Els efectes anti-envelliment de Ludwigia Octovalvis en ratolins Drosophila Melanogaster i SAMP8 Part 1

ResumHem investigat els efectes anti-envelliment de Ludwigia octovalvis (Jacq.) PH Raven (Onagraceae), és un extracte que es consumeix àmpliament com a beguda saludable a diversos països. Utilitzant la mosca de la fruita, Drosophila melanogaster, com a organisme model, vam demostrar que l'extracte de L. octovalvis (LOE) va allargar significativament la vida útil de la mosca amb una dieta alta, però no baixa en calories, cosa que indica que la LOE pot regular la vida útil mitjançant una restricció dietètica ( via relacionada amb DR). LOE també va atenuar el declivi cognitiu relacionat amb l'edat tant en les mosques com en el ratolí 8 (SAMP8) propens a l'acceleració de la senescència, sense provocar cap compensació negativa perceptible, inclosa la ingesta d'aigua, la ingesta d'aliments, la fecunditat o l'activitat motora espontània. LOE contenia alts nivells de polifenols i flavonoides, que posseeixen una forta activitat d'eliminació de radicals DPPH i es va demostrar que atenuaven el dany oxidatiu i la letalitat induïts pel paraquat a les mosques. Les anàlisis de cromatografia de gasos-espectrometria de masses (GC-MS) van identificar 17 molècules conegudes, de les quals -sitosterol i escualè eren les dues més abundants. També vam demostrar que -sitosterol podria allargar la vida útil, probablement mitjançant l'activació de la proteïna cinasa activada per AMP (AMPK) al cos gras de les mosques adultes. Les nostres dades suggereixen que la LOE és una potent intervenció antienvelliment amb potencial per tractar trastorns relacionats amb l'edat.

El glicòsid de cistanche també pot augmentar l'activitat de la SOD en els teixits del cor i del fetge, i reduir significativament el contingut de lipofuscina i MDA a cada teixit, eliminant eficaçment diversos radicals reactius d'oxigen (OH-, H₂O₂, etc.) i protegint contra els danys de l'ADN causats. per radicals OH. Els glucòsids feniletanoides de Cistanche tenen una forta capacitat d'eliminació dels radicals lliures, una capacitat reductora superior a la de la vitamina C, milloren l'activitat de SOD en la suspensió d'esperma, redueixen el contingut de MDA i tenen un cert efecte protector sobre la funció de la membrana espermàtica. Els polisacàrids de Cistanche poden millorar l'activitat de SOD i GSH-Px en eritròcits i teixits pulmonars de ratolins senescents experimentalment causats per D-galactosa, així com reduir el contingut de MDA i col·lagen al pulmó i el plasma, i augmentar el contingut d'elastina. un bon efecte d'eliminació de DPPH, allarga el temps d'hipòxia en ratolins senescents, millora l'activitat de SOD al sèrum i retarda la degeneració fisiològica del pulmó en ratolins senescents experimentalment Amb la degeneració morfològica cel·lular, els experiments han demostrat que Cistanche té la bona capacitat antioxidant. i té el potencial de ser un fàrmac per prevenir i tractar malalties de l'envelliment de la pell. Al mateix temps, l'echinacòsid a Cistanche té una capacitat significativa per eliminar els radicals lliures DPPH i pot eliminar espècies reactives d'oxigen, prevenir la degradació del col·lagen induïda pels radicals lliures i també té un bon efecte reparador sobre el dany dels anions dels radicals lliures de timina.

Feu clic a cistanches herba

【Per a més informació:george.deng@wecistanche.com/WhatApp:86 13632399501】

Paraules clauLudwigia octovalvis. Restricció dietètica. Esperança de vida. AMPK

Introducció

Entendre l'envelliment és un repte important del nostre temps, tenint en compte les tendències demogràfiques i les càrregues previstes d'una societat de la gent gran. Els estudis que investiguen malalties relacionades amb l'edat com les malalties neurodegeneratives, els càncers i les malalties cardiovasculars ja han donat una visió significativa de la senescència humana. Se sap que la restricció dietètica (RD), mitjançant la reducció de la ingesta de calories sense desnutrició o alteració de l'equilibri dels components de la dieta, és la intervenció més eficaç per allargar la vida saludable de totes les espècies, des de llevats fins a mosques fins a mamífers (Lin et al. 2000; Wood et al., 2004; Bonkowski et al., 2006; Wu et al., 2013). En rosegadors, la DR pot augmentar significativament la vida útil dels ratolins normals i dels ratolins 8 (SAMP8) de curta durada (Weindruch i Walford 1982; Choi i Kim 2000; Simons et al. 2013). En les mosques, també es pot observar una sorprenent prolongació de la vida útil (Zheng et al. 2005; Soh et al. 2013). Tot i que els estudis en primats (mico rhesus) encara no han generat resultats definitius sobre l'efecte de la DR sobre la mortalitat, és evident que la DR en micos produeix efectes fisiològics beneficiosos similars als observats en rosegadors i mosques (Colman et al. 2009; Mattison et al. al. 2012). S'ha demostrat que l'extensió de la vida útil per DR probablement està mediada per diverses vies genètiques que impliquen la detecció i el metabolisme de nutrients, com ara la insulina/IGF, les sirtuïnes (Sir), SKN-1, l'objectiu de la rapamicina i la proteïna quinasa activada per AMP. (AMPK) (Lin et al. 2000; Kaeberlein et al. 2005; Bishop i Guarente 2007; Alcedo i Kenyon 2004; Stenesen et al. 2013). Sembla que Sir2/Sirt1 (Lin et al. 2004) i AMPK (Xiao et al. 2011) es poden activar mitjançant un augment de les proporcions AMP/ATP, ADP/ATP o NAD/NADH, que reflecteix un estat d'energia cel·lular més baix. Aquests, al seu torn, indueixen una sèrie d'esdeveniments de senyalització aigües avall que transformen l'estat metabòlic de les cèl·lules des del consum d'energia fins a l'emmagatzematge i la generació d'energia.

Tenint en compte els límits pràctics per als humans a l'hora de practicar la DR a la vida quotidiana, el desenvolupament de la mimètica de la DR s'ha convertit en un camp apassionant per a la investigació contra l'envelliment. Els suplements dietètics que contenen compostos nutracèutics o extractes de plantes poden ser capaços de proporcionar intervencions segures i efectives per allargar la vida saludable. Ja s'ha demostrat que els extractes de fruites de nectarines i pomes, així com els extractes d'herbes de Rhodiola rosea i Curcuma longa, allargan la vida útil de les mosques de la fruita, mitjançant la reducció del dany oxidatiu (Boyd et al. 2011; Peng et al. 2011; Schriner et al., 2009; Lee et al., 2010; Schriner et al., 2013). Els components principals identificats en aquestes plantes que promouen la salut com a candidats probables per als efectes d'allargar la vida útil són els polifenols, que tenen el potencial d'actuar com a eliminadors de radicals lliures o quelants de metalls actius redox (Galleano et al. 2010). El resveratrol, un compost polifenòlic que es troba principalment a la pell del raïm vermell, és l'exemple més conegut d'aquesta classe de molècules i s'ha demostrat que allarga la vida útil d'espècies tan distants evolutivament com Saccharomyces cerevisiae, Caenorhabditis elegans, Drosophila melanogaster i Nothobranchius. furzeri (Howitz et al. 2003; Wood et al. 2004; Valenzano et al. 2006). Tot i que s'han demostrat les propietats antioxidants del resveratrol, l'acumulació d'evidències suggereix que aquest compost també pot actuar com un potent activador de diversos gens associats a la longevitat, inclosos Sir2/Sirt1 esmentats anteriorment (Hubbard et al. 2013).

Ludwigia octovalvis (Jacq.) PH Raven (Onagraceae) té una àmplia distribució a les zones tropicals de molts països del món. Tot i que la composició química completa de L. octovalvis no s'ha descrit completament, aquesta planta té una llarga història d'ús com a medicament a base d'herbes per tractar diverses condicions, com ara edema, nefritis i hipotensió. Grans poblacions a Àsia consumeixen extracte de L. octovalvis (LOE) com a beguda saludable diàriament. L'avaluació toxicològica en ratolins ha suggerit que el tractament crònic de LOE pot proporcionar propietats immunoreguladores, hepatoprotectores i protectores cardiovasculars, sense efectes secundaris observables (Kadum Yakob et al. 2012). A més, s'ha informat que LOE té activitats antibacterianes i anticancerígenes (Chen et al. 1989; Chang et al. 2004). En aquest estudi, hem investigat els efectes antienvelliment de LOE, utilitzant tant mosques de la fruita com ratolins SAMP8 com a organismes model. Els nostres resultats suggereixen que la LOE es pot desenvolupar com una intervenció anti-envelliment.

Mètodes

Preparació LOE

Les plantes senceres de L. octovalvis es recollien generalment durant la temporada d'estiu, i les plantes seques es van obtenir de l'estació de millora agrícola local i de Taiwan Herbal Biopharma Company Ltd. a Taiwan. El control de qualitat de L. octovalvis va ser supervisat per Taiwan Herbal Biopharma Company Ltd. i es va dipositar un exemplar de val (núm. 034) a l'herbari de Hsiehyu Biotech Company Ltd. Per a la preparació de LOE, es van remullar 100 g de pols de L. octovalvis en 400 ml d'etanol al 95 per cent durant la nit a 4 graus i després s'extreu dues vegades a 55 graus durant 30 min. El sobrenedant es va centrifugar (a 8,000xg durant 5 min) i es va filtrar (TOYO núm. 1) per eliminar els residus. La LOE es va obtenir després d'un procés de descompressió.

Cromatografia de gasos-espectrometria de masses (GC-MS)

L'anàlisi GC-MS de LOE es va realitzar mitjançant un cromatògraf de gasos HP- 6890 i un detector selectiu de massa HP{-5973 (MSD, Agilent Technologies), equipat amb una columna de cromatografia de gasos capil·lar HP-5MS (12,5 m×0,2 mm ID, 0,33 μm de gruix de pel·lícula) (J&W Scientific). El volum d'injecció era de 2 ul en mode splitless i la temperatura d'entrada era de 29 0 graus. L'heli es va utilitzar com a gas portador (cabitat de 0,6 ml/min) i la temperatura del forn es va programar de la següent manera: temperatura inicial: 35 graus, augmentada de 5 graus / min a 90 graus, després de 10 graus / min a 200 graus. , i finalment de 20 graus /min a 290 graus , on es va mantenir durant 8 min. L'anàlisi es va realitzar en el mode EI, amb una tensió d'ionització fixada a 70 eV. L'adquisició d'escaneig (m/z 45-550) de MSD es va dur a terme amb el programari HP Chemistation.

2,2-Difenil-1-picrilhidrazil (DPPH) activitat d'eliminació de radicals i contingut total de polifenols i flavonoides

L'activitat d'eliminació de radicals DPPH es va mesurar mitjançant un mètode modificat descrit anteriorment (Brand-Williams et al. 1995). Breument, es va afegir 100 ul de diferents concentracions de LOE, àcid ascòrbic, resveratrol, escualè o -sitosterol (Sigma) a 200 ul de 100 μM DPPH en plaques de 96-microwell per assolir les concentracions finals. de 0, 1, 5, 10 i 50 ug/ml. La mescla de reacció es va incubar a la foscor a temperatura ambient durant 30 min. Es va mesurar una disminució de l'absorbància a 520 nm en un lector de microplaques (AccuReader 965). Els constituents fenòlics totals de LOE es van determinar amb el reactiu Folin-Ciocalteu, utilitzant àcid gàlic com a estàndard (Slinkard i Singleton 1977). El contingut sencer de flavonoides es va mesurar amb un assaig colorimètric de clorur d'alumini, utilitzant rutina com a estàndard (Shih et al. 2010).

Cultiu cel·lular i anàlisis Western blot

Les cèl·lules de Drosophila Schneider (S2) es van cultivar a 25 graus en el medi Drosophila de Schneider (Invitrogen), complementat amb un sèrum boví fetal inactivat per calor a l'1 0 per cent (Gibco). Les cèl·lules es van tractar amb diferents concentracions de LOE i -sitosterol (Sigma) en condicions de creixement normals (1 × mitjà, com anteriorment) o en condicions DR (0,5 × medi, dilució 1:1 del medi 1 × en solució salina tamponada amb fosfat ( PBS)) durant 12 h. Els nivells de proteïnes de fòsfor-AMPK i -tubulina (anticossos de Cell Signaling Technology) es van analitzar mitjançant Western blot tal com es va descriure anteriorment (Wang et al. 2005).

Mosques i assajos de vida útil

Canton-S (CS), w1118, el controlador GeneSwitch S106 (Bloomington Stock Center #8151) i UASAMPK.RNAi (Bloomington Stock Center #32371) es van recaptar amb aliments estàndard de sacarosa/llevat/farina de blat de moro. . Les verges S106 es van creuar amb mascles UASAMPK.RNAi en experiments de derrota AMPK. Per als assajos de vida útil, les mosques que s'havien tancat en 48 h (aproximadament 100 mascles i 100 femelles) es van transferir a una gàbia de població de 1-l i es van mantenir en una incubadora humidificada i amb temperatura controlada amb 12-h encesa/ cicle de llum apagada a 25 graus (Wang et al. 2009). Es va proporcionar menjar fresc cada dos dies i es va puntuar el nombre i el gènere de les mosques mortes. Els aliments alts i baixos en calories contenien un 15 o un 5 per cent tant de dextrosa com de llevat, respectivament. Es va afegir un dos per cent d'agar i un 0,23 per cent de Tegosept (Apex) a tots els aliments. Es van afegir diferents concentracions de LOE, escualè, -sitosterol, RU486 (Mifepristone, Sigma) o control de vehicles als aliments descrits a cada experiment.

Alimentació, fecunditat i activitat motora espontània de les mosques

Les mosques de deu dies mantingudes en aliments rics en calories que contenien diferents concentracions de LOE es van transferir a vials frescos del mateix aliment, amb l'addició d'un 0,5 per cent de FD&C núm. 1 colorant alimentari blau. Després de 24 h, es van homogeneïtzar 10 mosques en un únic tub que contenia PBS i es va determinar la quantitat de colorant ingerit per espectrofotòmetre per a l'absorbància del colorant a 625 nm. La fecunditat femenina es va determinar mitjançant el recompte diari d'ous produïts per tres parelles d'aparellament. Les mosques es passaven diàriament a nous vials que contenien aliments adequats i es va comptar i registrar el nombre d'ous posats durant els primers 20 dies de vida adulta. Per controlar els nivells d'activitat, es van col·locar vials de vidre que contenien una sola mosca mascle a la font d'aliment adequada en cambres d'enregistrament locomotor que tenen anells circulars de fonts de llum infraroja; Els trencaments del feix es registren com a activitat (TriKinetics). Les dades es van registrar cada 20 s durant un període de 72-h. Els monitors d'activitat es van allotjar a la incubadora descrita anteriorment.

Memòria a curt termini associativa olfactiva pavloviana de les mosques

Les mosques a diferents edats van ser entrenades mitjançant l'exposició a electroshock (70 V) que es va combinar amb una olor durant 60 s. Posteriorment, les mosques van ser exposades a una segona olor sense electroshock durant 60 s. Les mosques es van deixar reposar durant 45 s i després van ser sotmeses a una prova de laberint en T durant 2 minuts, en la qual havien de triar entre les dues olors. Les olors utilitzades eren metilciclohexanol (1:1, dilució 000 en oli mineral) i o octanol (1,5:1, dilució000 en oli mineral). Per a tots els experiments, es van realitzar almenys cinc sessions per a cadascuna de les combinacions d'olor-electroshock. Totes les dades es van promediar i es mostren com a percentatge de l'índex de memòria per a cada grup. L'índex de rendiment es va calcular restant el nombre de mosques que entraven al braç en què l'olor es va emparellar amb l'electroxoc del nombre que entrava al braç oposat, on l'olor no estava emparellat amb l'electroxoc, i dividint-lo pel nombre total de mosques.

Determinació d'estrès oxidatiu induït pel paraquat i 4-hidroxi-2-nominal (HNE)

Les mosques de deu dies mantingudes en aliments rics en calories que contenien diferents concentracions de LOE es van transferir a vials amb paper de filtre remullat en una solució de paraquat 0 o 20 mM i dextrosa al 6%. El nombre de mosques mortes es va comptar cada 3 a 4 h. A les 12 h, es van recollir algunes de les mosques tractades amb paraquat i es va mesurar l'HNE mitjançant el kit ELISA OxiSelect™ HNE Adduct (Cell Biolabs), seguint el protocol proporcionat pel fabricant.

Els animals

Tots els protocols experimentals van seguir la normativa local d'ètica animal. Els ratolins SAMP8 es van criar i mantenir al Modular Animal Caging System® (Disseny alternatiu) i el seu menjar es va esterilitzar mitjançant irradiació gamma. L'habitació tenia un cicle de llum d'encesa/apagada de 12- h, amb la fase fosca que començava a les 20.00 h. Per als ratolins, es va afegir LOE a l'aigua potable a concentracions finals de 0, 50 i 100 ug/ ml. Es va controlar regularment la ingesta d'aliments, el consum d'aigua i el canvi de pes corporal.

Preparació d'ARN, síntesi d'ADNc i reacció quantitativa en cadena de la polimerasa (qPCR)

L'ARN total es va preparar a partir d'almenys 30 mosques mitjançant el RNeasy Mini Kit (Qiagen). L'ARN es va tractar amb DNasa i es va convertir en cDNA mitjançant oligo-d(T)15 (Invitrogen) i la transcriptasa inversa SuperScript III (Invitrogen) tal com es va descriure anteriorment (Chou et al. 2013). Les reaccions de qPCR es van realitzar mitjançant un StepOnePlus Real-Time PCR Systems (Applied Biosystems), SYBR Green Master Mix (Applied Biosystems) i els primers específics de gens eren CAAG AGCTATCTGCTCGACTTCAA i CACATTTCGA AAAACTCCATGGT per AMPK- i GACGAAAT CAAGGCTAGGGAGTCGTC i GACGAAAT CAAGGCTAGGGAGTCGTC per a GAGCTAGGAGTCG. Es va dur a terme una reacció de PCR en dos passos amb desnaturalització a 95 graus durant 15 s, recuit i extensió combinada a 60 graus durant 1 min en un total de 40 cicles. El nivell d'expressió d'ARNm de cada gen objectiu en comparació amb GAPDH es va quantificar mitjançant la resta: Cttarget - CtGAPDH=ΔCt. Una diferència d'un cicle de PCR equival a un canvi doble en el nivell d'expressió de l'ARNm. La singularitat dels amplicons es va confirmar mitjançant corbes de dissociació.

Reconeixement d'objectes nous, laberint de T elevada i proves de camp obert

Per a la nova prova de reconeixement d'objectes, els ratolins es van habituar primer a una caixa oberta (50 cm × 25 cm × 50 cm) durant 10 minuts al dia durant dos dies consecutius, sense cap objecte present. El tercer dia, els ratolins es van col·locar a la caixa durant 2 minuts i després es van presentar dos objectes similars a cada ratolí. El temps dedicat a explorar cada objecte es va registrar durant el període de 5-min posterior (definit com a sessió d'entrenament). Els ratolins van ser retornats a la seva gàbia de casa. Una, dues o tres hores després, es van tornar a provar els mateixos animals durant 5 minuts a la caixa amb un objecte conegut i un nou (definit com la sessió de prova de memòria). L'índex de discriminació d'objectes es va calcular restant el temps dedicat a explorar un objecte conegut del temps dedicat a explorar un objecte nou i dividint-lo pel temps total dedicat a explorar ambdós objectes.

El laberint de T elevada es va modificar a partir d'estudis anteriors (Cruz-Morales et al. 2008; De-Mello i Carobrez 2002; Maia et al. 2010; Santos et al. 2006; Takahashi et al. 2005). Constava d'un braç tancat per murs de 15 cm d'alçada, perpendiculars a dos braços oberts oposats. Els tres braços tenien dimensions iguals (30 cm×5 cm), i tot l'aparell estava elevat 50 cm per sobre del terra. El dia d'entrenament, cada ratolí es va col·locar a l'extrem distal del braç tancat, de cara a la intersecció dels braços, i es va permetre explorar el braç tancat. La prova va acabar quan el ratolí va entrar als braços oberts (les quatre potes estaven a la zona del braç obert) o va romandre al braç tancat durant 300 s. El nombre d'assaigs necessaris per assolir el criteri d'evitació es va utilitzar per avaluar la capacitat d'aprenentatge dels ratolins durant les sessions d'entrenament. Vint-i-quatre hores després de les sessions d'entrenament, els ratolins es van tornar a exposar al braç tancat i es va registrar el temps que van romandre al braç tancat com a avaluació de la retenció de memòria.

La prova de camp obert es va realitzar en una caixa oberta (50 cm × 25 cm × 50 cm). Cada ratolí es va col·locar al centre del camp obert i es va permetre explorar lliurement l'aparell durant 1 h. La direcció i la velocitat de viatge de cada ratolí es van registrar mitjançant observació automatitzada (instruments de diagnòstic i recerca).

Resultats

L'extensió de la vida útil induïda per LOE s'associa amb DR

Per provar si la LOE té un efecte anti-envelliment in vivo, primer vam examinar la vida útil de les mosques CS criades en aliments que contenen diferents concentracions de LOE. Les mosques masculines CS en aliments rics en calories tenien una vida útil mitjana de 41,5 dies, i l'addició de 50, 100 i 1,000 ug/ml de LOE als aliments per a mosques va allargar la vida útil de les mosques masculines en 8,9, 16,1 i 9,6 per cent, respectivament (figura 1a i taula 1). Les mosques femenines CS amb aliments rics en calories tenien una vida útil mitjana de només 32,2 dies, curta en comparació amb els seus homòlegs masculins. Tanmateix, la LOE va induir una extensió de la vida útil encara més gran a les mosques CS femenines, on 100 ug/ml de LOE va tenir l'efecte més gran (24,2 per cent d'extensió; Fig. 1b i taula 1), i 100 ug/ml LOE també va allargar la vida útil tant en mascles com en homes. femella w1118 vola, cosa que suggereix que la vida útil prolongada per LOE no es limita al fons genètic CS (Fig. 1c, d i taula 1).

Com que la DR és una intervenció ben documentada per allargar la vida útil, volíem provar si els efectes de longevitat de LOE es veurien alterats per DR. Les mosques CS masculines i femelles criades amb aliments baixos en calories van mostrar un augment del 17, 8 i 49, 4 per cent en la vida mitjana, respectivament, en comparació amb les mosques CS criades amb aliments rics en calories (Fig. 1e, f i taula 1). No obstant això, la LOE no va induir una extensió de la vida útil per sobre de la que ja s'havia vist per a les mosques control en aliments baixos en calories (Fig. 1e, f i Taula 1), cosa que suggereix una relació entre la LOE i l'extensió de la vida útil induïda per DR, la qual cosa implica que aquestes intervencions poden actuar, almenys en part, per les mateixes vies.

El tractament amb LOE crònica no indueix compensacions negatives

Com que l'extensió de la vida útil induïda per LOE està potencialment acoblada amb la via DR, vam examinar si la LOE podria reduir la ingesta d'aliments de les mosques i donar lloc a un estat semblant a la DR. Vam controlar la ingesta d'aliments de les mosques mitjançant un sistema estàndard d'afegir colorant al seu menjar (Wang et al. 2009). De mitjana, les mosques femelles CS van ingerir molt més menjar en comparació amb els mascles de la mateixa edat, però no es va observar cap diferència en la ingesta d'aliments entre les mosques control i tractades amb LOE per a cap gènere (Fig. 2a).

A més de la reducció de la ingesta d'aliments, les intervencions que allargan la vida útil poden implicar compensacions negatives, com ara una disminució de la fecunditat i l'activitat física (Flatt et al. 2008; Wang et al. 2009; Sohal i Buchan 1981). Vam trobar que les mosques CS tractades amb LOE no van mostrar cap diferència en la producció d'ous durant els primers 20 dies de vida adulta (Fig. 2b). Tant les mosques CS tractades amb LOE com les de control també van mostrar un ritme circadià normal i una activitat motora espontània (Fig. 2c), com s'ha assenyalat anteriorment (Wang et al. 2009).

LOE atenua els dèficits de memòria relacionats amb l'edat en mosques de la fruita i ratolins SAMP8

El declivi funcional de les neurones és un segell comú del procés d'envelliment. Es va examinar la memòria funcional de les mosques mitjançant una prova de memòria associativa a curt termini olfactiva de Pavlovian. Les mosques CS en aliments rics en calories van mostrar un deteriorament cognitiu gradual en els primers 20 dies de vida adulta (Fig. 3a). Aquesta disminució de la memòria es va atenuar per DR, amb una diferència estadísticament significativa observada el dia 20 (Fig. 3a, b). La LOE també va reduir la disminució de la memòria relacionada amb l'edat de manera dependent de la dosi, amb les mosques amb 100 ug/ml LOE assolint un nivell d'altiplà similar al observat per a les mosques DR (Fig. 3b).

Hem investigat més l'efecte pro-cognitiu de LOE en ratolins SAMP8, que se sap que desenvolupen l'aparició precoç de dèficits en l'aprenentatge i la memòria i s'ha demostrat que són un model adequat per estudiar els mecanismes fonamentals de la malaltia d'Alzheimer (Flood i Morley 1992, 1993). Chan et al 2006; Takeda 2009). A les proves de reconeixement d'objectes nous, els ratolins SAMP8 de 3-mes d'edat van mostrar una memòria de reconeixement sostinguda fins a 3 h després de la sessió d'entrenament, passant més temps en l'objecte nou en comparació amb l'objecte familiar (Fig. 3c, d). Aquesta retenció de memòria, però, no es va observar en els ratolins SAMP8 de 8-mes d'edat (Fig. 3c, d). L'addició de LOE (100 ug/ml) a l'aigua potable durant 5 mesos (a partir dels 3 mesos d'edat) va millorar significativament la retenció de memòria de reconeixement dels ratolins SAMP8, fins i tot a les 3 h després de la sessió d'entrenament (Fig. 3d). La suplementació d'aigua de 50 ug/ml de LOE va tenir menys efectes beneficiosos, però va poder millorar la retenció de memòria fins a 2 h (Fig. 3d).

A les proves de laberint de T elevada, tots els grups de ratolins van requerir un nombre similar de proves d'entrenament per assolir el criteri d'evitació, cosa que suggereix que tots els ratolins tenien habilitats d'aprenentatge similars (Fig. 3e). A les proves de recuperació de memòria de 24-h, només de 8-mes, però no de 3-mes, els ratolins SAMP8 van mostrar un dèficit important en la retenció de memòria (figura 3f). Aquest dèficit de memòria de la por relacionat amb l'edat en els ratolins SAMP8 també es podria rescatar amb una suplementació de LOE 5-mes a l'aigua potable (figura 3f). Els efectes procognitius de LOE observats anteriorment no es poden atribuir a cap canvi en l'activitat motora general dels ratolins, ja que no es va observar cap diferència en la velocitat de viatge o la distància a les proves de camp obert (Fig. 3g i dades no mostrades). Els ratolins SAMP8 que van rebre un tractament LOE de 5-mesos no van mostrar cap efecte sobre la ingesta d'aliments o el consum d'aigua i cap canvi en el pes corporal (Fig. 3h-j).

【Per a més informació:george.deng@wecistanche.com/WhatApp:86 13632399501】