Efectes d'un nutracèutic basat en fruites i verdures sobre biomarcadors d'inflamació i estat oxidatiu en el plasma d'una població sana: un assaig clínic controlat amb placebo, doble cec i aleatoritzat

Correu electrònic de contactetina.xiang@wecistanche.comper a més informació

Resum: Hi ha evidència científica de l'efecte positiu depolifenolsa partir dels aliments vegetalsinflamació ioxidatiuestat. L'objectiu del present estudi va ser investigar si el tractament amb un nutracèutic d'alt nivell polifenòlic redueix la concentració plasmàtica de certsoxidatiuiinflamatòriabiomarcadors en una població sana. Es van seleccionar i estratificar cent vuit subjectes per sexe al grup d'intervenció (n {{0}}) i al grup placebo (n=55). Noranta-dos subjectes van completar l'estudi després de dues 16-setmanes de tractament separades per un període de rentat de quatre setmanes. Els resultats van revelar diferències estadísticament significatives en els subjectes tractats amb l'extracte polifenòlic en comparació amb el placebo: una disminució d'homocisteïna, lipoproteïna de baixa densitat oxidada (OxLDL), TNF-, sTNFR1 i proteïna C reactiva (CRP). La disminució més significativa es va observar per a OxLDL (de 78,98 ± 24,48 a 69,52 ± 15,64; p <{21}}.05) i="" crp="" (de="" 1,50="" ±="" 0.="" 33="" a="" 1,39="" ±="" 0,37;="" p=""><0,05), ambdós="" mostrant="" diferències="" significatives="" en="" comparació="" amb="" el="" placebo="" (p=""><0,001). a="" més,="" les="" catecolamines="" van="" augmentar="" després="" de="" l'administració="" del="" producte="" investigat,="" especialment="" en="" el="" cas="" de="" la="" dopamina="" (de="" 15,43="" ±="" 2,66="" a="" 19,61="" ±="" 5,73;="" p="">< 0,05).="" per="" tant,="" el="" consum="" d'un="" nutracèutic="" a="" base="" de="" fruites="" i="" verdures="" amb="" un="" alt="" contingut="" en="" polifenols="" sembla="" millorar="" els="" paràmetres="" relacionats="" amb="" els="" beneficis="" per="" a="" la="" salut="">oxidatiuiinflamatòriabiomarcadors), incloent canvis notables en l'expressió de catecolamines.

Paraules clau: polifenol; biomarcadors; estrès oxidatiu; fruita; vegetal; nutracèutic

1. Introducció

La literatura científica ha documentat el paper de la dieta en la prevenció de malalties no transmissibles com l'obesitat, les malalties cardiovasculars, el càncer i totes les causes de mort, especialment a través del consum de fruites i verdures pel seu alt contingut en compostos bioactius, principalment polifenols [1]. ,2]. Hi ha una relació inversa entre la dieta mediterrània, caracteritzada per un elevat consum de productes rics en polifenols, mitjançant el consum d'aliments i begudes riques en polifenols com ara fruites, verdures, cacau, te i cafè, i el risc de qualsevol causa. mortalitat [3,4]. Malgrat que s'ha demostrat que el consum de 800 g/dia de fruites i verdures redueix el risc de malalties cardiovasculars i mortalitat per totes les causes, i 600 g/dia redueix el risc de càncer, l'OMS i diverses pautes dietètiques encara recomanem 400 g/dia [5]. Tanmateix, la majoria de la població ni tan sols arriba al mínim establert per les autoritats sanitàries, que equival a cinc racions de fruites i verdures al dia [6,7]. Els beneficis relacionats amb un estil de vida saludable són coneguts arreu del món, sorgint nous productes que ofereixen la possibilitat d'incorporar els esmentats compostos bioactius a través de suplements/nutracèutics, la qual cosa ajuda a assolir les recomanacions nutricionals [8].

A més, a causa del progressiu envelliment de la població, entre altres factors com l'alimentació i l'estil de vida, es produeix un augment accelerat de les malalties neurodegeneratives, amb la MA com a principal exponent, la prevalença de les quals es duplica cada 20 anys. A causa de l'impacte i cost social que genera, s'han realitzat nombrosos estudis sobre la relació entre el consum de fruites i verdures com a aportació d'antioxidants que redueixenoxidatiudany a nivell cerebral [9].

Els polifenols es produeixen com a metabòlits secundaris de les plantes com a mecanisme de defensa contra condicions adverses (paràsits, clima o contaminació, entre d'altres) [10] i formen un ampli grup de fitoquímics bioactius, incloent àcids fenòlics, estilbens, lignans, alcohols fenòlics i flavonoides [11,12]. Proporcionen efectes potencials en la prevenció i tractament de diverses patologies, com les malalties cardiovasculars, el càncer, la diabetis mellitus i l'envelliment i les malalties neurodegeneratives [13] a través de diverses bioactivitats (activitat cardioprotectora, anti-inflamatòriaactivitat, activitat antienvelliment, activitat antioxidant, activitat anticancerígena, efectes antimicrobians, efectes neuroprotectors, efectes protectors pulmonars, efectes protectors renals, prevenció de l'osteoporosi i protecció contra la irradiació UV) [14]. Els polifenols s'atenueninflamaciósuprimint pro-inflamatòriafactors de transcripció de la interacció amb les proteïnes implicades en l'expressió gènica i la senyalització cel·lular [15]. La capacitat vasodilatadora, vasoprotectora, antitrombòtica, antilipèmica, antiescleròtica, antiinflamatòria i antiapoptòtica dels polifenols és conseqüència de les seves propietats saludables [12], tenint en compte que els polifenols són la principal font d'antioxidants (10 vegades superior a la vitamina). C i 100 vegades més gran que la vitamina E i els carotenoides) [16]. De fet, la quercetina, la miricetina i el kaempferol són flavanols, els flavonoides amb la capacitat de neutralització de radicals lliures més alta, ja que la seva estructura de grups fenòlics és capaç de capturar els electrons no aparellats de ROS, generant espècies reactives neutralitzades [17]. Tanmateix, la concentració de polifenols al plasma depèn molt de l'estructura química i la font dietètica, per la qual cosa és recomanable la ingesta a llarg termini per obtenir tots els beneficis relacionats [12].

L'objectiu de l'assaig clínic actual era avaluar si el consum a llarg termini d'una gran varietat de polifenols mitjançant un nutracèutic a base de fruites i verdures és capaç de millorar els biomarcadors relacionats ambinflamacióioxidatiuestat en subjectes sans que no consumeixen les quantitats recomanades de fruites i verdures. A més, la població sana no gran ha estat objecte de pocs estudis d'intervenció que relacionen el consum de fruites i verdures i els nivells de catecolamines com a variables relacionades amb la cognició [27,28,34].

2. Resultats

2.1. Estudiar la població

En aquest estudi es van incloure un total de 108 subjectes (la taula 1 mostra les seves dades demogràfiques), dividits en dos grups homogenis (N1 i N2). Finalment, després de l'encreuament i la pèrdua de seguiment, 92 subjectes (N1=48, N{2=44) ​​van completar la intervenció i es van incloure a l'anàlisi estadística final, tal com es mostra a la figura 1.

2.2. Biomarcadors plasmàtics

Les mitjanes i les desviacions estàndard de tots els biomarcadors analitzats en tots els subjectes, tant al principi com al final de la intervenció després de la ingesta d'extracte polifenòlic (EXT) o la ingesta de placebo (PLA), es mostren a la taula 2.

Pel que fa al perfil lipídic, la variació del colesterol de lipoproteïnes d'alta densitat (HDL) en funció del tipus de producte consumit va ser remarcable. Els valors de HDL es van reduir significativament després del consum de PLA (∆4,52mg/dL;p).<0.05),while increased="" significantly="" in="" the=""><0.05).additionally, the="" difference="" between="" both="" groups="" was="" also="" statistically="" significant="" at="" the="" end="" of="" the=""><0.05). finally,="" total="" cholesterol="" and="" triglycerides="" values="" did="" not="" show="" significant="" differences="" throughout="" the="" intervention="" after="" pla="" or="" ext="">
Regarding the vitamins analyzed, a slight increase in vitamin B12 was observed in both groups, as well as small non-significant variations in vitamin E values, as shown in Table2(p>0.05). Per exemple, la vitamina B12 va variar després del tractament d'ingrés tant en els grups PLA com en EXT; tanmateix, no es van trobar diferències significatives (p=0.43 i p=0.20, respectivament). En el cas de la vitamina E, els valors van variar en els grups PLA(p=0.98)i EXT(p{=0.91).A més, comparant els grups al final de la intervenció, no Es van observar diferències significatives per a la vitamina B12 (p=0,205) o la vitamina E (p{=0,974).

Pel que fa als valors de catecolamines, el principal descobriment va ser l'augment significatiu de la dopamina (∆4,18 pg/mL;p).<0.001)after consumption="" of="" ext="" with="" respect="" to="" pla="" (p="0.22)," showing="" significant="" differences="" between="" groups="" at="" the="" end="" of="" the="" intervention=""><0.001). a="" significant="" increase="" in="" norepinephrine="" values="" was=""><0.05), with="" an="" increase="" of="" ∆="" 39.21="" pg/ml="" in="" the="" ext="" group,="" not="" observed="" in="" the="" pla="" group="" (p="0.72)." there="" was="" no="" signifificant="" difference="" between="" the="" groups="" at="" the="" end="" of="" the="" study.="" analyzing="" the="" cortisol="" and="" adrenaline="" values,="" no="" signifificant="" differences="" were="" observed="" in="" any="" group="" during="" the="" intervention,="" nor="" at="" the="" end="" of="" the="">

La funció tiroïdal va ser determinada per les hormones T3, T4 i TSH. Durant la intervenció, es va observar que els valors de l'hormona T3 van disminuir significativament en ambdós grups (p < 0.05).="" els="" valors="" de="" l'hormona="" t4="" van="" variar="" de="" diferents="" maneres,="" augmentant="" significativament="" en="" el="" grup="" pla="" (∆="" 0,57="" mcg/l;="" p=""><0,001) i="" disminuint="" de="" manera="" no="" significativa="" en="" el="" grup="" ext="" (∆="" 0,47="" mcg).="" ).="" mentrestant,="" els="" valors="" de="" l'hormona="" tsh="" es="" van="" mantenir="" constants="" després="" del="" consum="" d'ambdós="" productes.="" comparant="" l'evolució="" de="" les="" tres="" hormones="" entre="" grups="" al="" final="" de="" l'estudi,="" no="" es="" van="" observar="" diferències="" significatives="" per="" a="" t3="" (p="0,195)," t4="" (p="0,195)" o="" tsh="" (p="">

Per determinar la seguretat dels productes investigats, es van analitzar les transaminases (GOT, GPT i GAMMA GT) per tal d'avaluar la funció hepàtica dels subjectes, sense observar canvis significatius (p > 0.05) en cap dels enzims hepàtics esmentats després del consum del producte o del placebo. Per tant, es pot suposar que la ingesta dels productes és segura.

3. Discussió

Com s'ha comentat anteriorment, les dades obtingudes en el present manuscrit reflecteixen algunes diferències entre tractaments. Tanmateix, en condicions basals, no es van observar diferències significatives entre grups, la qual cosa reforça els canvis significatius obtinguts després del consum del producte.

L'homocisteïna plasmàtica es considera un indicador de risc cardiovascular que es pot modificar mitjançant l'exercici i la dieta. A més, el seu alt efecte neuroprotector és ben conegut [35,36]. Tanmateix, sembla que els aliments proporcionen un subministrament constant de nutrients per mantenir un metabolisme òptim de l'homocisteïna [37]. En el nostre estudi, l'homocisteïna va disminuir significativament després del consum del producte, com en estudis anteriors [22,38]. Per tant, el consum de polifenols en dosis elevades ajuda a reduir l'homocisteïna, que es podria considerar com a capacitat cardioprotectora. Al seu torn, el perfil lipídic, el colesterol total i els triglicèrids no es van veure afectats durant la intervenció. No obstant això, cal destacar que el colesterol HDL plasmàtic va augmentar significativament després del consum del producte i va disminuir després del consum del placebo. Aquests canvis en les lipoproteïnes plasmàtiques reforcen la idea de la capacitat cardioprotectora del producte investigat.

El principal descobriment de la present investigació va ser la disminució significativa d'OxLDL, juntament amb l'augment del colesterol HDL després del consum crònic de l'extracte ric en polifenols respecte al placebo. Aquests resultats estan en concordança amb estudis anteriors que recolzen que els polifenols mostren protecció contra l'aterosclerosi, inhibint així la proliferació del múscul llis vascular [12,39,40]. L'OxLDL és un dels pocs paràmetres reconeguts per l'Autoritat Europea de Seguretat Alimentària (EFSA), en el marc de les declaracions de funció, i sembla ser una variable de resultat adequada per a la justificació de les declaracions de salut relacionades amb la reducció del dany oxidatiu als lípids. 41,42]. A més, OxLDL promou l'adhesió dels monòcits a les cèl·lules endotelials mitjançant un mecanisme independent de l'expressió d'ICAM-1 i VCAM-1, generant cèl·lules espumosos [43]. Tanmateix, això no passa amb LDL [44]. Aquesta unió es realitza a través de certs receptors, com el CD36. OxLDL és un lligand per a PPAR i regula l'expressió de CD36, afavorint la captació d'OxLDL als macròfags [45] i, en conseqüència, contribuint al desenvolupament de l'aterosclerosi mitjançant l'activació del sistema immunitari [46]. Curiosament, OxLDL promou la disfunció endotelial i l'aterosclerosi, disminuint així el risc cardiovascular [47,48].

Al seu torn, el tractament amb el producte investigat va provocar una reducció plasmàtica de la CRP, una proteïna de fase aguda sintetitzada al fetge, mediada per altres citocines, especialment IL-1 i IL-6 [49]. Els nivells alts de PCR es correlacionen amb un augment del risc d'esdeveniments cardiovasculars, fins i tot en individus sans [50]. Diversos estudis han trobat una associació entre les concentracions de CRP i els esdeveniments cardiovasculars com l'infart agut de miocardi, l'ictus i la progressió de la malaltia oclusiva arterial perifèrica [51,52]. Tot i que els nivells obtinguts en CRP es troben dins dels rangs normals per a una persona sana, la disminució d'aquests nivells mostra la validesa dels polifenols en aquest sentit.

A més, el marcador immunoinflamatori TNF- es va reduir significativament després del consum de l'extracte. El TNF- és una citocina proinflamatòria que s'expressa significativament en el teixit adipós, així com en leucòcits, cèl·lules endotelials i cèl·lules musculars [53], participant en la desregulació endotelial, estimulant la migració de monòcits i macròfags i induint l'expressió de molècules d'adhesió. [54]. De fet, es pot produir un augment de TNF- en una dieta amb una concentració baixa de carotens, la qual cosa pot explicar la reducció observada en els nivells de TNF- [55]. Per tant, té sentit que en el nostre estudi disminueixi el seu valor després del consum del producte a causa de l'elevada presència de carotens en el producte.

L'extracte polifenòlic utilitzat per a la present investigació ha estat provat en diversos estudis d'intervenció, amb diferents temps de consum i en diferents grups de població, donant lloc a resultats inconsistents. En una intervenció d'una {{{0}}setmana en homes entrenats que pertanyen a les forces de policia especials austríaques, es van registrar reduccions significatives (p < 0,001)="" en="" la="" concentració="" de="" grups="" carbonil="" en="" proteïnes="" i="" tnf-="" a="" les="" setmanes="" 16="" i="" 28.="" .="" una="" diferència="" amb="" el="" nostre="" estudi="" va="" ser="" que="" en="" el="" seu="" estudi="" es="" van="" obtenir="" mostres="" a="" les="" setmanes="" 4,="" 8,="" 16="" i="" 28.="" en="" particular,="" els="" valors="" van="" augmentar="" fins="" a="" la="" setmana="" 8="" i="" van="" disminuir="" a="" partir="" de="" la="" setmana="" 16="" [56].="" en="" una="" intervenció="" de="" vuit="" setmanes="" en="" subjectes="" amb="" sobrepès="" i="" obesitat="" majors="" de="" 40="" anys,="" es="" van="" reportar="" reduccions="" significatives="" del="" colesterol="" total,="" el="" colesterol="" ldl="" i="" el="" tnf-,="" que="" no="" es="" van="" obtenir="" amb="" el="" placebo;="" tanmateix,="" no="" es="" van="" trobar="" diferències="" significatives="" en="" crp,="" stnfr1="" o="" oxldl="" [57].="" tots="" dos="" resultats="" semblen="" confirmar="" que="" la="" ingesta="" de="" polifenols="" a="" llarg="" termini,="" com="" en="" el="" nostre="" estudi="" (16="" setmanes),="" s'associa="" a="" una="" major="" efectivitat="" contra="" la="" inflamació.="" en="" una="" altra="" intervenció="" de="" vuit="" setmanes="" en="" dones="" obeses,="" es="" van="" observar="" millores="" significatives="" en="" diversos="" marcadors="" d'oxidació="" de="" proteïnes="" com="" les="" proteïnes="" carbonil,="" oxldl="" (p="0.015)" i="" l'oxidació="" total="" de="" lípids="" de="" tots="" els="" lípids.="">inflamatòriamarcadors, es van observar reduccions significatives de TNF- (p=0.011). A l'inici, els valors de TNF estaven per sobre del rang establert en els grups placebo i extracte; al final de la intervenció, es van mantenir elevats en el grup placebo i van disminuir fins als valors normals en el grup que va consumir el producte [58]. Finalment, l'eficàcia de l'extracte també s'ha provat en subjectes no sans, informant d'una reducció d'OxLDL després d'un període de consum de tres mesos per part de grans fumadors [59].

Pel que fa a les catecolamines, es van observar augments significatius de la noradrenalina i, especialment, de la dopamina després del consum del producte investigat. Tanmateix, no es van observar canvis significatius per al cortisol i l'adrenalina en cap grup. Tot i que alguns estudis anteriors han informat d'una reducció del cortisol al plasma [60] o la saliva [61] després de la ingesta de polifenols, això no és habitual, i els valors rarament mostren canvis significatius [62-64] pel que fa a la ingesta de polifenols. El fet que tant els valors d'adrenalina com de cortisol no augmentin implica que no es va desenvolupar una resposta adrenèrgica vinculada al consum del producte. La noradrenalina i la dopamina també augmenten en pacients grans amb malalties neurodegeneratives [65,66] i estan relacionades amb l'ansietat [67] i la millora cognitiva [68]. A més, la norepinefrina està estretament relacionada amb l'atenció, així com amb l'alerta [69,70]. Els resultats obtinguts en el present estudi en termes de dopamina i noradrenalina podrien estar relacionats amb les millores a nivell cognitiu observades en una altra publicació [71]. Podem afirmar que el consum de polifenols, per tant, augmenta els nivells d'alerta i atenció, que es correlacionen amb els resultats a nivell de proves cognitives [71]

Una limitació del present assaig clínic, tal com la descriuen Di Lorenzo et al. [10] en un estudi sistemàtic sobre la biodisponibilitat dels polifenols, és que la inclusió de subjectes sans en els assaigs clínics dificulta l'avaluació de diferències significatives en els biomarcadors, que es veuen alterats en condicions patològiques. Altres limitacions d'aquest estudi inclouen el fet que els metabòlits dels compostos fenòlics del producte no es van determinar més enllà del contingut de vitamina E o de la resposta individual, cosa que podria afectar la biodisponibilitat i la bioactivitat dels polifenols [72].

És important recordar que els voluntaris del present estudi són subjectes sans i els biomarcadors d'inflamació que hem determinat es troben entre valors normals en plasma. Per tant, les diferències observades dins del rang de valors normals d'aquests biomarcadors, tot i ser estadísticament significatives, no són sorprenents des del punt de vista clínic. Tanmateix, si el producte en estudi ha aconseguit canvis estadísticament significatius en persones sanes, aquests canvis podrien ser encara més grans en pacients amb valors anormals [73,74], ja que els polifenols del producte ajudarien a combatre almenys parcialment l'agent causant aquesta interrupció. del nivell plasmàtic [75].

Per tant, les futures investigacions podrien centrar-se a considerar aquests aspectes tant en poblacions sanes com no sanes.

4. Materials i Mètodes

4.1. Disseny de prova

Aquest estudi va consistir en un assaig clínic aleatoritzat, creuat, doble cec, estratificat per sexe i controlat amb placebo per avaluar l'efectivitat del consum diari d'un nutracèutic encapsulat (Juice Plus plus Premium®, The Juice Plus plus Company, Collierville). , TN, EUA) basat en diferents fruites i verdures sobre biomarcadors de plasma sanguini d'inflamació i estat oxidatiu. La intervenció va tenir una durada de 36 setmanes: dos períodes de 16 setmanes separats per un període de rentat de 4 setmanes. Durant la intervenció, els subjectes van acudir al laboratori quatre vegades (a l'inici i al final de cada fase), obtenint mostres de sang en condicions de dejuni. A l'inici de cada fase, el producte (EXT o PLA) es lliurava als subjectes i, al final de cada fase, els subjectes havien de retornar els paquets perquè els investigadors quantifiquessin la resta de productes.

Cada subjecte va signar un document de consentiment informat i se li va assignar un codi numèric per ordre d'arribada; posteriorment, un investigador extern va realitzar l'aleatorització mitjançant un generador computaritzat (Epidat v4.1 Epi-dat, Espanya) assignant els subjectes a un dels grups. Ni els investigadors ni els subjectes sabien a quins grups pertanyien els subjectes. Tant el producte com el placebo es van marcar amb codis proporcionats per l'empresa distribuïda i classificats en A i B, i només al final de l'estudi es va notificar als investigadors quin codi corresponia al producte i quin al placebo. El protocol ha estat aprovat per la Comissió de Revisió Institucional de la Universitat Catòlica San Antonio de Múrcia (UCAM) (data: 24 de novembre de 2017; codi: CE111072). Aquest estudi es va dur a terme seguint els estàndards de bona pràctica clínica i s'ha dut a terme d'acord amb la Declaració d'Hèlsinki. L'assaig es va registrar a www.clinicaltrials.gov (accedit l'11 de juny de 2020) (identificador CFE/JU/44-17). L'estudi es va dur a terme al Departament de Farmàcia de la Facultat de Ciències de la Salut de la Universitat Catòlica San Antonio de Múrcia (UCAM). S'ha complert la legislació europea vigent en matèria de protecció de dades personals (Reglament (UE) 2016/679).

4.2. Participants

Els subjectes havien de complir tots els criteris d'inclusió (signar el consentiment informat, IMC entre 18,5 i 35 kg/m2, no patir cap malaltia crònica, no consumir més de tres racions de fruites i verdures al dia i edats compreses entre els 18 anys). i 65 anys) i no complir cap dels criteris d'exclusió (estar en medicació o en tractament farmacològic, prendre multivitamínics, al·lèrgic a fruites o verdures, estar a dieta, ser vegetarià o vegà, fumar, consumir més de 3 gots d'alcohol ( vi o cervesa) al dia, estar embarassada, s'ha fet una cirurgia important en els darrers tres mesos, ha tingut problemes per dormir i ha donat 0,5 L de sang en els darrers tres mesos). Després de comprovar els criteris d'inclusió/exclusió, un total de 108 subjectes d'ambdós sexes van iniciar l'estudi. Es va realitzar una verificació per garantir que els subjectes seguien complint els criteris al llarg de totes les visites a la unitat mitjançant una enquesta d'índex d'estil de vida mediterrani (MEDLIFE) per avaluar els hàbits dietètics i l'activitat física [76]. Durant la intervenció, 16 subjectes es van perdre de seguiment, de manera que el

el nombre de subjectes que van completar l'estudi va ser de 92, les dades demogràfiques dels quals es mostren a la taula 1.

4.3. Suplement de prova

El producte investigat i el placebo tenien les mateixes característiques, i tots dos van ser fabricats i subministrats per The Juice Plus Plus Company, Collierville, TN, EUA. La presentació va ser en forma de productes farmacèutics encapsulats de color blanc, subministrats en ampolles diferenciades només per un codi. Un cop finalitzat l'estudi, els investigadors van rebre quin codi pertanyia al producte i quin al placebo. Les diferències en el producte comercial eren que consistia en una ingesta de tres tipus diferents de càpsules al dia: dues de baies barrejades, dues de fruites barrejades i dues de verdures barrejades, cadascuna proporcionada en una ampolla separada. Per aquest motiu, i per poder fabricar un producte similar i un placebo, es va optar per fabricar càpsules que continguin una barreja de les tres càpsules esmentades (baies, fruites i verdures), per la qual cosa el consum diari d'aquest estudi era de sis. càpsules: tres abans de l'esmorzar i tres a mitja tarda, acompanyades d'aigua.

El producte investigat es va proporcionar en càpsules blanques opaques i contenia pols i pols de suc de fruites, verdures i baies de poma, taronja, pinya, nabiu, préssec, cirera acerola, remolatxa, pruna, dàtil, mango, pastanaga, julivert, col rizada, bròquil, col, espinacs, segó d'arròs, tomàquet, fulles de carxofa, nabius, mores, grosella negra, nabius, nabius, raïm concòrdia, saüc, extracte de llavors de raïm, extracte de te verd, arrel de gingebre, gerds, cacau, magrana, barreja natural de tocoferols ( , δ, , -tocoferols, gira-sol -tocoferol), barreja de carotenoides naturals (luteïna, -carotè, licopè, astaxantina), pectina cítrica, bioflavonoides cítrics, pell de llimona, carbonat de calci, all en pols, espirulina, barreja d'enzims naturals, diòxid de silici , estearat de magnesi d'origen vegetal, tangeretina i Lactobacillus acidophilus. Una dosi diària de 6 càpsules va proporcionar 2,91 mg de carotè, 18,7 mg de vitamina E, 159 mg de vitamina C, 318 µg de folat, 6,1 mg de luteïna, 1 mg de licopè i 0,15 mg d'astaxantina. El placebo consistia en cel·lulosa microcristal·lina, midó d'arròs, càpsula vegetariana (cel·lulosa), estearat de magnesi i colors artificials (FD&C groc #6 i FD&C blau #1).

La caracterització polifenòlica del producte es va realitzar en un estudi previ de Bresciani et al. mitjançant UHPLC-QqQ-MS, mostrant un total de 119 compostos polifenòlics de diferents famílies fenòliques, inclosos flavonols com el kaempferol i la quercetina, les antocianines i les flavones [77]. Pel que fa a la biodisponibilitat, el coneixement de la quantitat biodisponible de polifenols és més interessant que la quantitat total, ja que, en moltes situacions, els polifenols més abundants no són els més actius per a l'organisme [78]. Per aquest motiu, Bresciani et al. va avaluar la biodisponibilitat del producte, trobant que de les 92 molècules monitoritzades només es van identificar 20 metabòlits circulants al plasma, tots ells com a restes de sulfat, glucurònid o glicina, que apareixen en diferents moments al plasma en funció de la ubicació d'absorció en el tub digestiu [79].

4.4. Variables d'estudi

Totes les variables es van analitzar quatre vegades durant l'estudi: al principi i al final de cada 16-fase de consum de producte setmanal. Durant l'estudi, els subjectes no van poder iniciar o modificar cap tractament hormonal, ni fer canvis significatius en la dieta o l'activitat física que poguessin afectar les variables de l'estudi.

Mesures de mostres de sang

Els subjectes havien d'arribar després d'un període de dejuni de 12 h, només permetent la ingesta d'aigua en les 3 h anteriors. L'exercici d'intensitat moderada-alta no es va permetre 24 hores abans de l'extracció. Es van recollir mostres de sang de la vena antecubital en un tub de recollida de sang k3E/K3EDTA (3 ml) i tubs de recollida de sang de gel sèric i activador de coàguls (5 ml) *3. Abans de ser enviats al laboratori (Laboratoris MUNUERA SL Múrcia, Espanya), només es van centrifugar els tubs de recollida de sang de gel sèric i activador de coàguls (4500 rpm, 5 min, 4 ◦C). Els biomarcadors analitzats per a cada variable van ser: (a) Biomarcadors proinflamatoris: OxLDL (ng/mL) per assaig ELISA en mostres de sèrum, TNF- (pg/mL) i sNTFR1 (ng/mL) per ELISA competitiu (marca de diagnòstic DRG), CRP (mg/L) per immunoassaig turbidimètric (PETIA) i homocisteïna (pg/mL) en un analitzador BN ProSpec® (segons el protocol proporcionat al kit Siemens N Latex HCYOPAX 03); (b) vitamines: vitamina E (mcg/mL) per HPLC amb un cromatògraf JASCO (PU-980 IntelligentPLC-Plus) i una columna Betasil-C18 (mida de partícula 5 µm, 250 × 4,6 mm) connectada a una fluorescència JASCO detector (FP-920 Intelligent Fluorescense Detector) i vitamina B12 (pg/ml) per quimioluminescència amb immunoassaigs comercials mitjançant equips automatitzats Centaur XPsiemens Diagnostics (Siemens Healthcare SA); (c) catecolamines: cortisol (mcg/L) mitjançant la tècnica de quimuminescència amb immunoassaig Immulite 2000 (DPC, Gwynedd, RU) i noradrenalina (pg/mL), adrenalina (pg/mL) i dopamina (pg/mL) per HPLC amb un flux de 0,5 ml/min, Tº de 35 ◦C, la sensibilitat de 20, el potencial de 0,7, una fase mòbil d'acetonitril-aigua i fase inversa de C18 utilitzant n electroquímic detector; (d) hormones tiroïdals: T3 (mcg/L), T4 (mcg/L) i TSH (mU/l) mitjançant equips automatitzats CentaurXP Siemens Diagnostics (Siemens Healthcare SA); (e) estat immune: IgA (mg/L) mitjançant la tècnica de turbidimetria amb la prova Monolab. Com a reactius, es van utilitzar tampó Tris (20 mmol/L), PEG 8000 i pH 8,3 com a diluent i sèrum de cabra, IgA anti-humana i pH 7,5 com a anticossos.

4.5. Anàlisi estadística

Les variables contínues es presenten com a mitjana ± desviació estàndard (DE) a la línia de base i en la seva evolució, aplicant la prova de Kolmogorov-Smirnov per verificar la distribució normal de les dades discontínues. L'anàlisi es va realitzar per a tots els subjectes que van participar en l'estudi, tant en el període de consum de producte com de placebo. Per a les variables quantitatives, es va realitzar una comparació de la prova t de Student entre les dues branques de l'estudi. Per analitzar les diferències entre els grups (EXT i PLA) en l'evolució de les diferents variables, es va realitzar una anàlisi de variància de mesures repetides amb el temps com a factor intrasubjecte. D'aquesta manera, es van establir diferències per a cada variable analitzada, tenint en compte aquests factors. Es va realitzar una prova de Bonferroni per a l'anàlisi post-hoc. Es van comparar diferències significatives (amb l'opció d'assumir igualtat de variància o no). En el conjunt de proves estadístiques, el nivell de significació escollit va ser 0,05. L'anàlisi estadística es va realitzar amb el programari SPSS 24 (SPSS, Inc., Chicago, IL, EUA).

5. Conclusions

La nostra investigació va demostrar que el consum crònic d'un extracte polifenòlic a base de baies, fruites i verdures en una població sana que no menja les quantitats recomanades de fruites i verdures al dia millora l'estat oxidatiu i la inflamació mitjançant una millora en diversos biomarcadors sanguinis, especialment OxLDL, CRP i colesterol HDL, millorant també els valors de les catecolamines, especialment la dopamina.

Aportacions de l'autor: Adquisició de finançament, MPZ i JM; investigació, RA i JM; metodologia, RA, J.Á.C., RX-M., BC, DV, MPZ i JM; administració de projectes, JM; supervisió, JM; validació, JM; redacció: revisió i edició, RA, J.Á.C. i JM Tots els autors han llegit i han acceptat la versió publicada del manuscrit.
Finançament: aquest estudi va ser finançat per Juice Plus Company. En cap moment l'empresa ha col·laborat en el disseny o gestió de les dades obtingudes.
Declaració de la Junta de Revisió Institucional: Aquest estudi s'ha realitzat d'acord amb les directrius de la Declaració d'Hèlsinki, aprovada pel Comitè d'Ètica de la Universitat Catòlica San Antonio de Múrcia (UCAM) (data: 24 de novembre de 2017; codi: CE111702).
Declaració de consentiment informat: es va obtenir el consentiment informat de tots els subjectes implicats en l'estudi.

Declaració de disponibilitat de dades: no és necessari.
Agraïments: els autors agraeixen als subjectes la participació en l'estudi, així com a JuicePlus Company pel suport i la promoció de la investigació.
Conflictes d'interessos: els autors declaren que no tenen cap conflicte d'interès pel que fa al present manuscrit.
Disponibilitat de la mostra: No aplicable.

Referències

1. Aune, D.; Giovannucci, E.; Boffetta, P.; Fadnes, LT; Keum, N.; Norat, T.; Greenwood, DC; Riboli, E.; Vatten, LJ; Tonstad, S. La ingesta de fruites i verdures i el risc de malaltia cardiovascular, càncer total i mortalitat per totes les causes: una revisió sistemàtica i una metaanàlisi de dosi-resposta d'estudis prospectius. Int. J. Epidemiol. 2017, 46, 1029–1056. [CrossRef] [PubMed]
2. Slavin, JL; Lloyd, B. Beneficis per a la salut de fruites i verdures. Adv. Nutr. 2012, 3, 506–516. [Ref creuat]
3. Tresserra-Rimbau, A.; Rimm, EB; Medina-Remón, A.; Martínez-González, MA; López-Sabater, MC; Covas, MI; Corella, D.; Salas-Salvadó, J.; Gómez-Gracia, E.; Lapetra, J.; et al. Ingesta de polifenols i risc de mortalitat: una reanàlisi de l'assaig PREDIMED. BMC Med. 2014, 12, 77. [CrossRef]
4. Tresserra-Rimbau, A.; Rimm, EB; Medina-Remón, A.; Martínez-González, MA; de la Torre, R.; Corella, D.; Salas-Salvadó, J.; Gómez-Gracia, E.; Lapetra, J.; Arós, F.; et al. Associació inversa entre la ingesta habitual de polifenols i la incidència d'esdeveniments cardiovasculars a l'estudi PREDIMED. Nutr. Metab. Cardiovasc. Dis. 2014, 24, 639–647. [Ref creuat]
5. Blomhoff, R.; Andersen, LF; Iversen, PO; Johansson, L.; Smeland, S. Kostråd per å fremme folkehelsen og forebygge kroniske syk dommer. Mètode. Vitensk. kunnskapsgrunnlag 2011. Disponible en línia: https://www.helsedirektoratet.no/rapporter/kostrad for-a-fremme-folkehelsen-og-forebygge-kroniske-sykdommer-metodologi-og-vitenskapelig-kunnskapsgrunnlag/Kostr percentatge C3 percent A5d percent 2{{52 }}per cent per cent 20 per cent C3 per cent A5 per cent 20fremme per cent 20folkehelsen per cent 20og per cent 20forebygge per cent 20kroniske per cent 20sykdommer per cent 20 per cent E2 per cent 80 per cent 93 per cent 2 0metodologi per cent 20og per cent per cent 20og per cent 20vitenskapeln{100}{101}{100}{101} /attachment/inline/2a6293e0-169e-41bd-a{872-f3952dbb22c2:0d09926111d614e6059e804b7f9b21c17bd0c1cd/Kostr per cent 2002dbb22c2:0d09926111d614e6059e804b7f9b21c17bd0c1cd/Kostr per cent per cent 2002020000000000000000000000% forebygge percent 20kroniske percent 20sykdommer percent 20 percent E2 percent 80 percent 93 percent 20metodologi percent 20og percent 20vitenskapelig percent 20kunnskapsgrunnlag.pdf (consultat l'11 de gener de 2021).
6. Benton, D.; Jove, HA El paper dels sucs de fruites a l'hora d'assolir la 5-recomanació diària per a la ingesta de fruites i verdures. Nutr. Rev. 2019, 77, 829–843. [CrossRef] [PubMed]
7. Li, Y.; Zhang, D.; Pagán, JA Normes socials i consum de fruites i verdures als barris de la ciutat de Nova York. J. Urban Health 2016, 93, 244–255. [CrossRef] [PubMed]
8. Sachdeva, V.; Roy, A.; Bharadvaja, N. Perspectives actuals dels nutracèutics: una revisió. Curr. Farmàcia. Biotecnologia. 2020, 21, 884–896. [Ref creuat]
9. Román, GC; Jackson, RE; Gadhia, R.; Román, AN; Reis, J. Dieta mediterrània: el paper dels àcids grassos ω-3 de cadena llarga en el peix; polifenols en fruites, verdures, cereals, cafè, te, cacau i vi; probiòtics i vitamines en la prevenció de l'ictus, el deteriorament cognitiu relacionat amb l'edat i la malaltia d'Alzheimer. Rev. Neurol. 2019, 175, 724–741. [Ref creuat]
10. Di Lorenzo, C.; Colombo, F.; Biella, S.; Stockley, C.; Restani, P. Polifenols i salut humana: el paper de la biodisponibilitat. Nutrients 2021, 13, 273. [CrossRef]
11. Manach, C.; Williamson, G.; Morand, C.; Scalbert, A.; Rémésy, C. Biodisponibilitat i bioeficàcia dels polifenols en humans. I. Revisió de 97 estudis de biodisponibilitat. Am. J. Clin. Nutr. 2005, 81, 230S–242S. [Ref creuat]
12. Quiñones, M.; Miguel, M.; Aleixandre, A. Polifenols, compostos naturals amb efectes beneficiosos sobre les malalties cardiovasculars. Nutr. Hosp. 2012, 27, 76–89. [Ref creuat]
13. Li, S.; Tan, HY; Wang, N.; Cheung, F.; Hong, M.; Feng, Y. El mecanisme potencial i d'acció dels polifenols en el tractament de les malalties del fetge. Òxid. Med. Cèl·lula. Longev. 2018, 2018, 8394818. [CrossRef]
14. Li, A.; Li, S.; Zhang, Y.; Xu, X.; Chen, Y.; Li, H. Recursos i activitats biològiques dels polifenols naturals. Nutrients 2014, 6, 6020–6047. [Ref creuat]
15. Panell de l'EFSA sobre additius alimentaris i fonts de nutrients afegides als aliments (ANS). Avaluació del risc per a dones peri i postmenopàusiques que prenen complements alimentaris que contenen isoflavones aïllades. EFSA J. 2015, 13, 4246. [CrossRef]
16. Rice-Evans, CA; Miller, NJ Activitats antioxidants dels flavonoides com a components bioactius dels aliments. Bioquímica. Soc. Trans. 1996, 24, 790–795. [CrossRef] [PubMed]
17. Korkina, LG; Afanas' Ev, IB Propietats antioxidants i quelants dels flavonoides. Adv. Pharmacol. 1996, 38, 151–163.
18. Dorjgochoo, T.; Gao, Y.-T.; Chow, W.-H.; Shu, X.; Yang, G.; Cai, Q.; Rothman, N.; Cai, H.; Li, H.; Deng, X.; et al. El metabòlit principal de F2-isoprostà a l'orina pot ser un biomarcador més sensible de l'estrès oxidatiu que el propi isoprostà. Am. J. Clin. Nutr. 2012, 96, 405–414. [CrossRef] [PubMed]
19. Santilli, F.; D'Ardes, D.; Davì, G. L'estrès oxidatiu en la malaltia vascular crònica: de la predicció a la prevenció. Vascul. Pharmacol. 2015, 74, 23–37. [CrossRef] [PubMed]
20. McGuire, S. Departament d'Agricultura dels Estats Units i Departament de Salut i Serveis Humans dels EUA, pautes dietètiques per als americans, 2010. Washington, DC: impremta del govern dels EUA, gener de 2011. Adv. Nutr. 2011, 2, 293–294. [CrossRef] [PubMed]

21. Baroni, L.; Bonetto, C.; Rizzo, G.; Bertola, C.; Caberlotto, L.; Bazzerla, G. Associació entre el deteriorament cognitiu i l'estat de vitamina B12, folat i homocisteïna en adults grans: estudi retrospectiu. J. Alzheimer. Dis. 2019, 70, 443–453. [Ref creuat]
22. Samman, S.; Sivarajah, G.; Home, JC; Ahmad, ZI; Petocz, P.; Caterson, ID Un concentrat mixt de fruites i verdures augmenta les vitamines antioxidants i el folat plasmàtics i redueix l'homocisteïna plasmàtica en els homes. J. Nutr. 2003, 133, 2188–2193. [CrossRef] [PubMed]
23. Meng, H.; Li, Y.; Zhang, W.; Zhao, Y.; Niu, X.; Guo, J. La relació entre el deteriorament cognitiu i l'homocisteïna en una població amb deficiència de B12 i folat a la Xina: un estudi transversal. Medicina 2019, 98, e17970. [Ref creuat]
24. Lin, F.; Pei, L.; Zhang, Q.; Han, W.; Jiang, S.; Lin, Y.; Dong, B.; Cui, L.; Li, M. Ox-LDL indueix l'apoptosi de les cèl·lules endotelials i la migració dels macròfags mitjançant la regulació de la fosforilació de la caveolina-1. J. Cèl·lula. Physiol. 2018, 233, 6683–6692. [CrossRef] [PubMed]
25. Calder, PC; Albers, R.; Antoine, J.-M.; Blum, S.; Bourdet-Sicard, R.; Falgueres, GA; Folkerts, G.; Friedmann, PS; Gelada, GS; Guarner, F. Processos de malalties inflamatòries i interaccions amb la nutrició. Br. J. Nutr. 2009, 101, 1–45. [Ref creuat]
26. Karlsen, A.; Paur, I.; Bøhn, SK; Sakhi, Alaska; Borge, GI; Serafini, M.; Erlund, I.; Laake, P.; Tonstad, S.; Blomhoff, R. El suc de nabiu modula la concentració plasmàtica de marcadors inflamatoris relacionats amb NF-κB en subjectes amb un major risc de ECV. Eur. J. Nutr. 2010, 49, 345–355. [CrossRef] [PubMed]
27. Gonçalves, CFL; Santos, MC; Ginabreda, MG; Fortunato, RS; Carvalho, DPd; Freitas Ferreira, AC La rutina de flavonoides augmenta la captació de iodur de tiroide a les rates. PLoS ONE 2013, 8, e73908. [Ref creuat]
28. Mancini, A.; Martorana, GE; Magini, M.; Festa, R.; Raimondo, S.; Silvestrini, A.; Nicolotti, N.; Mordente, A.; Mele, MC; Miggiano, GAD; et al. Estrès oxidatiu i síndrome metabòlica: efectes de la dieta enriquida amb antioxidants naturals sobre la resistència a la insulina. Clin. Nutr. ESPEN 2015, 10, e52–e60. [Ref creuat]
29. Giuliani, C.; Noguchi, Y.; Harii, N.; Napolitano, G.; Tatone, D.; Bucci, I.; Piantelli, M.; Mònaco, F.; Kohn, LD La quercetina flavonoide regula el creixement i l'expressió gènica a les cèl·lules tiroïdals FRTL-5 de rata. Endocrinologia 2008, 149, 84–92. [Ref creuat]
30. Kanazawa, K.; Sakakibara, H. Alt contingut de dopamina, un fort antioxidant, al plàtan Cavendish. J. Agric. Química dels Aliments. 2000, 48, 844–848. [Ref creuat]
31. Parmar, HS; Kar, A. Paper protector dels extractes de pell de Mangifera indica, Cucumis melo i Citrullus vulgaris en l'hipotiroïdisme induït químicament. Chem. Biol. Interactuar. 2009, 177, 254–258. [Ref creuat]
32. Rahman, MM; Ichiyanagi, T.; Komiyama, T.; Sato, S.; Konishi, T. Efectes de les antocianines sobre l'estrès oxidatiu induït per l'estrès psicològic i l'estat dels neurotransmissors. J. Agric. Química dels Aliments. 2008, 56, 7545–7550. [Ref creuat]
33. Graumann, R.; París, I.; Martínez-Alvarado, P.; Rumanque, P.; Pérez-Pastene, C.; Cardenas, SP; Marín, P.; Díaz-Grez, F.; Caviedes, R.; Caviedes, P. Oxidació de la dopamina a aminocrom com a mecanisme de neurodegeneració dels sistemes dopaminèrgics en la malaltia de Parkinson. Possible paper neuroprotector de la DT-diaforasa. Pol. J. Pharmacol. 2002, 54, 573–580. [PubMed]
34. Jiang, X.; Huang, J.; Cançó, D.; Deng, R.; Wei, J.; Zhang, Z. L'augment del consum de fruites i verdures està relacionat amb un risc reduït de deteriorament cognitiu i demència: metaanàlisi. Davant. Neurosci envelliment. 2017, 9, 18. [CrossRef] [PubMed]
35. Borai, IH; Ezz, MK; Rizk, MZ; Aly, HF; El-Sherbiny, M.; Matloub, AA; Fouad, GI Impacte terapèutic dels polifenols de les fulles de raïm en determinats marcadors bioquímics i neurològics en la malaltia d'Alzheimer induïda per AlCl(3). Biomed. Pharmacother. 2017, 93, 837–851. [CrossRef] [PubMed]
36. Zeng, Q.; Li, F.; Xiang, T.; Wang, W.; Ma, C.; Yang, C.; Chen, H.; Xiang, H. Influència dels grups d'aliments sobre l'homocisteïna total del plasma per a genotips específics de MTHFR C677T a la població xinesa. Mol. Nutr. Alimentació Res. 2017, 61. [CrossRef] [PubMed]
37. Ganguly, P.; Alam, SF Paper de l'homocisteïna en el desenvolupament de malalties cardiovasculars. Nutr. J. 2015, 14, 6. [CrossRef]
38. Upadya, H.; Prabhu, S.; Prasad, A.; Subramanian, D.; Gupta, S.; Goel, A. Un assaig clínic aleatoritzat, doble cec, controlat amb placebo i multicèntric per avaluar l'eficàcia i la seguretat de l'extracte d'Emblica Officinalis en pacients amb dislipèmia. Complement BMC. Altern. Med. 2019, 19, 27. [CrossRef] [PubMed]
39. Bulotta, S.; Celano, M.; Lepore, SM; Montalcini, T.; Pujia, A.; Russo, D. Efectes beneficiosos dels components fenòlics de l'oli d'oliva oleuropeïna i hidroxitirosol: Centrat en la protecció contra malalties cardiovasculars i metabòliques. J. Trad. Med. 2014, 12, 219. [CrossRef]
40. Osakabe, N.; Baba, S.; Yasuda, A.; Iwamoto, T.; Kamiyama, M.; Takizawa, T.; Itakura, H.; Kondo, K. La ingesta diària de cacau redueix la susceptibilitat de les lipoproteïnes de baixa densitat a l'oxidació com es va demostrar en voluntaris humans sans. Radic Lliure. Res. 2001, 34, 93–99. [CrossRef] 41. Martini, D.; Rossi, S.; Biasini, B.; Zavaroni, I.; Bedogni, G.; Musci, M.; Pruneti, C.; Passeri, G.; Ventura, M.; Di Nuzzo, S.; et al. Efectes reivindicats, variables de resultat i mètodes de mesura de les declaracions de salut proposats en virtut del Reglament 1924/2006 de la Comunitat Europea en el marc de la protecció contra el dany oxidatiu i la salut cardiovascular. Nutr. Metab. Cardiovasc. Dis. 2017, 27, 473–503. [CrossRef] [PubMed]
42. Turck, D.; Bresson, J.-L.; Burlingame, B.; Dean, T.; Fairweather-Tait, S.; Heinonen, M.; Hirsch-Ernst, KI; Mangelsdorf, I.; McArdle, HJ; Naska, A.; et al. Orientació per als requisits científics per a declaracions de salut relacionades amb els antioxidants, el dany oxidatiu i la salut cardiovascular: (Revisió 1). EFSA J. Eur. Aliment segur. Auth. 2018, 16, e05136. [Ref creuat]
43. Dwivedi, A.; Anggård, EE; Portador, MJ L'adhesió de monòcits mediada per LDL oxidat a les cèl·lules endotelials no implica NFkappaB. Bioquímica. Biofísica. Res. Commun. 2001, 284, 239–244. [Ref creuat]
44. Quinn, MT; Parthasarathy, S.; Fong, LG; Steinberg, D. Lipoproteïnes de baixa densitat modificades oxidativament: un paper potencial en el reclutament i retenció de monòcits / macròfags durant l'aterogènesi. Proc. Natl. Acad. Ciència. EUA 1987, 84, 2995–2998. [CrossRef] [PubMed]