Avaluació toxicològica i efectes protectors de l'extracte etanòlic de fulla de Cassia Spectabilis DC sobre la funció hepàtica i renal dels ratolins infectats amb Plasmodium Berghei
Oct 30, 2023
1. Introducció
Fins avui, el problema dePlasmodiumLa resistència dels paràsits als fàrmacs antipalúdics existents segueix sent un problema important per a l'eradicació de la malària [1–3]. per tant, es continua fent recerca sobre el descobriment de noves fonts de fàrmacs antipalúdics, un dels quals és de plantes medicinals [4].En viuiin vitroEls models s'han utilitzat durant molt de temps en proves antimalàriques. A la segona meitat del segle XX,Plasmodium bergheioPlasmodium yoeliis'utilitzava per infectar rosegadors. Mentrestant,P. bergheies va convertir en l'espècie més utilitzada per a l'estudi a l'etapa hepàtica, especialment la formació d'hipnozoïts per investigar la recurrència de la malària [5–7].
FEU CLIC AQUÍ PER OBTENIR LA FORMULACIÓ A HERBES DE CISTANCHE PER AL RONÓN
Una de les plantes tradicionals a Indonèsia, Cassia spectabilis DC de la família Caesalpiniaceae, s'ha demostrat experimentalment in vitro contra P. falciparum i en el tractament de la malària in vivo contra P. berghei [8, 9], cosa que indica que la planta C. spectabilis DC és molt potencial per desenvolupar-se encara més com a candidat a fàrmacs antimalàrics. Treballs anteriors van informar que una prova in vivo amb un extracte etanòlic al 90% de fulla de C. spectabilis DC contra P. berghei ANKA en ratolins BALB/c va mostrar que un valor ED50 era de 131,5 mg/kg de peso corporal [9], i es classifica com a molt bona activitat antipalúdica [10].
A més, l'extracte, les fraccions, les subfraccions i els compostos aïllats de C. spectabilis DC s'han provat in vitro per les seves activitats antimalàriques. *El compost actiu d'aquesta planta s'ha identificat amb èxit com un compost idèntic a la (–){{0}}hidroxicasina, i la seva prova d'activitat antimalàrica in vitro va mostrar un IC50 molt baix de 0,016 ug/mL [ 11], que es classifica com una activitat antimalàrica molt forta [12].
La investigació sobre aquesta planta sobre la superació de la resistència als medicaments contra la malària s'ha continuat examinant la seguretat i els efectes de la millora de l'extracte de fulla de C. spectabilis DC sobre les funcions hepàtiques i renals en ratolins infectats amb P. berghei ANKA. S'han realitzat àmpliament estudis de recerca sobre l'efecte de les plantes medicinals que tenen activitat antimalàrica sobre les funcions hepàtiques i renals de ratolins infectats amb paràsits [13–16], així com proves de toxicitat aguda i subaguda [17–20]. El fetge té un paper important en la regulació dels processos fisiològics. és un òrgan que participa en diverses funcions vitals com el metabolisme, la secreció i l'emmagatzematge. A més, el fetge té un paper important en la desintoxicació i l'excreció de compostos endògens i exògens [21–24].
La infecció per malària comença quan els esporozoïts s'infecten per la picada del mosquit Anopheles femella infectada amb paràsits de la malària. Durant l'alimentació de sang, la femella Anopheles infectada injecta l'etapa d'esporozoit del paràsit [25, 26]. Després d'aproximadament una hora de viatge pel cos humà, els esporozoïts entren al fetge, ataquen els hepatòcits i inicien el cicle asexual de l'esquizogonia exoeritrocítica. A l'interior de les cèl·lules hepàtiques, els paràsits es multipliquen asexualment, fins que arriben a l'esquizont madur i, finalment, un gran nombre de merozoïts produeixen i entren al torrent sanguini després de l'esclat d'hepatòcits infectats. * Els hepatòcits infectats que causen danys hepàtics a causa de la ruptura d'hepatòcits i merozoïts infectats entren al torrent sanguini i inicien el cicle eritrocític als glòbuls vermells [27, 28]. El dany que es produeix a les cèl·lules hepàtiques pot augmentar els enzims que treballen en la funció hepàtica, especialment l'enzim transaminasa, i els canvis morfològics en l'aparença del fetge [29, 30], com l'hepatomegàlia. L'hepatosplenomegàlia és una característica comuna de la infecció de la malària en humans [31] i ratolins [32] causada per l'exposició crònica a paràsits de la malària. No obstant això, no hi ha augment del ronyó en la infecció per malària.
La disfunció del fetge es pot detectar mitjançant la transaminació hepatocel·lular de la transaminasa oxaloacètica glutàmica plasmàtica (SGOT) i la transaminasa pirúvica glutàmica glutàmica (SGPT) plasmàtica alliberada al plasma, o mitjançant l'examen histològic del teixit [33]. El dany més comú és l'activació de la mort cel·lular apoptòtica o la necrosi dels hepatòcits [34–36]. La afectació renal clínicament significativa s'associa amb la infecció per P. falciparum i P. malariae. *La infecció per P. falciparum produeix manifestacions agudes, que van des d'asimptomàtiques fins a trastorns urinaris i alteracions electrolítiques lleus per a la insuficiència renal aguda (IRA) o la lesió renal aguda (IRA) que requereixen suport de diàlisi [27, 37]. *Se sap que els casos d'IRA en la complicació de la malària contribueixen a una taxa de mortalitat elevada, que és d'aproximadament el 75% dels casos. * L'estudi histològic suggereix la presència de glomerulonefritis, necrosi tubular aguda i nefritis intersticial com el factor hemodinàmic clau en l'IRA associada a la malària [38]. En general, el grau de disfunció renal es pot detectar mitjançant la presència de quantitats adequades de proteïna a l'orina i un augment dels nivells plasmàtics d'urea, creatinina i electròlits plasmàtics [39].
*La toxicitat de l'extracte etanòlic al 90% de fulles de C. spectabilis DC (EECS) en ratolins BALB/c, seguida dels exàmens enzimàtics, pot afectar la histopatologia i les funcions hepàtiques i renals després de l'administració de l'EECS.
2. Materials i Mètodes
2.1. Material Vegetal i Preparació d'EECS. *e C. spectabilis
Les fulles de DC es van comprar i es van determinar al LIPI (Centre de Recerca d'Indonèsia), Jardí Botànic, Purwodadi, Java oriental, Indonèsia (B-160/IPH.06/KS.02/III/ 2019). *L'exemplar es va dipositar com a herbari al Departament de Farmacognosia i Fitoquímica, Facultat de Farmàcia, Universitas Airlangga. * Les fulles es van esbandir a fons amb aigua de l'aixeta per eliminar els contaminants estranys, es van assecar a 45 graus i es van triturar en pols amb un molinet. * L'extracció es va dur a terme macerant els materials vegetals en pols (500 g) en un matràs que contenia 2.500 ml d'etanol al 90% (a 25-30 graus) durant 3 × 24 hores. * El dissolvent d'extracció es va separar, es va filtrar a través de paper de filtre i es va evaporar a pressió reduïda per evaporació rotativa. * El rendiment d'extracte etanòlic de 1000 g de pes sec de pols de fulla de C. spectabilis DC va ser del 10,20% (p/p) i es va utilitzar en aquest experiment.
2.2. Animals.
En l'estudi es van utilitzar ratolins BALB / c mascles d'entre 6 i 8 setmanes, amb un pes de 25 a 30 g. Tots els ratolins es van obtenir del Centre Veterinari Farma, Direcció General de Ramaderia i Salut Animal del Ministeri d'Agricultura, Surabaya, Java oriental, Indonèsia. *Els animals estaven allotjats en condicions estàndard i s'alimentaven amb una dieta d'estoc i aigua ad libitum. * L'aprovació del protocol d'estudi es va obtenir del Comitè d'Ètica per a la Investigació Animal, Universitas Air langga, Indonèsia, número 2.KE.181.10.2018.
2.3. Test de toxicitat aguda.
L'EECS es va ponderar i es va tornar a suspendre amb 0,5% carboximetil cel·lulosa sòdica (Na CMC) per obtenir les dosis desitjades. Els ratolins BALB/c es van dejunar durant 24 hores abans de ser alimentats amb l'extracte. * Els animals es van dividir en tres grups, cada grup contenia cinc ratolins. *Les dosis per a cada grup van ser 1.250; 2.500; i 5,000 mg/kg de peso corporal, respectivament. El comportament general de cada ratolí es va observar contínuament durant una hora després de cada dosi, de manera intermitent cada quatre hores, i després durant un període de 24 hores [40–42].
2.4. Prova de toxicitat subaguda.
A la prova de toxicitat subaguda, els ratolins es van agrupar en tres grups i cada grup es va tractar amb EECS alhora, cinc vegades i deu vegades de dosi oral diària de 150 mg/kg de peso corporal durant 28 dies; al grup control normal només se li va donar menjar i beguda ad libitum [43]. *Els animals es van observar durant 28 dies per detectar qualsevol signe de toxicitat. Al final del període d'observació, tots els animals van ser sacrificats sota anestèsia amb èter i es van extreure òrgans vitals com ara fetges i ronyons de tots els animals per a exàmens bruts i histopatològics.
2.5. Paràsit dels rosegadors.
La sensibilitat a la cloroquina de Plasmodium berghei ANKA es va obtenir de l'Institut de Biomolecular Eijkman, Jakarta, Indonèsia, i es va mantenir mitjançant el passatge en sèrie que es va utilitzar en aquest estudi.
2.6. Efecte de l'EECS sobre el nivell de plasma de SGOT i SGPT.
* Aquest experiment va ser una prova supressiva basada en Peters [44]. * Aquesta prova supressiva es va fer abans de l'avaluació de l'EECS sobre el nivell plasmàtic de SGOT i SGPT. *Els animals es van infectar amb P. berghei ANKA i es van dividir en cinc grups de A, B, C, D i E. *Els animals van ser tractats poc després de la infecció el dia 0 (D0) i va continuar diàriament durant tres dies (D1-D3). El grup A com a control negatiu va rebre 0,5% Na CMC per via oral. Els grups B i C com a grups tractats van rebre EECS en una dosi oral única de 150 i 200 mg/kg de peso corporal, respectivament. El grup D va ser un control positiu donat cloroquina a una dosi oral única de 100 mg/kg de peso corporal. A més, el grup E com a control sa no estava infectat amb paràsits i només se li va donar menjar i beguda ad libitum. El quart dia (D4), es van preparar els frotis de sang de cada ratolí i es van examinar microscòpicament. A més, es va recollir plasma abans de la mesura dels nivells de SGOT i SGPT.
2.7. Efecte de l'EECS sobre la histopatologia del fetge i el ronyó.
Al final del període d'observació, tots els animals es van sacrificar sota anestèsia amb èter abans de l'eliminació del fetge i els ronyons. Després de pesar els òrgans, els teixits es van fixar en una solució de formaldehid al 10% i es van processar posteriorment per a la tinció d'hematoxilina-eosina (H&E). *Es va realitzar una observació histopatològica per conèixer l'efecte toxicològic de l'EECS sobre les cèl·lules degeneratives i necròtiques dels teixits. * Els danys es van classificar segons Gibson-Corley et al. [45].
2.8. Anàlisi estadística.
* Les dades es van representar com a mitjana ± desviació estàndard (DE). Es va utilitzar l'anàlisi unidireccional de la variància (ANOVA) per comparar les dades distribuïdes normalment entre els tractaments, seguida d'una prova de comparació múltiple post hoc quan es va obtenir una significació diferent. Quan les dades no es van distribuir amb normalitat, es van utilitzar les proves U de Kruskal-Wallis i Mann-Whitney per avaluar les diferències entre tractaments.
Servei de suport de Wecistanche: el major exportador de cistanche a la Xina:
Correu electrònic:wallence.suen@wecistanche.com
Whatsapp/Tel:+86 15292862950
Compreu per obtenir més detalls de les especificacions:
https://www.xjcistanche.com/cistanche-shop
