i que no hi va haver diferències significatives en l'expressió de l'ARNm de Runx2, un factor de transcripció que es mou a principis del mecanisme de calcificació vascular, l'expressió d'ARNm d'osteopontina entre grups (Fig. 4B) va augmentar significativament en un grup de CKD-HP en comparació amb el grup no grup CKD i elGrup CKD-LP(Fig. 4C). L'expressió d'ARNm de SLC37A2 també va augmentar significativament en el grup CK D-HP en comparació amb el grup no CKD i el grup CKD-LP (Fig. 4D). Com que hi havia grans diferències individuals en aquestes rates, vam examinar la correlació entre l'osteopontina i l'ARNm de SLC37A2 i vam trobar una correlació significativa entre aquestes molècules (figura 4E). L'examen histològic de l'aorta toracoabdominal va revelar una calcificació medial només a l'aorta del grup CKD-HP (Fig. 5A). Per examinar el lloc d'expressió de SLC37A2 a l'aorta, vam realitzar una immunotinció de l'aorta de CKD-HPrats. SLC37A2 es va expressar fortament a la zona oncalcificació vasculares va produir (Fig. 5B).

Fig. 1. El HeatMap de gens expressats de manera diferent entre AoSMCno cultivat amb 2,6 mM P i AoSMC cultivat amb 2,6 mM P. El vermell representa gens amb un nivell de senyal alt, i el verd representa gens amb un nivell de senyal baix. AOSMC cèl·lules musculars llises aòrtiques. Vegeu la figura a la versió en línia.

Discussió

Hem investigat les molècules candidates relacionades amb P implicades en la calcificació vascular. Els nostres resultats van demostrar que SLC37A2 és una de les molècules que augmenta ambcalcificació vascularin vitro i in vivo.

La família SLC37 pertany a la superfamília SLC i inclou proteïnes: SLC37A 1-440) La família SLC37 conté proteïnes transmembrana a la membrana del reticle endoplasmàtic i té una seqüència homòloga a l'antiporter d'organofosfatofosfat bacterià.(41) SLC37A4 és més conegut com eltransportador de glucosa6-fosfat.(2-44 Tanmateix, hi ha pocs informes sobre SLC37A2 i els detalls sobre la seva funció no s'entenen del tot. SLC37A2, també conegut com SPX2, s'expressa abundantment en macròfags murins, melsa, tim i teixit adipós blanc (WAT). ) de models de ratolí genèticament obesos i cèl·lules semblants als osteoclasts derivades de cèl·lules Raw264.7.(45.6) La proteïna SLC37A2 transporta tant els intercanvis de glucosa-6-fosfat/fosfat com de fosfat/fosfat.(4) Recentment, els informes han demostrat una associació de SLC37A2 amb malaltia animal. (47-49) Un defecte SLC37A2 provocaosteopatia craniomandibular(CMO), una malaltia òssia proliferativa autolimitada, en races terrier. (47) En el bestiar lleter, una mutació homozigota SLC37A2 és responsable de la mort embrionària. (8,9) A més. SLC37A2 s'ha considerat un objectiu per als gens diana de la vitamina D. (per tant) també s'ha considerat el potencial del gen objectiu del receptor de progesterona fosfor-Ser294 en la progressió del càncer de mama (1) S'ha informat que la inflamació pot provocar i agreujar la calcificació vascular. (2s26) A més. SLC37A2 s'expressa abundantment en macròfags i WAT que es veuen afectats per la infiltració de macròfags. (s) Per tant. vam considerar que SLC37A2 podria ser una molècula expressada durant la inflamació. Tanmateix, les nostres troballes no van mostrar cap augment de l'expressió de SLC37A2 en AoSMC exposada a una resposta inflamatòria, aquesta molècula no sembla estar afectada directament per l'estimulació inflamatòria. SLC37A2 pot estar implicat en la calcificació vascular mitjançant un mecanisme diferent de la inflamació.

S'ha informat que SLC37A2 actua com un P-enllaçatAnti-Porter. (41) A més, es va informar que SLC37A2 era un gen objectiu per a la vitamina D, i el gen SLC37A2 conté un important lloc d'unió al receptor de vitamina Dreceptor (ss2) Els canvis correlacionats sistemàticament en l'expressió dels gens SLC37A2 i les formes circulants de vitamina D. s'ha vist en cèl·lules mononuclears de sang perifèrica humana. (50) Els receptors de la vitamina D s'uneixen a 1a, 25-dihidroxi vitamina D, que és un metabòlit de la vitamina D, i regulen l'expressió gènica. la 25dihidroxivitamina D, funciona en l'absorció de Ca i P a l'intestí, la mobilització de Ca a l'os i la reabsorció de Caïn als ronyons. (3) Hi ha un informe que en rates model d'ERC induïda per adenina, la sèrum la, 25-dihidroxi vitamina D, era significativament més alta en rates amb una ingesta de dieta alta en p, amb calcificació vascular avançada, en comparació amb les rates de baix nivell. -p ingesta de dieta.39) SLC37A2 pot estar relacionat amb la regulació de P a través de la vitamina D. Es necessiten més estudis per aclarir que la vitamina D afecta l'expressió de SLC37A2 in vitro i Vivo.

S'ha demostrat que el mecanisme de la calcificació vascular és similar al de la formació òssia. La deficiència de SLC37A2 causada per CMO és clínicament comparable a la hiperostosi cortical infantil humana, també coneguda com a malaltia de Caffey.7 A més, hi ha informes que SLC37A2 s'expressa en la medul·la òssia i els osteoclasts.o Hytone et al.(7 van plantejar la hipòtesi que una disfunció de SLC37A2 provocaria un desequilibri en la funció de la formació d'os osteoblàstica i osteoclàstica i, com a resultat, conduiria a la hiperostosi.

Runx2 és un factor de transcripció essencial per a la calcificació vascular. També s'informa que Runx2 és un factor de transcripció de diferenciació d'osteoblasts expressat en cèl·lules epitelials de mama en desenvolupament. (s435) Runx2 sembla ser necessari per a la regulació dels gens objectiu de la progesterona fosfor-Ser294, que estan associats amb la progressió del càncer de mama. SLC37A2 es considera un gen objectiu del receptor de progesterona fosfor-Ser294 candidat. (s1) Per tant, es considera que Runx2 pot regular SLC37A2En el present estudi, l'expressió de l'ARNm de SLC37A2 a l'aorta de rates CkD es va correlacionar amb l'ARNm d'osteopontina, que s'adreça al gen de Runx2.