Estudi sobre els efectes de millora de l'extracte de glicòsids feniletanoides de Rouchongrong (Cistanche Deserticola) sobre el metabolisme dels lípids en fetges de ratolins ApoE - / - Amb dieta alta en greixos basada en la regulació d'expressions ACOX1 - CPT2

RESUM Objectiu:Per explorar elefectes de l'extracte de glicòsids feniletanoidesdes deCistanche deserticola(PGCD) sobre el metabolisme dels lípids en el fetge de ratolins ApoE- / - induït per una dieta alta en greixos. Mètodes: 70 ratolins masculins ApoE- / - alimentats amb una dieta alta en greixos es van dividir en 5 grups, grup model (MOD), grup control positiu, es van donar atorvastatina [20 mg / (kg·d)] + Ezetimibe [20 mg / (kg) ·d)](A + E), es van donar grups de dosis baixes, mitjanes i altes de PGCDPGCD[250, 500, 1000 mg / ( kg·d)]; es van establir altres 14 ratolins C57BL / 6J mascles amb dieta achow com a grup de control normal (CON). El cap de setmana 12, es va detectar el contingut de TG i les activitats d'ALT i AST en sèrum i teixit hepàtic segons les instruccions d'operació. El teixit hepàtic fresc es va homogeneïtzar i el contingut d'àcids grassos sintasa (FAS), acil de cadena llarga - CoA deshidrogenasa (LCAD) i glutatió peroxidasa (GSH - Px),superòxid dismutasa (SOD)Les activitats es van provar mitjançant ELISAmethod, mentre que els continguts de malondialdehid (MDA) i peròxid de lípids (LPO) es van detectar amb kidmethods. Les expressions d'ARNm de l'acil-coenzim A oxidasa 1 (ACOX1) i la carnitina palmitoiltransferasa 2 (CPT2) es van detectar mitjançant experiments de RT-PCR.

CLICA AQUÍ PER SABER EL 80%GLICÒSIDES FENILETANOIDESEXTRACTE NATURAL DE CISTANCHE ORGANIC

Servei de suport de Wecistanche: el major exportador de cistanche a la Xina:

Correu electrònic:wallence.suen@wecistanche.com

Whatsapp/Tel:+86 15292862950

Compreu per obtenir més detalls de les especificacions:

https://www.xjcistanche.com/cistanche-shop

Resultats:A diferència del grup model,PGCD de tres dosis va reduir tots els nivells de TGal fetge i al sèrum de manera dependent de la dosi, i va reduir les activitats d'ALT i AST al sèrum. El PGCD de tres dosis va reduir el contingut de FAS de manera dependent de la dosi i va augmentar significativament el contingut de LCAD al fetge.PGCD promogutles activitats de GSH - Px i SODi van reduir significativament el contingut de MDA i LPO al fetge. Els experiments de RT-PCR van demostrar que el PGCD va elevar els nivells d'ARNm d'ACOX1 i CPT2 al teixit hepàtic.

Conclusió:El PGCD pot millorar el metabolisme dels lípids i la resposta a l'estrès oxidatiu i reduir la deposició de lípids al teixit hepàtic mitjançant la regulació de les expressions d'ARNm d'ACOX1 i CPT2.

Paraules clau:Extracte de glicòsids feniletanoides de Cistanche deserticola; ACOX1; CPT2;metabolisme dels lípids;estrès oxidatiu; Ratolins ApoE-/-

Malaltia del fetge gras no alcohòlic(NAFLD) és una de les malalties hepàtiques més esteses al món, amb una prevalença de prop del 30% a la població general. La malaltia del fetge gras a la Xina està creixent a una taxa anual del 0,594% [1]. L'aparició i el desenvolupament de NAFLD estan estretament relacionats amb la ingesta calòrica excessiva del cos. La dieta alta en greixos condueix a una acumulació excessiva de greix al fetge i indueix NAFLD [2], i el pas inicial de la seva patogènesi és la deposició de triacilglicerol (TG) a les cèl·lules hepàtiques[2] 3. Fins ara, no hi ha fàrmacs terapèutics específics dirigits a la patogènesi de la NAFLD. Trobar fàrmacs segurs i efectius amb mecanismes clars per a la prevenció i el tractament de la NAFLD s'ha convertit en una tasca important per als investigadors. Cistanche deserticola YC Ma és una planta paràsit del gènere Cistanche de la família Orobanchaceae. El seu component principal, els glucòsids feniletanoides, té les funcions de millorar la funció immune del cos, anti-envelliment, anti-radiació, antioxidant i hepatoprotector, i altres efectes[4-5]. Aquest estudi pretén realitzar un estudi preliminar sobre el mecanisme deGlicòsids feniletanoides de Cistanche deserticola(PGCD) en la millora del metabolisme dels lípids.

1 Materials experimentals

1.1 Medicaments experimentals

Les tiges carnoses de Cistanche deserticola (contingut d'humitat 8, 5%) es van comprar a Hotan Dichen Pharmaceutical Co., Ltd.; les substàncies de referència de glicòsids feniletanoides (components principals verbascoside i echinaceaside) (ambdues puresa > 98%) es van comprar a Manster, Chengdu, Sichuan Biotechnology Co., Ltd.; Atorvastatina: Pfizer Xangai; Ezetimibe: Merck Pharmaceuticals Co., Ltd.

1.2 Animals d'experimentació

Ratolins C57BL/6J mascles de 6 a 8 setmanes i ratolins ApoE-/-, pes corporal (20 ± 2) g, comprats a Changzhou Cavins Experimental Animal Co., Ltd., número de llicència: SCXK (Su) 2016-0010 , cicle de llum de 12 h / 12 h, temperatura (22 ± 1) grau, humitat 50% ~ 60%, ingesta gratuïta d'aliments i aigua. Abans de l'experiment, els ratolins van ser alimentats amb una dieta estàndard durant 1 setmana per adaptar-se. Tota la cura i els experiments d'animals segueixen les normes del Comitè d'Ètica dels Animals Experimentals de la Primera Universitat Mèdica de Shandong (núm. d'ètica: W202107080303).

1.3 Recerca experimentalagents

Pinso ric en greixos: Harlan Teklad; Kits TG, ALT, AST: Beijing Solebao Biotechnology Co., Ltd.; Kits FAS, LCAD: Shanghai Langton Biotechnology Co., Ltd.; Kit GSH-Px: Shanghai Jining Biotechnology Co., Ltd.; Kits SOD, MDA, LPO, BCA: Nanjing Jiancheng Biotechnology Co., Ltd.; Kit de Trizol: Invitrogen, Carlsbad, CA; Primers ACOX1 i CPT2: dissenyats per Sangon Bioengineering (Shanghai) Co., Ltd.

1. 4 Instruments experimentals Hei - Evaporador rotatiu expert VAP: Alemanya

Heidolph; Lector de microplaques multifuncional Varioskan LUX: ThermoFisher; Assecador de congelació al buit FD8508: Ilshin, Corea del Sud; Homogeneïtzador F6/10: Shanghai Fluoroco; Cromatògraf líquid d'alt rendiment Agilent1260, espectrofotòmetre UV Cary 3500: Agilent Technologies Ltd.; Quant studio5RT - Instrument de PCR: Thermo Fisher Biochemicals, Inc.

2.3.1 Massa corporal i índex hepàtic

Al final de la 12a setmana, els ratolins es van dejunar i es van pesar. Els ratolins van ser anestesiats amb pentobarbital sòdic i sacrificats. Els fetges es van collir per calcular l'índex hepàtic.

2.3.2 Detecció d'indicadors sèrics

Agafeu el sèrum i detecteu les activitats de l'aspartat aminotransferasa (AST) i l'alanina aminotransferasa (ALT) en seqüència segons el funcionament del kit; El BCA determina el contingut de proteïnes del sèrum i detecta el contingut de TG.

2.3.3 Detecció de factors relacionats amb el metabolisme dels lípids en el teixit hepàtic

En condicions de 4 graus, peseu una quantitat adequada de fetge fresc i homogeneïtzeu-lo en PBS, centrifugueu (radi de centrifugació 7,5 cm, 3 000 r/min) l'homogeneïtat durant 1 min, preneu el sobrenedant i mesureu el contingut de proteïnes de teixit hepàtic per BCA. Contingut de TG al teixit, mètode ELISA per detectar contingut d'àcids grassos sintasa (FAS) i acil-CoA deshidrogenasa de cadena llarga (LCAD) al teixit hepàtic.

2.3.4 Detecció de factors oxidatius relacionats amb el teixit hepàtic

En condicions de 4 graus, peseu una quantitat adequada de fetge fresc i homogeneïtzeu-lo en PBS, centrifugueu l'homogeneïtat (radi centrífug 7,5 cm, 3 000 r/min) durant 15 min, preneu el sobrenedant i mesureu el contingut de proteïnes de teixit hepàtic amb BCA. Seguiu els reactius Les instruccions de la caixa detecten activitats de superòxid dismutasa (SOD) i glutatió peroxidasa (GSH-Px), i alhora detecten nivells de malondialdehid (MDA) i peròxid de lípids (LPO).

2. 3. 5 Detecció per RT-PCR

Expressió d'ARNm d'ACOX1/CPT2 al teixit hepàtic: agafeu una quantitat adequada de teixit hepàtic fresc, utilitzeu un kit Trizol per extreure l'ARNm del teixit hepàtic total, utilitzeu la transcriptasa inversa MuLV per sintetitzar l'ADNc i utilitzeu l'ADNc com a plantilla per realitzar una fluorescència quantitativa en temps real. Detecció per PCR (Qpcr). , les condicions de reacció van ser: pre-desnaturalització a 95 graus durant 2 min; desnaturalització a 95 graus durant 10 s, recuit: 60 graus durant 30 s, extensió a 72 graus durant 35 s, 34 cicles, i finalment extensió a 72 graus durant 5 min, i quantificació en temps real mitjançant un analitzador automàtic. Expressió d'ARNm d'ACOX1 i CPT2. Programari Rotor-gen Q. 1.7 (Qiagen) es va utilitzar per a l'anàlisi de dades i es va utilitzar el mètode 2-△△Ct per comptar els nivells relatius d'ARNm i GAPDH. Cada grup d'experiments es va realitzar en paral·lel > 3 vegades. Les seqüències d'encebadors són les següents: GAPDH, aigües amunt: 5' - GCCACCC AGAAGACTGTG - 3', aigües avall: 5' - ATGTAGGCCATGAGGTCCAC - 3'; ACOX1, aigües amunt: 5' -CGCCACCTT CAATCC AGAGT - 3' aigües avall: 5' -TCTGCGATGCCAAATTCCCT - 3'; CPT2, aigües amunt: 5'- TCCTCCTACTC AGGACGCAA - 3' aigües avall: TTGGGATCTTCCGCTCACAC.

2.4 Mètodes estadístics

SPSS 20.0 S'ha utilitzat programari estadístic per analitzar les dades. Les dades de mesura es van expressar com (x ± s). Es va utilitzar l'anàlisi unidireccional de la variància per a la comparació entre grups. P <0,05 es va considerar una diferència estadísticament significativa.