L'echinacòsid exerceix una activitat antitumoral en el càncer de fetge
Mar 31, 2022
Contacte:joanna.jia@wecistanche.com/ WhatsApp: 008618081934791
Wen Li*, Jing Zhou, Yajie Zhang, Jing Zhang, Xue Li, Qiao Yan, Jiabing Han i Fangdi Hu*
Resum
Antecedents:L'echinacòsid (ECH) és el principal ingredient actiu de Cistanches Herba, que se sap que té efectes terapèutics sobre els tumors metastàtics. Tanmateix, els efectes de l'ECH sobre el càncer de fetge encara no estan clars. Aquest estudi va ser per investigar els efectes de l'ECH sobre l'agressió de les cèl·lules canceroses del fetge.
Mètodes:Es van tractar dos tipus de cèl·lules de càncer de fetge Huh7 i HepG2 amb diferents dosis d'ECH en diferents moments i gradients. Es van utilitzar assajos de formació de colònies i MTT per determinar els efectes de l'ECH sobre la viabilitat de les cèl·lules Huh7 i HepG2. Es van utilitzar assajos Transwell i assajos de citometria de flux per detectar els efectes del tractament amb ECH sobre la invasió, la migració, l'apoptosi i el cicle cel·lular de les cèl·lules Huh7 i HepG2. L'anàlisi Western blot es va utilitzar per detectar els efectes de l'ECH en els nivells d'expressió de TGF- 1, smad3, smad7, proteïnes relacionades amb l'apoptosi (Caspasa-3, Caspasa{-8) i Cyto C en cèl·lules canceroses de fetge. La relació entre miR-503-3p i TGF- 1 es va detectar mitjançant l'anàlisi bioinformàtica i l'assaig del reporter de la luciferasa.
Resultats:Els resultats van mostrar que l'ECH va inhibir la proliferació, la invasió i la migració de les cèl·lules Huh7 i HepG2 de manera dependent de la dosi i del temps. A més, vam trobar que ECH va provocar l'apoptosi de les cèl·lules Huh7 i HepG2 bloquejant cèl·lules en la fase S. A més, es va trobar que l'expressió de miR-503-3p es reduïa als teixits del tumor hepàtic, però el tractament amb ECH va augmentar l'expressió de miR{-503-3p a les cèl·lules Huh7 i HepG2. A més, vam trobar que el TGF- 1 es va identificar com un objectiu potencial de miR-503-3p. ECH va promoure l'activació de la via de senyalització TGF- 1/Smad i va augmentar els nivells d'expressió de Bax/Bcl-2. A més, ECH podria desencadenar l'alliberament de Cyto C mitocondrial i provocar la reacció de grau Caspases.
Conclusions:Aquest estudi demostra que l'ECH exerceix activitat antitumoral mitjançant l'eix miR{-503-3p/TGF{- 1/Smad en càncer de fetge i proporciona un agent antitumoral segur i eficaç per al càncer de fetge.
Paraules clau: Echinacòsid, càncer de fetge, apoptosi, MiR-503-3p, TGF- 1/smad
Cistanche és un agent antitumoral segur i eficaç per al càncer de fetge.
Introducció
El càncer de fetge és un dels tumors malignes més freqüents amb una alta incidència, i la incidència del càncer de fetge ha anat creixent ràpidament [1]. L'hepatectomia és la millor manera de tractar el càncer de fetge per als pacients en les seves primeres etapes [2]. Tanmateix, la majoria dels pacients tenen recurrència i metàstasi després de la cirurgia. La taxa de supervivència 5-anyual és només d'un 3-5 per cent [2]. Per tant, es necessiten amb urgència nous enfocaments i agents terapèutics.
En els últims anys, el desenvolupament de fàrmacs contra el càncer i la investigació sobre fitoquímics han començat a prestar atenció a l'etnofarmacologia [3, 4]. Un gran nombre d'estudis clínics i experimentals han demostrat que els monòmers de medicaments poden inhibir la proliferació, metàstasi de cèl·lules de carcinoma hepatocel·lular, induir l'apoptosi i la diferenciació de cèl·lules canceroses [5]. Cistanches Herba és una planta que pertany a la família de les plantes, que és la medicina tradicional a la Xina i es coneix com "ginseng del desert" [6]. Cistanches Herba és rica en tipus de components químics, i els investigadors nacionals i estrangers n'han aïllat més d'un centenar de compostos, entre els quals hi ha glucòsids de feniletanol, lignans, terpens cicloalifàtics, sucres, aminoàcids, etc. [7]. L'echinacòsid (ECH) és el component principal de Cistanches Herba i també es considera generalment el seu principal ingredient actiu [6]. En els darrers anys, els estudis han demostrat que l'ECH pot ser una nova opció de tractament per a tumors agressius o àmpliament metastàtics [8]. Els estudis han trobat que l'ECH pot inhibir el càncer de pàncrees, la leucèmia, el càncer gàstric, el càncer d'endometri i molts altres tumors [9]. Tanmateix, no hi ha cap informe sobre l'efecte de l'ECH en la progressió del càncer de fetge.
Els miRNAs tenen un paper fonamental en la regulació post-transcripcional de l'expressió gènica (10). Estudis extensos han demostrat que els miRNA estan estretament relacionats amb el càncer de fetge [11] i l'esclerosi múltiple. MiR-503-3p és un miRNA recentment descobert que està implicat en la proliferació, migració i invasió de cèl·lules tumorals [12]. Tanmateix, la seva funció en el càncer de fetge no està clara. Actualment, la investigació dels gens objectiu aigües avall de miRNA es troba en una etapa relativament madura, però molts loci de gens objectiu romanen sense descobrir. La via de transducció del senyal TGF- 1/Smad3 és especialment important per a la tumorigènesi i el desenvolupament [13]. Es va trobar que la via TGF- 1/Smad3 es va activar en el model d'hepatoma, cosa que suggereix que la via TGF{{- 1/Smad3 va tenir un paper important en el desenvolupament del càncer de fetge [14]. Es considera que l'alta expressió de la via TGF- 1/Smad3 és una de les raons clau de l'aparició del càncer de fetge [15]. Per tal d'investigar més el mecanisme subjacent que va mediar els efectes de l'ECH sobre el càncer de fetge, es va explorar la via miRNA/TGF- 1/Smad3.
En aquest estudi, vam avaluar els efectes de l'ECH en la progressió de les cèl·lules canceroses de fetge i vam trobar que l'ECH exercia una activitat antitumoral mitjançant l'eix miR-503-3p/TGF{- 1/Smad en càncer de fetge, i proporciona un agent antitumoral segur i eficaç per al càncer de fetge.
cistanche tcmés anticancerígen.
Mètodes i materials
Materials
Echinacoside (ECH) (purity>98 per cent, monohidrat) es va obtenir de Hetian Dichen sashing Pharmaceutical Development Co., Ltd (Xinjiang, Xina). La fórmula estructural es mostra a la figura 1.
Cultiu cel·lular i transfecció
Les línies cel·lulars de càncer de fetge humà Huh7 i HepG2 es van comprar a FENGHUISHENGWU (Hunan, Xina). Les cèl·lules es van cultivar en medi DMEM complementat amb sèrum boví fetal al 10% (FBS, Gibco, EUA) a 37 graus en una incubadora de cèl·lules al 5% de CO2. MiR-503-3p mimic i miR-NC es van obtenir de Shanghai Gene Pharmaceutical Co., Ltd. (Xangai, Xina). Totes les transfeccions es van realitzar amb el reactiu Lipofectamine 2000 (Invitrogen) seguint les instruccions del fabricant. Després de 24-48 h addicionals, les cèl·lules transfectades es van recollir i processar per a estudis posteriors.
Assaig del reporter de la luciferasa
Els ARN totals es van extreure de les cèl·lules i el TGF- es va amplificar mitjançant els primers WT i MUT. Es va inserir un fragment de TGF- 1 al vector indicador de la luciferasa pGL{3-Bashc anomenat TGF- -WT-Luc. La regió d'unió de 1 i miR-503-3p es va mutagenitzar per formar un plasmidi mutant designat com a TGF- 1-Mut-Luc. TGF 1-WT-Luc i TGF- 1-Mut-Luc es van co-transfectar a cèl·lules amb miR-503-3p mimic i pRLTK. Les cèl·lules es van recollir 6 hores després de la transfecció. Es va utilitzar el kit d'assaig del reporter de doble luciferasa (Promega, Madison, WI, EUA) per determinar l'activitat de la luciferasa.
Assaig de creixement cel·lular
Les cèl·lules Huh7 i HepG2 (2 × 105) es van col·locar en plaques de 96-pous. A continuació, les cèl·lules es van tractar amb ECH durant 24, 36 i 48 h. Després d'això, es van afegir 10 ml de solució MTT a cada pou i les cèl·lules es van incubar durant 4 h. Després d'això, es van afegir 150 μL de DMSO als pous. I l'absorbància a 570 nm va ser mesurada per un lector ELISA (Aoweiya, Beijing, Xina).
Formació de colònies
Es va preparar una suspensió unicel·lular a partir de les cèl·lules transfectades i es va cultivar en una incubadora durant 7 dies. Després de descartar el medi, les cèl·lules es van tacar amb la taca de Wright durant 5 min i després es van tenyir amb una solució de colorant Giemsa i una solució tampó de fosfomolibdat de Sorensen (1:9) durant 10 min. Després del rentat, les colònies es van comptar al microscopi.
Assaig Transwell
Els assajos de migració i invasió es van realitzar a les cambres Transwell (Costar, Badhoevedorp, Te Netherlands) recobertes amb o sense Maribel (BD Biosciences) a la superfície superior de la membrana de {{0}}μm (mida de porus). Per a l'assaig de migració, les cèl·lules Huh7 i HepG2 transfectades es van tornar a suspendre en 200 µL de medi DMEM sense sèrum i es van sembrar a les cambres superiors. Per a l'assaig d'invasió, Matrigel (30 ug/pou) es va recobrir prèviament a les membranes de les cambres superiors i altres passos eren els mateixos que l'assaig de migració. Després d'una incubació de 24 h, les cèl·lules que havien migrat o envaït a través de la membrana a la superfície inferior es van fixar amb etanol i es van tenyir amb un 0, 2% de violeta cristal·lí. Finalment, es van observar i comptar cèl·lules en cinc camps aleatoris mitjançant un microscopi.
Anàlisi del cicle cel·lular
Les cèl·lules Huh7 i HepG2 es van sembrar en plaques 6-pous a una densitat d'1 × 105 cèl·lules/ml. Les cèl·lules es van recollir després de ser tractades amb ECH durant 0, 24, 48 h. A continuació, es van afegir aquestes cèl·lules amb 1 ml d'etanol al 75% prerefridat amb gel, fixat a 20 graus durant 2 h. Després d'això, les cèl·lules es van afegir amb una solució de tinció de PI i es van incubar a la foscor durant 15 min. Després es va analitzar el cicle cel·lular mitjançant citometria de flux.
Anàlisi de cèl·lules apoptòtiques
Les cèl·lules es van xapar en plaques de 6-pous a una densitat de 5 × 105 cèl·lules/pou. Després de la recollida, es van centrifugar les cèl·lules i es van afegir 195 μL de solució d'unió a Annexin V-FITC per resuspendre les cèl·lules. A continuació, es van afegir 5 μl d'annexina V-FITC i 10 μl de solució de tinció de iodur de propidi. Les cèl·lules es van incubar a la foscor i després es van col·locar en un bany de gel.
Cistanche protegeix el fetge.
PCR de transcripció inversa quantitativa (qRT-PCR)
Els ARN totals es van extreure mitjançant el reactiu TRIzol (Haigene, Haerbin, Xina). Es va utilitzar el sistema de PCR en temps real Te viiA™ 7 per a qRT-PCR. L'ARN es va transcriure inversament a l'ADNc mitjançant el kit de síntesi d'ADNc de la primera cadena BeyoRT™ (Beyotime Institute of Biotechnology). L'U6 es va utilitzar com a control endogen [16]. Les seqüències d'imprimació eren les següents:
miR-503-3p: endavant: 5′-CTGATGGTTAAGAGAATGT-3′,
miR-503-3p: revers: 5′-GTCCTTGGACATCCGGGCCG-3′,
U6: endavant: 5′-GACAGATTCGGTCTGTGGCAC-3′,
U6: revers: 5′-GATTACCCGTCGGCCATCGATC-3′.
Anàlisi Western blot
Es van recollir les cèl·lules transfectades i es van extreure proteïnes totals. Les concentracions de proteïnes es van determinar mitjançant el kit d'assaig de proteïnes BCA. Les mostres de proteïnes es van separar amb un 10% de SDS-PAGE i es van transferir a una membrana de fluorur de polivinilidè. A continuació, la membrana es va incubar amb anti-TGF- 1 (1:1000, Shifeng, Xangai, Xina), SMAD3 (1:1000, Shifeng, Xangai, Xina), SMAD 7 (1:1000, Shifeng, Xangai, Xina), Bcl-2 (1:1000, Shifeng, Xangai, Xina), Bax (1:1000, Shifeng, Xangai, Xina), Cyto C (1:1000, Shifeng, Xangai, Xina), caspasa{ {19}} (1:1000, Shifeng, Xangai, Xina), caspasa-8 (1:1000, Shifeng, Xangai, Xina) i anticossos anti- -actina (1:1000, Shifeng, Xangai) , Xina) durant la nit. Deu, la membrana es va incubar amb l'anticòs secundari anti-conill (1:1000, Shifeng, Xangai, Xina) [17].
Mètodes estadístics
Les dades es van presentar com a mitjana ± desviació estàndard (DE). Totes les anàlisis estadístiques es van realitzar amb el programari SPSS 13.0. La prova t de l'estudiant es va utilitzar per a les comparacions. El valor p <0,05 es="" va="" considerar="">
Resultats
Efecte de l'ECH sobre l'activitat i la proliferació de cèl·lules de càncer de fetge humà
Per investigar l'efecte de l'ECH en la funció de les cèl·lules de càncer de fetge humà, es va realitzar un assaig MTT i els resultats van mostrar que la viabilitat cel·lular de HepG2 (Fig. 2a) i Huh7 (Fig. 2b) es va reduir gradualment amb l'augment de la dosi i el temps de Tractament amb ECH en comparació amb el grup control (p <0.01). després="" de="" 48="" h="" d'exposició="" a="" ech,="" la="" viabilitat="" cel·lular="" era="" la="" més="" baixa,="" de="" manera="" que="" es="" va="" seleccionar="" 48="" h="" d'exposició="" a="" ech="" per="" a="" un="" experiment="" posterior.="" els="" resultats="" de="" l'assaig="" de="" formació="" de="" colònies="" van="" mostrar="" que="" el="" nombre="" de="" colònies="" de="" cèl·lules="" hepg2="" (fig.="" 2c)="" i="" huh7="" (fig.="" 2d)="" va="" disminuir="" gradualment="" amb="" el="" tractament="" d'ech="" de="" manera="" dependent="" de="" la="" dosi="" en="" comparació="" amb="" el="" grup="" control="" (p=""><0 0,01,="" p="">< 0,001).="" aquests="" resultats="" indiquen="" que="" l'ech="" té="" un="" paper="" important="" en="" l'activitat="" i="" la="" proliferació="" de="" les="" cèl·lules="">
Efectes de l'ECH sobre la migració i la invasió de cèl·lules de càncer de fetge humà
Per investigar més l'efecte de l'ECH sobre la funció de les cèl·lules de càncer de fetge humà, es va detectar la migració cel·lular i la invasió. Com es mostra a la figura 3a, b, en comparació amb el grup sense tractament d'ECH, la migració i la invasió de les cèl·lules Huh7 i HepG2 es van reduir significativament després del tractament d'ECH de manera dependent de la dosi (p.<0.01,><0.001), suggesting="" that="" ech="" inhibited="" the="" migration="" and="" invasion="" of="" huh7="" and="" hepg2="">
L'ECH va regular la distribució i l'apoptosi de cèl·lules de càncer de fetge humà
Per tal d'explorar l'efecte de l'ECH sobre l'apoptosi de cèl·lules de càncer de fetge, es va dur a terme citometria de flux. Com es mostra a la figura 4a, en comparació amb el grup control, el percentatge de cèl·lules Huh7 i HepG2 a la fase G0/G1 es va reduir significativament després del tractament amb ECH de manera dependent de la dosi (p.<0.01), and="" the="" percentage="" of="" huh7="" and="" hepg2="" cells="" in="" the="" s="" phase="" was="" gradually="" increased="" after="" ech="" treatment="" in="" a="" dose-dependent="" manner=""><0.01), but="" there="" was="" no="" change="" of="" the="" percentage="" of="" huh7="" and="" hepg2="" cells="" in="" g2/m="" phase="" after="" ech="" treatment="" (p="">0.05), que indica que l'ECH va provocar l'aturada en fase S de les cèl·lules Huh7 i HepG2. A més, amb l'augment de la dosi d'ECH, la taxa d'apoptosi de les cèl·lules Huh7 i HepG2 va augmentar gradualment en comparació amb el grup control (Fig. 4b, p.<0.01,><0.001). these="" results="" indicated="" that="" ech="" induced="" the="" apoptosis="" of="" huh7="" and="" hepg2="">
Els efectes de l'ECH sobre la via TGF-1/Smad
Se sap que la via de senyalització TGF- 1/Smad està molt implicada en l'apoptosi cel·lular. Per tal d'investigar el mecanisme de l'apoptosi induïda per ECH a les cèl·lules HepG2. Es va detectar l'expressió de la via de senyalització TGF- 1/Smad. En comparació amb el grup control, vam trobar que el tractament amb ECH va reduir significativament els nivells d'expressió de TGF- 1 i Smad3 tant a nivell d'ARNm (Fig. 5a) com de proteïnes (Fig. 5b), i va augmentar significativament l'expressió de Smad7 de manera dependent de la dosi tant a nivells d'ARNm com de proteïnes (pàg<0.01,><0.001). these="" results="" indicated="" that="" ech="" inhibited="" the="" activation="" of="" the="" tgf-β1/smad="" signaling="">
TGF-1 era un objectiu directe de miR-503-3p
A més, l'eina de predicció en línia Starbase v2. va demostrar que el TGF- 1 era un objectiu potencial de miR-503-3p (figura 6a). Els resultats de l'assaig del gen reporter de la luciferasa van mostrar que l'activitat de la luciferasa de les cèl·lules HepG2 i les cèl·lules Huh7 co-transfectades amb miR-503-3p mimic i TGF- 1-WT es va reduir significativament, però no les cèl·lules cotransfectades amb miR{{ {10}}p imitació i TGF- 1-MUT (Fig. 6b, p<0.01). similarly,="" the="" luciferase="" activity="" of="" hepg2="" and="" huh7="" cells="" co-transfected="" with="" mir-503-3p="" inhibitor="" and="" tgf-β1-="" mut="" was="" signifcantly="" increased,="" but="" not="" the="" cells="" co-transfected="" with="" mir-503-3p="" inhibitor="" and="" tgf-β1-wt="" (fig.="" 6c,=""><0.01). furthermore,="" the="" expression="" levels="" of="" tgf-β1="" were="" signifcantly="" reduced="" in="" the="" mir-503-3p="" mimic="" group="" compared="" with="" that="" in="" the="" nc="" group="" (fig.="" 6d,=""><0.01), but="" signifcantly="" increased="" in="" the="" mir-503-3p="" inhibitor="" group="" (fig.="" 6d,=""><0.05). these="" results="" suggested="" that="" tgf-β1="" was="" a="" direct="" target="" of="" mir-503-3p.="" to="" further="" investigate="" whether="" mir-503-3p="" mediated="" the="" effect="" of="" ech="" on="" liver="" cancer,="" the="" expression="" of="" mir-503-3p="" was="" detected="" in="" liver="" cancer="" tissues="" and="" it="" showed="" that="" the="" expression="" levels="" of="" mir-503-3p="" were="" decreased="" in="" liver="" cancer="" tissues="" compared="" with="" that="" in="" normal="" liver="" tissues="" (fig.="" 6f,=""><0.01). moreover,="" the="" expression="" levels="" of="" mir503-3p="" were="" further="" decreased="" in="" metastasis="" liver="" cancer="" tissues="" than="" that="" in="" nonmetastatic="" liver="" cancer="" tissues="" (fig.="" 6g,=""><0.01). the="" expression="" levels="" of="" mir-503-3p="" in="" hepg2="" and="" huh7="" cells="" were="" gradually="" increased="" after="" ech="" exposure="" (fig.="" 6e,=""><0.05,><0.01). taken="" together,="" these="" results="" suggest="" that="" mir-503-3p/tgf-β1="" may="" mediate="" the="" effect="" of="" ech="" on="" liver="">
Efecte de l'ECH sobre les activitats del citocrom C i les caspases
Com es mostra a la figura 7a, en comparació amb el grup control, vam trobar que el tractament amb ECH va induir una disminució significativa dels nivells d'expressió de Bcl-2 de manera dependent de la dosi (p<0.01,><0.001), while="" the="" expression="" levels="" of="" bax="" were="" signifcantly="" increased="" in="" a="" dose-dependent="" manner=""><0.01,><0.001). it="" was="" demonstrated="" that="" bcl-2="" and="" bax="" were="" involved="" in="" ech-induced="" apoptosis="" in="" hepg2="" and="" huh7="" cells.="" in="" addition,="" the="" expression="" levels="" of="" cyto="" c,="" caspase-8,="" and="" caspase-3="" were="" signifcantly="" increased="" in="" hepg2="" and="" huh7="" cells="" (fig.="" 7b,=""><0.01,><0.001), indicating="" that="" the="" release="" of="" cyto="" c="" and="" the="" activation="" of="" caspase-8="" and="" caspase-3="" were="" involved="" in="" ech-induced="" apoptosis="" in="" hepg2="" and="" huh7="">
Discussió
La resecció quirúrgica és el principal mètode de tractament per als pacients amb càncer de fetge, i la taxa de recurrència i metàstasi després de la resecció hepàtica és alta [18, 19]. En aquest estudi, hem trobat que l'ECH té un cert efecte inhibidor sobre els tumors hepàtics i proporciona un agent antitumoral segur i eficaç per al càncer de fetge. La pràctica clínica ha demostrat que la medicina tradicional xinesa pot alleujar eficaçment els símptomes clínics dels pacients amb càncer de fetge [20]. Per a ECH, els estudis han demostrat que ECH té efectes antioxidants, antidepressius, antiinflamatoris, antivirals, antitumorals i antibacterians [21, 22]. En el càncer colorectal, l'ECH pot induir l'apoptosi de les cèl·lules tumorals mitjançant la regulació positiva de la caspasa -3 i la divisió dels enzims de reparació de l'ADN per induir l'oxidació de l'ADN [23]. En aquest estudi, hem trobat per primera vegada que l'ECH exerceix activitat antitumoral mitjançant l'eix miR 503-3p/TGF- 1/Smad en càncer de fetge.
La fase intercel·lular del cicle cel·lular de les cèl·lules eucariotes es pot dividir en G1, S i G2. Els punts de regulació del cicle cel·lular en diferents períodes estan regulats per diferents factors reguladors [24]. Aquest estudi va trobar que el percentatge de cèl·lules Huh7 i HepG2 a la fase G0/G1 i G2/M es va reduir, i el percentatge de cèl·lules a la fase S es va augmentar després de l'ECH, cosa que indica que l'ECH va provocar l'aturada de la fase S. de cèl·lules Huh7 i HepG2. El desequilibri de l'apoptosi és un dels principals mecanismes dels tumors humans. S'ha informat que els fàrmacs quimioterapèutics antitumorals generalment indueixen l'apoptosi de les cèl·lules canceroses i controlen la progressió del càncer. En el nostre estudi, també vam trobar que l'ECH podria induir l'apoptosi de les cèl·lules canceroses de fetge de manera dependent de la dosi, cosa que suggereix que induir l'apoptosi de les cèl·lules canceroses pot ser un dels mecanismes subjacents de l'ECH en el càncer de fetge.
Els miRNA tenen un paper clau en la regulació de la proliferació cel·lular de HCC, cicle, apoptosi, migració mitjançant interaccions amb diferents vies i molècules de senyalització [25, 26]. Per exemple, es va trobar que miR-26a s'expressa molt a les cèl·lules hepàtiques normals, però està significativament regulat a la baixa a les cèl·lules canceroses del fetge i inhibeix la proliferació [27]. La sobreexpressió de miR-503-3p indueix l'apoptosi de les cèl·lules canceroses de pulmó i inhibeix la invasió i la migració cel·lular [28]. A més, un gran nombre d'estudis han demostrat que la via de senyalització TGF- 1/Smad té un paper fonamental en el desenvolupament del càncer de fetge [7]. A més, quan el càncer de fetge continua progressant, s'informa que l'expressió de TGF - 1 augmenta gradualment [29]. En aquest estudi, vam trobar que l'ECH regulava a la baixa TGF- 1 i Smad3 i Smad7 augmentava, demostrant que l'ECH va inhibir l'activació de la via de senyalització TGF{- 1/Smad. En aquest estudi, vam trobar que l'expressió de miR-503-3p es va reduir als teixits del tumor hepàtic, però el tractament amb ECH va augmentar l'expressió de miR{-503-3p a les cèl·lules Huh7 i HepG2. A més, vam trobar que el TGF- 1 es va identificar com un objectiu potencial de miR-503-3p. ECH va promoure l'activació de la via de senyalització TGF- 1/Smad i va augmentar els nivells d'expressió de Bax/Bcl-2. Aquests resultats suggereixen que la via de senyalització miR-503-3p/TGF{- 1/Smad pot mediar els efectes de l'ECH sobre el càncer de fetge. Se sap que l'augment de la relació Bax/Bcl-2 pot provocar que el Cito C dels mitocondris s'alliberi al citoplasma. La cito C interacciona amb la caspasa-8 i forma un cos apoptòtic que després recluta i activa la caspasa-3, que provoca la cascada de caspases i promou la mort cel·lular [30]. En aquest estudi, vam trobar que ECH va reduir l'expressió de Bcl-2 i augmentava l'expressió de Bax, Cyto C, caspasa-8 i caspasa-3. Aquests resultats suggereixen que l'ECH pot reparar la lesió mitocondrial fins a cert punt.
ConclusióEn aquest estudi, vam trobar que el tractament amb ECH va inhibir la proliferació, la invasió i la migració i va induir l'apoptosi de les cèl·lules canceroses del fetge. Es va trobar que el mecanisme subjacent del tractament amb ECH a les cèl·lules canceroses de fetge estava relacionat amb la via de senyalització miR-503-3p/TGF{- 1/Smad. Aquest estudi proporcionarà una certa base experimental per a la investigació de l'ECH sobre antitumorals. Val la pena assenyalar que el present estudi està limitat per la manca d'experiments amb animals. Per tant, el nostre futur estudi realitzarà experiments amb animals per confirmar encara més les nostres troballes.
