Biovigilància de micotoxines al plasma de pacients amb malaltia d'Alzheimer i ParkinsonⅢ
Apr 12, 2023
3. Conclusions
Presentem els resultats obtinguts en un primer estudi HBM sobre l'anàlisi de 19 micotoxines i metabòlits en mostres de plasma de voluntaris sans i pacients (AD i PD) a La Rioja (Espanya). Els resultats de l'estudi suggereixen algunes diferències entre el control i els pacients en els nivells d'OTA i STER. Es desconeix el motiu d'aquesta diferència. Diversos factors podrien estar influint en el resultat observat, com ara les diferències en les dietes, l'alteració del metabolisme a causa de la malaltia o el fet que el gènere i l'edat puguin tenir un paper important en els nivells de micotoxines detectades al plasma.
Feu clic a la tintura de cistanche per a la malaltia d'Alzheimer i la malaltia de Parkinson
Tots aquests factors de confusió s'han d'avaluar acuradament amb estudis que incloguin un nombre més elevat d'individus. En el present estudi, s'han observat diferències en l'OTA entre acompanyants sans i pacients, però les diferències semblen estar més relacionades amb el gènere que la malaltia en si. A més, l'OTA va tendir a disminuir amb l'edat, especialment en el grup de PD. Una de les troballes principals és que l'STER només va aparèixer després del tractament amb -glucuronidasa/arilsulfatasa, donant suport a la hipòtesi que els STER-glucurònids es formen durant el metabolisme humà. A més, es va trobar que els nivells plasmàtics de STER eren més alts en els pacients, sense diferències entre patologies. A més, els nivells de STER es correlacionen positivament amb l'edat de les dones.
A l'hora d'interpretar les dades, és important assenyalar que el present estudi no ha estat dissenyat per explicar la patobiologia de la PD o la MA, sinó per explorar si la presència d'un possible factor de risc ambiental pot actuar com a agents pertorbadors implicats en el gen. interacció amb l'entorn. Les mostres del grup control coincideixen amb les dades anteriors obtingudes en una població similar d'una regió veïna d'Espanya i utilitzen la mateixa anàlisi LC/MS-MS [35].
Tanmateix, quan es comparen individus sans entre ambdós estudis cal tenir en compte que: (i) la franja d'edat és diferent, ja que la majoria de les mostres del present estudi es van obtenir de persones majors de 60 anys, especialment en els grups d'AD i PD. , com s'esperava per a les malalties relacionades amb l'edat; i (ii) el nombre de mostres de control que és baix en el present estudi. A més, també s'han de tenir en compte altres limitacions a l'hora d'interpretar les dades del present estudi; moltes de les dades estaven molt a prop del LOD i el nombre de mostres era limitat (especialment en homes AD). En general, els nostres resultats mostren algunes diferències estadísticament significatives entre el grup de control i els pacients amb malalties neurodegeneratives, però també apunten a algunes respostes relacionades amb l'edat i el sexe que podrien estar influint al seu torn en el metabolisme.
4. Materials i Mètodes
4.1. Reactius
LC-MS grade methanol (Honeywell Riedel-de-Haën, Seelze, Germany), LC grade acetonitrile (ACN) (Merck, Darmstadt, Germany), MS grade formic acid (purity > 98%), ammonium formate (both from Fluka Sigma-Aldrich, Mannheim, Germany), and deionized water (>Es van utilitzar 18 MΩ cm−1 de resistivitat) purificats en un sistema Ultramatic Tipus I (Wasserlab, Navarra, Espanya) per a la preparació de mostres i l'anàlisi LC-MS/MS. Els cartutxos de lípids Captiva EMR (3 ml) es van obtenir d'Agilent Technologies (Santa Clara, CA, EUA).
Totes les micotoxines (material de referència, puresa superior o igual al 98 per cent) es van comprar a Sigma-Aldrich (St. Louis, MO, EUA) com a solucions d'ACN a les concentracions següents AFM1, AFG2 i AFB2: 0. 5 µg/ml; AFG1 i AFB1: 2 µg/mL; OTA-d5 i OTB: 10 µg/mL; STER i DOM-1: 50 µg/mL; NIV, DON, 3-ADON, 15-ADON, NEO, DAS, FUS-X, ZEA i toxines T-2 i HT{-2: 100 µg/mL. Els materials de referència es van emmagatzemar a -20 ◦C. Les solucions estàndard es van preparar a ACN i es van emmagatzemar a -20 ◦C. La solució de treball, que inclou totes les micotoxines, es va preparar diluint les solucions stock individuals corresponents en ACN. L'estabilitat de les solucions estàndard i d'estoc de treball en aquestes condicions d'emmagatzematge es va avaluar prèviament [36].
4.2. Subjects
Es va obtenir el consentiment informat per escrit de tots els participants abans de la inclusió de l'estudi. Un total de 94 subjectes, entre ells 44 pacients amb EP lleu, 25 pacients amb demència no relacionada amb EP i 25 controls sans, van ser reclutats del servei neurològic de l'Hospital San Pedro de La Rioja (Espanya) amb aprovació ètica ("Estudi de perfils lipídics en mostres de sèrum/plasma de pacients amb malaltia de Parkinson per a l'obtenció d'un patró clínic diferencial amb finalitats diagnòstiques" Ref: CEICLAR PI- 212, aprovat el 4 d'abril de 2016) del comitè local d'ètica d'experimentació humana (CEImLar). , Comité Ética de Investigación con medicamentos de La Rioja). Els pacients van ser diagnosticats per neuròlegs experimentats. Els pacients amb PD van ser avaluats mitjançant l'escala HY modificada (taula S3) mentre que els pacients amb demència no relacionada amb PD van ser avaluats pel GDS (taula S4) per determinar el seu estadi de malaltia. Els controls saludables van incloure cònjuges o acompanyants no relacionats de pacients sense cap malaltia neurològica o comorbiditat aparent o coneguda.
4.3. Plasma
Recollida Es van obtenir mostres de sang en una visita mèdica. La sang es va recollir en tubs recoberts d'EDTA de 4 ml (Vacutainer, ref # 368171) i el plasma es va separar en 2 h mitjançant centrifugació a 22 00 × g durant 15 min a temperatura ambient. El plasma es va eliminar immediatament i es va transferir a vials codificats en alíquotes de 0, 2 ml per evitar cicles de congelació/descongelació repetits i després es va emmagatzemar a -80 ◦ C. Es va tenir la cura adequada per evitar la contaminació de les mostres de plasma amb cèl·lules o components del pellet obtingut de la centrifugació.
4.4. Preparació de la mostració
El tractament amb plasma abans i després de la hidròlisi enzimàtica va ser el descrit a ArceLópez et al. (2020) [35,36]. De manera concisa, les mostres de plasma (400 µL) es van afegir a un cartutx de lípids Captiva EMR, que contenia 1200 µL d'ACN acidificat (1 per cent d'àcid fòrmic). Es va aplicar el buit i, al cap de 5 min, es van separar dues parts alíquotes de 400 µL (una per a cadascun dels grups de micotoxines que s'investigaran) de l'efluent i després es van evaporar a sequedat (60 ◦ C).
Aquesta metodologia es va utilitzar per a la detecció de 19 compostos (micotoxines i metabòlits), classificats en dos grups (segons els diferents programes d'elució necessaris per a la separació cromatogràfica): DOM-1, AFG2, AFM1, AFG1, AFB2, AFB1 , OTB, ZEA, STER, OTA, T-2, HT-2 (grup I) i NIV, DON, FUS-X, NEO, 3-ADON, 15-ADON i DAS (grup II). El residu es va reconstituir amb 200 µL de fase mòbil en la proporció corresponent al grup de micotoxines previst a analitzar (40 per cent B per al grup I i 5 per cent B per al grup II).
Abans de l'anàlisi cromatogràfica, la solució es va vortexar (5 min) i es va filtrar (PVDF, 0,45 µm, Merck Millipore, Irlanda). El procediment per a la hidròlisi enzimàtica va ser: 400 µL de plasma es van tractar amb 50 µL d'una barreja d'enzims glucuronidasa/sulfatasa (250 U/mL, 0,2 U/mL en PBS; de Helix Pomatia (Sigma Aldrich, Mannheim, Alemanya). Després de l'agitació, les mostres es van incubar durant la nit (37 ◦ C) en un bany d'aigua i, a continuació, es va realitzar una neteja de mostres de plasma, amb cartutxos Captiva-EMR, de manera similar a la descrita anteriorment.
4.5. Anàlisi LC/MS-MS
L'anàlisi LC-MS/MS es va realitzar en un sistema LC sèrie 1200 acoblat a un 6410 Triple Quadrupole (QqQ) en mode ESI( plus ), tots dos d'Agilent Technologies (Mannheim, Alemanya). La separació es va dur a terme a 45 ◦C en una columna Ascentis Express C18, mida de partícula de 2,7 µm de 150 × 2,1 mm (Supelco Analytical, St. Louis, MO, EUA) amb una fase mòbil composta per formiat d'amoni 5 mM i àcid fòrmic al 0,1 per cent. en aigua (A) i formiat d'amoni 5 mM i àcid fòrmic al 0,1 per cent en un metanol/aigua 95:5 (B) en condicions de gradient.
El volum d'injecció era de 20 µL i l'elució del gradient es va dur a terme a un cabal de 0,4 ml/min. Els paràmetres d'adquisició de dades es descriuen a Arce-López et al. (2020) [36]. Les mostres es van analitzar i agrupar en seqüències analítiques. Cada seqüència incloïa, juntament amb les mostres, vuit calibradors coincidents amb la matriu.
Aquests calibradors es van emprar en la preparació de corbes de calibratge, que van servir per a la quantificació de micotoxines en les mostres analitzades en la mateixa seqüència. Els criteris d'acceptació de les corbes de calibratge van ser: un mínim de sis punts, un coeficient de determinació (R2 ) > 0,99 i una concentració calculada enrere per a cada calibrador que no diferís (expressat com a RE) del valor nominal per més del 15 per cent (20 per cent per al nivell de LOQ) [32]. A més, els temps de retenció no haurien de diferir més d'un 2,5 per cent entre mostres i calibradors [33]. Segons el volum de plasma disponible, no totes les mostres es podrien analitzar després del tractament enzimàtic.
4.6. Validació del mètode analític
Validació d'ambdós procediments (abans i després de la hidròlisi enzimàtica) seguint les directrius de la FDA i la UE tal com es descriu a Arce-Lopez et al. (202{{10}}) [35,36]. Els valors de LOD van ser: 1,35 ng/mL per a DOM-1; 0,35 ng/mL per a AFG2, 0,18 ng/mL per a AFM1; 0.07 ng/mL per a AFG1 i AFB2; 0.04 ng/mL per a AFB1; 2,70 ng/mL per a HT-2; 0,40 ng/mL per a OTA i OTB; 0,20 ng/mL per a T-2 i STER; 1,80 ng/mL per a ZEA; 9,10 ng/ml per a la VNI; 1,94 ng/mL per a DON; 1,95 ng/ml per a FUS-X; 0,18 ng/ml per a NEO; 0,70 ng/mL per 3-ADON; 1,20 ng/mL per 15-ADON i 0,15 ng/mL per a DAS.
Els valors de recuperació (en condicions de precisió intermèdia) abans del tractament enzimàtic van ser del 68,8 per cent per a STER al 97,6 per cent per a DAS (RDS inferior o igual al 15 per cent per a totes les micotoxines) i no es van trobar diferències després del tractament enzimàtic. Els efectes de la matriu també es van avaluar abans i després del tractament enzimàtic, i no hi va haver diferències en la majoria de les micotoxines, obtenint valors RDS inferiors o iguals al 15 per cent per a totes. L'estabilitat després de dos cicles de congelació-descongelació es va avaluar a dos nivells de concentració (6 i 30xLOQ) (tres rèpliques per nivell). Totes les micotoxines eren estables (RSD < 15 per cent) (taula S7).
4.7. Anàlisi estadística i tractament de dades
Quan es tracten dades analítiques amb estadístiques, és important dilucidar el tipus de distribució que va caracteritzar el conjunt de dades. Els descriptors i les proves de paquet que s'han d'utilitzar són diferents si tenim dades distribuïdes de manera normal o no distribuïdes. La prova de Shapiro-Wilk es va utilitzar per verificar la distribució normal dels nivells de concentració de micotoxines investigats.
Com que es va rebutjar la hipòtesi de normalitat, es va utilitzar un conjunt de proves no paramètriques (que no implica cap suposició de distribució) per al tractament estadístic. Per avaluar les possibles diferències entre els nivells de concentració d'OTA i STER en grups i subgrups, es va utilitzar la prova de suma de rangs de Wilcoxon (estadística de dues mostres de Mann-Whitney) [49]. En estadístiques, la prova de suma de rangs de Wilcoxon és una prova no paramètrica que s'utilitza per comprovar si dues mostres és probable que derivin de la mateixa població verificant que per a dos valors seleccionats aleatòriament X i Y de les dues poblacions, la probabilitat que X sigui més gran. que Y és igual a la probabilitat que Y sigui més gran que X.
Amb el mateix propòsit, es va utilitzar una prova de Kruskal-Wallis on la col·lecció de variables implicava més d'una distribució [50]. Per avaluar la correlació entre els nivells de micotoxines i l'edat (variable quantitativa) es va utilitzar el coeficient de correlació de rang de Spearman (o rho de Spearman). Totes les proves es van realitzar amb un nivell de significació del 5 per cent. Les sortides s'informen juntament amb el nivell de significació estadística i el valor p. Totes les anàlisis es van realitzar mitjançant el programari STATA14 (Stata/IC 14.0, Copyright 1985–2015 StataCorp LP). Pel que fa al tractament de dades per a la configuració del conjunt de dades, les variables quantitatives i qualitatives es van tractar de la següent manera: nivell OTA i STER. Variable quantitativa, variable no negativa expressada com a valors en ng/mL.
Els valors es van assignar de la següent manera: Valor=0 ng/mL; quan es va trobar el resultat analític derivat de l'anàlisi
Es va utilitzar una variable quantitativa per escalar el diagnòstic dels pacients amb PD (taula S3). A més, es va definir una variable binària (HY_d=0 i HY_d=1): HY{_d=0 per a PD pacients que van puntuar l'escala HY en el rang 1-2 (no els reflexos posturals alterats); HY_d=1 per a pacients amb PD que van puntuar l'escala HY en el rang 2,5-3 (reflexos posturals alterats). escala GDS. Es va utilitzar una variable quantitativa per escalar el diagnòstic dels pacients amb AD (taula S4).
El mecanisme de Cistanche tracta la malaltia d'Alzheimer i la malaltia de Parkinson
Cistanche és una herba tradicional xinesa que s'ha utilitzat durant molts anys pels seus possibles beneficis per a la salut. En estudis recents, s'ha trobat que Cistanche pot tenir efectes neuroprotectors i pot ser eficaç en el tractament de la malaltia d'Alzheimer (MA) i la malaltia de Parkinson (MP).
El mecanisme de Cistanche en el tractament eficaç de l'AD i la PD s'atribueix als seus components actius, com l'echinacòsid, l'acteòsid i els cistanosids. Es creu que aquests compostos tenen propietats antioxidants i antiinflamatòries que poden reduir l'estrès oxidatiu i la inflamació del cervell, que s'associen amb el desenvolupament i la progressió de malalties neurodegeneratives.
Cistanche també pot promoure el creixement de les cèl·lules nervioses i millorar la funció cognitiva augmentant els nivells de factor neurotròfic derivat del cervell (BDNF), una proteïna que juga un paper crucial en el creixement i manteniment de les neurones. A més, s'ha demostrat que Cistanche redueix les plaques -amiloides, que són trets distintius de la malaltia d'Alzheimer, i disminueix l'acumulació de -sinucleïna al cervell, que s'associa amb la malaltia de Parkinson.
En general, els beneficis terapèutics potencials de Cistanche en el tractament de l'AD i la PD són prometedors, però calen estudis addicionals per dilucidar els seus mecanismes d'acció exactes i confirmar la seva eficàcia i seguretat en entorns clínics.
Referències
1Serrano-Pozo, A.; Frosch, diputat; Masliah, E.; Hyman, BT Alteracions neuropatològiques en la malaltia d'Alzheimer. Cold Spring Harb. Perspectiva. Med. 2011, 1, a006189. [Ref creuat]
2. Fearnley, JM; Lees, AJ Envelliment i malaltia de Parkinson: selectivitat regional de substància negra. Cervell 1991, 114, 2283–2301. [Ref creuat]
3. Barber, RC La genètica de la malaltia d'Alzheimer. Scientifica (El Caire) 2012, 2012, 1–14. [Ref creuat]
4. Izco, M.; Carlos, E.; Alvarez-Erviti, L. Les dues cares dels exosomes en la malaltia de Parkinson: de la patologia a la teràpia. Neuroscientist 2021, 107385842199000. [CrossRef] [PubMed]
5. Hou, Y.; Dan, X.; Babbar, M.; Wei, Y.; Hasselbalch, SG; Croteau, DL; Bohr, VA L'envelliment com a factor de risc de malalties neurodegeneratives. Nat. Rev. Neurol. 2019, 15, 565–581. [CrossRef] [PubMed]
6. Johnson, ME; Stecher, B.; Labrie, V.; Brundin, L.; Brundin, P. Activadors, facilitadors i agreujadors: redefinició de la patogènesi de la malaltia de Parkinson. Tendències Neurosci. 2019, 42, 4–13. [Ref creuat]
7. Wainaina, MN; Chen, Z.; Zhong, C. Factors ambientals en el desenvolupament i la progressió de la malaltia d'Alzheimer d'aparició tardana. Neurosci. Bou. 2014, 30, 253–270. [Ref creuat]
8. Rahman, MA; Rahman, MS; Uddin, MJ; Mamum-Or-Rashid, ANM; Pang, M.-G.; Rhim, H. Risc emergent de factors ambientals: mecanismes de coneixement de les malalties d'Alzheimer. Entorn. Ciència. Contaminar. Res. 2020, 27, 44659–44672. [CrossRef] [PubMed]
9. Bush, AI La teoria del metall de la malaltia d'Alzheimer. J. Alzheimer Dis. 2012, 33, S277–S281. [CrossRef] 10. Moulton, PV; Yang, W. La contaminació de l'aire, l'estrès oxidatiu i la malaltia d'Alzheimer. J. Entorn. Salut Pública 2012, 2012, 472751. [CrossRef]
11. Li, Y.; Fang, R.; Liu, Z.; Jiang, L.; Zhang, J.; Li, H.; Liu, C.; Li, F. L'associació entre l'exposició ambiental a pesticides tòxics i la malaltia d'Alzheimer: una anàlisi cientometria i de visualització. Chemosphere 2021, 263, 128238. [CrossRef]
12. Fulop, T.; Witkowski, JM; Bourgade, K.; Khalil, A.; Zerif, E.; Larbi, A.; Hirokawa, K.; Pawelec, G.; Bocti, C.; Lacombe, G.; et al. Pot una hipòtesi d'infecció explicar la hipòtesi beta-amiloide de la malaltia d'Alzheimer? Davant. Neurosci envelliment. 2018, 10, 224. [CrossRef]
13. Vasefi, M.; Ghaboolian-Zare, E.; Abedelwahab, H.; Osu, A. Toxines ambientals i progressió de la malaltia d'Alzheimer. Neuroquimia. Int. 2020, 141, 104852. [CrossRef]
14. Goldman, SM Toxines ambientals i malaltia de Parkinson. Ann. Rev. Pharmacol. Toxicol. 2014, 54, 141–164. [CrossRef] [PubMed]
15. Marras, C.; Canning, CG; Goldman, SM Medi ambient, estil de vida i malaltia de Parkinson: implicacions per a la prevenció en la propera dècada. Mov. Desordre. 2019, 34, 801–811. [CrossRef] [PubMed]
16. Van der Mark, M.; Brouwer, M.; Kromhout, H.; Nijssen, P.; Huss, A.; Vermeulen, R. L'ús de pesticides està relacionat amb la malaltia de Parkinson? Algunes pistes sobre l'heterogeneïtat dels resultats de l'estudi. Entorn. Perspectiva de la Salut. 2012, 120, 340–347. [CrossRef] [PubMed]
17. Gorell, JM; Johnson, CC; Rybicki, BA; Peterson, EL; Richardson, RJ El risc de la malaltia de Parkinson amb l'exposició a pesticides, l'agricultura, l'aigua de pou i la vida rural. Neurologia 1998, 50, 1346–1350. [Ref creuat]
18. Priyadarshi, A.; Khuder, SA; Schaub, EA; Priyadarshi, SS Factors de risc ambiental i malaltia de Parkinson: una metaanàlisi. Entorn. Res. 2001, 86, 122–127. [Ref creuat]
19. Mitchell, NJ; Bowers, E.; Hurburgh, C.; Wu, F. Potencials pèrdues econòmiques per a la indústria del blat de moro dels EUA per contaminació amb aflatoxines. Addició d'aliments. Contam. Part A 2016, 33, 540–550. [CrossRef] [PubMed]
20. Marín, S.; Ramos, AJ; Cano-Sancho, G.; Sanchis, V. Micotoxines: avaluació d'ocurrència, toxicologia i exposició. Química dels Aliments. Toxicol. 2013, 60, 218–237. [Ref creuat]
21. Janik, E.; Niemcewicz, M.; Ceremuga, M.; Estela, M.; Saluk-Bijak, J.; Siadkowski, A.; Bijak, M. Aspectes moleculars de les micotoxines: un problema greu per a la salut humana. Int. J. Mol. Ciència. 2020, 21, 8187. [CrossRef]
22. Logrieco, A.; Miller, J.; Eskola, M.; Krska, R.; Ayalew, A.; Bandyopadhyay, R.; Battilani, P.; Bhatnagar, D.; Chulze, S.; De Saeger, S.; et al. La carta de micotoxines: augmentar la conscienciació i l'acció concertada per minimitzar l'exposició a les micotoxines a tot el món. Toxines (Basilea) 2018, 10, 149. [CrossRef] 23. Comissió Europea. Reglament (CE) núm. 1881/2006 de la Comissió, de 19 de desembre de 2006, pel qual s'estableixen els nivells màxims de determinats contaminants en els productes alimentaris. Apagat. J. Eur. Unió 2006, 364, 5–24.
24. Parlament Europeu. Parlament Europeu i Consell de la UE Directiva del Parlament Europeu i del Consell de 7 de maig de 2002 sobre substàncies indesitjables en l'alimentació animal 2002/32. Apagat. J. Eur. Comunitats 2002, L140, 10–22.
25. Comissió Europea. Recomanació de la Comissió de 17 d'agost de 2006 sobre la presència de desoxinivalenol, zearalenona, ocratoxina A, T{3}} i HT-2 i fumonisines en productes destinats a l'alimentació animal. Apagat. J. Eur. Unió 2006, L299, 7–9.
26. Eskola, M.; Kos, G.; Elliott, CT; Hajšlová, J.; Mayar, S.; Krska, R. Contaminació mundial de cultius alimentaris amb micotoxines: validesa de l''estimació de la FAO', àmpliament citada, del 25 per cent. Crit. Rev. Food Science. Nutr. 2020, 60, 2773–2789. [CrossRef] [PubMed]
27. Escrivá, L.; Font, G.; Manyes, L.; Berrada, H. Estudis sobre la presència de micotoxines en mostres biològiques: una visió general. Toxines (Basilea) 2017, 9, 251. [CrossRef]
28. Gurusankar, R.; Yenugadhati, N.; Krishnan, K.; Hays, S.; Haines, D.; Zidek, A.; Kuchta, S.; Kinniburgh, D.; Gabos, S.; Mattison, D.; et al. El paper del seguiment biològic humà en l'avaluació de riscos per a la salut. Int. J. Avaluació de riscos. Gestionar. 2017, 20, 136–197. [Ref creuat]
29. Bredesen, DE Malaltia d'Alzheimer per inhalació: una epidèmia no reconeguda i tractable. Aging (Albany NY) 2016, 8, 304–313. [Ref creuat]
30. Martins, I. La sobrenutrició determina la regulació del LPS de la neurotoxicitat induïda per micotoxines en malalties neurodegeneratives. Int. J. Mol. Ciència. 2015, 16, 29554–29573. [CrossRef] [PubMed]
31. Izco, M.; Vettorazzi, A.; Forcen, R.; Blesa, J.; de Toro, M.; Álvarez-Herrera, N.; Cooper, JM; Gonzalez-Peñas, E.; López de Cerain, A.; Alvarez-Erviti, L. L'exposició oral subcrònica a la micotoxina ocratoxina A indueix característiques patològiques clau de la malaltia de Parkinson en ratolins sis mesos després de la finalització del tractament. Química dels Aliments. Toxicol. 2021, 152, 112164. [CrossRef]
32. Centre d'Avaluació i Recerca de Medicaments (FDA). Guia de validació de mètodes bioanalítics per a la indústria. 2018. Disponible en línia: https://www.fda.gov/files/drugs/published/Bioanalytical-Method-Validation-Guidance-for-Industry.pdf (consultat el 20 de novembre de 2019).
33. Comissió Europea. Decisió de la Comissió de 12 d'agost de 2002 per la qual s'aplica la Directiva 96/23/CE del Consell relativa a l'execució de mètodes analítics i a la interpretació dels resultats (2002/657/CE). Apagat. J. Eur. Comunitats 2002, 221, 8–36.
34. EFSA. Gestió de dades censurades a l'esquerra en l'avaluació de l'exposició dietètica de substàncies químiques. EFSA J. 2010, 8, 1–96.
35. Arce-López, B.; Lizarraga, E.; Irigoyen, Á.; González-Peñas, E. Presència de 19 micotoxines en plasma humà en una regió del nord d'Espanya. Toxines (Basilea) 2020, 12, 750. [CrossRef]
36. Arce-López, B.; Lizarraga, E.; Flores-Flores, M.; Irigoyen, Á.; González-Peñas, E. Desenvolupament i validació d'una metodologia basada en la neteja de lípids de Captiva EMR i anàlisi LC-MS/MS per a la determinació simultània de micotoxines en plasma humà. Talanta 2020, 206, 120193. [CrossRef]
37. Remiro, R.; González-Peñas, E.; Lizarraga, E.; López de Cerain, A. Quantificació d'ocratoxina A i cinc anàlegs en vins negres de Navarra. Food Control 2012, 27, 139–145. [Ref creuat]
38. Yang, S.; Zhang, H.; De Saeger, S.; De Boevre, M.; Sol, F.; Zhang, S.; Cao, X.; Wang, Z. Metabolisme in vitro i in vivo de l'ocratoxina A: un estudi comparatiu mitjançant espectrometria de masses híbrida de cromatografia líquida d'ultra-rendiment-quadrupol/temps de vol. Anal. Bioanal. Chem. 2015, 407, 3579–3589. [CrossRef] [PubMed]
39. Muñoz, K.; Cramer, B.; Dopstadt, J.; Humpf, HU; Degen, GH Evidència de conjugats d'ocratoxina A en mostres d'orina de nadons i adults. Micotoxina Res. 2017, 33, 39–47. [CrossRef] [PubMed]
40. Vidal, A.; Mengelers, M.; Yang, S.; De Saeger, S.; De Boevre, M. Biomarcadors d'exposició a micotoxines: una revisió exhaustiva. Compr. Rev. Food Science. Aliment segur. 2018, 17, 1127–1155. [Ref creuat]
41. Panell EFSA CONTAM (Grup EFSA sobre contaminants a la cadena alimentària); Schrenk, D.; Bodin, L.; Chipman, JK; del Mazo, J.; Grasl-Kraupp, B.; Hogstrand, C.; Hoogenboom, L.; Leblanc, J.; Nebbia, CS; et al. Avaluació del risc de l'ocratoxina A en els aliments. EFSA J. 2020, 18, 06113.
42. Arce-López, B.; Lizarraga, E.; Vettorazzi, A.; González-Peñas, E. Biomonitoring humà de micotoxines en sang, plasma i sèrum en els darrers anys: una revisió. Toxines (Basilea) 2020, 12, 147. [CrossRef]
Beatriz Arce-López 1 , Lydia Alvarez-Erviti 2 , Barbara De Santis 3 , María Izco 2 , Silvia López-Calvo 4 , Maria Eugenia Marzo-Sola 4 , Francesca Debegnach 3 , Elena Lizarraga 1 , Adela López de Cerain 5,6 , Elena González-Peñas 1,† i Ariane Vettorazzi 5,6,* ,†
1 Departament de Tecnologia Farmacèutica i Química, Grup de Recerca MITOX, Facultat de Farmàcia i Nutrició, Universitat de Navarra, 31008 Pamplona, Espanya; barce@alumni.unav.es (BA-L.); elizarraga@unav.es (EL); mgpenas@unav.es (EG-P.)
2 Laboratori de Neurobiologia Molecular, Centre d'Investigacions Biomèdiques de La Rioja (CIBIR), Piqueras 98, 3r Pis, 26006 Logronyo, Espanya; laerviti@riojasalud.es (LA-E.); mizco@riojasalud.es (MI)
3 National Reference Laboratory for Mycotoxins and Plant Toxins, Istituto Superiore di Sanità, 00161 Roma, Itàlia; barbara.desantis@iss.it (BDS); francesca.debegnach@iss.it (FD)
4 Servicio de Neurología, Hospital San Pedro, Piqueras 98, 26006 Logronyo, Espanya; slcalvo@riojasalud.es (SL-C.); memarzo@riojasalud.es (MEM-S.)
5 Department of Pharmacology and Toxicology, Research Group MITOX, School of Pharmacy and Nutrition, Universidad de Navarra, 31008 Pamplona, Spain; acerain@unav.es 6 IdiSNA, Navarra Institute for Health Research, 31008 Pamplona, Spain
