Transmissió del virus de la pesta porcina clàssica en garrins cohabitants amb diversos estats immunitaris després d'una vacuna viva atenuada

Resum simple:

La pesta porcina clàssica és un patogen molt perillós que afecta els porcs domèstics. La vacunació amb la vacuna viva modificada és fonamental per prevenir i controlar la pesta porcina clàssica. Tanmateix, molts factors, com els anticossos derivats de la mare a través del calostre, podrien interferir amb l'eficàcia de la vacuna viva, donant lloc a una protecció incompleta en ramats comercials. En aquest estudi, es va investigar la transmissió del virus de la pesta porcina clàssica en garrins experimentals amb diversos estats immunitaris posteriors a la vacunació. Un garrin lliure de patògens específics infectat amb el virus de la pesta porcina clàssica va servir com a donant viral i invasor primari i va cohabitar amb garrins amb anticossos d'origen matern que havien estat vacunats o no. Segons els resultats, la majoria dels garrins amb anticossos d'origen matern que van ser vacunats estaven totalment protegits de la transmissió per contacte del donant viral i van bloquejar la transmissió vírica a tercers (aquells garrins exposats secundàriament mitjançant la cohabitació). La immunitat mediada per cèl·lules, representada per cèl·lules específiques que secreten interferó- -, va servir com a clau per a l'eliminació i la recuperació del virus. En canvi, els garrins no vacunats amb nivells baixos d'anticossos derivats de la mare havien accelerat la infecció pel virus de la pesta porcina clàssica després de la invasió viral. En conclusió, la vacunació encara indueix una immunitat sòlida en ramats comercials sota interferència d'anticossos derivats de la mare i pot bloquejar la transmissió viral en ramats.

planta de cistanche per augmentar el sistema immunitari

Resum:

La pesta porcina clàssica (LCR) és una malaltia hemorràgica sistèmica que afecta els porcs domèstics i els senglars. La vacuna viva modificada (MLV) indueix una protecció ràpida i sòlida contra la infecció pel virus CSF (CSFV). Els anticossos derivats de la mare (MDA) a través del calostre podrien interferir amb l'eficàcia del MLV, donant lloc a una protecció incompleta contra la infecció per CSFV en porcs. Aquest estudi va investigar la transmissió de CSFV entre garrins experimentals amb diversos estats immunes post-MLV. Dinou garrins, 18 amb MDA i 1 garrins lliure de patògens específics infectats amb CSFV que servia com a donant de CSFV, van cohabitar amb garrins als quals se'ls havia o no administrat el MLV. Cinc sises parts dels garrins amb MDA als quals se'ls havia administrat una dosi de MLV estaven totalment protegits de la transmissió de contacte del donant de CSFV i no transmetien CSFV als garrins exposats secundàriament mitjançant la cohabitació. La immunitat mediada per cèl·lules, representada per les cèl·lules secretores d'interferó- -específiques anti-CSFV, va ser clau per a l'eliminació i la recuperació del virus. Després de la cohabitació amb un donant de CSFV, els garrins no vacunats amb nivells baixos de MDA van mostrar infecció per CSFV i es van estendre el CSFV a altres garrins mitjançant el contacte; aquells amb alts nivells de MDA es van recuperar però van actuar com a portadors asimptomàtics. En conclusió, el MLV encara indueix una immunitat sòlida en ramats comercials sota interferències MDA i bloqueja la transmissió de CSFV dins d'aquests ramats.

Paraules clau:

peste porcina clàssica; vacuna viva modificada; anticossos derivats de la mare; transmissió

1. Introducció

La peste porcina clàssica (PPC) és una malaltia hemorràgica transfronterera altament contagiosa que afecta els porcs domèstics i els senglars i és causada pel virus de la pesta porcina clàssica (CSFV) [1,2]. La LCR és una malaltia de declaració obligatoria per l'Organització Mundial de Salut Animal (WOAH) i la LCR encara és una malaltia endèmica a Àsia, Amèrica del Sud, Amèrica Central i el Carib. Només els països d'Amèrica del Nord, Oceania i Europa occidental han eradicat amb èxit la LCR [3–6].

El CSFV és un virus d'ARN d'una sola soca embolicat de laPestivirusgènere de la família Flaviviridae que també inclou el virus de la diarrea viral bovina i el virus de la malaltia de la frontera [1,2]. El genoma viral conté aproximadament 12,3 kb i codifica 3898 aminoàcids de poliproteïna, que després es processen en quatre estructurals (C, Erns, E1 i E2) i vuit no estructurals (Npro, p7, NS2, NS3, NS4A, NS4B, NS5A, i NS5B) per proteases virals i cel·lulars [7]. A partir de les seqüències E2 o NS5B, el CSFV es classifica en tres genotips amb tres o quatre subtipus (1.1, 1.2, 1.3; 2.1, 2.2, 2.3; 3.1, 3.2, 3.3, 3.4) [8]. Depenent de la virulència del CSFV i dels factors del porc, com ara l'edat, la raça, l'estat de salut i l'estat immune, els porcs infectats amb el CSFV poden presentar signes clínics aguts, subaguts o crònics [9-11]. Els porcs infectats amb CSFV d'alta virulència presenten febre aguda i lesions hemorràgiques greus i excreten altes càrregues virals a les seves femtes, saliva i secrecions durant els seus curts dies de supervivència. Per contra, els porcs infectats amb CSFV de virulència moderada i baixa virulència presenten signes clínics subaguts i crònics i lesions més lleus i excreten nivells moderats o baixos de CSFV en les seves femtes, saliva i secrecions durant els seus dies de supervivència relativament més llargs [12,13]. ]. Al camp, els porcs infectats principalment poden tenir un paper destacat en la transmissió secundària del CSFV a altres porcs amb immunitat variable al CSFV. La transmissibilitat del CSFV de virulència moderada i alta virulència és superior a la del CSFV de baixa virulència [12, 13].

La vacunació és crucial per a la prevenció i el control de la PPC als països endèmics. La vacuna viva modificada (MLV) és una vacuna d'alta eficàcia, segura i assequible que és la més utilitzada entre els ramats comercials. El MLV pot induir ràpidament la immunitat per proporcionar protecció parcial als 3 dies posteriors a la vacunació i una protecció completa als 5 dies posteriors a la vacunació [14-16]. Tanmateix, molts factors, inclòs l'estat de salut dels porcs de qualitat vacunal i el nivell d'anticossos derivats de la mare (MDA), poden reduir l'eficàcia del MLV, donant lloc a una protecció incompleta dels porcs vacunats [14–16]. En ramats endèmics de LCR, el moment de la vacunació amb MLV depèn dels nivells de MDA dels porcs; nivells elevats de MDA interfereixen amb l'eficàcia del MLV i els nivells baixos de MDA augmenten el risc d'infecció dels garrins [17,18]. Per tant, les formulacions dels programes de vacunació MLV en ramats s'han de basar en la disminució dels nivells de MDA. Un programa de vacunació implementat regularment contra la LCR a Taiwan consisteix a vacunar truges embarassades per proporcionar MDA a través del seu calostre als nounats i després administrar la primera dosi de MLV als garrins a les 3-12 setmanes d'edat. Segons la vigilància a Taiwan, els títols mitjans d'anticossos neutralitzants (NA) anti-CSFV de MDA en garrins en el moment de la seva primera vacunació MLV són superiors a 1:32 [19], cosa que podria afectar l'eficàcia del MLV i donar lloc a diverses estats immunitaris en ramats. Aquest estudi descriu un experiment amb animals per examinar la capacitat del MLV per protegir garrins amb diferents nivells de MDA després de la cohabitació amb un garrin infectat per CSFV que va actuar com a donant de CSFV (és a dir, l'"invasor primari").

2. Materials i Mètodes

2.1. Cèl·lules i virus

Es van cultivar cèl·lules de ronyó-15 (PK-15) lliures de -1-circovirus porcí en un medi essencial mínim (Thermo Fisher Scientific, Carlsbad, CA, EUA) amb un 5% de sèrum boví fetal. (FBS) i incubat a 37 ◦C en un 5% de CO2. Les cèl·lules PK-15 van donar suport a la propagació de CSFV, inclosa la soca de la vacuna Lapinized Philippines Coronel (LPC) del genotip 1.1 i la soca TD/96 del genotip 2.1. Els títols de virus de les soques LPC i TD/96 van ser de 107,71 i 105,87 de dosi infecciosa de cultiu de teixits del 50% (TCID50), respectivament.

2.2. Disseny experimental

Un total de garrins d'{{0}}setmanes d'edat que inclouen 1 garrins lliure de patògens específics (SPF) sense NA anti-CSFV (Grup 1) i 18 garrins sans (Grups 2-5) de la LPC vacunada En l'experiment es van utilitzar truges d'un ramat lliure de CSFV (figura 1). Els 18 garrins sans es van dividir aleatòriament en quatre grups (grups 2-5); els mitjans del títol de NA anti-LPC (log2) entre els grups 2-5 eren, respectivament, 3,7 ± 2,2, 3,7 ± 2,3, 4,3 ± 2,2 i 4,3 ± 1,3 log2 vegades i no eren significativament diferents a 0 dies posteriors a l'experiment (DPE). El garrin SPF (grup 1) es va inocular irònicament utilitzant la soca 5 × 105 TCID50 TD/96 a 7 DPE i va servir com a invasor primari o donant de CSFV quan cohabitava a l'habitació 12 amb els grups 2 i 3 (figura 1). Per provar si els MDA van reduir l'eficàcia del MLV, el grup 2 (n=6) es va vacunar amb una sola dosi de vacuna LPC (més d'1 × 104 TCID50/dosi) a 0 DPE. Per provar la capacitat de protecció de l'MDA, el grup 3 (el control del grup 2; n=3) no es va vacunar amb la vacuna LPC i, per tant, aquests garrins van mostrar la descomposició de l'MDA després de 7 dies després del primer contacte amb l'invasor primari. El grup 1 (invasor primari) va conviure amb els grups 2 i 3 durant 10 dies (de 7 a 17 DPE). El grup 2 es va traslladar a l'habitació 2 per servir com a invasors secundaris mitjançant la cohabitació amb el grup 4 (n=6) de 17 a 36 DPE. El grup 3 es va traslladar a la sala 4 per cohabitar amb el grup 5 (n=3). Per tant, els grups 4 i 5 eren garrins amb 17 dies de decadència de MDA després del primer contacte amb els invasors secundaris. El Comitè Institucional de Cura i Ús d'Animals de l'Institut de Recerca en Sanitat Animal va aprovar aquest experiment animal (número d'aprovació A09007).

Figura 1. Disseny experimental.

Els animals es van controlar diàriament per detectar signes clínics i es va puntuar cada paràmetre de 0 a 3, que representaven de normal a greu, segons el mètode de Mittelholzer [19]. Es va mesurar la temperatura rectal i es van recollir mostres de sang, saliva i fecals dues vegades per setmana fins a 35 DPE. Les mostres es van analitzar per a les càrregues de CSFV i anticossos anti-CSFV. Es va realitzar una necròpsia a 18 DPE per al grup 1, a 36 DPE per als grups 2 i 3 i a 39 DPE per als grups 4 i 5. Les mostres ambientals (és a dir, hisops de la tanca, femta al terra, abeurador, etc.). i el beure) també es van analitzar per CSFV.

2.3. Reacció en cadena de la polimerasa en temps real de transcripció inversa quantitativa (QRRT-PCR) de CSFV

Els ARN virals de les mostres es van extreure amb el QIAamp® Viral RNA Mini Kit (QIAGEN, Hilden, Alemanya) i es van detectar mitjançant la reacció en cadena de la polimerasa de transcripció inversa quantitativa (QRRT-PCR) [20]. El QRRT-PCR es va utilitzar per detectar els diferents genotips i analitzar quantitativament les càrregues de CSFV de les mostres.

Beneficis de cistanche per a homes enforteixen el sistema immunitari

Feu clic aquí per veure els productes Cistanche Enhance Immunity

【Demanar més】 Correu electrònic:cindy.xue@wecistanche.com / Whats App: 0086 18599088692 / Wechat: 18599088692

2.4. NA anti-CSFV

L'escalfament del sèrum dels garrins a un complement inactivat de 56 ◦C va permetre la detecció d'anti-LPC i TD/96 NA. En resum, les mostres de sèrum diluïdes en sèrie 2-fold, començant a 1:4, es van barrejar amb volums iguals de 100 TCID50 de la soca LPC o TD/96. Les mescles es van incubar a 37 ◦ C durant 1 h i posteriorment es van transferir a cèl·lules PK-15 en plaques 96-pous. Després de la incubació durant 3 dies, les cèl·lules es van fixar i es van tacar per detectar la presència d'antigen CSFV mitjançant un assaig de fluorescència indirecta. El títol neutralitzant de l'anticossos és el log2 del factor de dilució de l'anticòs (recíproc de dilució) quan el 50% dels pous estan protegits de la infecció.

2.5. Cèl·lules secretores d'interferó específic (IFN)- -CSFV

Per avaluar la immunitat mediada per cèl·lules (CMI) anti-CSFV dels garrins, es va realitzar una prova de resposta a IFN específica de CSFV ex vivo de les cèl·lules mononuclears de sang perifèrica (PBMC). Els PBMC de la sang anticoagulada amb EDTA es van sotmetre a centrifugació a 400x g mitjançant Histopaque-1077 (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, EUA). Els PBMC es van suspendre en un medi RPMI 1640 (Thermo Fisher Scientific, Carlsbad, CA, EUA) que contenia un 10% (vol/vol) de FBS inactivat per calor, 100 unitats/ml de penicil·lina G, 100 µg/mL de tomicina estreptococ i 0,25 µg/g mL d'amfotericina B. El nombre de PBMC- -que secreten IFN de CSFV es va detectar mitjançant un assaig ELISPOT enzimàtic d'IFN porcí d'un sol color (CTL, Shaker Heights, OH, EUA). A les plaques de 96-pous, es van assignar PBMC a 5 × 106 cèl·lules/ml a 100 µL per pou amb anticossos de captura d'IFN porcí al grup simulat (inoculat amb medi RPMI 1640), el grup TD/96 (infectat amb 0,1 MOI) i el grup ConA (complementat amb 5 µg/mL de concanavalina A; Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, EUA), que serveix de control positiu. Es van utilitzar estimulacions dúplex cada vegada. Després de 48 h d'estimulació, es van rentar els pous, es va unir l'anticòs detectat amb IFN- - i es va sembrar el substrat. Les taques de cada pou es van seleccionar i analitzar mitjançant l'analitzador CTL.

2.6. Immunohistoquímica

Els teixits limfoides es van examinar mitjançant un assaig immunohistoquímic mitjançant el sistema de detecció Super Sensitive Polymer HRP IHC (BioGenex, The Hague, Netherlands) i l'anticòs monoclonal 1C7A1 contra les soques del genotip 2.1 CSFV [21]. El desenvolupament d'un color marró indica la presència de CSFV.

2.7. Estadístiques

Es va utilitzar una anàlisi de la variància i la prova de rang múltiple de Duncan per determinar les diferències estadísticament significatives entre els grups. L'anàlisi de dades es va realitzar mitjançant SAS (SAS Institute, Cary, NC, EUA). Un valor p inferior a 0,05 indica una significació estadística.

3. Resultats

3.1. Signes clínics

Tots els garrins estaven sans abans de l'experiment (taula 1). El garrin del grup 1 era el donant de CSFV (invasor primari) i es va inocular amb la soca TD/96. La febre i els signes clínics associats al CSFV al grup 1 es van detectar a 12 DPE i 13 DPE, respectivament, amb puntuacions contínuament creixents de 13 a 18 DPE que van assolir un màxim amb una puntuació de 20 a 18 DPE. Per als garrins dels grups 2 i 3 que cohabitaven amb el donant de CSFV, el grup 2, que consistia en els garrins amb MDA que havien estat vacunats amb la vacuna LPC, estaven sans i no presentaven febre ni cap signe clínic associat al CSFV durant l'experiment. . Tanmateix, els del grup 3, que comprenia els garrins amb MDA que no havien estat vacunats amb LPC, van presentar febre a 23 DPE (16 dies després del primer contacte, DP1C) i el nombre de porcs febrils va augmentar de 23 a 36 DPE. La febre es va correlacionar amb els signes clínics associats al CSFV que es van manifestar a 24 DPE (17 DP1C). Tot i que un garrin (8138) presentava signes clínics lleus (puntuació per sota de 5), els altres dos garrins es van deteriorar clínicament de 24 a 36 DPE, amb les seves puntuacions entre 12 i 16. El garrin 8136 del grup 3 va morir als 29 DPE. Els garrins del grup 4 que estaven en contacte (cohabitats) amb els del grup 2 també estaven sans i no presentaven febre ni signes clínics associats al CSFV durant el període experimental. Els garrins del grup 5 que estaven en contacte amb els del grup 3 van presentar febre als 27 DPE (10 dies després del segon contacte, DP2C) i signes clínics associats al CSFV als 30 DPE (13 DP2C). El nombre de garrins febrils i les puntuacions clíniques del grup 5 van augmentar amb el temps; la puntuació a 39 DPE va ser de 21 ± 1,4, oscil·lant entre 19 i 22.

Taula 1. Percentatge de garrins febrils en cada grup durant el període experimental.

Segons els paràmetres clínics, la presència només de MDA (Grup 3) no podria protegir els garrins de la transmissió de contacte induïda per l'invasor primari (Grup 1). Una sola dosi de la vacuna LPC a més de les MDA (Grup 2; és a dir, la pràctica àmpliament aplicada) va oferir protecció contra la transmissió de contacte induïda per l'invasor primari (Grup 1; Taula 1). La pràctica de vacunació àmpliament aplicada també va beneficiar els garrins envaïts secundàriament (és a dir, el grup 4, que només tenien MDA però no presentaven febre ni signes clínics). Clínicament, la situació del grup 5 (els garrins amb transmissió de contacte induïda pels invasors secundaris) va recapitular la situació del grup 3 (transmissió de contacte induïda per l'invasor primari).

3.2. Virèmia del CSFV

La soca CSFV TD/96 no es va detectar a la sang de cap dels garrins abans de l'experiment (figures 2A i 3A). Després de la inoculació TD/96, la virèmia TD/96 al garrin del grup 1 es va detectar per primera vegada als 10 DPE (3 dies després de la inoculació, POI) i es va detectar contínuament fins als 17 DPE. Les càrregues de CSFV van augmentar de 101,2 TCID50/mL a 10 DPE a 106,4 TCID50/mL a 17 DPE. Al grup 2, que inclou els garrins amb vacunació LPC que havien cohabitat amb l'invasor primari, només es va detectar virèmia TD/96 en un garrin (8134) de 21 a 35 DPE. Les càrregues de CSFV a la sang de Piglet 8134 van assolir el màxim (104,9 TCID50/mL) a 24 DPE i posteriorment van disminuir a 101,7 TCID50/mL a 35 DPE. Al grup 3, que inclou els garrins sense vacunació LPC que havien cohabitat amb l'invasor primari, la virèmia TD/96 es va detectar per primera vegada en el 66,7% (2/3) dels garrins a 21 DPE (14 DP1C), i tots van ser positius el 24. DPE. Tanmateix, Piglet 8138 va ser negatiu per a la virèmia TD/96 de 28 a 35 DPI (figura 2A). Al grup 4, format pels garrins que cohabitaven amb el grup 2 a la sala 2, no es va detectar virèmia TD/96 durant el període experimental. Tots els garrins del grup 5, que comprenien els garrins que havien estat en contacte amb el grup 3, van ser positius per a la virèmia TD/96 de 31 a 35 DPE. Les càrregues de CSFV van oscil·lar entre 105,1 i 106,7 TCID50/mL a 35 DPE (figura 3A). En els grups 2 i 3, la presència de MDA va retardar la primera detecció de virèmia fins als 10 DP1C (és a dir, els garrins van romandre asimptomàtics fins als 17 DPE; taula 1) amb l'invasor primari, en comparació amb el dia 3 POI del grup 1 en el grup agut. fase. La dosi única addicional de la vacuna LPC (grup 2) va reduir el percentatge de porcs virèmics en un 83% (figura 2A). De la mateixa manera, la dosi única addicional de la vacuna LPC va reduir les càrregues virals a la sang de 28 a 35 DPE (figura 3A). La vacunació LPC del grup 2 també va beneficiar els garrins del grup 4 amb els quals van cohabitar posteriorment (envaïts secundàriament), tot i que un dels garrins del grup 2 tenia virèmia transitòria (figura 2A) i saliva (figura 2B) i excrement fecal (figura 2C) de TD. /96. Aquest canvi en l'estat virèmic es va correlacionar amb el determinat en funció dels paràmetres clínics (Secció 3.2), tot i que la detecció de laboratori va ser més sensible.

Figura 2. Nombre (percentatge) de garrins positius per a TD/96 detectats mitjançant QRRT-PCR [20] de la sang (A), la saliva (B) i la femta (C) dels garrins de cadascun grup durant el període experimental. El garrin del grup 1 es va inocular irònicament amb TD/96 a 7 DPE i va servir com a donant de CSFV (és a dir, invasor primari) per als grups 2 i 3. Els garrins del grup 2 que van ser vacunats amb LPC a 0 DPE i els del grup 3 que no es va sotmetre a la vacunació LPC cohabitada amb el garrí del grup 1 de 7 a 17 DPE. Els garrins dels grups 4 i 5 van cohabitar amb els dels grups 2 i 3 (és a dir, invasors secundaris), respectivament, de 17 a 36 DPE.

Figura 3. Les càrregues de CSFV estan presents a (A) sang, (B) saliva i (C) femta dels garrins de cada grup.

3.3. Vessió de CSFV a la saliva

La soca CSFV TD/96 no es va detectar a la saliva de cap dels garrins abans de l'experiment (figures 2B i 3B). La saliva del garrin del grup 1 va ser primer positiva per TD/96 als 14 DPE (7 DP1C), que va continuar fins als 17 DPE. Les càrregues de CSFV van augmentar de 105,8 TCID50/mL a 14 DPE a 107,6 TCID50/mL a 17 DPE. En particular, en els garrins del grup 2 que havien estat vacunats amb LPC i havien cohabitat amb el donant de CSFV, TD/96 es va detectar per primera vegada en el 66,7% (4/6) de les mostres de saliva a 14 DPE (7 DP1C), que es va convertir en negatiu. després. Més tard, un altre garrin (1/6, Piglet 8134 amb virèmia TD/96; Figura 2A), va llançar TD/96 a la seva saliva de 21-24 DPE a 101,2 i 102,7 TCID50/mL, un nivell inferior als dels garrins esmentats. . En el grup 3 amb els garrins només amb MDA i sense vacunació LPC que havien cohabitat amb el donant de CSFV, TD/96 es va detectar inicialment en el 66,7% (2/3) de les mostres de saliva a 21 DPE, i totes les mostres de saliva van ser positives per 24 DPE. Al grup 4, format per garrins que cohabitaven amb els del grup 2, TD/96 no es va detectar a les mostres de saliva durant l'experiment, mentre que al grup 5, que comprenia els garrins que cohabitaven amb els del grup 3, totes les mostres de saliva van ser positives per a TD/96 de 24 a 35 DPE. Les càrregues de CSFV van augmentar amb el temps i van oscil·lar entre 105,9 i 107,3 ​​TCID50/mL per 35 DPE. Un total de quatre sises parts dels garrins del grup 2 (amb vacunació LPC en dosi única) tenien TD/96-saliva positiva a 14 DPE abans de la virèmia. El CSFV es va detectar anteriorment en els garrins del grup 2 que havien estat en contacte amb el garrin del grup 1 durant la seva vessament TD/96. Un garrin (Piglet 8134) del grup 2 va mostrar més tard un vessament transitori de 21 a 24 DPE, que és més probable que sigui representatiu de la replicació del CSFV a les glàndules salivals després de la virèmia. Segons la comparació entre els grups 2 i 3, la vacunació LPC va disminuir l'excrement de CSFV.

3.4. Excrement de CSFV a les femtes

La soca CSFV TD/96 no es va detectar a les femtes de cap dels garrins abans de l'experiment (figures 2C i 3C). Les femtes del garrí del grup 1 van ser TD/96 positives primer a 14 DPE (7 DPIC), que van continuar fins als 17 DPE. Les càrregues de CSFV van augmentar de 105,1 TCID50/g a 14 DPE a 108,8 TCID50/mL a 17 DPE. Al grup 2, que comprenia els garrins amb vacunació LPC que cohabitaven amb el donant del grup 1 de CSFV, només el garrins 8134 es va eliminar de manera transitòria a 24 DPE (17 DPIC), mentre que la resta de garrins del grup 2 van ser negatius. Al grup 3, format per garrins sense vacunació LPC que cohabitaven amb el donant de CSFV, dos terços dels garrins (tots excepte Piglet 8138) van ser positius entre 21 (14 DP1C) i 35 DPE, temps durant el qual les càrregues de CSFV van augmentar de 105,1. TCID50/g a 21 DPE a 107,5 TCID50/mL a 31 DPE. Tanmateix, les mostres fecals de Piglet 8138 amb virèmia transitòria TD/96 no van ser positives per a TD/96. Al grup 4, format pels garrins que cohabitaven amb els del grup 2, totes les mostres fecals van ser negatives per a TD/96 durant el període experimental. Al grup 5, que comprenia els garrins que cohabitaven amb el grup 3, el nombre de mostres fecals TD/96-positives va augmentar amb el temps de 24 a 35 DPE, i les càrregues van oscil·lar entre 105,7 i 107,2 TCID50/g a 35 DPE. . Al grup 5, la primera detecció es va produir a 24 DPE (7 DP2C), que era similar a la del grup 1 (14 DPE), i el perfil general era paral·lel al de la virèmia (figura 2A), cosa que suggereix que el CSFV es va replicar localment després de la virèmia. . Tal com es detalla a les seccions 3.3 i 3.4, les femtes i la saliva van ser els principals vehicles de transmissió de contacte de CSFV.

cistanche tubulosa: millora el sistema immunitari

3.5. Càrregues de CSFV en teixits obtinguts mitjançant necròpsia

Els teixits del garrin donant del grup 1 de CSFV i dels garrins dels grups 3 i 5 amb els quals va cohabitar van ser TD/96 positius (taula 2). Les càrregues de TD/96 als teixits del garrin del grup 1 oscil·laven entre 103,76 i 109,37 TCID50/g. Al grup 5, format pels garrins que estaven en contacte amb els del grup 3, es va detectar TD/96 en tots els garrins i es va distribuir per tots els teixits, amb càrregues més elevades als òrgans hematolimfoides (amígdales, ganglis limfàtics i melsa) i aquests òrgans. amb un subministrament de sang més abundant (fetge, pulmons, cor i ronyons), tal com es presenta a la figura 2A, C. Les càrregues de TD/96 més altes es trobaven als teixits limfoides (més de 109,0 TCID50/g). Per contra, els teixits no hematolimfoides dels garrins cohabitats dels grups 2 i 4, excepte el garrí 8134 del grup 2, que tenia virèmia transitòria TD/96, eren positius de baix nivell de TD/96 només a la sang, les amígdales i els ganglis limfàtics inguinals. , i els ganglis limfàtics submaxil·lars, amb aquests nivells que oscil·len entre 101,65 i 103,78 TCID50/g. Al grup 3, que inclou els garrins sense vacunació LPC que havien estat en contacte amb el donant del grup 1 de CSFV, es va detectar TD/96 en tots els teixits de dos dels tres garrins (excepte el garrin 8138). El garrí 8138 del grup 3, que tenia virèmia transitòria TD/96, tenia TD/96 a les seves amígdales, ganglis submaxil·lars i ganglis bronquials, tot i que les càrregues virals eren inferiors a la mitjana, oscil·lant entre 103,08 i 104,69 TCID50/mL.

Taula 2. Càrregues de CSFV detectades en diversos teixits dels garrins mitjançant QRRT-PCR de CSFV

3.6. CSFV en l'entorn experimental

La tanca, les femtes al terra, l'abeurador i la font d'aigua de cada sala experimental es van provar per a TD/96 mitjançant QRRT-PCR (taula 3). El TD/96 es va detectar a les 14 i 17 DPE a les femtes del terra de l'habitació 12, on el donant de CSFV del grup 1 va conviure amb els garrins dels grups 2 i 3. La tanca, l'abeurador i el beure van resultar negatius. Les mostres de la sala 2 en què els grups 2 i 4 cohabitaven eren negatives entre 21 i 35 DPE. El TD/96 es va detectar per primera vegada a les femtes del terra de l'habitació 4 (Grups 3 i 5) a 24 DPE. Posteriorment, es va detectar TD/96 a la tanca, l'abeurador i el beure de l'habitació 4 de 28 a 35 DPE. Aquests resultats indiquen que les femtes (que podrien estar potencialment presents en tot tipus de mostres ambientals) i la saliva (que probablement estaria present a les mostres de l'abeurador i de la font d'aigua) van ser els vehicles principals per a la transmissió de contacte. L'excrement víric transitori dels garrins del grup 2 (figures 2 i 3) no es va introduir a la sala 2, on cohabitaven amb els garrins del grup 4.

Taula 3. Càrregues de CSFV de mostres ambientals de les sales experimentals.

3.7. PBMC secretants d'IFN- -específics de CSFV

Les cèl·lules secretores d'IFN- -específiques de CSFV es van examinar a les PBMC dels garrins dels grups 2 a 5 entre 7 i 35 DPE (figura 4). Als garrins del grup 2, el nombre de cèl·lules secretores d'IFN- -, tot i que amb una freqüència inferior al 0,1% dels PBMC, va ser significativament més alt que el dels grups 3, 4 i 5. entre 7 i 35 DPE. El nombre de cèl·lules secretores d'IFN- -a Piglet 8134 del grup 2, que tenia virèmia transitòria TD/96 en un període de temps similar (figura 2A), es va correlacionar amb els nombres significativament més baixos de 56 (21 DPE) i 62 (28). DPE; mitjana del grup Superior o igual a 116); no obstant això, aquestes xifres van assolir la mitjana del grup en 35 DPE. El nombre de cèl·lules secretores d'IFN- -específiques de CSFV als grups 3, 4 i 5 no va ser significativament diferent.

Figura 4. Les cèl·lules secretores d'IFN- -específiques de CSFV es van examinar als PBMC de garrins dels grups 2 a 5 entre 7 i 35 DPE. Els garrins del grup 2 amb vacunació LPC a 0 DPE i els del grup 3 sense vacunació LPC van cohabitar amb el garrin donador de CSFV del grup 1 de 7 a 17 DPE. Els garrins dels Grups 4 i 5 van conviure amb els dels Grups 2 i 3, respectivament, de 17 a 35 DPE. Els valors amb lletres de superíndex diferents, a i b, indiquen una diferència estadísticament significativa (p < 0,05) entre si. No hi ha diferències significatives entre els valors que contenen la mateixa lletra

3.8. NA anti-CSFV

Els NA anti-CSFV dels sèrums de garrins es van generar en resposta a la soca LPC (figura 5A) o a la soca TD/96 (figura 5B). No es van detectar NA anti-CSFV al donant del grup 1 de CSFV entre 7 i 17 DPE. Els sèrums dels garrins dels grups 2 a 5 a {{10}} DPE presentaven títols que oscil·laven entre 5 i 7 log2 (entre 32- i 128-plegament). Després que els garrins del grup 2 es van vacunar amb la vacuna LPC i cohabitar amb el donant de CSFV, el títol mitjà no va disminuir entre 0 i 28 DPE. A causa de l'augment dels NA anti-LPC a Piglet 8134 de 31 a 35 DPE, el títol mitjà del grup 2 va augmentar significativament. En els garrins del Grup 3 sense vacunació LPC que van conviure amb el donant de CSFV, el títol mitjà va disminuir gradualment entre 0 i 28 DPE. A mesura que el títol de Piglet 8138 va augmentar gradualment entre 21 i 35 DPE, el títol mitjà del grup 3, per contra, va augmentar entre 31 i 35 DPE. Els títols mitjans dels grups 4 i 5 van disminuir amb el temps. En general, el perfil anti-TD/96 NA de cada grup va ser paral·lel al dels perfils anti-LPC NA, tot i que la mitjana anti-TD/96 NA estava entre 1,3 i 3,7 log2 (aproximadament 2–12- vegades; Figura 5B), que era inferior a la mitjana de NA anti-LPC.

Figura 5. Els NA anti-LPC (A) o TD/96 (B) en els sèrums dels garrins de cada grup durant el període experimental. El garrin del grup 1 es va inocular irònicament amb TD/96 a 7 DPE i va servir com a donant de CSFV (és a dir, invasor primari), cohabitant posteriorment amb els garrins dels grups 2 i 3 de 7 a 17 DPE. Els garrins del grup 2 es van vacunar amb LPC a 0 DPE i els garrins del grup 3 no es van vacunar amb LPC. Els garrins dels Grups 4 i 5 van conviure amb els dels Grups 2 i 3, respectivament, de 17 a 35 DPE.

La vida mitjana estimada dels MDA derivats dels títols d'anticossos dels garrins del grup 4 transferits a través del calostre de truges vacunades amb LPC va ser de 10, 7 dies (figura 5A). Aquesta estimació està recolzada per la febre negativa i els signes clínics (taula 1), la virèmia negativa, la saliva i les càrregues virals fecals (figures 2 i 3) i els teixits (taula 2; vegeu la secció 3.9) i mostres ambientals (taula 3). ) dels garrins del Grup 4, que indicaven que no havien estat infectats pel virus TD/96 durant el període experimental.

3.9. Immunohistoquímica detecció de senyals d'antígen de CSFV en mostres de teixit de necròpsia

Els senyals de CSFV TD/96 es van detectar als teixits limfoides del donant del grup 1 de CSFV (figura 6I), d'un garrin del grup 2 (piglet 8134, que tenia càrregues de CSFV a la sang que estaven al nivell més alt de 104,9 TCID50). /mL a 24 DPE i que posteriorment va disminuir a 101,7 TCID50/mL a 35 DPE), de tres garrins del grup 3 i de tres garrins del grup 5. Els garrins del grup 4 no van ser positius per a TD/96 (figura 6J). Els forts senyals de CSFV TD/96 es van distribuir àmpliament a les amígdales, mels i ganglis limfàtics dels garrins dels grups 1, 3 (excepte Piglet 8138) i 5. Per Piglet 8134 (grup 2) amb virèmia transitòria TD/96 , els senyals positius de TD/96-dispersos es van localitzar principalment a les regions parenquimàtiques de les amígdales, la medul·la dels ganglis limfàtics inguinals i els ganglis limfàtics submaxil·lars (figura 6A-D), cosa que és coherent amb els resultats de la càrrega viral. quantificació d'aquests teixits (taula 2). La morfologia i la distribució de les cèl·lules TD/96-positives eren fortament macròfagiques. Al Piglet 8138 (Grup 3) amb virèmia transitòria TD/96, el nombre i la distribució dels senyals TD/96-positius (figura 6E-H) eren similars als de Piglet 8134.

Figura 6. Els antígens de CSFV als teixits limfoides estaven marcats per l'anticòs monoclonal 1C7A1. Un gangli limfàtic (A, B) i una amígdala (C, D) de Piglet 8134 (Grup 2), que tenien virèmia transitòria TD/96, presenten el senyal positiu de TD/96-marró. Un gangli limfàtic (E, F) i una amígdala (G, H) de Piglet 8138 (grup 3), que tenien virèmia transitòria TD/96, presenten el senyal positiu de TD/96-marró. Un gangli limfàtic (I) de Piglet 8150 (Grup 1) presenta un senyal positiu/96-marró difús de TD al paracòrtex. Un gangli limfàtic (J) de Piglet 8146 (Grup 4) va ser negatiu per a TD/96

Al Piglet 8134 (Grup 2) i Piglet 8138 (Grup 3), tots dos amb virèmia transitòria de baix nivell (figures 2A i 3A; Taula 2), els antígens de CSFV encara eren detectables als macròfags dels teixits de les amígdales (figura 6A-H) , que va tornar a demostrar que les amígdales són un teixit ideal per al diagnòstic de CSFV.

4. Discussió

La vacunació és crucial per a la prevenció i el control de la PPC a les zones endèmiques de PPC. Una pràctica àmpliament aplicada és proporcionar als nounats MDA a través del calostre de les truges vacunades i després administrar una sola dosi de MLV (com LPC) quan els garrins tinguin entre 3 i 6 setmanes; aquest procediment es va utilitzar per al grup 2 del present estudi (figura 1). Molts factors, inclosa la qualitat de la vacuna, els procediments del programa de vacunació (p. ex., horaris, tipus i rutes) i els nivells de MDA i l'estat de salut dels porcs (inclosa la variació individual), poden influir en l'eficàcia de la vacunació contra el CSFV, reduint la protecció contra la infecció [14– 16]. En el present estudi, tot i que els garrins dels grups 2 i 3 tenien nivells alts de MDA a 1:32–{11}} vegades a 7 DPE (figura 5A; és a dir, 0 DP1C amb el donant del grup 1 de CSFV); Figura 1), els MDA van retardar el progrés de la infecció, tal com indica l'aparició tardana de la virèmia a 10 DP1C (grups 2 i 3; figura 2A). Això va fer que els garrins estiguessin asimptomàtics (taula 1), tot i que alguns dels garrins encara eliminen el virus a la saliva i les femtes (figura 2B, C). Aquests excretors virals ocasionals del grup 2 van representar variacions individuals en l'estat de salut del grup o les respostes immunes analitzades en aquest estudi. Només els MDA només poden oferir protecció parcial abans que es produeixi la replicació viral a la sang i els teixits. El nivell anti-CSFV TD/96 NA no es va convertir positivament després de la vacunació LPC (figura 5B), fins i tot després que els garrins cohabitaven amb l'invasor primari del grup 1. Això probablement es va produir perquè el nivell de MDA efectivament va interferir amb l'eficàcia del MLV i per la naturalesa immunosupressora del CSFV invasor TD/96.

cistanche tubulosa: millora el sistema immunitari

Els títols dels NA i CMI anti-CSFV representats pel nombre de cèl·lules secretores d'IFN- -específiques de CSFV estan estretament relacionats amb la protecció dels porcs contra la infecció per CSFV [17,22-24]. El garrí 8134 (grup 2), amb nivells baixos de NA anti-CSFV i baix nombre de cèl·lules secretores d'IFN- -específiques de CSFV després de la inoculació de MLV (figures 4 i 5), va mostrar virèmia transitòria de CSFV i vessament després del contacte amb el CSFV. donant (figures 2 i 3). Per contra, els altres garrins del grup 2, amb NA anti-CSFV baixes però amb cèl·lules secretores d'IFN- -específiques de CSFV relativament altes després de la inoculació de MLV, no estaven infectats amb CSFV, fins i tot després de cohabitar amb el donant de CSFV durant 10 dies. . A més, tot i que Piglet 8138 (Grup 3) tenia un títol elevat de NA anti-LPC (més de 128-plegues) sense vacunació MLV i amb cèl·lules secretores d'IFN- -específiques de CSFV mínimes, també presentava CSFV transitori. virèmia després de cohabitar amb el donant TD/96, però al final del període experimental estava lliure de CSFV. Els altres garrins del grup 3, amb nivells baixos de NA anti-LPC (inferior a 64- vegades) i sense vacunació MLV, van presentar signes clínics greus associats al CSFV, lesions i altes càrregues de teixit de CSFV, que van provocar la mort. Una comparació dels resultats dels grups 2 i 3, que tenien títols i perfils anti-CSFV similars (figura 5), ​​indica que el CMI és el factor clau en l'eliminació i la recuperació viral. Els garrins del grup 2 tenien més CMI (figura 4), cosa que és coherent amb les puntuacions clíniques lliures (taula 1) i tots els paràmetres provats (figura 2, figura 3 i figura 6).

En particular, al grup 2 i als altres grups, els nivells de CMI no van augmentar notablement (i només a una freqüència inferior al 0,1% dels PBMC) durant el període experimental (figura 4), malgrat els garrins. exposició constant a l'excrement viral del donant del grup 1 de CSFV i dels garrins del grup 3 de 7 a 17 DPE (figures 2 i 3). Les baixes freqüències de les cèl·lules secretores d'IFN- -probablement reflecteixen el següent: (1) la naturalesa immunosupressora del CSFV, (2) la interferència de MDA i (3) la limitació tècnica de l'assaig que vam realitzar. Per tant, determinar una finestra adequada en la qual el nivell de MDA sigui prou baix com per evitar interferències i, tanmateix, prou alt per proporcionar una protecció inicial i millorar la CMI anti-CSFV és essencial per millorar la immunitat dels ramats.

Per als garrins del grup 2 tractats amb el procediment de vacunació àmpliament aplicat, l'eliminació ocasional de CSFV en saliva i femta es va produir durant un període curt (Figura 2) a baixes càrregues de CSFV (Figura 3); així, els garrins del grup 4 (només amb MDA) van bloquejar la transmissió del CSFV al grup 4, tal com indiquen els resultats negatius del CSFV de les mostres ambientals recollides de la sala 2 (taula 3), la manca de febre i els signes clínics (taula 1). ), i l'absència de saliva i vessament fecal i virèmia (figures 2 i 3) durant la cohabitació. Tanmateix, els portadors asimptomàtics de CSFV del grup 2 podrien haver estat una responsabilitat indetectable en el camp.

La resposta immune es pot induir de manera ràpida i constant en garrins SPF vacunats amb el MLV. Les respostes immunes cel·lulars i humorals dels garrins vacunats amb MLV es revelen als 5 i 12 dies posteriors a la vacunació, respectivament, com a molt aviat [14–16,22]. Quan el MLV s'utilitza en ramats comercials, els MDA redueixen l'eficàcia del MLV. En el present estudi, el CMI dels garrins del grup 2 amb nivells substancials de MDA va augmentar ràpidament a 0 DP1C (7 DPE; Figura 4; és a dir, molt més ràpid que en porcs SPF sense MDA), encara que ni l'anticossos ni el CMI. els perfils van canviar dràsticament (figures 4 i 5). Un augment tan ràpid a 7 DPE (figura 4) després de la vacunació LPC suggereix que el calostre pot proporcionar altres components immunològics, a més dels MDA, que indueixen una resposta semblant a un anamnèstic.

Els NA anti-CSFV s'utilitzen habitualment per avaluar l'eficàcia de la vacuna i per investigar la infecció per CSFV en ramats. Segons la soca CSFV, el títol de les NA anti-CSFV contra soques homòlogues (p. ex., LPC del genotip 1.1) és més gran que contra soques heterogènies (p. ex., TD/96 del genotip 2.1) i, en aquest estudi, era log2 1.3 a 3.7 (Figura 5A) superior a la de la soca TD/96 (Figura 5B) [14]. També es va observar una diferència de títol de NA similar en diferents soques del virus de la síndrome reproductiva i respiratòria porcina (PRRSV) i SARS-CoV -2 [25,26]. Com que els MDA són un factor d'interferència vital per a l'eficàcia del MLV, el calendari de vacunació òptim per a la inoculació de MLV en garrins és quan els MDA dels garrins són inferiors a 1:32-vegament del títol de NA anti-LPC. Per tant, el temps òptim de vacunació MLV en el present estudi va ser de 28 DPE, cosa que és coherent amb la nostra estimació que la vida mitjana dels MDA va ser de 10,7 dies (Grup 2; Figura 5A) i similar als resultats de l'anàlisi de l'anti- Títols LPC NA dels grups 4 i 5. Paradoxalment, el nivell de 32-fold del títol de NA anti-CSFV (aproximadament equivalent a 1:128- vegades dels NA anti-LPC) es considera l'índex protector per Infecció per CSFV [17]. La majoria dels garrins dels grups 4 i 5 tenien menys d'1:32-titols anti-TD/96 NA a partir de 7 DPE. Així, el període de finestra en què els nivells de MDA són adequadament baixos per no interferir amb la vacunació MLV però prou alts per ser protectors és estret, mentre que la finestra per al risc d'infecció per CSFV és àmplia. El període adequat per a la vacunació amb MLV només es pot allargar si el MLV es produeix a partir de soques homòlogues, que normalment no estan disponibles a la majoria de les zones endèmiques de CSFV.

La immunitat del ramat es correlaciona negativament amb la propagació del patogen en la prevenció i el control de malalties. L'augment de la immunitat del ramat pot reduir tant la susceptibilitat a la infecció com la magnitud de l'eliminació de patògens al ramat [27, 28]. La vacunació s'utilitza habitualment com una eina directa i ràpida per augmentar la immunitat del ramat. S'ha demostrat que la millora de la cobertura de la immunitat del ramat mitjançant la immunització de la vacuna per reduir la propagació del patogen és eficaç per al control del PRRSV, el circovirus porcí tipus 2, el CSFV, el virus de la pseudoràbia i el SARS-CoV-2 [29–36]. En estudis sobre CSFV, l'administració de vacunes de subunitats MLV i E2 també va reduir la transmissió de CSFV als ramats [14–16,22,32]. En el present estudi, tot i que uns quants garrins vacunats amb MLV van mostrar virèmia i excrement transitòria del CSFV (grups 2 i 3; figures 2 i 3), la inoculació de MLV no només va oferir una protecció completa als porcs vacunats, sinó que també va assegurar que la soca TD/96 no es va transmetre de l'invasor primari (Grup 1) al grup envaït secundari (Grup 4). Per contra, el TD/96 es va estendre del grup 1 donant de CSFV al grup 3 (sense vacunació MLV) i al grup 5, demostrant que la vacunació MLV contra el CSFV pot bloquejar la transmissió del CSFV, augmentant així la probabilitat d'eradicació del CSFV reduint el valor de el nombre bàsic de reproducció (R0) del patogen [28]. Es requereix una cobertura vacunal més àmplia per eradicar malalties amb patògens d'alt R0. El R0 del CSFV està associat amb la virulència de la soca i la dosi d'inoculació del CSFV. Els nivells de patògens R0 de les dosis d'inoculació moderada i alta d'una soca moderadament virulenta i la dosi d'inoculació baixa d'una soca altament virulenta són substancialment superiors a la d'una dosi d'inoculació alta d'una soca de baixa virulència. soca [13]. Aquests resultats indiquen que es requereix més cobertura d'immunitat de ramat a les zones endèmiques de CSF amb soques de CSFV moderades o altament virulentes.

Les cèl·lules del llinatge monòcit-macròfag són cèl·lules de tropisme de CSFV que tenen un paper en la transmissió de CSFV [37–39]. En el present estudi, els garrins que es van recuperar eren sans i asimptomàtics; tanmateix, el CSFV pot infectar i amagar de manera persistent als teixits limfoides (figura 6), evitant així l'eliminació immune; això també admet l'ús de teixits limfoides com a exemplars ideals per al diagnòstic. També s'ha observat una infecció viral persistent amb CSFV, virus de la immunodeficiència humana tipus 1 i virus sincitial respiratori [40–42]. El CSFV té la capacitat d'alterar l'expressió de citocines, receptors de citocines, quimiocines, interferons i receptors de tipus toll als macròfags, reflectint la seva naturalesa immunosupressora i la gairebé inactivitat dels perfils d'anticossos (Figura 5) i CMI (Figura 4). porcs experimentals, malgrat la seva exposició contínua a la vessament de CSFV a la saliva i les femtes dels invasors primaris (Grup 1) i secundaris (Grup 3). La immunoregulació dels porcs després de la infecció per CSFV va implicar un augment dels factors proinflamatoris (IL-1, IL{-6, IL{-8 i MCF) i els factors antivirals (IFN- i ) [43]. Tanmateix, els mecanismes evolucionats i la infecció persistent de CSFV encara no estan clars.

Beneficis de cistanche per a homes enforteixen el sistema immunitari

5. Conclusions

Els MDA seguits de la vacunació MLV poden induir una immunitat suficient, especialment CMI, que permeten l'eliminació i la recuperació del virus. Tot i que uns quants garrins vacunats amb MLV tenien virèmia transitòria de baix nivell i excrement viral a la saliva i les femtes, la transmissió del CSFV a tercers (Grup 4) es podria bloquejar mitjançant la vacunació MLV, reduint així el R0 del CSFV. i augmentar la possibilitat d'eradicació de la PPC.

Referències

1. WOAH. Capítol 15.2: Infecció pel virus de la peste porcina clàssica. En el Codi Sanitari dels Animals Terrestres; WOAH: París, França, 2022.

2. Ganges, L.; Crooke, RRHH; Bohórquez, JA; Postel, A.; Sakoda, Y.; Becher, P.; Ruggli, N. Virus de la peste porcina clàssica: passat, present i futur. Res del virus. 2020, 289, 198151. [CrossRef] [PubMed]

3. WOAH (World Animal Health Information System). Pesta porcina clàssica: estat oficial de la malaltia. Disponible en línia: www.woah. org/en/disease/classical-swine-fever/#ui-id-2 (consultat l'1 de setembre de 2022).

4. Sawai, K.; Nishi, T.; Fukai, K.; Kato, T.; Hayama, Y.; Yamamoto, T. Anàlisi filogenètica i filodinàmica d'un brot del virus de la pesta porcina clàssica al Japó (2018-2020). Transbord. Emerg. Dis. 2022, 69, 1529–1538. [CrossRef] [PubMed]

5. De Oliveira, LG; Gatto, IRH; Mechler-Dreibi, ML; Almeida, HMS; Sonálio, K.; Storino, GY Assoliments i reptes de l'eradicació de la pesta porcina clàssica al Brasil. Virus 2022, 12, 1327. [CrossRef] [PubMed]

6. Zhu, X.; Liu, M.; Wu, X.; Ma, W.; Zhao, X. Anàlisi filogenètica dels aïllats del virus de la pesta porcina clàssica de la Xina. Arc. Virol. 2021, 166, 2255–2261. [CrossRef] [PubMed]

7. Lindenbach, BD; Thiel, HJ; Rice, CM Flaviviridae: Els virus i la seva replicació. A Fields Virology, 5a ed.; Knipe, DM, Howley, PM, Griffin, DE, Eds.; Lippincott Williams & Wilkins: Filadèlfia, PA, EUA, 2007; pàgines 1101–1152.

8. Paton, DJ; McGoldrick, A.; Greiser-Wilke, I.; Parcariyanon, S.; Cançó, JY; Liou, PP; Stadejek, T.; Lowings, JP; Bjorklund, H.; Belak, S. Tipatge genètic del virus de la peste porcina clàssica. Veterinària. Microbiol. 2000, 73, 137–157. [CrossRef] [PubMed]

9. Depner, KR; Hinrichs, U.; Bickhardt, K.; Greiser-Wilke, I.; Pohlenz, J.; Moennig, V.; Liess, B. Influència dels factors relacionats amb la raça en el curs de la infecció pel virus de la peste porcina clàssica. Veterinària. Rec. 1997, 140, 506–507. [Ref creuat]

10. Floegel-Niesmann, G.; Bunzenthal, C.; Fischer, S.; Moennig, V. Virulència dels aïllats recents i antics del virus de la peste porcina clàssica avaluats pels seus signes clínics i patològics. J. Vet. Med. Ser. B 2003, 50, 214–220. [Ref creuat]

11. Moennig, V.; Floegel-Niesmann, G.; Greiser-Wilke, I. Signes clínics i epidemiologia de la peste porcina clàssica: una revisió de nous coneixements. Veterinària. J. 2003, 165, 11–20. [Ref creuat]

12. Durand, B.; Dàvila, S.; Cariolet, R.; Mesplède, A.; Le Potier, MF Comparació d'estimacions basades en la virèmia i la clínica de la transmissió dins i entre la ploma del virus de la peste porcina clàssica a partir de tres experiments de transmissió. Veterinària. Microbiol. 2009, 135, 196–204. [Ref creuat]

13. Weesendorp, E.; Backer, J.; Stegeman, A.; Loeffen, W. Efecte de la soca i la dosi d'inoculació del virus de la peste porcina clàssica en la transmissió dins de la ploma. Veterinària. Res. 2009, 40, 59. [CrossRef]

14. Huang, YL; Deng, MC; Wang, FI; Huang, CC; Chang, CY Els reptes del control de la pesta porcina clàssica: vacunes de vida modificada i subunitats E2. Res del virus. 2014, 179, 1–11. [CrossRef] [PubMed]

15. Suradhat, S.; Damrongwatanapokin, S.; Thanawongnuwech, R. Factors crítics per a una vacunació exitosa contra la pesta porcina clàssica a les zones endèmiques. Veterinària. Microbiol. 2007, 119, 1–9. [CrossRef] [PubMed]

16. Van Oirschot, JT Vaccinologia de la peste porcina clàssica: del laboratori al camp. Veterinària. Microbiol. 2003, 96, 367–384. [Ref creuat]

17. Terpstra, C.; Wensvoort, G. El valor protector dels títols d'anticossos neutralitzants induïts per la vacuna en la peste porcina. Veterinària. Microbiol. 1988, 16, 123–128. [Ref creuat]

18. Vandeputte, J.; També, HL; Ng, FK; Chen, C.; Chai, KK; Liao, GA Adsorció d'anticossos colostrals contra la pesta porcina clàssica, persistència d'anticossos materns i efecte sobre la resposta a la vacunació en porcs. Am. J. Vet. Res. 2001, 62, 1805–1811. [CrossRef] [PubMed]

19. Ma, WJ; Chen, QL; Chang, CC Investigació del rendiment d'anticossos i presència d'ARN viral abans i després de la vacunació de la soca de la vacuna de la pesta porcina clàssica a les granges de porcs de Taiwan. Veterinària de Taiwan. J. 2010, 36, 45–54.

20. Mittelholzer1, C.; Moser, C.; Tratschin, JD; Hofmann, MA L'anàlisi de la cinètica de replicació del virus de la pesta porcina clàssica permet diferenciar les soques altament virulentes de les avirulentes. Veterinària. Microbiol. 2000, 74, 293–308. [Ref creuat]

21. Huang, YL; Pang, VF; Pan, CH; Chen, TH; Jong, MH; Huang, TS; Jeng, CR Desenvolupament d'una PCR en temps real multiplex de transcripció inversa per a la detecció i genotipat del virus de la pesta porcina clàssica. J. Virol. Mètodes 2009, 160, 111–118. [Ref creuat]

22. Huang, YL; Meyer, D.; Postel, A.; Tsai, KJ; Liu, HM; Yang, CH; Huang, YC; Berkley, N.; Deng, MC; Wang, FI; et al. Identificació d'un epítop conformacional comú a la glicoproteïna E2 del virus de la pesta porcina clàssica i del virus de la malaltia de la frontera. Virus 2021, 13, 1655. [CrossRef]

23. Graham, SP; Everett, HE; Haines, FJ; Johns, HL; Sosan, OA; Salguero, FJ; Clifford, DJ; Steinbach, F.; Drew, TW; Crooke, H. El repte dels porcs amb virus de la pesta porcina clàssica després de la vacunació de la soca C revela una protecció notablement ràpida i coneixements sobre la immunitat primerenca. PLoS ONE 2012, 7, e29310. [Ref creuat]

24. Graham, SP; Haines, FJ; Johns, HL; Sosan, O.; Rocca, SAL; Làmpada, B.; Rumenapf, T.; Everett, H.; Crooke, H. Caracterització de les respostes de cèl·lules T que secreten IFN de gran reacció creuada induïdes per la vacuna que es correlacionen amb una protecció ràpida contra el virus de la pesta porcina clàssica. Vacuna 2012, 30, 2742–2748. [CrossRef] [PubMed]

25. Suradhat, S.; Intrakamhaeng, M.; Damrongwatanapokin, S. La correlació de la producció d'interferó gamma específica del virus i la protecció contra la infecció pel virus de la pesta porcina clàssica. Veterinària. Immunol. Immunopatol. 2001, 83, 177–189. [CrossRef] [PubMed]

26. Planas, D.; Veyer, D.; Baidaliuk, A.; Staropoli, I.; Guivel-Benhassine, F.; Rajah, MM; Planchais, C.; Porrot, F.; Robillard, N.; Puech, J.; et al. Sensibilitat reduïda de la variant delta del SARS-CoV-2 a la neutralització d'anticossos. Natura 2021, 596, 276–280. [Ref creuat]

27. Zhang, C.; Hu, J. Vacunes del virus de la síndrome reproductiva i respiratòria porcina: estat actual i estratègies per a una vacuna universal. Transbord. Emerg. Dis. 2014, 61, 109–120.

28. Andre, FE; Booy, R.; Bock, HL; Clemens, J.; Datta, SK; John, TJ; Lee, BW; Lolekha, S.; Peltola, H.; Ruff, TA; et al. La vacunació redueix molt la malaltia, la discapacitat, la mort i la desigualtat a tot el món. Bou. Òrgan Mundial de la Salut. 2008, 86, 140–146. [CrossRef] [PubMed]

29. Rosa, N.; Andraud, M. L'ús de vacunes per controlar la propagació de patògens en poblacions de porcs. Gerència de Salut Porcina. 2017, 3, 8. [CrossRef] [PubMed]

30. Andraud, M.; Pradera, B.; Durand, B.; Cariolet, R.; Jestin, A.; Madec, F.; Rose, N. Quantificació de la transmissió del circovirus porcí tipus 2 (PCV-2) dins i entre corrals en porcs. Veterinària. Res. 2008, 39, 43. [CrossRef]

31. Rose, N.; Andraud, M.; Bigault, L.; Jestin, A.; Grasland, B. Una vacuna comercial basada en PCV2 redueix significativament la transmissió de PCV2b en condicions experimentals. Vaccine 2016, 34, 3738–3745. [Ref creuat]

32. Rose, N.; Renson, P.; Andraud, M.; Paboeuf, F.; Le Potier, MF; Bourry, O. La vacuna viva modificada del virus de la síndrome reproductiva i respiratòria porcina (PRRSv) redueix la transmissió del virus en condicions experimentals. Vaccine 2015, 33, 2493–2499. [Ref creuat]

33. Bouma, A.; De Smit, AJ; De Jong, MCM; De Kluijver, EP; Moormann, RJM Determinació de l'aparició de la immunitat de ramat induïda per la vacuna de la subunitat E2 contra el virus de la peste porcina clàssica. Vaccine 2000, 18, 1374–1381. [Ref creuat]

34. De Smit, AJ; Bouma, A.; Van Gennip, HGP; De Kluijver, EP; Moormann, RJM Els virus de la soca C quimèrica (marcador) indueixen una protecció clínica contra el virus virulent de la peste porcina clàssica (CSFV) i redueixen la transmissió de la CSFV entre porcs vacunats. Vacuna 2001, 19, 1467–1476. [CrossRef] [PubMed]

35. Van Nes, A.; Stegeman, JA; De Jong, MCM; Loeffen, WLA; Kimman, TG; Verheijden, JHM No hi ha brots importants de virus de la pseudoràbia en ramats de truges ben immunitzats. Vaccine 1996, 14, 1042–1044. [CrossRef] [PubMed]

36. Shrestha, NK; Burke, PC; Nowacki, AS; Terpeluk, P.; Gordon, SM Necessitat de la vacunació contra la malaltia del coronavirus 2019 (COVID-19) en persones que ja han tingut COVID-19. Clin. Infectar. Dis. 2022, 75, e662–e671. [CrossRef] [PubMed]

37. Gómez-Villamandos, JC; Ruiz-Villamor, E.; Bautista, MJ; Sánchez, CP; Sánchez-Cordón, PJ; Salguero, FJ; Jover, A. Canvis morfològics i immunohistoquímics en macròfags esplènics de porcs infectats amb peste porcina clàssica. J. Comp. Patol. 2001, 125, 98–109. [Ref creuat]

38. Sánchez-Cordón, PJ; Romanini, S.; Salguero, FJ; Ruiz-Villamor, E.; Carrasco, L.; Gómez-Villamandos, JC Estudi histopatològic, immunohistoquímic i ultraestructural de l'intestí en porcs inoculats amb el virus de la peste porcina clàssica. Veterinària. Patol. 2003, 40, 254–262. [Ref creuat]

39. Sah, V.; Kumar, A.; Dhar, P.; Upmanyu, V.; Tiwari, Alaska; Wani, SA; Sahu, AR; Kumar, A.; Badasara, SK; Pandey, A.; et al. Signatura de l'expressió gènica a tot el genoma en macròfags infectats pel virus de la pesta porcina clàssica i PBMC de porcs autòctons en comparació amb mestissos. Gene 2020, 731, 144356. [CrossRef]

40. Coronado, L.; Bohórquez, JA; Muñoz-González, S.; Pérez, LJ; Rosell, R.; Fonseca, O.; Delgado, L.; Perera, CL; Frías, MT; Ganges, L. Investigació de les infeccions de peste porcina clàssica cròniques i persistents en condicions de camp i el seu impacte en l'eficàcia de la vacuna. BMC Vet. Res. 2019, 15, 247. [CrossRef]

41. Rivera-Toledo, E.; Gómez, B. La persistència del virus sincicial respiratori als macròfags altera el perfil de l'expressió gènica cel·lular. Virus 2012, 4, 3270–3280. [Ref creuat]

42. Kruize, Z.; Kootstra, NA El paper dels macròfags en la persistència i la patogènesi del VIH-1. Davant. Microbiol. 2019, 10, 2828. [CrossRef]

43. Borca, MV; Gudmundsdottir, I.; Fernández-Sainz, IJ; Holinka, LG; Risatti, GR Patrons d'expressió gènica cel·lular en macròfags porcins infectats amb la soca Brescia del virus de la peste porcina clàssica altament virulenta. Res del virus. 2008, 138, 89–96. [Ref creuat]