Efecte de pigmentació anti-pell sinèrgica dels glicòsids de feniletà i glabridina cistanche

Resum per investigar el sinèrgicEfecte de CishancheEl costat de fenil etanol (PHGS) i la glabridina (GLA) contra la pigmentació de la pell, la proporció de massa de PHGS i GLA es va analitzar per inhibició in vitro tirosinasa, 1, 1- difenil -2- 2, 2- diazo-bis (3- etil-Benzotiazol -6- catió de diamoni sulfonic de diamoni (ABTS+) Radical Scavenging Radical. El model de hipopigmentació induït per UVB i es va avaluar i es va avaluar l'activitat de la Melanina i es va avaluar l'activitat de Tyrosinase i es va avaluar l'activitat de Melaninasa i la producció de Melaninasa Contingut de melanina com a índexs.

ElinflamatoriEs va establir un model de cèl·lules Hacat induïdes per lipopolisacàrid (LPS) i es va avaluar l'efecte antiinflamatorial del fàrmac inhibint l'alliberament d'interleucina -6 (IL {{2}) i el factor de necrosi tumoral (TNF-). Es va establir més el model d’estrès oxidatiu de les cèl·lules HACAT induïdes per clorhidrat d’azodiisobuamidina (AAPH) i es va utilitzar com a Índexs l’activitat millorada del superòxid dismutasa (SOD) i la catalasa (CAT) per avaluar l’efecte antioxidant del fàrmac. La proporció de massa òptima de PHGS i GLA es va determinar pels tres models anteriors. Els resultats van mostrar que les solucions aquoses de PHGS/GLA (1∶1), PHGS/GLA (5∶1) i PHGS/GLA (10∶1) preparades amb M (PHGS) ∶M (GLA) =1 ∶1, 5∶1, 10∶1 presentaven bons efectes inhibidors i sinnergistes sobre l’activitat de la tirosinasa i l’activitat antòxidant. Les taxes d’inhibició de PHGS/GLA (1∶1),
Les solucions aquoses PHGS/GLA (5∶1) i PHGS/GLA (1 0 ∶1) amb una concentració de massa de 0,4 g/L van ser del 94,37%, el 92,93%i el 88,06%, respectivament. Les taxes de depuració dels radicals lliures de DPPH van ser del 89,44%, 88,72,%i 88,10%, respectivament.
Les taxes de caça dels radicals lliures ABTS+ van ser 1 0 0,13%, 100,0,1%i 99,87%, respectivament. Quan la concentració de massa de PHGS/GLA va ser de 25 ug/ml, PHGS/GLA (1∶1), PHGS/GLA (5∶1) i PHGS/GLA (10∶1) solucions aquoses no van mostrar citotoxicitat a les cèl·lules B16F10 i Hacat. La inhibició de l’activitat de la tirosinasa en la solució aquosa PHGS/GLA (1 ∶1) va ser més forta (l’activitat de la tirosinasa 23,80%) i el contingut de melanina (30,90%) va disminuir significativament. La solució aquosa PHGS/GLA (1∶1) va mostrar el millor efecte d'inhibició sobre IL -6 i TNF-alliberament i la capacitat de millorar l'activitat de SOD i CAT. La combinació de PHGS i GLA va mostrar un bon rendiment sinèrgic, superior a un medicament únic i superior a la solució aquosa PHGS/ GLA (5∶1) i PHGS/ GLA (10∶1). La combinació de PHGS i GLA va tenir un paper sinèrgic en la millora de la pigmentació de la pell mitjançant la inhibició de la producció de melanina i els efectes antiinflamatoris i antioxidants.

 

Paraules clau Cistanche Glicòsids fenilethanoides; glabridin; efectes sinèrgics; Pigmentació anti-pell; anti-oxidació; antiinflamatoris; Materials de drogues

 

 

 

Cistanche fenil etanol per al blanqueig

Poseu -vos en contacte amb nosaltres ara

Servei de suport de Wecistanche, el major exportador de cishanche de la Xina:
Correu electrònic: wallence.suen@wecistanche.com
WhatsApp/Tel: +86 15292862950

 

Per obtenir més informació sobre possibles descomptes, no dubteu en contactar amb el nostre equip d’atenció al client. Estaran encantats d’ajudar -vos!

 

La pigmentació de la pell és una malaltia de la pell causada per factors com les lesions, la inflamació de la pell i la radiació ultraviolada [1-2]. Aquests factors poden comportar un augment anormal de la melanina, que al seu torn provoca problemes com el cloasma, les pigues i la hiperpigmentació post-inflamatòria (PIH) [3-4], afectant l’estat mental i la qualitat de la vida de les persones. Actualment, el tractament de la pigmentació de la pell se centra principalment en inhibir la tirosinasa, un enzim clau en la formació de melanina [5-6].
La darrera investigació [7-8] mostra que la pigmentació de la pell depèn de la connexió estreta entre queratinòcits i melanòcits de l'epidermis. Una vegada que els radicals lliures i els factors inflamatoris alliberats per queratinòcits entrin en contacte amb melanòcits, induiran un augment de l’activitat de la tirosinasa, donant lloc a un augment del contingut de melanina. També acceleraran el transport de melanina i faran que la melanina dipositi a la superfície de la pell. Per tant, el tractament de la pigmentació de la pell requereix diverses mesures com ara inhibir la producció de melanina, antiinflamatòria i anti-oxidació.

Actualment, tot i que les preparacions tradicionals de fàrmacs, com la hidroquinona i la hidroquinona, tenen certs efectes en el tractament de la pigmentació de la pell, els seus modes d’acció són relativament únics i poden produir reaccions adverses [9-10]. En comparació, els medicaments naturals són naturals i suaus i són cada cop més reconeguts i lloats pels consumidors [11-12]. En particular, la combinació d’extractes de plantes múltiples [13-14] no només pot inhibir la producció de melanina, sinó que també té múltiples efectes com ara efectes antiinflamatoris i antioxidants, proporcionant noves idees i mètodes per al tractament de la pigmentació de la pell.
Cishanche Deserticola Ma té un valor medicinal únic i és conegut com el "ginseng del desert". Els estudis han trobat que el glicòsid de feniletanoides d’ingredients característics contingut en cistanche té una bona activitat antioxidant [15] i efectes antiinflamatoris [16], i també té un cert efecte inhibidor de la tirosinasa [17]. La glicirrhizina és un component flavonoide a Glycyrrhiza Glabra L., que té un efecte de blanqueig potent i que es coneix com a "or blanquejant" [18]. El tractament tradicional de la medicina xinesa de la pigmentació de la pell sol començar a frenar la melsa i el ronyó, esborrant la calor i la desintoxicació i reomplint el Qi i la sang [19].
Els glicòsids feniletanòlics de Cishanche Deserton poden reomplir el ronyó Yang i beneficiar essència i sang, mentre que Glycyrrhiza glabra pot reomplir la melsa i Qi, eliminar la calor i desintoxicar -se. Els dos poden treballar junts per resistir la pigmentació. La combinació de feniletanoidc glicòsids de cistanche deserticola i glabridina pot resistir la pigmentació de la pell de múltiples dimensions i objectius, protegir -se contra els raigs ultraviolats a la banda sencera, inhibir synergísticament l’activitat de la tirosinasa i reduir la producció de melanina i pot reduir els radicals lliures i els factors inflamatoris, reduir la inflamació de la pell i l’estrès oxidatiu i regular i el transport i el transport i el transport. No obstant això, hi ha pocs informes de la literatura sobre la inhibició sinèrgica de la pigmentació de la pell per glicòsids feniletanoides de Cistanche Deserticola i Glabridina.
Aquest treball té la intenció d’explorar si hi ha un efecte sinèrgic entre els ppheniletanoidglicòsids de Cistanche deserticola (PHGS) i la glabridina (GLA) mitjançant experiments bioquímics in vitro i l’establiment de 3 models de cèl·lules, ND obtenen la proporció de massa composta òptima per a un efecte sinnergista. Es preveu proporcionar suport teòric i orientació pràctica per al desenvolupament de productes naturals de cura de la pell de les plantes i ajudar a promoure la indústria de la cura de la pell a desenvolupar -se en una direcció més natural, sana i eficient.

 

 

On: una reacció és l’absorbància de la solució de mostra, la solució de titrosina L, PBS i solució de tirosinasa; Un control de reacció és l’absorbància de la solució de mostra, la solució de Tyrosina L, la solució N i PBS; Un en blanc és l’absorbància de la solució de L-tirosina, la solució PBS i la solució de tirosinasa; Un control en blanc és l’absorbància de les solucions de L-Tyrosina i PBS.

'

1.3.2 Determinació de la capacitat de caça de radicals lliures de DPPH

Primer, pesar amb precisió {{0}}. 0 197 g (0. 0 5 mmol) de dpph i dissoldre -ho en 25 0 ml d'etanol anhidrós per preparar una solució de treball DPPH amb una concentració de {0}. mmol/l. A continuació, PHGS i GLA es van preparar en solució PHGS etanol i solució GLA etanol amb concentracions de massa de 0. 0 01, 0,01, 0,1, 0,4, 0,8, 1,2, 1,6, 2,0 mg/ml respectivament utilitzant 50% etanol per volum i la solució etanol VC es va preparar de la mateixa manera. A continuació, la solució PHGS etanol i la solució GLA etanol es van barrejar uniformement a m (solució phgs) ∶ m (solució GLA)=40 ∶1, 20∶1, 10∶1, 5∶1, 1∶1, 1∶5, 1∶10, 1∶20, 1∶40 per obtenir 9 tipus de phgs/GLA (40∶1) ~ PHGS/GLA (1∶40) Solucions d'etanol. Finalment, afegiu 100 µl de diferents solucions de mostra i 100 µl de solució de treball DPPH a la placa de pou 96-, barregeu -ho bé i allunyeu -vos de la llum a temperatura ambient durant 30 min. Mesureu l'absorbància a 517 nm amb un marcador enzimàtic. La VC es va utilitzar com a control positiu i cada experiment es va repetir tres vegades. Calculeu la taxa d’escalfament de radicals lliures de DPPH (%) segons la fórmula (2).
DPPH Radical Scavenging Radical Rate/%=(1 −𝐴1 - 3𝐴2) × 100 (2) on: A1 és l'absorbància de la solució de mostra + la solució de treball DPPH; A2 és l’absorbància de 50% d’etanol per volum + DPPH Solució de treball; A3 és l’absorbància de la solució de mostra + 50% etanol per volum.

1.3.3 Determinació de les ABT+ Capacitat de caça radical lliure

Primer, pesar 1 g (1,82 mmol) de ABTS i dissoldre -ho en aigua desionitzada per preparar una solució de treball ABTS amb una concentració final de 7,4 mmol/L; Pesar 0. 5 g de persulfat de potassi i dissoldre -ho en aigua desionitzada per preparar una solució de treball de persulfat de potassi amb una concentració final de 2,6 mmol/L; Barregeu la solució de treball ABTS i la solució de treball del persulfat de potassi en volums iguals i reaccioneu durant 12 h a la foscor per preparar la solució de treball ABTS+. A continuació, segons el mètode de la secció 1.3.2, prepareu la solució PHGS etanol, solució GLA etanol, solució d’etanol N i VC, així com PHGS/GLA (40∶1) ~ PHGS/GLA (1∶40) Solució d’etanol.
Finalment, afegiu 40 µl de solucions de mostra diferents i 160 µl de solució de treball ABTS+ a la placa de pou 96-, barregeu bé, reaccioneu a temperatura ambient a la foscor durant 6 min i mesura l’absorbància de la solució a 734 nm mitjançant un lector ELISA. Calculeu la taxa de colada de radicals ABTS+ (%) segons la fórmula (3).

 

On: A1 és l’absorbància de la solució de mostra + ABTS + Solució de treball; A2 és l’absorbància de l’aigua desionitzada + ABTS + Solució de treball; A3 és l’absorbància de la solució de mostra + aigua desionitzada.

 

1.4 Experiment de cèl·lules

1.4.1 Cultura cel·lular

Després que es revifi les cèl·lules B16F10 i Hacat, s’inoculen en medi d’alta glucosa DMEM (que conté una barreja de sèrum boví fetal del 10% i 1% de penicil·lina-estromicina per una fracció de massa) i es cultiven en una incubadora a 37 graus, 5% de fracció de volum de CO2 i 70% d’humitat durant 24 hores. L’estat de creixement cel·lular s’observa a un microscopi i el medi es substitueix o es subculta segons l’estat de creixement cel·lular.

 

1.4.2 Agrupació experimental

Les cèl·lules B16F10 i Hacat de la fase de creixement logarítmica s’inoculen a les plaques de pou 96- amb nombres cel·lulars adequats i es cultiven durant 24 hores per permetre que les cèl·lules s’adhereixin a la paret. Es preparen solucions de mostres de diferents concentracions de massa mitjançant un medi de cultiu DMEM. El grup normal, grup model, grup de dosis baixes (125 ug/ml) grup, grup PHGS de dosis mitjanes (250 ug/ml), grup de dosis altes (500 ug/ml), grup GLA de dosis baixes (6,25 ug/ml), grup de dosis mitjanes (12,5 ug/ml) grup, grup GLA (25 ug/ml) i grup Phgs/Phgs/Gla (1∶1) grup (1∶1), grup (1∶1), grup (1∶1), grup (1∶1), grup (1∶1), grup (1∶1), grup (1∶1), grup (1∶1), grup, grup Phgs/Gla) (1∶1), grup Gla (1∶1), grup Gla (1∶1), grup Gla) (1∶1), grup Gla) (1∶1) Es va configurar el grup PHGS/GLA (5∶1) i el grup de cultiu PHGS/GLA (10∶1).

En el model de pigmentació B16F10 induït per UVB, es van afegir les cèl·lules del grup model amb 30 µl de PBS (pH =7. 4) i es van col·locar 3 cm directament per sota de l'irradiador UVB durant 110 s; El grup experimental es va pretractar amb 100 µl de solucions de mostra de diferents concentracions de massa durant 1 h, després es va afegir amb 30 µl de PBS i es va col·locar 3 cm directament per sota de l’irradiador UVB durant 110 s; El grup normal sempre utilitzava medi de cultiu DMEM d’alta glucosa; El grup en blanc no es va inocular amb cèl·lules, sinó amb una quantitat igual de medi de cultiu.

En el model d’inflamació de cèl·lules Hacat induït per LPS, el grup model es va cultivar amb solució PBS de LPS a una concentració de 20 ug/ml durant 24 hores; El grup experimental es va pretractar amb 100 µl de solucions de mostra de diferents concentracions de massa durant 24 hores i després es van afegir amb 20 ug/ml de solució LPS durant 24 hores; El grup normal sempre utilitzava medi DMEM de gran glucosa; El grup en blanc no es va inocular amb cèl·lules, sinó amb una quantitat igual de medi de cultiu.

En el model d’estrès oxidatiu de cèl·lules Hacat induït per AAPH, el grup model es va cultivar amb una solució AAPH (2,5 mmol) de 100 ml a una concentració de 25 mmol/L durant 24 hores; El grup experimental es va pretractar amb 100 µl de mostres de solucions de diferents concentracions de massa durant 24 hores i després es van afegir amb solució AAPH a una concentració de 25mmol/L durant 24 h; El grup normal sempre utilitzava medi DMEM de gran glucosa; El grup en blanc no es va inocular amb cèl·lules, sinó amb una quantitat igual de medi de cultiu.

Cada grup es va configurar amb 3 pous replicats i es va cultivar en una incubadora a 37 graus, fracció de volum del 5% de CO2 i 70% d’humitat.

1.4.3 assaig de citotoxicitat

El mètode CCK8 es va utilitzar per determinar la citotoxicitat. Les cèl·lules B16F1 0 i Hacat en la fase de creixement logarítmica es van digerir amb un 0,25% de trypsina durant 3 min. Després de la finalització de la digestió, el medi de cultiu es va explotar repetidament per fer una suspensió cel·lular amb una densitat d’1 × 104 cèl·lules/ml. Les cèl·lules es van inocular uniformement en una placa de pou 96-, 100 µl per pou, i es va afegir PBS als pous al voltant de les cèl·lules. Després que les cèl·lules s’adherissin a la paret, es van afegir diferents concentracions de massa de solució de mostra, 3 pous replicats per grup i es van cultivar en una incubadora a 37 graus, fracció de volum de 5% i 70% d’humitat durant 24, 48 i 72 h, i després es va descartar la solució. Tots els grups es van afegir amb 100 µl de medi de cultiu complet que contenia una fracció de volum CCK8 del 10% i es van incubar durant 60 min. Es va mesurar l’absorbància de la solució a 450 nm mitjançant un lector ELISA. La viabilitat cel·lular (%) es va calcular segons la fórmula (4).

 

 

On: un grup experimental és l’absorbància dels pous que contenen cèl·lules i solució de mostra sota irradiació UVB; Un grup normal és l’absorbància dels pous que contenen cèl·lules i solució de mostra sense irradiació UVB; Un grup en blanc és l’absorbància dels pous que contenen un medi de cultiu però no hi ha cèl·lules.

 

1.4.5 Determinació del contingut de melanina

El contingut de melanina es va determinar pel mètode de la lisi de la naOH. Després de tractar les cèl·lules durant 72 h segons el mètode de la secció 1.4.2, es va descartar el sobrenedant i es va rentar dues vegades amb PBS, i es van afegir 100 µl de solució aquosa de NaOH que contenia un 10% de DMSO per volum (concentració d’1 mol/L). Després d’haver estat col·locat en un forn de 90 graus durant 1 h, l’absorbància de la solució a 490 nm es va determinar mitjançant un marcador enzimàtic. L’experiment es va repetir 3 vegades. El contingut de melanina (%) es va calcular segons la fórmula (5).

 

1.5 Determinació del contingut del factor inflamatori i de l’índex d’estrès oxidatiu

Després de tractar les cèl·lules durant 48 h segons el mètode de la secció 1.4.2, es van recollir les cèl·lules Hacat de cada grup amb un rascador cel·lular, centrifugat i es va recollir el sobrenedant. El contingut de IL -6 i TNF- es va determinar segons les instruccions del kit ELISA.
Després de tractar les cèl·lules durant 48 h segons el mètode de la secció 1.4.2, les cèl·lules Hacat de cada grup es van recollir amb un rascador cel·lular i les cèl·lules es van trencar per congelació i descongelació repetides. Les cèl·lules es van centrifugar a 12000 r/min a 4 graus durant 10 min i es va recollir el sobrenedant. L’activitat SOD i el contingut de CAT es van determinar segons les instruccions del kit ELISA.

1.6 Determinació de l’índex combinat
El mètode d’índex combinat (CI) [20] es va utilitzar per determinar si els PHG i GLA en diferents proporcions de massa tenien un efecte sinèrgic en la inhibició de l’activitat de la tirosinasa i la anti-oxidació. L’índex de combinació es va calcular segons la fórmula (6):

Wherein: D1 and D2 are the mass concentrations (mg/mL) of the two drugs when the activity reaches x% in the combined treatment; DX is the mass concentration (mg/mL) required for the activity to reach x% when the two substances are used alone. Compusyn software was used for calculation. CI>1 indica un efecte antagònic, Ci =1 indica un efecte additiu i CI<1 indicates a synergistic effect.

 

1.7 Anàlisi de dades

Totes les dades s’expressen com a "mitjana aritmètica ± desviació estàndard (𝑥̅ ± 𝑠)". El programari Graph Prism 9.5. 0 es va utilitzar per a l'anàlisi estadística. L'anàlisi unidireccional de la variància es va utilitzar per a la comparació entre diversos grups. P<0.05 was considered statistically significant.