L'efecte de la taxifolina sobre la lesió hepàtica oxidativa induïda per dosis altes de cisplatí en rates

Siusplau contactaoscar.xiao@wecistanche.comper a més informació

Resum

Fons. El cisplatí és un agent quimioterapèutic (derivat) a base de platí inespecífic que provoca un augment de l'activitat dels radicals lliures al lier. L'activitat antioxidant de la taxifolina s'ha demostrat anteriorment, i s'ha informat que la taxifolina inhibeix el radical hidroxi, en estudis experimentals. Objectius. No s'han trobat estudis a la literatura actual que examinin l'efecte protector de la taxifolina sobre el dany hepàtic oxidatiu induït pel cisplatí. El nostre objectiu és determinar l'efecte protector de la taxifolina sobre l'hepatotoxicitat induïda pel cisplatí en un estudi experimental.

Materials i mètodes. En total, es van assignar 18 rates mascles albines Wistar en 3 grups: controls sans (grup HC), 5 mg/kg de cisplatí administrat durant 8 dies (grup CIS) i 50 mg/kg de taxifolina més 5 mg/kg de cisplatí administrat durant 8 dies (TCG). Els nivells de malondialdehid (MDA), glutatió total (TSH), oxidant total (SO) i antioxidant total (TAS) es van mesurar al teixit hepàtic extret. Resultats. Els nivells de MDA i TOS de Livertisue van ser significativament més alts en el grup CIS. contrast, i els nivells de TAS van ser significativament més baixos en el grup CS, administrat només cisplatina (p<0.00), compared="" to="" other="" groups.="" in="" the="" tcg="" group,="" administered="" cisplatin="" +="" taxifolin,="" mda="" and="" tos="" levels="" were="" significantly="" lower,="" whereas="" tsh="" and="" tas="" levels="" were="" significantly="" higher="" than="" in="" the="" cis="" group=""><>

Feu clic aquí per saber-ne més

Condicions. Aquests resultats suggereixen que la taxifolina pot ser útil per prevenir lesions hepàtiques relacionades amb el cisplatí. Paraules clau: càncer, hepatotoxicitat, cisplatina, antioxidant taxifolina

Fons

El cisplatí és un agent quimioterapèutic (derivat) no específic a base de platí que s'utilitza per tractar el càncer d'estómac, testicles, ovari, bufeta, ronyó, ureterovesical, cap i coll.1 S'ha informat que causa efectes tòxics greus en molts òrgans i sistemes. durant el tractament.2-4 L'eficàcia quimioteràpia-pèutica del cisplatí augmenta juntament amb la dosi. Tanmateix, l'augment de la dosi provoca efectes secundaris com nefrotoxicitat, ototoxicitat, neurotoxicitat, hepatotoxicitat, nàusees, vòmits i, en el 67% dels pacients, diarrea, limitant-ne l'ús clínic5,6. El cisplatí també provoca un augment de l'activitat dels radicals lliures en fetge, provocant estrès oxidatiu.7 El cisplatí administrat per via intravenosa (180-480mg/m²) també pot arribar a concentracions elevades al fetge, excepte al ronyó i l'intestí, i pot causar una toxicitat important.8 Per tant, s'ha detectat va informar que els efectes secundaris més crítics són l'hepatotoxicitat i la nefrotoxicitat. L'hepatotoxicitat es manifesta com un augment dels nivells de transaminases sèriques (alanina aminotransferasa (ALT) i aspartat aminotransferasa (AST)). Fins i tot s'ha demostrat que la dosi de tractament utilitzada com a supressor de tumors provoca hepatotoxicitat.10 Tot i que el mecanisme de lesió del cisplatí no és ben conegut, algunes evidències suggereixen que és causada per l'estrès oxidatiu, a causa de l'activitat de les espècies reactives d'oxigen (ROS). L'estrès oxidatiu induït per ROS provoca una disminució del glutatió (GSH), que és un antioxidant endogen.

A més, les ROS afecten la peroxidació lipídica de la membrana cel·lular i condueixen a l'aparició de productes més tòxics com el malondialdehid (MDA)."1 Això suggereix que la teràpia antioxidant pot ajudar a prevenir o reduir l'hepatotoxicitat induïda pel cisplatí. Els estudis han demostrat que diversos antioxidants No obstant això, l'hepatotoxicitat causada pel cisplatí segueix sent una de les raons crucials per limitar-ne l'ús a la dosi desitjada, per tant, s'estan duent a terme diversos tipus d'investigació per alleujar l'hepatotoxicitat del cisplatí. En el nostre estudi, hem investigat si la taxifolina (3,3',4'5,7-pentahidroxiflava-no), un flavonoide contingut en cebes, card marià, escorça marítima francesa i escorça d'avet Douglas, té un efecte protector contra l'hepatotoxicitat del cisplatí.13 Antioxidant S'ha documentat l'activitat de la taxifolina.14 En estudis experimentals, s'ha informat que la taxifolina inhibeix el radical hidroxil (OH), Aron la cèl·lula i protegeix l'ADN cel·lular de l'oxidació. e danys per l'activitat antioxidant.15 Aquestes dades suggereixen que la taxifolina protegirà el teixit hepàtic contra el dany oxidatiu causat pel cisplatí.

Objectius

No es van trobar dades a les revisions de la literatura sobre els efectes protectors de la taxifolina sobre la toxicitat hepàtica induïda pel cisplatí. Per tant, el nostre estudi pretenia investigar, mitjançant anàlisi bioquímica, si la taxifolina té o no un efecte protector sobre l'hepatotoxicitat induïda pel cisplatí en rates.

Materials i mètodes Estudi dels animals

Es van obtenir divuit rates mascles albines Wistar ({0}} g) del Centre d'Investigació i Aplicació Experimental Mèdica de la Universitat d'Atatürk (Erzurum, Turquia). Abans de l'experiment, els animals van ser allotjats i alimentats al laboratori durant 1 setmana a temperatura ambient normal (22 graus). Els experiments amb animals es van realitzar d'acord amb les directrius nacionals per a l'ús i la cura d'animals de laboratori i van ser aprovats pel comitè local d'ètica animal de la Universitat d'Atatürk (aprovació núm. 75296309-050.01.04-E. 1800138920, 4 de maig de 2018). Procediment experimental Els animals d'experimentació es van dividir en grup de control sa (HC), grup de 5 mg/kg de cisplatí (CIS) i grup de 50 mg/kg de taxifolina més 5 mg/kg de cisplatí (TCG). En aquest experiment, es van administrar 50 mg/kg de taxifolina (Evalar, Biysk, Rússia) a les rates del grup (n=6) mitjançant sonda oral. Als grups CIS (n=6) i HC(n{=6), es va administrar per via oral aigua destil·lada com a dissolvent. A la literatura, els fàrmacs investigats per a l'acció contra la toxicitat del cisplatí generalment s'administraven als animals d'experimentació 1 h abans del cisplatí. Una hora després de l'administració de taxifolina i aigua destil·lada, es van injectar un total de 4 dosis de cisplatí (Ebewe-Liba, Istanbul, Turquia) en animals dels grups TCG i CIS a una dosi de 5 mg/kg intraperitoneal (IP.) cada 2 dies.7 Es van administrar taxifolina i aigua destil·lada amb el mateix mètode durant 8 dies un cop al dia en la dosi i el volum especificats. Al final d'aquest període, els animals s'han sacrificat amb anestèsia de tiopental d'alta dosi (50 mg/kg) (IE Ulagay, Istanbul, Turquia) i es van eliminar els teixits hepàtics. Es van mesurar els nivells de malondialdehid, TSH, estat oxidant total (TOS) i estat antioxidant total (TAS) al teixit hepàtic extret. A més, es van recollir mostres de sang de la vena lateral de la cua de rates no anestesiades i es van centrifugar a 1500 × g durant 10 min. A continuació, es va mesurar l'activitat ALT i AST al sèrum.

Cistanche pot millorar la immunitat

Anàlisis bioquímiques

Abans de la dissecció, tots els problemes es van esbandir amb solució salina tamponada amb fosfat.propietats de cistancheEls teixits hepàtics es van homogeneïtzar en tampons de fosfat freds amb gel (50 mM, pH 7,4) que eren adequats per a la variable a mesurar. Els homogeneïtats de teixit es van centrifugar a 5000 rpm durant 20 min a 4 graus i es van extreure els sobrenedants per analitzar la concentració de MDA, tGSH, TAS, TOS i proteïnes. La concentració de proteïnes del sobrenedant es va mesurar mitjançant el mètode descrit per Bradford. Tots els resultats dels teixits es van expressar dividint per grams de proteïna.18 Totes les mesures espectrofotomètriques es van realitzar mitjançant un lector de microplaques (BioTek Powerwave XS"; BioTek⑩, Winooski, EUA).

Anàlisi del malondialdehid

Les mesures de malondialdehid es van basar en el mètode utilitzat per Ohkawa et al.,cistanche tubulosa beneficisque implica l'absorbància mesurada espectrofotomètricament del complex de color rosa format per àcid tiobarbitúric (TBA) i MDA. Breument, es van afegir 25 μl d'homogeneïtat sovint a una solució que contenia 25 μl de 80 g/L de dodecil sulfat de sodi i 1 ml de solució de barreja (20 g/L d'àcid acètic més 1,06 g de 2-tiobarbitúric més 180 ml d'aigua destil·lada). ). La mescla es va incubar a 95 graus durant 1 h. En refredar, la mescla es va centrifugar durant 10 min a 4000 rpm. L'absorbància del sobrenedant es va mesurar a 532 nm. La corba estàndard es va obtenir utilitzant 1,1,3,3-tetrametoxi propà.19 Anàlisi de glutatió total (GSH)

La quantitat de GSH en l'homogeneïtat total es va mesurar amb el mètode utilitzat per Sedlak et al.20 i Baker et al.,21 amb algunes modificacions. El principi del mètode és la intensitat del color de l'àcid 5-tio-2-nitrobenzoic groc fosc (TNB). El TNB s'allibera mitjançant la reducció del reactiu d'Ellman (5,5'-ditiobis (2-àcid nitro benzoic)-DTNB) per grups tiol lliure i es mesura a una longitud d'ona de 412 nm (2 GSH més DTNB→GSSG més 2 TNB, compost de color groc fosc).

En primer lloc, es va aplicar el procés de desproteinització a totes les mostres d'homogeneïtat per eliminar la reacció dels grups sulfhidril de proteïnes amb el reactiu d'Ellman. L'homogeneïtat de teixit es va precipitar amb 200 μL d'àcid tricloroacètic al 25 per cent, i el precipitat es va eliminar després de la centrifugació a 2500 × g durant 5 min a 4 graus. El sobrenedant obtingut es va utilitzar per determinar el nivell de GSH. Un total de 200 μL de tampó de mesura (200 mmol/L de tampó Tris-HCl que conté 0,2 mmol/L d'àcid etilendiaminotetraacètic (EDTA) a pH 8,9), 100 μL de sobrenedant, 5 μL de DTNB (10 mmol/L) i 5 μL de glutatió reductasa-NADPHmix (3,75 ml de NADPH 1 mM i 80 μL de 625 U/L de glutatió reductasa) es van afegir a la placa i es van incubar durant 5 minuts a temperatura ambient. El DTNB es va utilitzar com a cromogen i va formar un complex de color groc amb grups sulfhidril. L'absorbància es va mesurar a 412 nm mitjançant un espectrofotòmetre esmentat anteriorment. La corba estàndard es va obtenir utilitzant GSH reduït. Segons la corba estàndard de GSH, es calculen els nivells de GSH de tots els teixits i els resultats s'expressen com a nmol GSH/mg de proteïna. Estat antioxidant total (TAS)

i anàlisis de l'estat oxidatiu total (TOS).

Els nivells TOS i TAS d'homogeneïtats de teixits es van determinar mitjançant un nou mètode de mesura automatitzat i kits disponibles comercialment (Rel Assay Diagnostics, Gaziantep, Turquia), tots dos desenvolupats per Erel.223 El mètode TAS es basa en el blanqueig del color característic d'un color més estable. El catió radical ABTS (2,2'-i-bis(3-etilbenzoti-azolina-6-àcid sulfònic)) mitjançant antioxidants, i les mesures es realitzen a 660 nm. Els resultats s'expressen en nmol Trolox equivalent/L. En el mètode TOS, els oxidants presents a la mostra van oxidar el complex ió ferros-o-dianisidina a ió fèrric. La reacció d'oxidació es va potenciar per les molècules de glicerol, que estan abundantment presents al medi de reacció. L'ió fèrric va produir un complex de color amb xilenol taronja en un medi àcid. La intensitat del color, que es va poder mesurar a 530 nm espectrofotomètricament, es va relacionar amb la quantitat total de molècules oxidants presents a la mostra. Els resultats s'expressen com a peròxid d'hidrogen (H2O2) equivalent/L. Anàlisi ALT i AST L'anàlisi sèrica ALT i AST es van realitzar en un autoanalitzador Roche Cobas 8000 mitjançant el mètode espectrofotomètric i els kits de la mateixa empresa (REF:207649557-322,20764949-322, respectivament; Roche Diagnostics, Basilea, Suïssa ). El principi d'ambdues mesures es basa en mesurar el canvi d'absorbància del NADH a 340 nm.

Anàlisis estadístics

Les anàlisis estadístiques es van realitzar mitjançant IBM SPSSsoftware v.21.0(IBM Corp., Armonk, EUA).cistanche tubulosa en xinèsEl valor de la prova de potència estimada ({{0}}beta) es va calcular com a 0,99 amb el programa G-Power (https://www.psychologie.hhu.de/ar-beitsgruppen/allgemeine-psychologie-und- arbeitspsy-chologie/gpower). Les variables numèriques es van expressar com a mediana (min-max). Per a l'anàlisi de variables contínues es va realitzar la prova de Kruskal-Wallis. Per a entre dos grups, es va realitzar la prova de Dunn (una prova de comparació post hoc). El criteri mínim de significació estadística es va establir a la pàg<0.05 for="" all="">

Resultats

Com es mostra a la taula 1, l'activitat sèrica ALT i AST va ser significativament més alta en el grup CIS en comparació amb els grups HC i TCG (p<>

Quan es van comparar els nivells mitjans de MDA, es van trobar diferències estadísticament significatives entre els grups d'estudi (p<0.05). the="" amount="" of="" mda="" in="" the="" tcggroup="" was="" significantly="" decreased="" compared="" to="" the="" cis="" group=""><0.001), but="" no="" significant="" difference="" was="" found="" compared="" to="" the="" hc="" group="" (p="">0.05). Quan es van comparar els nivells mitjans de TSH als grups d'estudi, hi va haver una diferència estadísticament significativa entre els grups (p<0.05). in="" the="" tcg="" group,="" the="" levels="" were="" significantly="" higher=""><0.001) compared="" to="" the="" cis="" hc="" groups(table="" 1).="" there="" was="" a="" statistically="" significant="" difference="" among="" the="" groups="" in="" terms="" of="" tos=""><0.05). the="">

Discussió

En el nostre estudi, es va investigar bioquímicament l'efecte de la taxifolina sobre la lesió hepàtica oxidativa induïda per cisplatí en rates. Hi ha molts estudis que mostren danys hepàtics induïts pel cisplatí.7,24En la nostra investigació, paral·lelament a la literatura, els nivells sèrics d'ALT i AST van augmentar després de l'exposició a dosis elevades de cisplatí. Aquests valors van disminuir després de l'administració de taxifolina. Els nostres resultats van mostrar que el cisplatí va provocar un augment dels nivells de MDA i TOS i una disminució dels nivells de TAS al teixit hepàtic animal. Els paràmetres oxidant-antioxidant s'utilitzen per determinar el dany oxidatiu del teixit25 i avaluar la toxicitat bioquímica dels fàrmacs.26 L'augment de la producció de MDA al grup CIS suggereix que la peroxidació lipídica s'exacerba a les cèl·lules del teixit hepàtic d'aquest grup. El ROS condueix a la peroxidació de lípids a la membrana cel·lular i dóna lloc a la secreció de productes més tòxics, com ara MDA, a partir dels lípids.1 El malondialdehid pot causar danys a les proteïnes de membrana en inactivar els receptors i els enzims units a la membrana a les membranes, donant lloc a reticulació i polimerització dels components de la membrana.27 La reacció LPO s'acaba mitjançant reaccions antioxidants d'eliminació o continua amb reaccions d'extensió autocatalítiques.cistanche คือ28 Els estudis han suggerit que ROS també té un paper en la patogènesi de l'efecte hepatotòxic del cisplatí.7 Niu et al. van informar que la quantitat de MDA va augmentar en el dany oxidatiu hepàtic associat al cisplatí.2 En el nostre estudi, els valors alts de TOS mesurats després de L'administració de cisplatí indica estrès oxidatiu induït pel cisplatí. Es va trobar que el nivell de TOS va augmentar al grup CIS, on el nivell de MDA era alt. El TOS s'utilitza per determinar els efectes oxidatius acumulats de diversos oxidants en sistemes biològics.23 Els estudis han demostrat que el cisplatí eleva els nivells de TOS no només al teixit hepàtic sinó també al teixit renal.30 Això és coherent amb els nostres resultats experimentals que mostren que MDA i TOS es van augmentar els nivells en el teixit hepàtic.

De nou, en aquest estudi, es va observar que el cisplatí va disminuir la quantitat del teixit hepàtic en comparació amb el grup TCG i HC. Per prevenir els efectes nocius de les ROS, els organismes vius desenvolupen diversos mecanismes de protecció efectius tant a la cèl·lula com a la membrana cel·lular. Aquests mecanismes actuen tant bloquejant la producció de radicals com eliminant els efectes nocius dels radicals formats. El glutatió, un tripèptid format per glutamat, L-cisteïna i glicina, és un dels antioxidants més coneguts dels teixits vius. El glutatió reacciona amb H, O2 i peròxids orgànics catalitzant l'enzim glutatió peroxidasa, seleni que conté l'enzim al seu lloc actiu, actuant com a antioxidant i eliminant H, O de les cèl·lules. El glutatió detoxifica químicament el peròxid d'hidrogen o els òxids orgànics i protegeix les cèl·lules del dany de les ROS.31 En el nostre estudi, es va mesurar el nivell de TAS per investigar l'efecte inhibidor del cisplatí sobre els mecanismes antioxidants. Els resultats de les nostres proves van mostrar que hi havia una correlació entre la disminució intacte i el nivell de TAS. Niu et al.quant cistanche prendreva informar que el cisplatí va produir estrès oxidatiu en disminuir els nivells de GSH i TAS al teixit hepàtic.29

La taxifolina utilitzada contra el dany hepàtic oxidatiu induït pel cisplatí va inhibir significativament un augment dels nivells de MDA i TOS i va disminuir els nivells de tGSH i TAS. S'ha documentat en estudis anteriors que la taxifolina redueix els nivells de radicals lliures intracel·lulars, inhibeix la MDA i evita el consum d'antioxidants. 32 En un altre estudi, es va trobar que la taxifolina augmentava l'efecte de GSH.3

Com s'ha assenyalat anteriorment, la taxifolina és un flavonoide.13 Estudis anteriors han expressat que els flavonoides demostren l'activitat antioxidant inhibint la peroxidació lipídica i les reaccions enzimàtiques responsables de la formació de radicals lliures.34 En un estudi recent, es va suggerir que la taxifolina produeix un efecte hepatoprotector amb activitat antioxidant mitjançant la inhibició de la via de la peroxidació lipídica.35 En total, les dades de la literatura revisada coincideixen amb els nostres resultats experimentals.

Limitacions En el nostre estudi, va ser necessari investigar l'efecte de la taxifolina sobre els nivells de citocines proinflamatòries, coneguts per tenir un paper en la patogènesi de la toxicitat del cisplatí, per tal d'aclarir el seu efecte protector contra l'hepatotoxicitat causada pel cisplatí. A més, les troballes histopatològiques haurien de donar suport a totes les troballes bioquímiques. El petit nombre d'animals dels grups es podria considerar una altra limitació.

Conclusions

Com a resultat, el cisplatí va causar danys oxidatius al teixit hepàtic dels animals. En el grup CIS, l'equilibri oxidant-antioxidant es va deteriorar contra els oxidants. La taxifolina va evitar l'augment d'oxidants i va disminuir els antioxidants en el teixit hepàtic lesionat a causa del cisplatí. La taxifolina va evitar el canvi a favor dels oxidants en l'equilibri oxidant-antioxidant. Aquestes troballes suggereixen que la taxifolina podria ser un agent clínicament beneficiós per tractar l'hepatotoxicitat resultant dels procediments de quimioteràpia.

Aquest article està extret de N. Kurt et al. L'efecte antioxidant de la taxifolina