Funcions de Cistanche per al ronyó i la diabetis
Mar 11, 2022
La disfunció del rellotge circadià al túbul renal condueix a una gluconeogènesi renal millorada i una hiperglucèmia exacerbada en la diabetis.
per a més informació:ali.ma@wecistanche.com
Camille Ansermet1,6, Gabriel Centeno1,6, Yohan Bignon1,6, Daniel Ortiz2,6, Sylvain Pradervand3,Andy Garcia1, Laure Menin2, Frede´ric Gachon1,4, Hikari AI. Yoshihara5 i Dmitri Firsov1
1Departament de Ciències Biomèdiques, Universitat de Lausana, Lausana, Suïssa;2Servei d'espectrometria de masses, Institut de Ciències i Enginyeria Químiques, Ecole Polytechnique Fédérale de Lausanne, Lausana, Suïssa;3Genomic Technologies Facility, Universitat de Lausana, Lausana, Suïssa;4Institut de Biociència Molecular, Universitat de Queensland, Queensland, Austràlia; i 5Institut de Física, Ecole Polytechnique Fédérale de Lausanne, Lausana, Suïssa
Elrellotge circadiàés un mecanisme de manteniment del temps molecular omnipresent que sincronitza les funcions biològiques cel·lulars, tissulars i sistèmiques amb els cicles ambientals de 24-hores. Els rellotges circadians locals impulsen els ritmes específics del tipus cel·lular i dels teixits i la seva desregulació s'ha implicat en la patogènesi i/o la progressió d'un ampli espectre de malalties. No obstant això, el paper fisiopatològic intrínsecrellotges circadiansal ronyó dels diabètics es desconeix. Per resoldre aquesta pregunta, hem induït el tipus Idiabetisamb estreptozotocina en ratolins sense el regulador transcripcional circadià BMAL1 en podòcits (ratolins cKOp) o en elronyótúbul (ratolins cKOt). No hi va haver cap associació entre la disfunció del rellotge circadià i el desenvolupament de nefropatia diabètica en ratolins cKOp i cKOt amb diabetis. No obstant això, cKOt ratolins ambdiabetispresentava una hiperglucèmia exacerbada, un augment de l'excreció fraccionada de glucosa a l'orina, una poliúria millorada i una hipertròfia renal més pronunciada en comparació amb els ratolins control tractats amb tostreptozotocina. Les anàlisis d'ARNm i d'expressió de proteïnes van revelar una millora substancial de la via gluconeogènicaronyonsde ratolins cKOt amb diabetis en comparació amb els ratolins control diabètics. Anàlisi transcriptòmica juntament amb l'anàlisi funcional dels ratolins cKOt ambdiabetisvan identificar canvis en múltiples mecanismes que afecten directament o indirectament la via gluconeogènica. Així, demostrem aquesta disfunció de l'intrínsecronyótúbulrellotge circadiàagreuja la hiperglucèmia diabètica mitjançant la millora de la gluconeogènesironyótúbul proximal i ressalten encara més la importància del comportament circadià en pacients ambdiabetis.
PARAULES CLAU: elrellotge circadià; diabetis; gluconeogènesi; túbul proximal
Feu clic a Cistanche en urdú i Cistanche per a la diabetis
Declaració Transitòria
Endiabetis, elronyócontribueix al desenvolupament de la hiperglucèmia diabètica augmentant la reabsorció de glucosa de l'orina primària i regulant la gluconeogènesi al túbul proximal. No obstant això, aquests2 processos també estan controlats pelrellotge circadià, mecanisme que sincronitza una varietat de funcions renals específiques amb els cicles diaris de llum-foscor. Aquí, demostrem que la disfunció del rellotge circadian intrínsec al túbul renal pot agreujar la hiperglucèmia diabètica mitjançant la millora de la gluconeogènesi renal. Aquests resultats posen de manifest la importància dels efectes circadians en pacients diabètics, amb possibles implicacions per a la gestió de la glucosa.
Diabetisés una malaltia sistèmica en la qual el ronyó juga un paper particular. En la diabetis, elronyócontribueix al desenvolupament de la hiperglucèmia diabètica augmentant la reabsorció de glucosa de l'orina primària1 i augmentant la producció de glucosa mitjançant la gluconeogènesi.2,3 No obstant això, l'elevació a llarg termini dels nivells de glucosa en sang pot, al seu torn, provocar nefropatia diabètica (DN), una de les complicacions més greus. de la diabetis, caracteritzada per danys glomerulars, tubulars i vasculars al ronyó. Tot i que l'estrès metabòlic és el principal factor implicat en la patogènesi i la progressió de la DN, la hiperglucèmia per si sola no condueix a insuficiència torenal en la majoria dels pacients diabètics.4 Això suggereix que, combinat amb una malaltia intercurrent o la presència de "segons cops" ambientals, genètics o epigenètics, pot ser necessari per a l'inici. i/o progressió accelerada de la DN. Investigacions recents han suggerit que el mecanisme del rellotge circadià es troba a la intersecció de diversos processos (pato)fisiològics en elronyó.5 Condicional elrellotge circadiàen diferents tipus de cèl·lules renals en models animals provoca la interrupció dels ritmes circadians, la taxa de filtració inglomerular (TFG),6 pèrdua parcial del control de la pressió arterial,7,8 alteracions substancials en les vies metabòliques renals,9,10 i progressió accelerada de la crònica.malaltia de ronyó.11 En humans, la desalineació circadiana relacionada amb el treball per torns entre el rellotge biològic i els ritmes d'alimentació i d'activitat s'associa amb una disminució de la GFR12, un augment de l'excreció d'albúmina urinària13, una nictúria i un augment de la producció d'orina renal14 i un augment del risc de malaltia renal crònica.15.
Curiosament, elrellotge circadiàen elronyócontrola o està interconnectat amb moltes vies cel·lulars que estan implicades en la patogènesidiabetisi/o DN. Per exemple, l'eliminació específica dels túbuls renals de l'activador transcripcional BMAL1 (també anomenat ARNTL), un element central de la maquinària del rellotge circadià, provoca un augment marcat dels nivells d'expressió dels ARNm que codifiquen proteïnes implicades en la gluconeogènesi de la glutamina renal, inclòs el transportador de glutamina SNAT3 (SLC38A3). glutaminasa (GLS) i glutamat deshidrogenasa 1 (GLUD1).9 Més important, aquests canvis d'expressió es produeixen en animals normoglucèmics. Slominsket al. han demostrat que la proteïna del rellotge circadià PER1 està implicada en la regulació transcripcional del transportador de glucosa Sglt1 (Slc5a1) a les cèl·lules del túbul proximal16 i Ansermetet al. han demostrat que el rellotge circadià dels podòcits controla l'expressió del gen Arhgap24 associat amb predisposició a la DN tant en diabetis tipus 1 com en diabetis tipus 2.6 S'ha demostrat que tant els nivells elevats de glucosa com la deficiència tubular de BMAL1 indueixen fortament l'expressió de l'inhibidor de la cinasa dependent de ciclina p21CIP1a (Cdkn1a). ), un factor crític per desencadenar la senescència cel·lular al ronyó diabètic.9,17 La deacetilasa sirtuïna 1 depenent de dinucleòtids de nicotinamidaadenina (SIRT1), un dels reguladors clau del dany dels podòcits a la DN,18 s'ha identificat com un regulador mestre del bucle de retroalimentació energètica. dins de la xarxa de rellotge central.19 Un altre mecanisme cel·lular que enllaça DN amb elrellotge circadiàés l'objectiu dels mamífers de la rapamicina, una cinasa que coordina el metabolisme cel·lular amb el manteniment del temps circadià.20 L'objectiu alterat dels mamífers de la senyalització de la rapamicina també s'ha reconegut com un factor patogènic important en el dany induït per la diabetis a les cèl·lules tubulars renals, els podòcits22 i les cèl·lules endotelials glomerulars23 i mesangials24. . En conjunt, aquestes observacions suggereixen que les pertorbacions del rellotge circadià alronyópot influir en el desenvolupament de la hiperglucèmia diabètica estimulant la gluconeogènesi tubular renal i/o la reabsorció de glucosa, o actuant com un "segon cop" que contribueix a la patogènesi de la DN. Per abordar aquestes hipòtesis, vam generar i caracteritzar ratolins amb estreptozotocina (STZ) de tipus I induïda per estreptozotocina (STZ).diabetisi supressió específica de larellotge circadiàcoordinador Bmal1 en podòcits glomerulars o en el túbul renal.
Feu clic aCistanche per tractar malalties renals
MÈTODES
Els animals es van mantenir ad libitum amb la dieta estàndard de laboratori (dieta KLIBA NAFAG 3800). Tots els experiments es van realitzar amb ratolins mascles.
Models de ratolí
La inactivació del gen Bmal1 (Arntl) es va induir mitjançant el 2-tractament setmanal amb doxiciclina (DOX; 2 mg/ml en aigua potable) de8-Bmal1lox/lox/Nphs2-rtTA d'una setmana d'edat Ratolins /LC1 (ratolins cKOp) o de 8-ratolins Bmal1lox/lox/Pax8-rtTA/LC1 d'una setmana (ratolins cKOt). Els seus controls de parella (ratolins Bmal1lox/lox) van rebre el mateix tractament DOX. Ambdós models han estat prèviament descrits i validats.6,9 Una setmana després de finalitzar el tractament amb DOX, tipus Idiabetises va induir per injeccions ip de STZ (5 0 mg/kg de pes corporal [BW]; diari durant 5 dies). Els ratolins tractats amb vehicles van rebre injeccions de vehicles de solució salina tamponada amb fosfat. Tots els experiments es van realitzar 8 setmanes després de l'última injecció de STZ o vehicle. En tots els experiments, es va realitzar una recollida de teixit i sang de ratolins sacrificats a ZT9 (ZT indica unitats de temps Zeitgeber; ZT0 és el temps d'encesa i ZT12 és el temps d'apagada).
Gàbies metabòliques
Els ratolins es van allotjar en gàbies metabòliques individuals (Tecniplast). La recollida d'orina es va realitzar durant 24 hores després d'un període d'adaptació de 4-dia.
Química del plasma i de l'orina
El Laboratoire de prestations de Chimie Clinique del Centre Hospitalier Universitaire Vaudois va mesurar les concentracions i l'osmolalitat de Naþ, Kþ, Ca2þ, Mg2þ, fosfat, creatinina, glucosa, urat i urea plasmàtiques i urinàries. El pH urinari es va avaluar amb un mesurador de pH (Metrohm). El pH de la sang i els gasos sanguinis es van mesurar en sang arterial-venosa mixta mitjançant un analitzador de sang èpic (Siemens Healthcare). L'amoni urinari es va mesurar mitjançant el mètode Berthelot. L'àcid titulable urinari es va mesurar mitjançant el mètode de Chan.25 Els nivells d'aldosterona en plasma es van mesurar mitjançant radioimmunoassaig (DPC). La insulina plasmàtica es va determinar mitjançant un kit de Mercodia
GFR
La FG es va mesurar en animals anestesiats amb isotiocianat d'insulina-fluoresceïna, tal com es va descriure anteriorment.26
Test de tolerància a la glucosa IP
Després de 15 hores de dejuni, el control tractat amb vehicle o STZ i els cKotmice es van injectar ip amb glucosa (1 g/kg de peso corporal). La glucèmia es va mesurar amb un lector de glucèmia en una gota de sang de la cua (Contour NextOne; Bayer) abans (temps ¼ 0) i 15, 30, 60, 90, 120 i 180 minuts després de la injecció de glucosa.
Test de tolerància a la insulina
Després de 4 hores de restricció alimentària, els ratolins control i cKot tractats amb vehicle o STZ es van injectar ip amb 0, 5 U d'insulina (insulina recombinant humana; Sigma) per kg de peso corporal. La glucèmia es va mesurar abans de la injecció d'insulina (temps ¼ 0) i 15, 30, 45, 60, 90, 120, 150 i 180 minuts després de la injecció d'insulina. Si la glucèmia disminuïa per sota dels 2 mM, els ratolins van ser rescatats mitjançant la injecció ip de 30 mg de glucosa i es van excloure de l'anàlisi.
Seqüenciació de l'ARN
La seqüenciació de l'ARN es va realitzar tal com es descriu a Ansermet et al.6 Es va utilitzar l'anotació del gen Musmusculus GRCm38.92. Els recomptes de gens es van escalar mitjançant la normalització de TMM i es van transformar en recomptes per milió (CPM) mitjançant la funció "CPM" del paquet limma R.27 Es va calcular l'expressió diferencial entre els animals eliminatoris i els de control per als no tractats (solució salina tamponada amb fosfat) i els tractats ( STZ) i la interacció entre les 2. Per a cadascuna de les 3 comparacions, es van seleccionar gens amb una taxa de descobriment fals (FDR) < 5="" per="" cent="" per="" a="" una="" anàlisi="" d'enriquiment="" de="" "procés="" biològic"="" d'ontologia="" gènica="" amb="" "perfil="" de="" clúster".28="" termes="" amb="" un="" valor="">< 0.01="" were="" considered="" as="" significant="" and="" further="" processed="" with="" the="" function="" "simplify"="" with="" default="" parameters="" to="" remove="">
Anàlisi estadística
Totes les dades s'expressen com a mitjana ± SEM. Les proves estadístiques es descriuen a les llegendes de figures i a la taula complementària S10. P <0,05 es="" va="" considerar="" significatiu.="" l'anàlisi="" estadística="" es="" va="" realitzar="" mitjançant="" el="" programari="" graphpad="" prism="" (versió="">
Western blots capil·lars
Es van realitzar taques capil·lars Western a la instal·lació d'anàlisi de proteïnes de la Universitat de Lausana (https://www.unil.ch/paf/home/menuinst/technologies/western-in-capillaries.html). La seva quantificació es va realitzar de manera cegada per un tècnic d'aquesta instal·lació.
Cistanche pot millorar la funció renal
RESULTATS
La inactivació de Bmal1 als podòcits no condueix a la inducció de DN en ratolins tractats amb STZ
La inactivació específica dels podòcits de Bmal1 (Arntl) es va induir mitjançant el tractament de 2-setmanes amb DOX (2 mg/ml en aigua potable) de 8-Bmal1lox/lox/Nphs2-rtTA/ d'una setmana d'edat. Els ratolins LC1 (d'ara endavant anomenats ratolins cKOp).6 Els seus controls de camarada (ratolins Bmal1lox/lox; d'ara endavant anomenats ratolins control) van rebre el mateix tractament DOX. Com es mostra a la figura 1a, el tractament STZ (vegeu Mètodes) va provocar hiperglucèmia, que no era diferent entre els ratolins control i cKOp. El BW va ser més baix en animals tractats amb STZ, però aquest efecte va ser un ratolí similar dels dos genotips (figura 1b). El GFR, mesurant l'eliminació d'isotiocianat d'insulina-fluoresceïna, no era diferent entre els ratolins controlats amb STZ i els ratolins cKOp (figura 1c). Els animals diabètics mostraven glucosúria (figura 1d), poliúria (figura 1e), proteinúria de baix pes molecular (figura 1f) i albumínúria lleu (figura 1f). Tanmateix, no hi va haver cap diferència en aquests paràmetres entre els ratolins controlats amb STZ i els ratolins cKOp
Els ratolins sense BMAL1 al túbul renal presenten una hiperglucèmia exacerbada amb diabetis
Com es mostra a la figura 2a, el BW no era diferent en els ratolins de control diabètic i els ratolins desproveïts de BMAL1 al túbul renal (ratolins Bmal1lox/lox/Pax8-rtTA/LC1 tractats amb DOX9; d'ara endavant anomenats ratolins cKot). L'anàlisi del plasma sanguini va revelar que la hiperglucèmia induïda per STZ s'exacerba en els ratolins cKOt tant en condicions alimentades com en dejuni (figura 2b i c, respectivament). Cap dels altres paràmetres de plasma mesurats, inclosos l'osmolalitat i el sodi, potassi, fosfat, calci, magnesi, creatinina, les concentracions d'urat i d'aldosterona eren diferents entre el control tractat amb STZ i el c Kotmice, excepte l'augment dels nivells d'urea plasmàtica en els ratolins cKOt (taula suplementària S1). Els nivells d'insulina plasmàtica no eren diferents entre el control tractat amb STZ i els ratolins dejunats amb cKot (figura 2d). Les proves de tolerància a la glucosa i la insulina avaluades com el pendent de la disminució de la concentració de glucosa no van revelar diferències significatives entre els ratolins de cap genotip en ambdues condicions de tractament (figura 2e i f, respectivament).Diabetis-induïtronyóLa hipertròfia era més pronunciada en els ratolins cKOt diabètics que en els controls diabètics (figura 2g). La GFR no era diferent entre els ratolins tractats amb STZ dels dos genotips (figura 2h). L'augment de la ingesta d'aigua i el volum d'orina induït per STZ va ser més pronunciat en els ratolins c Kot (figura 3a i b, respectivament), mentre que l'osmolalitat de l'orina no era diferent entre els ratolins diabètics d'ambdós genotips (figura 3c). L'excreció fraccionada de glucosa va ser més alta i l'excreció fraccionada de sodi va ser menor en els ratolins cKOt tractats amb STZ en comparació amb els controls tractats amb STZ (figura 3d i e, respectivament), mentre que els valors d'excreció fraccionada de fosfat (figura 3f), magnesi (figura 3g) i El calci (figura 3h) no eren diferents entre els ratolins diabètics d'ambdós genotips. Tant els ratolins control com els cKot tractats amb STZ tenien una proteinúria similar de baix pes molecular però no albuminúria (figura suplementària S1). No es van trobar diferències histològiques importants entre els ronyons dels controls tractats amb vehicle o STZ i els ratolins cKot (figura suplementària S2).
Figura 1|Característiques generals dels ratolins control i cKOp tractats amb vehicle o estreptozotocina (STZ). (a) Glucèmia sense dejuni. (b) Pes corporal (BW). (c) Taxa de filtració glomerular (GFR) (eliminació d'insulina). (d) Glucosa en orina. (e) Volum d'orina. (f) Tinció de blau de Coomassie de proteïnes d'orina. Per a tots els ratolins, es va carregar un 0,3 per cent (vol) d'orina 24-hora en un gel d'electroforesi en gel de dodecilsulfat de sodi-poliacrilamida. Es dóna mitjans ± SEM. n=9 a cada grup, tret de les mesures de GFR, on es van utilitzar n=6 i n=9 ratolins en grups de control i cKOp tractats amb STZ, respectivament. Tots els resultats es van obtenir d'animals de 19-setmanes. Es va utilitzar una anàlisi bidireccional de la variància amb el test de comparació múltiple de Sidak. *P <0.05, †p=""><0,01, ‡p=""><0,001. alb,="" albúmina="" (65="" kda);="" lmwp,="" proteïna="" de="" baix="" pes="">
Figura 2|Característiques generals del control tractat amb vehicle o estreptozotocina (STZ) i ratolins c Kot. (a) Pes corporal. n=8 per als ratolins control tractats amb vehicles i c Kot, i n=9 per als ratolins controlats amb STZ i c Kot. (b) Glucèmia sense dejuni. n ¼ 8 i n=9 per a ratolins de control tractats amb vehicles i STZ i c Kot, respectivament. (c) Glucèmia en dejuni (16 hores de dejuni). n=9 per als ratolins control tractats amb vehicle i c Kot, i n=7 i n=6 per als ratolins control i c Kot tractats amb STZ, respectivament. ( d ) Nivells d'insulina en ratolins de control tractats amb vehicle o STZ i c Kot. n=9 i n=6 per als ratolins control tractats amb vehicles i c Kot, respectivament, i n=10 i n=7 per als ratolins control injectats amb STZ i c Kot, respectivament. Els nivells d'insulina plasmàtica es van mesurar a ZT18, enmig de la fase inactiva. ( e ) Els nivells de glucosa en sang es van mesurar al llarg del control de la prova de tolerància a la glucosa en vehicles o tractats amb STZ i ratolins c Kot. n=9 per als ratolins control tractats amb vehicle i c Kot, i n=7 i n=6 per als ratolins control i c Kot tractats amb STZ, respectivament. ( f ) Els nivells de glucosa en sang es van mesurar al llarg del control de la prova de tolerància a la insulina en vehicles o tractats amb STZ i ratolins c Kot. n=5 per a ratolins control tractats amb vehicle o STZ, i n=6 per a ratolins cKO tractats amb vehicle o STZ. (g)Diabetis-induïtronyóhipertròfia. n{{0}} a cada grup. La hipertròfia renal es va avaluar dividint el pes del ronyó (KW) amb el pes corporal (BW). Els valors relatius de KW/BW per al control injectat amb STZ i els animals c Kot es van calcular atribuint un 1{{10}}0 per cent a el grup injectat per vehicle corresponent. (h) Taxa de filtració glomerular (GFR) (eliminació d'insulina). n ¼ 5 i n ¼ 6 per als ratolins de control tractats amb STZ i c Kot, respectivament. Es dóna mitjans ± SEM. Es va utilitzar una anàlisi bidireccional de la variància amb la prova de comparacions múltiples de Sidak. *P <0,05, †p=""><0,01, ‡p=""><>
La hiperglucèmia exacerbada en ratolins cKOt es correlaciona amb una major expressió d'enzims gluconeogènics al ronyó.
Per identificar les vies moleculars associades a la hiperglucèmia exacerbada en ratolins cKOt tractats amb STZ, vam realitzar una anàlisi de seqüenciació d'ARN deronyótranscriptomes seguits d'anàlisis d'enriquiment de la via del transcriptoma sencer i anàlisis específiques d'ARN que codifiquen proteïnes implicades en la gluconeogènesi renal i la reabsorció renal de glucosa. La comparació de transcriptomes va revelar 1833 transcripcions expressades de manera diferenciada entre controls tractats amb vehicles i STZ (taula suplementària S2; FDR < 5="" per="" cent),="" 1.784="" transcripcions="" expressades="" de="" manera="" diferent="" entre="" ratolins="" ckot="" tractats="" amb="" vehicle="" i="" stz="" (taula="" suplementària="" s3;="" transcripció="" fdr="">< 5="" per="" cent="" expressada="" de="" manera="" diferenciada)="" .="" entre="" el="" control="" tractat="" amb="" vehicle="" i="" els="" ratolins="" c="" kot="" (taula="" suplementària="" s4;="">< 5%),="" and="" 2667="" transcripts="" differentially="" expressed="" between="" stz-treated="" control="" and="" c="" kot="" mice="" (supplementary="" table="" s5;="" fdr="" <="" 5%).="" gene="" ontology="" analysis="" of="" differentially="" expressed="" transcripts="" revealed="" enrichment="" of="" pathways="" related="" to="" lipid,="" amino="" acid,="" and="" carboxylic="" acid="" metabolism,="" and="" organic="" anion="" transport="" between="" control="" and="" cko="" mice="" in="" both="" vehicle="" and="" stz="" treatment="" groups="" (figure="" 4a="" and="" b,="" respectively,="" and="" supplementary="" tables="" s6="" and="" s7,="" respectively).="" a="" total="" of="" 284="" transcripts="" exhibited="" genotype-by="" treatment="" interaction="" effects="" (supplementary="" table="" s8;="" fdr="" <="" 5%),="" including="" glud1="" and="" g6pc="" transcripts="" encoding="" enzymes="" involved="" in="" renal="" gluconeogenesis="" (see="" below).="" gene="" ontology="" analysis="" of="" transcripts="" with="" significant="" interaction="" showed="" enrichment="" of="" only="" a="" limited="" number="" of="" pathways,="" mainly="" related="" to="" lipid="" metabolism="" and="" organic="" anion="" transport="" (figure="" 4c="" and="" supplementary="" table="" s9).="" among="" the="" genes="" encoding="" transporters="" involved="" in="" glucose="" reabsorption="" in="" the="" proximal="" tubule="" (sglt1,="" sglt2,="" glut1,="" and="" glut2),="" only="" glut1="" (slc2a1)="" displayed="" higher="" expression="" in="">ronyonsde ratolins cKOt diabètics en comparació amb els controls diabètics (taula suplementària S5).
Figura 3|La ingesta d'aigua i les característiques de l'orina dels controls tractats amb vehicles o estreptozotocina (STZ) i ratolins c Kot. (a) La ingesta d'aigua 24-horari. n=8 per a ratolins de control o cKOt tractats amb vehicles, i n=9 per a ratolins de control o cKOt tractats amb STZ. (b) El volum d'orina de 24-hora. n=8 per a ratolins de control o cKOt tractats amb vehicles, i n=9 per a ratolins de control o cKOt tractats amb STZ. (c) Osmolalitat de l'orina. n=8 per a ratolins control tractats amb vehicle, n=7 per a ratolins Kot c tractats amb vehicle i n=9 per a ratolins control o cKOt tractats amb STZ. (d) Excreció fraccionada (Fe) de glucosa. n=8 ratolins control o cKOt tractats amb vehicles, i n=9 per a ratolins control o cKOt tractats amb STZ. (e) Fe de sodi. n=8 per a ratolins control tractats amb vehicle, n=7 per a ratolins Kot c tractats amb vehicle i n=9 per a ratolins control o cKOt tractats amb STZ. (f) Fe de fosfat. n=8 per a ratolins de control tractats amb vehicle, n=7 per a ratolins cKOt tractats amb vehicle, n=8 per a ratolins de control tractats amb STZ i n=9 per a ratolins tractats amb STZ cKOt ratolins. (g) Fe de magnesi. n=8 ratolins de control tractats amb vehicles, n=7 per a ratolins c Kot tractats amb vehicles i n=9 per a ratolins de control o cKOt tractats amb STZ. (h) Fe de calci. n=8 ratolins de control tractats amb vehicles, n=7 per a ratolins c Kot tractats amb vehicles i n=9 per a ratolins de control o cKOt tractats amb STZ. Significa que es dóna SEM. Es va utilitzar una anàlisi bidireccional de la variància amb la prova de comparacions múltiples de Sidak. *P <{{50}}.05, †p=""><0,01, ‡p=""><0,001. bw,="" pes="">
Els 2 principals precursors gluconeogènics en elronyóarelactat i glutamina.29 Tal com es mostra a la figura 4d i e i a la taula suplementària S5, els nivells d'expressió de les proteïnes que codifiquen transcripcions implicades en la gluconeogènesi de glutamina renal (Snat3, Gls i Glud1) es van augmentar en els ronyons dels ratolins cKOt tractats amb STZ en comparació amb els controls tractats amb STZ. .Per contra, es va reduir l'expressió de l'ARNm que codifica la glutamat amoníac lligasa (Gavina), que inverteix el pas inicial de la glutaminòlisi impulsat per GLS. De la mateixa manera, els nivells d'expressió dels ARNm que codifiquen 2 enzims a la part comuna de la via gluconeogènica (és a dir, la fosfoenolpiruvat carboxicinasa [Pck1] i la glucosa-6-fosfatasa [G6pc]), van ser més alts en els ratolins cKOt tractats amb STZ. Es va confirmar una expressió més alta de GLUD1 i PCK1 als ronyons de ratolins cKOt diabètics a nivell de proteïna mitjançant Western blot capil·lar (figura 4f i figura suplementària S3). Al fetge dels ratolins diabètics, el nivell d'expressió de GLUD1 no era diferent entre els ratolins control i c Kot, i l'expressió de PCK1 era menor en els ratolins c Kot (figura suplementària S4). Cal destacar que els nivells d'expressió de Glud1, Snat3, fructosa-1,6-bifosfat 2 (Fbp2) i Glut1 eren més alts i els nivells d'expressió de Glul, Fbp1 i Glut2 eren més baixos enronyonsde ratolins cKOt tractats amb vehicles en comparació amb els controls tractats amb vehicles.
Figura 4|Anàlisi d'enriquiment del "procés biològic" d'ontologia gènica (GO). ( a ) Anàlisi GO de transcripcions expressades de manera diferent aronyonscontrol tractat amb vehicles i ratolins c Kot. ( b ) Anàlisi GO de transcripcions expressades de manera diferencial en ronyons de control tractats amb estreptozotocina (STZ) i ratolins Kot. ( c ) Anàlisi GO de transcripcions que presenten un efecte d'interacció genotip per tractament. Gràfics de punts per als 20 termes més significatius (valor Q <0.01). es="" van="" filtrar="" els="" termes="" redundants.="" generació="" representa="" la="" fracció="" de="" gens="" significatius="" anotats="" amb="" el="" terme="" mostrat.="" la="" mida="" del="" punt="" representa="" el="" nombre="" de="" gens="" significatius="" anotats="" amb="" el="" terme="" mostrat.="" n="6" per="" condició.="" (="" d="" )="" gràfics="" de="" canvi="" de="" plec="" per="" a="" les="" transcripcions="" que="" codifiquen="" els="" enzims="" i="" les="" transcripcions="" implicades="" en="" la="" gluconeogènesi="" renal.="" els="" valors="" del="" nivell="" d'expressió="" es="" van="" extreure="" de="" les="" taules="" complementàries="" s2,="" s3,="" s4="" i="" s5.="" *p=""><0,05, †p=""><0,01, ‡p=""><0,001. (="" e="" )="" representació="" esquemàtica="" de="" cèl·lules="" del="" túbul="" proximal="" amb="" proteïnes/enzims="" principals="" implicats="" en="" el="" procés="" de="" gluconeogènesi="" renal.="" en="" vermell:="" valors="" de="" p="" per="" a="" l'expressió="" diferencial="" entre="" el="" control="" tractat="" amb="" stz="" i="" els="" ratolins="" c="" kot.="" en="" blau:="" valors="" de="" p="" per="" a="" l'expressió="" diferencial="" entre="" el="" control="" tractat="" amb="" vehicle="" i="" els="" ratolins="" c="" kot.="" les="" fletxes="" vermelles="" i="" blaves="" indiquen="" que="" l'expressió="" augmenta="" ([)="" o="" disminueix="" (y)="" en="" ratolins="" inckot.="" (="" f="" )="" anàlisi="" quantitativa="" de="" western="" blots="" capil·lars="" per="" a="" glutamat="" deshidrogenasa="" (glud1)="" i="" fosfoenolpiruvat="" carboxicinasa="" (pck1;="" figures="" suplementàries="" s2="" i="" s3,="" respectivament)="">ronyonsde control salí tamponat amb fosfat o tractats amb STZ i ratolins c Kot (percondició n=6). Es va utilitzar una anàlisi bidireccional de la variància amb la prova de comparacions múltiples de Sidak. *P <0.05, †p=""><0,01, ‡p=""><0,001. au,="" unitat="" arbitrària;fbp1/2,="" fructosa-1,6-bifosfatasa="" 1/2;="" g6pc,="" glucosa-6-fosfatasa;="" gls,="" glutaminasa;="" glul,="" glutamina="" sintetasa;="" glut2,="" transportador="" de="" glucosa2;="" nhe3,="" intercanviador="" sodi-hidrogen="" 3;="" p="" ajustar,="" p="" ajustar;="" pc,="" piruvat="" carboxilasa;="" snat3,="" transportador="" de="" glutamina;="" tca,="">
Múltiples mecanismes que afecten directament o indirectament la via gluconeogènica es modifiquen en els ronyons dels ratolins diabètics.
La via gluconeogènica en elronyópot ser influenciat pelrellotge circadiàja sigui directament, mitjançant el control transcripcional, traduccional o posttraduccional de proteïnes implicades en la gluconeogènesi renal, o indirectament, afectant altres mecanismes renals que estan intrínsecament connectats amb la producció de glucosa al túbul proximal. Els factors transcripcionals, coactivadors i corepressors que regeixen la transcripció dels enzims gluconeogènics s'han caracteritzat parcialment al fetge, ronyó i altres teixits. Les figures 5a i b resumeixen els canvis en els nivells d'expressió de les transcripcions que codifiquen reguladors transcripcionals coneguts de la gluconeogènesi enronyonsratolins de control i cKOt (vegeu també les taules complementàries S4 i S5). Entre les transcripcions analitzades, les que codifiquen el receptor d activat per proliferador de peroxisomes (PPARd) i els criptocroms 1 i 2 van mostrar un augment substancial, mentre que el receptor nuclear NR1D1 (també conegut com REV-Erba) es va reduir substancialment en els ronyons de ratolins cKOt tant en vehicles com en STZ- animals tractats en comparació amb els controls amb el mateix tractament. L'expressió del coactivador g del receptor activat per peroxisomeproliferator 1-a (Pgc1a, Ppargc1a) va augmentar en ratolins cKOt tractats amb STZ en comparació amb els controls tractats amb STZ, i l'expressió del receptor glucocorticoide (Gr, Nr3c1) es va reduir en cKOtmics tractats amb vehicles. en comparació amb els controls tractats amb vehicles. Expressió de la proteïna de la caixa O (Foxo1), el factor nuclear hepatòcit 4a (Hnf4a), la proteïna d'unió a l'element sensible a l'adenosina monofosfat cíclica (Creb1), Para, Sirt1, la proteïna d'unió a CREB (Cbp, Crebbp), el coactivador transcripcional regulat per CREB 2 (Crtc2), i la histona deacetilasa 3 (Hdac3) no es va veure afectada pel tractament o el genotip
Figura 5|( a ) Gràfics de canvi de plecs per a transcripcions que codifiquen factors de transcripció, coactivadors i corepressors que regeixen la transcripció d'enzims gluconeogènics en ratolins control i cKOt tractats amb vehicles i estreptozotocina (STZ). Els valors del nivell d'expressió es van extreure de les taules complementàries S2, S3, S4 i S5. *P < 0.{{10}}5,="" †p="">< 0,01,="" ‡p="">< 0,001.="" (b)="" representació="" esquemàtica="" de="" les="" dades="" presentades="" a="" la="" figura="" 5a.="" en="" vermell:="" valors="" de="" p="" per="" a="" l'expressió="" diferencial="" entre="" el="" control="" tractat="" amb="" stz="" i="" els="" ratolins="" ckot.="" en="" blau:="" valors="" de="" p="" per="" a="" l'expressió="" diferencial="" entre="" el="" control="" tractat="" amb="" vehicle="" i="" els="" ratolins="" ckot.="" les="" fletxes="" vermelles="" i="" blaves="" indiquen="" una="" expressió="" augmentada="" ([)="" o="" disminuïda="" (y)="" en="" ratolins="" ckot.="" au,="" unitat="" arbitrària;="" cbp,="" xxx;="" creb1,="" xxx;="" crtc2,="" xxx;="" cry1,="" xxx;="" cry2,="" xxx;="" foxo1,="" xxx;="" g6pc,="" xxx;="" gr,="" xxx;="" hdac3,="" xxx;="" hnf4a="" ,="" xxx;="" nrld1,="" xxx;="" pck1,="" xxx;ppara,="" xxx;="" pparg,="" xxx;="" sirt1,="">
Com que l'acidosi és el principal estímul indirecte de la gluconeogènesi renal, vam mesurar el pH sanguini i urinari, els gasos sanguinis, l'excreció urinària d'amoníac (NH3/NH4þ) i l'acidesa titulable. Com es mostra a la figura 6, el pH de la sang era més alt en els ratolins cKOt tractats amb vehicles en comparació amb els controls tractats amb vehicles, però no era diferent entre els ratolins diabètics dels dos genotips. El bicarbonat de plasma va ser més baix en els controls diabètics en comparació amb els controls tractats amb vehicles; tanmateix, no es va trobar cap diferència en el bicarbonat de plasma entre els ratolins de control de la diabetis i els ratolins cKOt. L'excés de base de plasma i el pH de l'orina no es van veure afectats pel tractament o el genotip. Tanmateix, els ratolins cKOt tractats amb STZ van excretar quantitats més grans d'amoníac i d'acidesa titulable en comparació amb els controls tractats amb STZ. L'anàlisi de les transcripcions que codifiquen proteïnes implicades en el maneig de la base d'àcid renal va revelar una disminució de l'expressió de l'intercanviador d'hidrogen de sodi NHE3 (Slc9a3; vegeu la figura 4d i e) i de l'intercanviador d'anions AE1 (Slc4a1) i l'augment de l'expressió de l'anhidrasa carbònica II (Car2) i la subunitat b1 de H+-ATPasa (Atp6v1b1). Tanmateix, no es va observar cap diferència en els nivells d'expressió de l'antiportador de clorur-protó Clcn5, subunitat b2 de Hþ-ATPasa (Atp6v1b2), transportador d'amoníac Rhcg, cotransportador de bicarbonat de sodi NBCE1 (Slc4a4), intercanviador de clorur-bicarbonat depenent de sodi i NDC4a8(Slc) Pendrin d'intercanviador d'anions (Pds, Slc26a4) ratolins indiabètics cKOt en comparació amb controls diabètics (taula suplementària S5). Cal destacar que els nivells d'expressió de Nhe3 eren més baixos als ronyons dels ratolins cKOt tractats amb vehicles en comparació amb els controls tractats amb vehicles (figura 4d i taula suplementària S4).
DISCUSSIÓ
Està ben establert que la disfunció delrellotge circadiàmecanisme o una desalineació entre el rellotge biològic i els senyals socials i ambientals causats (per exemple, pel treball per torns), l'addicció a l'ordinador/Internet, el jetlag freqüent o els trastorns del son, són factors de risc importants per a la patogènesi i/o la progressió d'una varietat de malalties cròniques. Tanmateix, no s'ha investigat àmpliament la contribució dels rellotges circadians locals intrínsecs dels teixits versus les indicacions circadianes sistèmiques a processos fisiopatològics específics. Vam plantejar la hipòtesi que les perturbacions dels rellotges circadians renals intrínsecs poden contribuir al desenvolupament de DN i/o hiperglucèmia diabètica. Per provar aquestes hipòtesis, hem utilitzat 2 models de ratolí (és a dir, ratolins cKOp i cKOt) desenvolupats sobre un fons genètic C57BL/6 conegut per ser relativament resistent a la DN. En ambdós models, la deficiència de BMAL1 en condicions diabètics no va donar lloc a albuminúria addicional ni a diferències en la GFR, 2 característiques principals de la malaltia. Això suggereix que els ratolins transgènics sobre un fons C57BL / 6 poden no ser un model adequat per estudiar la hipòtesi del "segon cop" en el DN o que la patogènesi i/o la progressió del DN es veuen més afectades per pertorbacions circadianes sistèmiques que no pas pels rellotges circadians renals intrínsecs. Comprovació de la hipòtesi d'interacció entre la hiperglucèmia diabètica i la funció renal intrínsecarellotges circadiansva revelar una via gluconeogènica tubular renal millorada i una hiperglucèmia exacerbada en ratolins cKOt diabètics. Les anàlisis d'expressió d'ARNm i proteïnes van indicar que tant la gluconeogènesi de la glutamina com la part comuna de la via gluconeogènica són ratolins cKOt indiabètics millorats en comparació amb els controls diabètics. Aquesta observació va suggerir que els dos substrats gluconeogènics principals en elronyó(és a dir, glutamina i lactat) podrien contribuir a l'empitjorament de la hiperglucèmia en ratolins cKOt.
Figura 6|pH plasmàtic, bicarbonat de plasma, excés de bases plasmàtiques, pH de l'orina, acidesa titulable de l'orina 24-hora i excreció d'amoni en ratolins control i cKOt tractats amb vehicle o estreptozotocina (STZ). n ¼ 6–9. Es va utilitzar una anàlisi bidireccional de la variància amb la prova de comparacions múltiples de Sidak. *P < 0.05,="" †p=""><0,01, ‡p=""><>
RonyóLa gluconeogènesi ha guanyat un interès més gran en els darrers anys a causa del paper potencialment important de la glucosa produïda al túbul renal tant en l'equilibri metabòlic sistèmic com en la malaltia renal (revisat anteriorment2,30). El ronyó representa el 40 per cent de la producció total de glucosa de novo del cos en humans en dejú durant la nit.29diabetisTant el fetge com el ronyó augmenten la síntesi de glucosa, però l'augment relatiu de la gluconeogènesi renal és molt més fort que al fetge. Els estudis al fetge han demostrat que elrellotge circadiàpot influir en la gluconeogènesi hepàtica a través de múltiplesrellotge circadià-Mecanismes cel·lulars controlats. Zhang et al. han demostrat que els repressors circadians criptocroms 1 i 2 inhibeixen l'expressió d'enzims gluconeogènics bloquejant l'activació de CREB1.31Li et al. han demostrat que NR1D1, que forma una extremitat negativa crítica al rellotge circadià central, suprimeix la transcripció de Pck1 i G6pc.32 Com s'esperava per als gens de rellotge circadians en ratolins eliminatoris Bmal1,33 els nostres resultats van demostrar una forta regulació a l'alça de les transcripcions Cry1/Cry2 i una forta regulació de Transcripció Nr1d1 aronyonsde ratolins cKOt diabètics en comparació amb controls diabètics. Aquests resultats contradictoris poden suggerir l'especificitat dels teixits de la regulació de la gluconeogènesi per part dels elements bàsics del rellotge. Curiosament,ronyonsdels ratolins diabètics cKOt van mostrar una forta inducció de Ppard, que s'ha demostrat que estimula dràsticament l'expressió de Pck1 al múscul.34 Finalment, l'expressió de l'ARNm que codifica PGC1a, un coactivador crític de FoxO1, un factor transcripcional que controla l'expressió dels enzims gluconeogènics en els dos ronyons i els hídrics. va augmentar als ronyons dels ratolins cKOt diabètics. Col·lectivament, l'anàlisi dels transcriptomes renals va revelar que els ratolins diabètics cKOt presenten canvis substancials en diverses vies cel·lulars implicades en el control de la gluconeogènesi a laronyói/o altres teixits.
Avaluació dels mecanismes potencials mitjançant els quals lacircadiàrellotgepot influir en la via gluconeogènica en el diabèticronyóva revelar diverses característiques de l'estat àcid-base compensat de la sang, inclosa l'augment de l'excreció urinària d'amoni i l'acidesa titulable. Aquestes observacions van comparar dades de transcriptòmica que van demostrar una reducció dels nivells d'expressió de la transcripció que codifica NHE3, un transportador que juga un paper clau en la manipulació àcid-base del túbul proximal, juntament amb un augment potencialment compensatori de l'expressió del gen que codifica la subunitat Atp6v1b1 de la HþATPasa implicada en la secreció de HþATPasa. la nefrona distal. El control directe de l'expressió de Nhe3 mitjançant el rellotge circadià s'ha demostrat tant a nivell transcripcional16 com d'expressió proteica.35 Així, l'acidificació intracel·lular a causa de la reducció de l'expressió de NHE3 es podria considerar com una possible causa de l'augment de la gluconeogènesi a les cèl·lules del túbul proximal dels ratolins CKOt. Aquests resultats són paral·lels a les troballes d'Onishi et al.,36 que van demostrar que l'eliminació específica dels túbuls de NHE3 dóna com a resultat l'augment de l'expressió d'enzims gluconeogènics al ronyó. La millora de la part comuna limitant la velocitat de la via gluconeogènica (Pck1 i G6pc) en ratolins cKOt diabètics pot agreujar encara més l'acidificació intracel·lular mitjançant la millora de la gluconeogènesi de la glutamina, un procés metabòlic que genera ions hidrogen. Curiosament, l'expressió de Nhe3, Glul, Glud1 i Snat3, així com de diversos factors de transcripció que codifiquen transcripcions, coactivadors o corepressors que regeixen la transcripció d'enzims gluconeogènics (Gr, Ppard, Nr1d1, Cry1 i Cry2) es va modificar de manera similar a STZ- i ratolins cKOt tractats amb vehicles. Això suggereix que la gluconeogènesi renal també es millora en ratolins cKOt tractats amb vehicles. En condicions no diabètics, l'absència d'hiperglucèmia en ratolins incKOt es podria explicar de manera plausible per un augment del metabolisme d'aquesta glucosa excessivament sintetitzada per tots els teixits que metabolitzen la glucosa, inclòs elronyó.
Quina és la rellevància d'aquestes troballes per a la patogènesi?diabetisen humans? Està ben establert que el ritme d'alimentació té un paper important en l'enrotllament dels rellotges circadians perifèrics.37 Components dels aliments (p. ex., altes en sal,38 dietes baixes en carbohidrats i riques en proteïnes,39 i dieta cetogènica40) i factors paracrins/autocrins impulsats per la ingesta d'aliments (p. ex. , corticosteroides41) s'ha demostrat que tenen un fort impacte en els ritmes circadians delronyó. Diversos grups de població principals estan exposats periòdicament o constantment a una ingesta d'aliments alterada o alterada. Per exemple, entre un 20 i un 25 per cent dels empleats nord-americans i europeus realitzen treballs per torns, que s'associa amb un patró d'alimentació alterat.42 El segon grup de creixement ràpid amb un comportament dietètic afectat són els addictes greus a Internet, que representen, segons les estimacions actuals, 6 També s'ha demostrat que els trastorns del son, la malaltia renal crònica45 i alguns medicaments (per exemple, el cisplatí46) afecten significativament els ritmes circadians renals. Per tant, es pot especular que en una fracció substancial dels pacients diabètics, la hiperglucèmia pot empitjorar encara més a causa de la desregulació dels rellotges circadians als teixits perifèrics, inclòs el intrinsecrenal.rellotges circadians. En aquesta línia, un gran nombre d'estudis han demostrat una forta associació entre el treball per torns i el risc de desenvolupar diabetis (revisat anteriorment47). Col·lectivament, els nostres resultats proporcionen un nou vincle molecular entre el sistema circadià i la fisiopatologia dediabetis.
Cistanche pot prevenir la malaltia renal
DIVULGACIÓ
Tots els autors van declarar que no hi havia interessos en competència.
AGRAÏMENTS
Aquest treball va comptar amb el suport de la beca d'investigació de la Swiss National Science Foundation 310030-188499 (a DF) Una part d'aquest treball s'ha enviat com a resum a la reunió anual de 2021 de la Societat Americana de Nefrologia.
APORTACIONS DE L'AUTOR
HAIRY, FG i DF van dissenyar l'estudi; CA, GC, DO, YB i AG van realitzar experiments; CA, GC, DO, SP, LM i HAIY van analitzar les dades; CA i HAIY van fer les figures; DF i HAIY van escriure el manuscrit. Tots els autors van aprovar la versió final del manuscrit.
MATERIAL COMPLEMENTARI
Fitxer suplementari (PDF)
Figura S1. Tinció blava de Coomassie de proteïnes d'orina de ratolins control i cKOt tractats amb vehicle o estreptozotocina (STZ).
Figura S2. (A) Tinció de tricrom de Massonronyóseccions de controls tractats amb vehicle o estreptozotocina (STZ) i ratolins cKOt. (B) Tinció periòdica d'àcid-Schiff (PAS) de seccions de ronyó de ratolins control i cKOt tractats amb vehicle o estreptozotocina (STZ).
Figura S3. Anàlisi capil·lar Western blot de l'expressió de glutamatdehidrogenasa 1 (GLUD1; A) i fosfoenolpiruvatecarboxicinasa (PCK1; B) aronyonsde ratolins control i cKOt tractats amb vehicle o estreptozotocina (STZ).
Figura S4. Anàlisi capil·lar Western blot de l'expressió de glutamatdehidrogenasa 1 (GLUD1; A) i fosfoenolpiruvatecarboxicinasa (PCK1; B) al fetge de ratolins control i cKOt tractats amb vehicle o estreptozotocina (STZ).
Taula S1. Química del plasma en ratolins control injectats amb vehicles o estreptozotocina (STZ) i cKOt. Fitxers suplementaris (Excel)
Taula S2. Transcriptoma: estreptozotocina de control (STZ) versus solució salina tamponada amb fosfat de control (PBS).
Taula S3. Transcriptoma: estreptozotocina eliminatòria (KO) (STZ) versus solució salina tamponada amb fosfat KO (PBS).
Taula S4. Transcriptoma: solució salina tamponada amb fosfat (KO) (PBS) versus PBS control.
Taula S5. Transcriptoma: estreptozotocina eliminatòria (KO) (STZ) versus STZ control.
Taula S6. Enriquiment d'ontologia gènica (GO) per a solució salina tamponada amb fosfat (PBS) eliminatòria (KO) versus PBS control.
Taula S7. Enriquiment d'ontologia gènica (GO) per a estreptozotocina knockout (KO) (STZ) versus STZ control.
Taula S8. Transcriptoma: interacció genotip per tractament.
Taula S9. Enriquiment de l'ontologia gènica (GO) per a la interacció.
Taula S10. Estadístiques.
REFERÈNCIES
1. Vallon V. Transportadors de glucosa alronyóen salut i malaltia.Pflugers Arch. 2020;472:1345–1370.
2. Gerich JE. Paper del ronyó en l'homeòstasi normal de la glucosa i en la hiperglucèmia dediabetismellitus: implicacions terapèutiques. DiabetMed. 2010;27:136–142.
3. Mithieux G, Gautier-Stein A, Rajas F, et al. Contribució de l'intestí i el ronyó als fluxos de glucosa en diferents estats nutricionals de la rata. CompBiochem Physiol B Biochem Mol Biol. 2006;143:195–200.
4. Gheith O, Farouk N, Nampoory N, et al. Malaltia renal diabètica: diferència mundial de prevalença i factors de risc. J Etnofarmacol. 2016;5:49–56.
5. Firsov D, Bonny O. Els ritmes circadians i el ronyó. Nat Rev Nephrol.2018;14:626–635.
6. Ansermet C, Centeno G, Nikolaeva S, et al. La intrínsecarellotge circadiàinpodocytes controla la taxa de filtració glomerular. Ciència Rep. 2019;9:16089.
7. Stow LR, Richards J, Cheng KY, et al. El període circadià de proteïnes 1 contribueix al control de la pressió arterial i regula coordinadament els gens de transport renal de sodi. Hipertensió. 2012;59:1151–1156.
8. Zuber AM, Centeno G, Pradervand S, et al. El rellotge molecular està implicat en l'ajust circadià predictiu de la funció renal. Proc Natl Acad Sci U SA. 2009;106:16523–16528.
9. Nikolaeva S, Ansermet C, Centeno G, et al. La supressió específica de la nefrona del gen del rellotge circadià Bmal1 altera el plasma i el metaboloma renal i perjudica la disposició dels fàrmacs. J Am Soc Nephrol.2016;27:2997–3004.
10. Tokonami N, Mordasini D, Pradervand S, et al. Local renalrellotges circadianscontrolar l'homeòstasi dels electròlits fluids i la PA. J Am Soc Nephrol. 2014;25:1430–1439.
11. Motohashi H, Tahara Y, Whittaker DS, et al. El rellotge circadià s'interromp en ratolins amb nefropatia tubulointersticial induïda per adenina.RonyóInt. 2020;97:728–740.
12. Charles LE, Gu JK, Fekedulegn D, et al. Associació entre el treball per torns i la taxa de filtració glomerular en agents de policia. J Occup Environ Med.2013;55:1323–1328.
13. Boogaard PJ, Cabo ME. Augment de l'excreció d'albúmina en els treballadors industrials a causa del treball per torns en lloc de l'exposició prolongada a baixes concentracions d'hidrocarburs clorats. Occup Environ Med.1994;51:638–641.
14. Kim SJ, Kim JW, Cho YS, et al. Influència de la interrupció circadiana associada a la llum artificial a la nit en els patrons de micció dels treballadors per torns. IntNeurourol J. 2019;23:258–264.
15. Uhm JY, Kim HR, Kang GH, et al. L'associació entre el treball per torns i la malaltia renal crònica en treballadors manuals utilitzant dades de l'Enquesta d'examen nacional de salut i nutrició de Corea (KNHANES2011-2014). Ann Occup Environ Med. 2018;30:69.
16. Solocinski K, Richards J, All S, et al. Regulació transcripcional de NHE3 i SGLT1 per part delrellotge circadiàproteïna Per1 a les cèl·lules del túbul proximal.Am J Physiol Renal Physiol. 2015;309:F933–F942.
17. Wolf G. Regulació del cicle cel·lular en nefropatia diabètica. Kidney Int Suppl.2000;77:S59–S66.
18. Papadimitriou A, Silva KC, Peixoto EB, et al. La teobromina augmenta l'activitat NAD(þ)/Sirt-1 i protegeix el ronyó en condicions de diabetis. Am J Physiol Renal Physiol. 2015;308:F209–F225.
19. Perlis M, Ramsey KM, Bass J. El rellotge molecular és un reòstat metabòlic. Diabetis Obes Metab. 2015;17(suppl 1):99–105.
20. Ramanathan C, Kathale ND, Liu D, et al. La senyalització mTOR regula central i perifèricarellotge circadiàfunció. PLoS Genet. 2018;14:e1007369.
21. Sakaguchi M, Isono M, Isshiki K, et al. La inhibició de la senyalització mTOR amb rapamicina atenua la hipertròfia renal en els primers ratolins diabètics. Biochem Biophys Res Commun. 2006;340:296–301.
22. Godel M, Hartleben B, Herbach N, et al. Paper de mTOR en la funció dels podòcits i la nefropatia diabètica en humans i ratolins. J Clin Invest.2011;121:2197–2209.
23. Lenoir O, Jasiek M, Henrique C, et al. La cèl·lula endotelial i l'autofàgia podocítica protegeixen de manera sinèrgicadiabetis-glomeruloesclerosi induïda. Autofàgia. 2015;11:1130–1145.
24. Lu Q, Zhou Y, Hao M, et al. El mTOR promou la dapoptosi induïda per l'estrès oxidatiu de les cèl·lules mesangials en la nefropatia diabètica. Mol Cell Endocrinol.2018;473:31–43.
25. Chan JC. La determinació ràpida de l'àcid titulable urinari i l'amoni i l'avaluació de la congelació com a mètode de conservació. ClinBiochem. 1972;5:94–98.
26. Eisner C, Faulhaber-Walter R, Wang Y, et al. Contribució important de la secreció tubular a l'eliminació de creatinina en ratolins. Ronyó Int. 2010;77:519–526.
27. Ritchie ME, Phipson B, Wu D, et al. limma potencia les anàlisis d'expressió diferencial per a estudis de seqüenciació d'ARN i microarrays. Àcids nucleics Res.2015;43:e47.
28. Yu G, Wang LG, Han Y, et al. perfil de clúster: un paquet R per comparar temes biològics entre clústers de gens. Òmics. 2012;16:284–287.
29. Gerich JE, Meyer C, Woerle HJ, et al. Gluconeogènesi renal: la seva importància en l'homeòstasi de la glucosa humana.DiabetisCura. 2001;24:382–391.
30. Legouis D, Faivre A, Cippà PE, et al. Gluconeogènesi renal: paper subestimat de laronyóen el metabolisme sistèmic de la glucosa [e pub ahead of print]. Trasplantament de Nephrol Dial. Publicat en línia el 28 de novembre de 2020. https://doi.org/10.1093/ndt/gfaa302.
31. Zhang EE, Liu Y, Dentin R, et al. El criptocrom media la regulació circadiana de la senyalització d'AMPc i la gluconeogènesi hepàtica. Nat Med.2010;16:1152–1156.
32. Li X, Xu M, Wang F, et al. La interacció d'ApoA-IV amb NR4A1 i NR1D1 reprimeix la transcripció de G6Pase i PEPCK: regulació de la gluconeogènesi hepàtica mediada pel receptor nuclear en ratolins i una línia cel·lular d'hepatòcits humans. PLoS One. 2015;10:e0142098.
33. Weger BD, Gobet C, David FPA, et al. Anàlisi sistemàtica de l'expressió gènica hepàtica rítmica diferencial mediada pel rellotge circadià i els ritmes d'alimentació. Proc Natl Acad Sci US A.2021;118:e2015803118.
34. Fan W, Waizenegger W, Lin CS, et al. PPARd afavoreix la resistència a la carrera mitjançant la conservació de la glucosa. Metab cel·lular. 2017;25:1186–1193.e1184.
35. Saifur Rohman M, Emoto N, Nonaka H, et al.Rellotge circadiàEls gens regulen directament l'expressió de l'intercanviador Na(+)/H(+) NHE3 al ronyó. Ronyó Int. 2005;67:1410–1419.
36. Onishi A, Fu Y, Darshi M, et al. Efecte de la derrota específica dels túbuls renals de l'intercanviador de Na (+)/H (+) NHE3 en ratolins diabètics Akita. Am J PhysiolRenal Physiol. 2019;317:F419–F434.
37. Schibler U, Ripperger J, Brown SA. Oscil·ladors circadians perifèrics en mamífers: temps i alimentació. J Biol Ritmes. 2003;18:250–260.
38. Speed JS, Hyndman KA, Roth K, et al. L'alt nivell de sodi en la dieta provoca una asincronia del rellotge molecular renal a les rates. Am J Physiol RenalPhysiol. 2018;314:F89–F98.
39. Oishi K, Uchida D, Itoh N. La dieta baixa en carbohidrats i alta en proteïnes afecta l'expressió rítmica dels gens reguladors gluconeogènics i del rellotge circadià als teixits perifèrics del ratolí. Chronobiol Int.2012;29:799–809.
40. Oishi K, Uchida D, Ohkura N, et al. La dieta cetogènica altera larellotge circadiài augmenta el risc hipofibrinolític induint l'expressió d'un inhibidor de l'activador del plasminogen-1. Arterioscler Tromb Vasc Biol. 2009;29:1571–1577.
41. Sugino M, Furukawa K, Koinuma S, et al. Arrossegament diferencial dels rellotges perifèrics a la rata per glucocorticoides i alimentació. Endocrinologia.2012;153:2277–2286.
42. Souza RV, Sarmento RA, de Almeida JC, et al. L'efecte del treball per torns en els hàbits alimentaris: una revisió sistemàtica. Scand J Work Environ Health. 2019;45:7–21.
43. Kim Y, Park JY, Kim SB, et al. Els efectes de l'addicció a Internet sobre l'estil de vida i el comportament dietètic dels adolescents coreans. Nutr Res Pract.2010;4:51–57.
44. Canales MT, Holzworth M, Bozorgmehri S, et al. L'expressió del gen del rellotge està alterada en veterans amb apnea del son. Physiol Genòmica. 2019;51:77–82.
45. Egstrand S, Olgaard K, Lewin E. Ritmes circadians del metabolisme mineral en malaltia renal crònica-trastorn ossi mineral. Curr Opin NephrolHypertens. 2020;29:367–377.
46. Cao BB, Li D, Xing X, et al. Efecte del cisplatí sobre l'expressió gènica del rellotge al fetge, al cor ironyó. Biochem Biophys Res Commun.2018;501:593–597.
47. Schilperoort M, Rensen PCN, Kooijman S. Temps per a noves estratègies per mitigar el risc cardiometabòlic en treballadors per torns. Tendències Endocrinol Metab.2020;31:952–964.
