Leucèmia granulocítica espontània en un ratolí NOD/Shi-scid IL-2R nul

Resum:Aquí, informem d'un cas de leucèmia granulocítica espontània en un mascle NOD/Shi-{0}}d'una setmana d'edat.scidIL-2R ratolí nul (NOG). El ratolí va mostraranèmia progressivaimoviment respiratori brusc. Macroscòpicament, la melsa es va decolorar i es va engrandir. Histològicament, la medul·la òssia dell'estèrnumi el fèmur era altament cel·lular i gairebé exclusivament ple decèl·lules neoplàsiques. Els nuclis de les cèl·lules neoplàsiques eren grans, de forma ovalada a lleugerament irregular, i un petit nombre de cèl·lules tenienronyó- o nuclis en forma d'anell.Cèl·lules neoplàstiqueses va infiltrar àmpliament en els òrgans, i la melsa i el fetge estaven afectats de manera destacada. Immunohistoquímicament, una gran població de cèl·lules neoplàstiques a la polpa vermella de la melsa i el sinusoide del fetge va ser positiva per amieloperoxidasa. A partir de les característiques histològiques, es va diagnosticar aquest casleucèmia granulocítica. Aquesta nova informació sobretumors espontanispot ser útil per a l'ús adequat d'aquesta soca de ratolí en investigacions posteriors. (DOI: 10.1293/tox.2020-0092; J Toxicol Pathol 2021; 34: 241–244)

Paraules clau: leucèmia granulocítica, ratolí NOG, tumor espontani

FEU CLIC AQUÍ PER OBTENIR EXTRACTE DE CISTANX ORGÀNIC NATURAL AMB 25% ECHINACOSIDE I 9% ACTEOSIDE PER A LA FUNCIÓ RENOLÓ

Servei de suport de Wecistanche: el major exportador de cistanche a la Xina:

Correu electrònic:wallence.suen@wecistanche.com

Whatsapp/Tel:+86 15292862950

Compreu per obtenir més detalls de les especificacions:

https://www.xjcistanche.com/cistanche-shop

Leucèmia granulocítica espontàniapoques vegades s'informa en diverses soques de ratolins, tot i que els agents químics i la radiació ionitzant poden augmentar la incidència en algunes soques de ratolí1, 2. Els ratolins NOD/Shi-scid IL-2R nul (NOG) són greus.animals immunodeficients, i presenten defectes en cèl·lules T-, B- i assassines naturals, i macròfags i cèl·lules dendrítiques que funcionen malament per l'eliminació de la cadena del receptor IL-2 (IL2R c) a la soca NOD-scid3. Aquesta soca de ratolí s'utilitza per a proves no clíniques, com ara la prova de tumorigenicitat, per avaluar la qualitat i la seguretat dels productes biològics per a la medicina regenerativa utilitzant cèl·lules/teixits d'origen humà, a causa de l'empelt notablement millor de cèl·lules xenogèniques4–6. Tot i que l'estat immunodeficient i les seves implicacions per als xenoempelts s'han estudiat bé, hi ha poca informació disponible sobre tumors espontanis que es produeixen en aquesta soca de ratolí, com el limfoma tímic,mamàriaglàndula adenoma/adenocarcinoma, carcinoma bronquioloalveolar, rabdomiosarcoma, i teratoma7. Aquí, informem d'un cas de leucèmia granulocítica en un ratolí NOG mascle de 51-setmanes.

L'animal es va obtenir d'In-Vivo Science Inc. (Kanagawa, Japó) a l'edat de 6 setmanes i es va mantenir sense tractar. L'animal es va allotjar individualment en una gàbia de plàstic amb un sistema de gàbia ventilada individualment (Maxi Miser Caging System; Oriental Giken Inc., Tòquio, Japó) dins d'una habitació de sistema de barrera controlada pel medi ambient, que es va mantenir a una temperatura de 22 ± 2 graus amb una humitat del 50 ± 20% i un cicle llum/foscor de 12-h. El ratolí es va alimentar amb una dieta en granulats autoclaus (CRF-1; Charles River Japan, Inc., Tòquio, Japó) amb aigua de l'aixeta autoclau i libitum. L'animal es va manipular segons el protocol aprovat pel Comitè Institucional de Cura i Ús d'Animals de CMIC Pharma Science Co., Ltd., que està acreditat per AAALAC International.

Aquest ratolí va mostrar signes clínics de debilitament, com ara anèmia, moviment respiratori brusc i reducció de pes corporal entre les 49 i les 51 setmanes d'edat. L'animal va ser sacrificat a les 51 setmanes d'edat. A la necròpsia, la melsa es va decolorar i es va engrandir. No es van observar troballes brutes anormals evidents als altres òrgans. El tim i els ganglis limfàtics eren atròfics, similars als dels ratolins NOG normals.

Tots els òrgans i mostres de teixit es van recollir de manera rutinària, es van fixar en formalina tamponada neutra al 10%, es van incrustar en parafina i es van seccionar a aproximadament 3 μm. Per al seu examen patològic, les seccions es van tenyir amb hematoxilina i eosina (HE). Es van tacar immunohistoquímicament seccions de la melsa i el fetge per a l'anticòs policlonal anti-mieloperoxidasa humana (MPO) de conill (Dako Japó, Tòquio, Japó) com a marcador de cèl·lules mieloides, anticòs monoclonal anti-CD3 humà de conill (Nichirei Biosciences Inc., Tòquio, Japó). ) com a marcador de cèl·lules T i anticossos monoclonals anti-Pax-5 de conill (Abcam Inc., Cambridge, Regne Unit) com a marcador de cèl·lules B8. Les seccions es van incubar amb els anticossos a temperatura ambient durant 1 h i la immunodetecció es va dur a terme mitjançant un Histofine® MOUSESTAIN KIT (Nichirei Biosciences Inc.) amb 3,3′-diaminobenzidina/H2O2 com a cromogen. Aleshores eren les seccions immunotingudescontratacat amb hematoxilina.

Histopatològicament, la medul·la òssia de l'estèrnum i el fèmur era altament cel·lular i gairebé exclusivament plena de cèl·lules neoplàsiques (Fig. 1A). El teixit gras es va desplaçar completament. Hi havia focus cel·lulars ocasionals que consistien en elements eritroides i megacariocítics a la medul·la, que es consideraven restes dehematopoesi normal. La majoria de les cèl·lules neoplàstiques mostraven un aspecte blàstic, caracteritzat per nuclis grans, ovals a lleugerament irregulars, i amb una cromatina reticular que contenia un o més nuclèols prominents. Hi havia un petit nombre de cèl·lules amb nuclis en forma de ronyó o anell i algunes cèl·lules amb nuclis lobulats també estaven presents (Fig. 1B). Els grànuls del citoplasma de les cèl·lules neoplàstiques no eren evidents a les seccions tacades amb HE. Es van trobar nombroses figures mitòtiques a la medul·la, i també es van observar cossos apoptòtics ocasionals. Les cèl·lules neoplàsiques van envair notablement el periosti i el múscul esquelètic circumdant. Hi va haver una àmplia infiltració de cèl·lules neoplàsiques en altres òrgans i teixits, i la melsa i el fetge estaven implicats de manera destacada. A la melsa, es van observar cèl·lules neoplàsiques a tota la polpa vermella (Fig. 2). La infiltració capsular de cèl·lules neoplàsiques era evident. Es van observar algunes sèries eritroides i megacariocits en desenvolupament. De tant en tant es van observar megacariocits que contenien una o algunes cèl·lules mieloides al citoplasma, cosa que suggereix emperipolesi. Al fetge, les cèl·lules neoplàsiques es van infiltrar de manera difusa a la càpsula de Glisson i als sinusoides hepàtics (Fig. 3). Les cèl·lules neoplàstiques amb nuclis en forma de ronyó o anell també eren evidents en alguns vasos sanguinis. Alguns hepatòcits de la zona periportal, amb una infiltració de cèl·lules neoplàstiques destacades, van mostrar degeneració o necrosi, mentre que l'estructura normal del lòbul hepàtic es va mantenir intacta. També es va trobar infiltració de cèl·lules neoplàstiques en altres òrgans, com ara la paret alveolar i la regió perivascular del pulmó, interestadi al ronyó, sinusoides a les glàndules suprarenals i mucosa i submucosa del tracte gàstric (estómac i intestí). Immunohistoquímicament, una gran població de cèl·lules neoplàsiques a la polpa vermella de la melsa (Fig. 4) i el sinusoide del fetge va ser positiva per a MPO. No es van detectar cèl·lules positives CD3 i Pax-5. Els resultats de la immunotinció amb CD3 i Pax-5 eren similars als de la melsa de ratolins NOG normals, que eren histològicament hipoplàstics i no mostraven cèl·lules positives CD3 o Pax-5.

La investigació immunohistoquímica va revelar que les cèl·lules neoplàstiques es van originar a partir dels llinatges de cèl·lules mieloides. En algunes de les àrees implicades, especialment la melsa i el fetge, un nombre reduït de cèl·lules tenien formes de ronyó, anells o lobulats indicatives de sèries mieloides diferenciades. Aquestes troballes suggereixen que les cèl·lules neoplàsiques es deriven de granulòcits immadurs. El cas de mielopoiesi severa pot ser evident per la presència de tot tipus de sèries mieloides en desenvolupament, en contrast amb el domini de les cèl·lules immadures en la leucèmia. A més, l'anèmia progressiva és un signe clínic comú de la leucèmia granulocítica, i els augments de cèl·lules eritroides i megacariocítiques són pobres1. La població menor de granulòcits amb nuclis lobulats a la zona afectada sense inflamació òbvia indica que les troballes del present cas són mielopoiesi neoplàsica i no reactiva.

En la leucèmia granulocítica, la medul·la òssia pot ser substituïda per cèl·lules mieloides immadures i madures. En un informe anterior sobre altres soques de ratolins, aquestes cèl·lules neoplàsiques es van infiltrar completament al fetge, la melsa, els ganglis limfàtics, etc.2, i aquestes cèl·lules de la melsa i el fetge estaven localitzades principalment a la polpa vermella i al voltant de la càpsula de Glisson1. Així, la distribució de cèl·lules leucèmiques en el cas present era idèntica a la del cas anterior. Segons la morfologia de les cèl·lules, la leucèmia granulocítica en ratolins es classifica en dos tipus: el tipus juvenil, que és comparable a la leucèmia mielològica aguda humana, i el tipus madur a la leucèmia mielològica crònica humana1. En el cas juvenil, les cèl·lules neoplàsiques de la medul·la òssia, la melsa i el fetge estaven dominades per cèl·lules poc diferenciades, mentre que es poden observar elements mieloides que representaven diversos graus de maduració i el percentatge de mieloblasts era baix en alguns casos madurs2, 9. En aquest cas, les cèl·lules leucèmiques estaven dominades per una forma immadura amb nuclis grans, ovals i de forma lleugerament irregular. A més, tenint en compte les troballes clíniques que el deteriorament general de la salut, inclosa l'anèmia progressiva i el moviment respiratori brusc, es va desenvolupar de manera aguda; per tant, se suposa que el present cas és de tipus juvenil.

Fig. 1. Imatges histològiques de la medul·la òssia del fèmur. R: Les cèl·lules neoplàsiques proliferen de manera difusa, substituint així la medul·la òssia. B: Els nuclis són grans, de forma ovalada a lleugerament irregular. Un petit nombre de cèl·lules tenen nuclis en forma de ronyó (punta de fletxa groga), anell (punta de fletxa verda) o lòbul (punta de fletxa blanca). La figura mitòtica s'indica amb la fletxa blanca. HE taques. Barra negra=50 μm (A), 10 μm (B).

En una publicació anterior sobre ratolins NOG, les lesions neoplàsiques eren generalment poc freqüents; tanmateix, s'ha informat de limfoma tímic a un 0,82% en el grup d'edat que va de 16 a 40 setmanes7, 10. Segons el que sabem, no s'ha informat prèviament de leucèmia granulocítica espontània en ratolins NOG. En diverses soques de ratolins, incloses B6C3F1 i BALB/c, rarament es va produir leucèmia granulocítica2, 11, i no s'ha informat en el cas d'aquests ratolins als 12 mesos d'edat o menys. El cas present va desenvolupar leucèmia granulocítica a les 51 setmanes d'edat, que era una edat relativament jove. Aquesta nova informació sobre tumors espontanis pot ser útil per a l'ús adequat d'aquesta soca de ratolí en investigacions posteriors.