Efectes antioxidants dels feniletanoides de Cistanche Deserticola

Contacte: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 Correu electrònic:audrey.hu@wecistanche.com

Quanbo Xiong/ Shigetoshi Kadota, "Tadato Tani,6 i Tsuneo Namba"

L'extracte d'acetona-H2O (9:1) de la tija de Cistanche deserticola va mostrar una forta activitat eliminadora de radicals lliures. D'aquest extracte es van aïllar nou compostos feniletanoides principals. Van ser identificats per RMN com acteòsid, isoacteòsid, l^acetilacteòsid, tubulòsid B, equinacòsid, tubulòsid A, siringalida A 3z-a-rhamnopiranòsid, cistàsid A i cistàsid F. Tots aquests compostos van mostrar activitats d'eliminació de radicals lliures més fortes que un -tocoferol sobre el radical 1,1 -difeniI-2-picrilhidrazia 1 (DPPH) i la xantina/xantina oxidasa (XOD) van generar un radical anió superòxid (Oj). Entre els nou compostos, l'isoacteòsid i el tubulósid B, la part cafeoil dels quals es troba a la posició d' de la glucosa, van mostrar un efecte inhibidor sobre XOD. Vam estudiar més els efectes d'aquests feniletanoides sobre la peroxidació lipídica en microsomes de fetge de rata induïda per mètodes enzimàtics i no enzimàtics. Com era d'esperar, cadascun d'ells va mostrar una inhibició significativa tant de l'àcid ascòrbic/Fe2 plus com de l'ADP/NADPH/Fe3 més la peroxidació lipídica induïda en microsomes de fetge de rata, que eren més potents que l'a-tocoferol o l'àcid cafeic. Es va trobar que l'efecte antioxidant es va potenciar per un augment del nombre de grups hidroxil fenòlics a la molècula.

Paraules clau: Cistanche deserticola; feniletanoides;antioxidant; radical DPPH (1 ,1 -difenil-2-picrilhidrazil); radical anió superòxid; peroxidació lipídica

tija de Cistanche deserticola

La tija de Cistanche spp. (Cistanche Herba, família Orobanchaceae) és un tònic de la medicina tradicional xinesa utilitzat per a la deficiència del ronyó caracteritzat per impotència, sensació de fred a lloms i genolls, esterilitat femenina i restrenyiment a causa de la sequedat de l'intestí en el senil.D'aquestes plantes s'han aïllat una sèrie de components, inclosos els feniletmoides (de vegades anomenats fenilpropanoides),2) iridoides3* i polisacàrids4). Sato et al5} van informar que alguns feniletanoides d'aquest fàrmac brut van mostrar un efecte protector contra la disminució dels comportaments sexuals i d'aprenentatge en ratolins penjats carregats d'estrès. Els feniletanoides són els components principals d'aquestes plantes i es considera que contribueixen a les diferents accions d'aquest fàrmac.6)

Els feniletanoides estan àmpliament distribuïts al regne vegetal i s'ha trobat que alguns tenen l'activitat d'antianòxia, 7) antineoplàsia, 8) inhibició enzimàtica, 9* antiinflamació, 10) antinefritis, 1 n antimicroorganisme i immunomodulació.12) També es van informar estudis sobre l'activitat antioxidant d'alguns feniletanoides de Pedicularis,13 -15), però no es va trobar cap informe que tractessin l'activitat antioxidant dels feniletanoides de les espècies de Cistanche.

És ben reconegut que els radicals lliures estan implicats de manera crítica en diverses patogènesis com ara càncer, trastorns cardiovasculars, artritis, inflamació, així com en els processos degeneratius associats a l'envelliment. , vam trobar que cadascun dels extractes de CHC13 (C), EtOAc (E), acetona (A), acetona-H2O (9:1) (AH) i aigua (H) de la tija de Cistanche deserticola mostraven un potent DPPH activitat d'eliminació de radicals (Fig. 1), entre els quals, el més fort va ser exhibit per l'extracte d'acetona (H?.(9:1) (AH). L'extracte d'acetona-H2O (9:1) contenia una proporció elevada de feniletanoides, que probablement eren components actius dels efectes d'eliminació de radicals lliures. Vam aïllar els principals feniletanoides d'aquest extracte i vam estudiar els efectes antioxidants mitjançant la seva eliminació del radical DPPH i el radical anió superòxid generat xantina/XOD i la seva inhibició de l'àcid ascòrbic/Fe2 plus i ADP/NADPH/Fe3 més la peroxidació lipídica induïda al fetge de rata. microsomes.

Cistanche deserticola

MATERIALS I MÈTODES

Reactius Poliamida C-200 (75一150/zm) i gel de sílice (Wakogel C{-200, 75—150^m) en pols per a cromatografia en columna, DPPH (1,1 -difenil{{ 8}}picrilhidrazil), xantina, XOD (xantina oxidasa), NBT (tetrazoli nitroblau), ADP, g-NADPH, àcid cafeic i a-tocoferol es van comprar a Wako Pure Chemicals, Osaka, Japó. El malonaldehid bis (dimetilacetal) era de Tokyo Kasei, Tòquio, Japó. BSA (albúmina sèrica bovina) i alopurinol eren de sigma, St. Louis, EUA Altres productes químics eren de grau analític.

L'absorbància UV dels instruments es va mesurar en aL'espectrofotòmetre d'enregistrament Shimadzu UV-2200, els espectres de RMN es van portar a un sistema JEOL GX-400 o un sistema JEOL JNM-LA 400WB FT RMN.

Materials vegetals Un fàrmac brut comercial (produït a Nei Monggol, comprat al mercat de drogues bruts de Bozhou, província d'Anhui, Xina, 1995; el val speci men, TMPW núm. 15479 dipositat al Museu de Matèria Mèdica, Centre d'Investigació Analítica d'Etnomedicina, Recerca Institute for Wakan-Yaku, Toyama Medical and Pharmaceutical University) es va identificar com a tiges de Cistanche deserticola YC Ma comparant els seus caràcters morfològics i anatòmics amb una mostra autèntica proporcionada pel professor Dawen Shi, Departament de Farmacognòsia, Universitat Mèdica de Xangai, Xina.

Extracció i aïllament El fàrmac brut en pols (5,87 kg) es va extreure consecutivament amb CHC13 (12, 9 1x2) i EtOAc (9 1 x 3) a temperatura ambient i es va refluxar amb acetona (9 1 x 3), acetona-玦0 (9:1,91x3) i H2O (7.5 1x4) per donar els extractes de CHC13 (C) (28,7 g), EtOAc (E) ( 13,4 g), acetona (A) (95 g), acetona- H2O (9:1) (AH) (175 g) i H2O (H) (2,51 kg), respectivament. Una part de lOOg de l'extracte d'acetona-H2O (9:1) es va sotmetre a una columna de poliamida C-200 (4{{50}}0 g) i es va eluir amb H2O ({{41 }}) i després MeOH (5 1). L'eluent MeOH (20 g) es va carregar a una columna de gel de sílice (600 g) i es va eluir amb CHCl3-MeOH-H2O (8: 3:0,3) (5 1) per donar 10 fraccions. Cada fracció es va sotmetre a una columna Sephadex LH-20 i es va eluir amb diverses proporcions de MeOH-H2O (0 一 50 per cent); nou feniletanoides principals 1 (607 mg), 2 (286 mg), 3 (43 mg), 4 (187 mg), 5 (1,1 g), 6 (100 mg), 7 (208 mg), 8 (168 mg) , es van obtenir 9 (75 mg).

Animals Mascle Std: es van utilitzar rates Wistar (8 setmanes d'edat, 230 × 250 g). Els animals es van comprar al Centre d'Animals del Laboratori de Shizuoka i es van alimentar amb un menjar de pellets de laboratori (Clea Japan) i se'ls va donar aigua ad libitum.

Preparació de la suspensió microsòmica de fetge de rata La fracció microsòmica de fetge de rata es va preparar pel mètode de Kiso et al.19) però sense tractament previ de fenobarbital. Després que els animals havien dejunat durant 24 h, els fetges es van perfondre amb una solució de NaCl 0,9 per cent gelada in situ, després es van tallar en trossos prims i es van homogeneïtzar en una solució freda de KC1 a l'1,15 per cent (1.{{9}). } ml/g de pes de fetge humit). L'homogeneïtat es va diluir quatre vegades amb una solució de KC1 a l'1,15 per cent i es va centrifugar a 8000 g durant 20 min a 4 graus. A continuació, es va recollir la fracció sobrenedant i es va ultracentrifugar a 105.000 g durant 60 min. El pellet obtingut es va tornar a suspendre en el mateix volum de solució de KC1 a l'1,15 per cent. El contingut de proteïnes es va determinar pel mètode de Lowry et utilitzant albúmina com a estàndard.

Preparació de la mostra Les mostres provades es van dissoldre en aigua o etanol i es van diluir amb aigua a diverses concentracions. Les concentracions finals d'etanol estaven per sota de l'1 per cent en tots els sistemes d'assaig, excepte l'assaig d'eliminació de radicals DPPH. L'etanol a una concentració final inferior a l'1 per cent no va mostrar cap efecte en aquests sistemes d'assaig.

Efecte d'eliminació del radical DPPH L'efecte d'eliminació corresponia a la intensitat de l'extinció del radical DPPH, tal com descriu Hatano et al.21) Es van afegir cinc-cents /A de 60 卩m DPPH en EtOH a 500 /zl de solució de mostra i es van deixar reaccionar per 30 min a temperatura ambient, després es va mesurar la densitat òptica a 520 nm. Per al blanc, es va utilitzar EtOH en lloc de la solució de DPPH i, per al control, es va utilitzar H2O en lloc de la solució de mostra. Els valors IC50 es van calcular a partir de línies de regressió on l'abscissa representava la concentració del compost provat i l'ordenada el percentatge mitjà de reducció del radical DPPH de quatre proves separades.

Efectes sobre la generació de radicals d'anions superòxid La producció d'anions superòxid en el sistema xantina/XOD es va determinar utilitzant la meitat de la mida del mètode d'Imanari et al.22) Una barreja composta per 900/zl de 0,05 m de Na2CO3 (pH 10,2), 50 /il cadascun de 3 mM de xantina, 3 mM d'EDTA, 1,5 mg/ml de BSA, 0,75 mM de NBT i la mostra provada es va afegir amb 50 de 0,1 mg/ml de XOD per iniciar el reacció. Després d'incubació durant 30 min, la reacció es va aturar amb 50 /il de CuCl2 6 mM i es va mesurar l'absorbància a 560 nm. La solució de control es va preparar de la mateixa manera, però es va utilitzar 50 /il d'H2O en lloc de la solució de mostra. En la solució en blanc, es va utilitzar 50 /il d'H2O en lloc de la solució XOD. Els valors IC50 es van calcular a partir de línies de regressió on l'abscissa representava la concentració logarítmica del compost provat i l'ordenada el percentatge mitjà d'inhibició de la reducció de NBT de quatre en proves dependents.

Efectes inhibidors sobre l'activitat de XOD Els efectes inhibidors sobre l'activitat de XOD es van estimar pel mètode de Hatano et al.* amb algunes modificacions. Una mescla formada per 600/11 d'un tampó (0,1 m de solució de fosfat, pH 7,5), 50 以 de solució XOD (0,068 U/ml en tampó) i 50 卩 1 de solució de mostra es va preincubar durant 10 min a 25 graus. A continuació, es van afegir 300 pl de solució de xantina (0, 1 mM en tampó) a la barreja i la solució resultant es va incubar durant 30 min a 25 graus. La reacció enzimàtica es va acabar afegint 1 n HC1 (100 /zl) i es va mesurar l'absorbància de la barreja de reacció a 295 nm. La concentració d'àcid úric format a la mescla es va calcular a partir de l'absorbància, després de restar l'absorbància de la solució en blanc que es va preparar tal com es descriu anteriorment, excepte que la solució XOD es va substituir per 50 /zl del tampó. Els efectes inhibidors sobre XOD es van expressar pel percentatge d'inhibició (per cent) de formació d'àcid úric en comparació amb el control, en el qual es va utilitzar aigua en comptes de la solució de mostra. El conegut inhibidor de XOD, l'allopurinol, es va utilitzar com a control positiu.

Efectes inhibidors sobre la peroxidació lipídica en microsomes de fetge de rata La peroxidació de lípids en microsomes de fetge de rata induïda no enzimàticament per ascòrbic/Fe2 plus i induïda enzimàticament per ADP/NADPH/Fe3 plus es va mesurar pel mètode de Kiso et al.19) amb algunes modificacions. .

a) Àcid ascòrbic/Fe2 més peroxidació lipídica induïda en microsomes de fetge de rata: la barreja de reacció estava composta per 390/11 d'100 mM KC1/45 mM Tris-HCl (pH 8,0), 50 pl. de fracció microsòmica en 1,15 per cent de KC1 (20 mg de proteïna/ml) i 50 以 d'una solució de mostra. Després d'afegir 10/11 d'àcid ascòrbic 10 mM/0,5 mM de FeSO4 i després incubar a 37 graus durant 20 min, la barreja de reacció es va refredar en gel per aturar la reacció. La peroxidació lipídica es va mesurar pel mètode de l'àcid tiobarbitúric24) i es va expressar com a producció de MDA (malondialdehid). Això

b) ADP/NADPH/Fe3 més peroxidació lipídica induïda en microsomes de fetge de rata: la barreja de reacció contenia 29 0贝 de 100 mM de KC1/45him Tris-HCl (pH 8,0), 50/il de suspensió microsòmica en 1,15 per cent de KC1 (20 mg de proteïna/ml) i 50 以 de mostra en aigua. Es van afegir cinquanta d'ADP 20 mM acabats de preparar, 50//I de NADPH 1 mM i 10 de FeCl3 2 mM i després es van incubar a 37 graus durant 30 min. Es va mesurar la peroxidació lipídica i es va calcular l'IC50 pel mètode anterior.

Beneficis del cistanche: protegir el fetge

RESULTATS

Determinació de l'estructura Mitjançant la comparació directa de les seves dades ^H-NMR i 13C-RMN amb la literatura2*, els nou feniletanoides es van identificar com a 2,-acetilacteòsid (1), cistàsid A (2), tubulòsid A (3), equinacòsid ( 4), acteòsid (5), siringalida A 3'-a-ramnopiranòsid (6), tubulòsid B (7), isoacteòsid (8) i cistanòsid F (9), respectivament (Fig. 2). Tanmateix, per a l'acteòsid, un compost representatiu de feniletanoides, assignacions dels senyals de 13C-RMN de C-3 i C-4 a la fracció aglicona, C-3, C-4 , C-5 i C{-6 a la part cafeica en informes anteriors25) eren confús. Mitjançant el mètode de RMN 2D com HMBC i HMQC, vam assignar sense ambigüitats les dades de RMN 13C de l'acteòsid com a fracció d'aglicona Cl: 131,49, C-2: 117,14, C-3: 146,07, C{ {41}}: 144,62, C-5: 116,34, C-6: 121,29, Ca: 72,33, C# 36,54; fracció cafeoil Cl: 127,63, C-2: 115,26, C-3: 146,79, C-4: 149,78, C-5: 116,55, C{-6: 123,24 , Ca: 168,33, Cg: 114,68, Cy: 148,04; fragment de glucosa C-l': 104,16, C-2': 75,97, C-3': 81,66, C4: 70,39, C-5': 76,16, C-6' : 62,35; i ramnosa: Cl: 102,99, C-2: 72,22, C-3: 72,05, C-4: 73,79, C{-5: 70,58, C-6 : 18,46.

Les relacions estructura-activitat es van estudiar per a aquests nou feniletanoides mitjançant el seu radical DPPH i les activitats d'eliminació de radicals d'anions superòxid generades xantina/XOD, àcid ascòrbic/Fe2 plus i ADP/NADPH/ Fe3 més la peroxidació lipídica induïda en microsomes de fetge de rata. L'àcid cafeic i l'a-tocoferol, coneguts com a eliminadors de radicals lliures i antioxidants, es van utilitzar com a substàncies de control positiu.

DPPH Radical Scavenging Activity All of the nine phenylethanoids showed stronger DPPH radical scav-enging activity than either a-tocopherol or caffeic acid, except that cistanoside A (2), syringalide A 3'-a-rhamno- pyranoside (6) and cistanoside F (9) showed weaker activity than caffeic acid (Fig. 3). The activity order was tubuloside B ⑺(IC50 = 2.99 ^m) > echinacoside ⑷ (IC50 = 3.29 fiM)M 2z-acetylacteoside ⑴(IC50 = 3.30 /im) M tubuloside A (3) (IC50 = 3.34/im) acteoside (5) (IC50 = 3.36 〃m)> isoacteoside (8) (IC50 = 3.49 ^m) >caffeic acid (IC50 = 4.79 /2M)> cistanoside A (2) (IC5O = 4.87 /im)>siringalida A S'-a-ramnopiranòsid (6) (IC5O=5,52 /zm) > cistànosida F (9) (IC{50=6},29 /im) > a-tocoferol (IC{{10 }}.2//m). Tubulòsid B ⑺, echinacòsid (4), 2/-acetilacetòsid (1), tubulòsid A (3), acteòsid (5) i isoacteòsid (8) (IC5O=2,99一3,49 /im), cadascun dels quals té quatre grups hidroxil fenòlics a la molècula, de manera similar, va mostrar una activitat més forta que el cistanòsid A (2) la part 3-OH de la glicona del qual va ser metilada. Syringalide A 3z-a-rhamnopiranòsid (6) que només té un grup OH a la fracció aglicona va mostrar una activitat relativament feble. El cistanoside F (9), que només té dos grups hidroxil situats a la part cafeoil però no té feniletanol-glicona, va mostrar l'activitat més feble.

Effects on Superoxide Anion Radical Generation All the tested compounds exhibited a stronger inhibitory activity than a-tocopherol but weaker than caffeic acid on the generation of superoxide anion radical (Fig. 4). The activity order was caffeic acid (IC5()= 1.82jUM)>2'- acetylacteoside (1) (IC50 = 2.25 /im) tubuloside B ⑺ (IC50 = 2.34jUM) >echinacoside (4) (IC50 = 2.74juM)^ isoacteoside (8) (IC50 = 2.88 /zm) acteoside (5) (IC50 = 2.89 f/M) >cistanoside F (9) (IC5o = 3.13 rm) tubuloside A (3) (IC50 = 3.17 jUM)syringalide A 3'-a-rhamnopyrano- side (6) (IC50 = 3.20^m)>cistanòsid A (2) (IC5O=3.69 jUm) > a-tocoferol (IC50 > 10 〃m).

Efectes inhibidors sobre l'activitat de XOD Només l'isoacteòsid (8) i el tubulòsid B (7), la part cafeoil dels quals es troba a la posició 6z de la glucosa, van tenir efectes inhibidors sobre l'activitat de XOD i altres feniletanoides, que tenen una part cafeoil a la ^- la posició de la glucosa, no va mostrar efectes a les concentracions provades (25 × 200 m) (taula 1). aïllar nou compostos feniletanoides principals d'aquest extracte i determinar les seves estructures per RMN. sistema com a tubulòsid B (7)M2'-acetilacteòsid (1) iso-acteòsid (8) equinacòsid (4) tubulòsid A (3) M acteo costat (5) > siringalida A 3'-a-ramnopiranòsid (6) > cistanòsid A (2) > cistanòsid F (9); en el sistema ADP/NADPH/Fe3 més com a tubulòsid B (7)2,-acetilacteòsid (^^iso acteòsid (8) acteòsid (5) > tubulósid A (3) > costat echinaco (4) > siringalida A 3z-a-ramnopiranòsid (6) > cistàsid A (2) > cistanòsid F (9). Ambdós ordres eren similars als de les proves d'eliminació de radicals lliures anteriors, especialment en la prova d'eliminació de radicals DPPH. Tot i així, el nombre de grups hidroxil fenòlics a la molècula va tenir el paper més important en la inhibició de la peroxidació lipídica en els microsomes del fetge de rata.

efectes del cistanche

DISCUSSIÓ

Vam provar les activitats d'eliminació de radicals lliures dels diferents extractes de dissolvents de la tija de Cistanche deserticola sobre el radical DPPH i vam trobar que l'extracte d'acetona-H2O (9:1) presentava l'activitat més forta. Per trobar els components actius de l'activitat d'eliminació de radicals lliures, vam aïllar nou compostos feniletanoides principals d'aquest extracte i vam determinar les seves estructures per RMN.

Els efectes antioxidants d'aquests feniletanoides es van avaluar mitjançant la seva activitat d'eliminació de radicals lliures i l'activitat anti-peroxidació dels lípids. L'a-tocoferol, àmpliament conegut, es va utilitzar com a substància de control positiu. Com elLa lipofilia de l'a-tocoferol pot afectar les seves activitats en els sistemes d'assaig actuals, excepte en l'assaig d'eliminació de radicals DPPH, vam prendre l'àcid cafeic com una altra substància de control positiu.

En primer lloc, vam realitzar proves sobre les activitats d'eliminació de radicals lliures. Tots els 9 feniletanoides provats, sens dubte, van mostrar activitats d'eliminació de radicals anions superòxid i radical DPPH més fortes que l'a-tocoferol, però alguns eren més forts i altres més febles que l'àcid cafeic. L'activitat d'eliminació de radicals va augmentar amb un augment del nombre de grups hidroxil fenòlics. Es creia que el paral·lelisme incomplet de les activitats d'eliminació del radical DPPH i d'anions superòxid es devia als diferents caràcters entre les espècies radicals i alguns altres factors implicats en aquests dos sistemes de reacció,21,26) perquè el radical DPPH és un radical induït químicament que reacciona. amb eliminadors de radicals d'una manera química senzilla, mentre que el radical anió superòxid és generat per xantina/XOD, una reacció enzimàtica.

Si els feniletanoides inhibeixen el radical anió superòxid generat amb xantina/XOD, la inhibició es podria considerar com el resultat de la seva activitat d'eliminació del radical anió superòxid o (i) la seva inhibició de l'enzim XOD,23), així que vam realitzar una prova del seu efectes inhibidors de la xantina oxidasa. És interessant que, de manera selectiva, només l'isoacteòsid (8) i el tubulósid B (7), la part cafeoil dels quals es troba a la posició 6/-de la glucosa, van demostrar inhibició. Van mostrar un efecte a la concentració de 25—200jtiM en 3,4xlO^3U/ml (10jug/ml) de XOD, tot i que l'activitat era més feble que l'al·lopurinol; altres compostos, la part cafeoil dels quals es troba a la posició《-de la glucosa, no van mostrar cap efecte inhibidor. Aquest resultat va proporcionar el primer informe de l'efecte inhibidor dels feniletanoides sobre l'enzim XOD. Chan et al21) van informar que l'àcid cafeic i alguns dels seus anàlegs tenien efectes inhibidors sobre l'activitat XOD, però, no vam trobar cap efecte de l'àcid cafeic en les condicions de reacció actuals. En aquesta prova, la concentració de XOD va ser similar a la de la prova d'efecte sobre la generació de radicals anions superòxid (4,3 /zg/ml), però la concentració de compostos va ser molt més alta que en aquest últim. Per tant, la inhibició de la generació d'Oj per part d'aquests feniletanoides es deu a la seva activitat d'eliminació de radicals, però no a la seva activitat inhibidora de l'enzim XOD.

Que la reacció en cadena dels radicals lliures finalment condueix a la peroxidació lipídica és ben coneguda.28,29) Per tant, hem estudiat aquests compostos feniletanoides pels seus efectes sobre la peroxidació lipídica en microsomes de fetge de rata induïda pel sistema enzimàtic ADP/NADPH/Fe3 plus i la induïda per el sistema no enzimàtic àcid ascòrbic/Fe2 plus . Tots aquests compostos van mostrar efectes de peroxidació anti-lípids més forts que l'àcid cafeic i l'a-tocoferol en ambdós sistemes. En general, s'accepta que ambdós sistemes estan catalitzats per ions de ferro, ja sigui Fe2 més o Fe3 més, implicats amb radicals peroxil lipídic,30,31) i que el radical hidroxil OH té el paper més important en la peroxidació lipídica,32 _34) tot i que l'inici de l'OH s'ha qüestionat en alguns informes.35祁6) D'altra banda, el radical anió superòxid OJ, que és el producte primari de l'atac de e_ a l'O2 a la cadena radical, és bastant pobre. radical reactiu i no provoca peroxidació lipídica en si. Tot i que aquests feniletanoides van mostrar una activitat d'eliminació més feble del radical anió superòxid que l'àcid cafeic, van mostrar una acció de peroxidació anti-lípid molt més forta que aquest últim. Per tant, creiem que, com alguns altres polifenols aromàtics i trencadors de cadenes, poden inhibir la peroxidació lipídica anterior als microsomes del fetge de rata mitjançant la quelació dels ions Fe2 més o Fe3 més, i també eliminant el radical superòxid Oj per trencar la reacció radical en cadena. .37,38) A més, també poden eliminar espècies de radicals més tòxics com el radical hidroxil i els radicals peroxil lipídic per interrompre directament la peroxidació lipídica a una potència més alta que l'àcid cafeic.38,39)

Li et al. va estudiar alguns glicòsids feniletanoides, inclosos l'acteòsid (verbascòsid) (5), l'isoacteòsid (isoverbascòsid) (1) i l'equinacòsid (4) de Pedicularis per la seva inhibició de l'autooxidació de l'àcid linoleic a les micel·les, un sistema no biològic,13) per la seva protecció contra l'hemòlisi oxidativa in vitro,14''1 i també pels seus efectes eliminadors sobre NBT/PMS/NADH van generar superòxid i inhibició de la peroxidació lipídica induïda per l'àcid ascòrbic/Fe2 plus en microsomes del fetge de ratolí.15) Una activitat similar. -Estructura es va observar en els informes de Li et al. i els nostres resultats. És a dir, les activitats dels feniletanoides per inhibir la peroxidació lipídica depenen principalment del nombre i la posició estèrica dels grups hidroxil fenòlics.15) Sobre la base de la seva estereoquímica, els grups hidroxil fenòlics de la fracció cafeoil de l'acteòsid (5), tubulòsid A ( 3), i l'equinacòsid (4), que tenen el cafeoil a la posició 4z de la glucosa, formarien més fàcilment un enllaç d'hidrogen amb els grups hidroxil del ramnosil que els de l'isoacteòsid (8) i el tubulòsid B (7), que tenen el cafeoil a la posició 6' de la glucosa. Així, aquest últim reservava més grups hidroxil fenòlics lliures que el primer i, per tant, mostrava una activitat anti-peroxidació lipídica més forta. També vam observar que l'acetilació 2z d'aquests feniletanoides, encara que lleugerament, millorava els seus efectes antioxidants. Per exemple, l'acteòsid (5) i l'isoacteòsid (8), quan 2'-acetilat en 2/-acetilacteòsid (1) i tubulòsid B (7), respectivament, van mostrar activitats més fortes en els quatre sistemes d'assaig. A causa de la superioritat de l'estereoquímica i l'acetilació 2', el tubulósid B (7) va mostrar l'activitat antioxidant més forta entre les mostres provades. Potser a causa de la substitució d'un tercer fragment de sucre a la posició 6'~, aquesta correlació no encaixava bé en el cas del tubulòsid A (3) o de l'equinacòsid (4); tanmateix, en el sistema ADP/NADPH/Fe3 plus, el tubulósid A ⑶ encara presentava una activitat anti-peroxidació lipídica més forta que l'echinacòsid (4).

A més, l'ordre de l'activitat d'eliminació de radicals DPPH va mostrar un millor paral·lelisme amb el de la peroxidació anti-lípid que l'ordre de l'activitat d'eliminació de radicals anions superòxid. Això va tornar a demostrar que l'assaig d'eliminació de radicals DPPH és un mètode convenient i fiable per a l'assaig d'antioxidants,26) tot i que el radical DPPH és un radical induït químicament mentre que el radical anió superòxid podria ser un radical biològicament endògen.

En conclusió, tots els nou feniletanoides van mostrar activitats significatives d'eliminació de radicals lliures i efectes anti-peroxidació dels lípids en el present estudi. L'efecte antioxidant es va potenciar per un augment del nombre de grups hidroxil fenòlics a la molècula. Com es pot imaginar, els efectes antioxidants d'aquests feniletanoides demostrats aquí poden tenir un paper important en les accions del fàrmac Cistanchis Herba i poden explicar en part els mecanismes de l'activitat d'alguns feniletanoides contra la neoplàsia, la inflamació8* i la nefritis. 1 n en què els radicals lliures estan seriosament implicats.

Cistsanche Echinacoside: Antioxidació

REFERÈNCIES

1) Namba T., "The Encyclopedia of Wakan-Yaku (Traditional Sino-Japanese Medicines) with Color Pictures, 5, Vol. II, Hoikusha, Tòquio, 1994, pàg. 16—17.

2) a) Kobayashi H,, Karasawa H., Miyase T., Fukushima S., Chem. Pham. Bull, 32, 3009—3014 (1984); b) Ídem, ibid., 32, 3880—3885 (1984); c) Ídem, ibid., 33, 1452—1457 (1985); d) Karasawa H., Kobayashi H., Takizawa N., Miyase T., Fukushima S., Yakugaku Zasshi, 106, 562—566 (1986); e) Ídem, ibid., 106, 721—724 (1986); /) Kobayashi H., Oguchi H., Takizawa N., Miyase T., Ueno A., Usmanghani K., Ahmad M., Chem. Farmàcia. Bull., 35, 3309一3314 (1987); g) Yoshizawa F., Deyama T., Takizawa N., Usmanghani K., Ahmad M., ibid., 38, 1927—1930 (1990).

3) a) Kobayashi H, Komatsu J., Yakugaku Zasshi, 103, 508一511 (1983); b): Kobayashi H., Karasawa H., Miyase T., Fukushima S., Chem. Farmàcia. Bull., 32, 1729—1734 (1984); c) Ídem, ibid., 33, 3645—3650 (1985).

4) Naran R., Ebringerova A., Hromadkova Z., Patoprsty V., Phytochemistry, 40, 709—715 (1995).

5) Sato T., Kozima S., Kobayashi K., Kobayashi H., Yakugaku Zasshi. 105, 1131—1144 (1985).

6) Jin XL, Zhang QR, China J. Chinese Materia Medica, 19, 695—697 (1994).

7) Yamahara J., Kitani T., Kobayashi H., Kawahara Y., Yakugaku Zasshi, 110, 932—935 (1990).

8) a) Pettit G. R・,Numata A., Takemura T., Ode RH, Narula A, S., Schmidt JM, Cragg GM, Pase CP, J. Nat. Prod., 53, 456— 58 (1990); b) Saracoglu I., Inoue M., Calis I., Ogihara Y., Biol. Pharm, Bull., 18, 1396—1400 (1995).

9) Andary C., '4 Èsters de glicòsids de l'àcid cafeic i farmacologia/ ed. de Scalbert A., Polyphenolic Phenomena, Edicions INRA, París, 1993, pàg. 237—245.

10) Murai M., Tamayama Y., Nishibe S., Planta Med.. 61, 479― 80 (1995).

11) Hayashi K., Nagamatsu T., Ito M., Hattori T., Suzuki Y., Jpn. J. Pharmacol., 66, 47一52 (1994).

12) a) Molnar J., Gunics G., Mucsi I., Koltai M., Petri L, Shoyama Y., Matsumoto M., Nishioka L, Acta Microbiol. Hung.. 36, 425― 32 (1989); b) Sasaki H., Nishimura T., Morota T., Chin M., Mitsuhashi H" Komatsu Y., Maruyama H., Tu GR, He W., Xiong YL, Planta Med., 55, 4582462 (1989).

13) Li J., Wang PF, Zheng RL, Liu ZM, Jia 乙 J., Planta Med., 59, 315—317 (1993).

14) Zheng RL, Wang PF, Li J., Liu Z. M,, Jia ZJ, Chem. Phys. Lípids. 65, 151—154 (1993).

15) Li J., Zheng RL, Liu 乙 M., Jia 乙 J., Acta Pharmacol. Sinica, 13, 427T30 (1992).

16) Barber DA, Harris SR, American Pharmacy. 34, 26 i 35 (1993).

17) Elstner EF, Klin Wochenschr, 69, 949—956 (1991).

18) Martin GR, Danner DB, Holbrook NJ, Ann. Rev. Med., 44, 419—29 (1993).

19) Kiso Y., Tohkino H., Hattori M., Sakamoto T., Namba T., Planta Med.. 50, 298—302 (1984).

20) Lowry OH, Rosebrough NJ, Farr AL, Randall RJ, J. Biol. Chem.. 193, 265—275 (1951).

21) Hatano T., Edamatsu R., Hiramatsu M., Mori A., Fujita Y., Yasuhara T" Okuda T., Chem. Pharm. Bull., 37, 2016一2021 (1989).

22) Imanari T., Hirota M., Miyazaki M., Igaku No Ayumi, 101, 496—497 (1977).

23) Hatano T., Yasuhara T., Yoshihara R., Agata L, Noro T., Okuda T., Chem. Farmàcia. Bull., 38, 1224—1229 (1990).

24) Ohkawa H., Ohishi N., Yagi K., Anal. Biochem., 95, 351-358 (1979).

25) a) Lahloub M, F., Zaghloul AM, El-Khayat SA, Afifi MS, Sticher O., Planta Med.. 57, 481— 85 (1991); b) Nishimura H., Sasaki H., Inagaki N., Chin M. (Zhen 乙 X.), Mitsuhashi H., Fitoquímica. 30, 965—969 (1991); c) Budzianowski J., Skrzypczak L., ibid., 38, 997—1001 (1995),

26) Marsden SB, Nature (Londres), 181, 1199—1200 (1958).

27) Chan WS, Wen PC, Chiang HC, Anticancer Res., 15, 703一 708, (1995).

28) Janero DR, Burghardt B., Biochem, Pharmacol.. 37, 3335一3342 (1988).

29) Buettner GR, Arch. Bioquímica. Biophys., 300, 535一543 (1993).

30) Herbert V., Shaw S., Jayatilleke E., Stopler-Kasdan T., Stem Cells, 12, 289—303 (1994).

31) Aust SD, Miller DM, Samokyszyn VM, Methods Enzymol., 186, 457—463 (1990).

32) Kubota S., Ikegami Y., Kurokawa T., Sasaki R., Sugioka K., Nakano M., Biochem. Biofísica. Res, Commun., 108, 1025一1031 (1982).

33) Yagi K., Ishida N., Komura S., Ohhishi N., Kusai M., Kohno M., Biochem. Biofísica. Res. Commun., 183, 945一951 (1992).

34) Hockenbery DM, Oltvai ZN, Yin XM, Milliman CL, Korsmeyer SJ, Cell. 75, 241—251 (1993).

35) Bucher JR, Tien M., Aust AD, Biochem. Biofísica. Res, Commun., Ill, 777—784 (1983).

36) Yoshida T., Otake H., Aramaki Y., Hara T., Tsuchiya S., Hamada A., Utsumi H., Biol. Farmàcia. Bull.. 19, 779—782 (1996).

37) Afanas5 EVIB, Dorozhko A. L, Brodskii AV, Kostyuk VA, Potapovitch L A., Biochem. Pharmacol., 38, 1763—1769 (1989).

38) Robak J., Gryglewski RJ, Biochem. Pharmacol.. 37, 837—841 (1988).

39) Chimi H., Morel I., Lescoat G., Pasdeloup N・, Cillard P., Cillard J., Toxicology in Vitro, 9, 695一702 (1995)