Com Cistanche prevenir malalties hepàtiques

Contacte:joanna.jia@wecistanche.com/ WhatsApp: 008618081934791

Abstracte

Investigar les caracteritzacions preliminars, activitat antioxidant i hepatoprotectora dels polisacàrids deCistanche deserticola (CDPs), tres fraccions de polisacàrids, CDP-A, CDP-B i CDP-C, es van obtenir successivament per filtració de membrana (microfiltració, ultrafiltració i nanofiltració). Es van analitzar pesos moleculars, composicions de monosacàrids, pureses i espectres IR de les tres fraccions. Els resultats van mostrar que cdp-C contenia una proporció més alta d'àcid galacturònic (GalUA) que CDP-B i CDP-A. També es van analitzar les activitats antioxidants i els resultats van revelar que el CDP-C posseïa la major activitat. Així, l'activitat hepatoprotectora del CDP-C es va estudiar encara més. La investigació in vitro, CDP-C va promoure la viabilitat de les cèl·lules HepG2. La investigació in vivo, CDP-C va alleujar les alteracions induïdes per l'alcohol, inclosos els índexs serològics (alanina transaminasa, fosfatasa àcida, transpeptidasa γ-glutamil i triglicèrid) i indicadors hepàtics (superòxid dismutasa, malondialdehid, glutatió S-transferasa i triglicèrid) en animals model. La prominent esteatosi microvesicular i la necrosi lleu en histopatologia hepàtica d'animals model també van ser atenuades per l'administració de CDP-C. Aquestes troballes van indicar que el CDP-C posseïa activitat hepatoprotectora contra les lesions hepàtiques cròniques induïdes per l'alcohol. El mecanisme subjacent podria ser que cdp-C pot reduir el contingut de MDA i TG, i modular les activitats de l'enzim relatiu. Aquesta propietat es pot associar amb GalUA en CDP-C.

Paraula clau: Cistanche deserticola; Polisacàrids; Caracteritzacions preliminars; Antioxidant; Activitat hepatoprotectora.

cistanchebienfaitsdeserticola

1. Introducció

Cistanche és un holoparasita perenne i es distribueix principalment a la regió desèrtica del nord-oest de la Xina. La tija de l'espècie Cistanche (Orobanchaceae) es va registrar per primera vegada a la Materia Medica xinesa de Shen Nong. La cistanche s'ha utilitzat durant molt de temps com a medicina tradicional a base d'herbes per als tractaments de la deficiència renal, impotència, restrenyiment senil, dolor i debilitat de la cintura i els genolls, i la deficiència de sang. Les investigacions farmacològiques van revelar que Cistanche té activitat antiinflamatòria [5, 6], activitat anti-osteoporosi [7, 8], efecte sedant [9], activitat antifatigue [10], efecte neuroprotector [11]. A més, els polisacàrids de Cistanche deserticola (CDPs) tenen efectes anti-hiperglucèmics i hipolipidèmics[12], activitat immunològica [13], i efecte de proliferació sobre els limfòcits [14].

L'alcohol, una beguda consumida a tot el món, i l'additiu alimentari van induir gairebé 2,5 milions de morts cada any al món. Aquestes morts estan relacionades principalment amb la malaltia hepàtica induïda per l'abús d'alcohol [17, 18]. La malaltia hepàtica induïda per l'alcohol és una progressió crònica complexa multiespècie, que normalment es desenvolupa des de l'esteatosi alcohòlica fins a l'hepatitis alcohòlica i, finalment, la cirrosi alcohòlica. Així, identificar productes naturals actius per a aquells consumidors d'alcohol per prevenir o alentir la progressió de les lesions hepàtiques alcohòliques en la fase inicial és una estratègia de gestió beneficiosa.

Cistanche deserticola Y. C. Ma i Cistanche tubulosa (Schrenk) Wight són dues espècies medicinals registrades a pharmacopoeia xinesa. Molts articles han dilucidat les activitats hepatoprotectores de C. tubulosa [20-24] i C. deserticola [25, 26]. Però aquestes investigacions hepatoprotectores sempre tenien com a objectiu lesions hepàtiques agudes induïdes per tetraclorur de carboni (CCl4) o D-galactosamínic i lipopolisacàrid, però no preocupades per la lesió hepàtica crònica relacionada amb l'abús d'alcohol. A més, aquests informes es van centrar principalment en el mecanisme dels micucosacis fenitohanoides (PhG) en lloc dels CDPs. Per tant, en el present estudi es van investigar les caracteritzacions preliminars dels CDPs i les seves activitats antioxidants (in vitro). A més, es va establir el model de lesió hepàtica de ratolins ICR induïts pel vi d'esperit blanc per examinar l'activitat hepatoprotectora dels CDPs contra les lesions hepàtiques cròniques induïdes per l'alcohol.

cistanche i extracte d'herba tongkat ali

2. Materials i mètodes

2.1. Materials

Les tiges de C. deserticola van ser recollides de la Lliga D'Alashan, Mongòlia Interior de la Xina,i identificat pel professor Xiaodong Wang (Divisió d'Enginyeria de Biorefineria, Institut d'Enginyeria de Processos, Acadèmia Xinesa de Ciències, Beijing, P. R. Xina).

Dimetil sulfòxid (DMSO), 2, 2-azino-bis (3-etilbenzthiazolina-6-àcid sulfònic) (ABTS), 3-(4, 5-dimetiltizol-2-yl)-2, 5-difeniltetrazolium bromur (MTT), i 1, 1-difenil-2-picrílic-hydrazyl (DPPH) es van comprar a Sigma Chemical Co. (St. Louis, MO, EUA). El Sèrum boví modificat de Dulbecco (DMEM) i el sèrum boví fetal (FBS) van ser comprats a Invitrogen, Inc. L'esperit blanc Er Guo-tou va ser comprat a Beijing Red Star Co., LTD. Bicyclol va ser comprat a la Fàbrica Farmacèutica de la Unió de Pequín. Es van preparar solucions aquoses amb aigua ultra-pura d'un sistema de purificació d'aigua Milli-Q (Millipore, Bedford, MA, EUA). Tots els altres reactius eren de grau analític.

2.2. Extracció de CDPs i filtració fraccionària

Els CDPs crus es van preparar d'acord amb el mètode prèviament informat del nostre grup[27] amb una lleugera modificació. Breument, la pols (40 malla) de C. deserticola (50 kg) va ser extreta ultrasons (40 kHz i 6 kW) amb 1000 L de solució d'etanol aquós (50%, v / v) a 60 ◦ C durant 120 min. Els polisacàrids es van separar de l'extracte amb resina macroporosa (HPD 300). La solució de polisacàrid es concentrava sota pressió reduïda, es desprotetinava utilitzant el mètode de Sevag[28], i liofilitzava el producte s'anomenava CDPs crus.

Llavors 50 g dels CDPs crus es van dissoldre en aigua ultrapura de 2,5 L i es van separar successivament amb la microfiltració, ultrafiltració i nanofiltració (els talls nominals de pes molecular van ser de 300 kDa, 10 kDa i 200 Da. L'àrea efectiva de membrana era de 0,625 m2). La solució retinguda de microfiltració va ser liofilitzada i anomenada CDP-A. La solució permeada de microfiltració es va filtrar amb ultrafiltració, mentre que la solució retinguda va ser liofilitzada i anomenada CDP-B. La solució permeada d'ultrafiltració es va filtrar amb nanofiltració, la solució retinguda va ser liofilitzada i anomenada CDP-C.

2.3. Caracteritzacions preliminars de CDPs

Les mides moleculars dels CDP es van avaluar d'acord amb el mètodeel nostre grup [29]. Les composicions de monosacàrids van ser analitzades utilitzant el mètode descrit per P. Zhang et al [30]. Les pureses es van determinar d'acord amb el mètode de l'àcid fenol-sulfúric[31]. El contingut de proteïnes es va determinar utilitzant el mètode esmentat per Bradford i Maja Kozarski[ 32, 33]. Els espectres FT-IR de CDP van ser capturats amb un espectròmetre d'infrarojos de transformada de Fourier (FT / IR-660 Plus, JASCO) en el rang de 400 ~ 4000 cm-1.

2.4. Activitats antioxidants

Els efectes de carronyer dels CDPs sobre radicals hidroxil, superòxid, DPPH i ABTS van ser avaluats d'acord amb els mètodes descrits per Sun[34], Wang[35], Yap[36], i Fatiha[37], respectivament.

cistanche disfunció erèctilperronyó

2.5. Activitat hepatoprotectora de CDP-C in vitro

Sobre la base dels resultats de l'assay antioxidant, CDP-C va ser seleccionat per estudiar l'activitat hepatoprotectora. Les cèl·lules HepG2 (comprades a la Xina Center for Type Culture Collection, Pequín, Xina) es van cultivar en DMEM que conté FBS inactivat per calor (10%), estreptomicina (0,1 μg / ml), penicil·lina (100 IU / ml) i aminoàcid no essencial. Les cèl·lules van ser incubades en una atmosfera humidificada del 5% de CO2 a 37 °C, recollides en fase de creixement exponencial, sembrades en plaques de 96 pous (4×104 cèl·lules per pou, 100 μL), i incubades durant 24 h. Les cèl·lules del grup negatiu van ser tractades amb alcohol (la concentració final va ser del 3,5%, v/v) mentre que el grup ingenu va ser tractat amb aigua. Les cèl·lules del grup positiu van ser tractades amb alcohol i bicicleta (la concentració final va ser de 200μg/ml). Les cèl·lules dels quatre grups de prova van ser tractades amb alcohol i CDP-C (la concentració final de CDP-C va ser de 0,11, 0,3333, 1,00 i 3,00 mg/ml). Totes les cèl·lules van ser cultivades durant altres 48 h.

La viabilitat de les cèl·lules HepG2 va ser determinada pel mètode d'assaig MTT esmentat per J. Tong et al[38] amb una lleugera modificació. Breument, MTT (5 mg / ml, 20 μL per pou) es va afegir a les plaques de 96 pous de llavor cel·lular i les cèl·lules es van incubar durant 4 h. Les solucions es van eliminar i es va afegir DMSO (150 μL / pou). L'absorbància de cada pou es va mesurar a 492 nm utilitzant un lector de plaques de 96 pous (Thermo Scientific, America). La viabilitat de la cel·la s'ha calculat amb la fórmula següent:

Viabilitat cel·lular (%) = (Una mostra- Ablank) ×100/ (Un ingenu- Ablank)

On una mostra era l'absorbància del grup experimental; Una ingenuïtat era l'absorbància del grup de control sense mostra; Un blanc era l'absorbància del medi de cultiu sense cap mostra i cèl·lula de llavors.

2.6. Activitat hepatoprotectora de CDP-C in vivo

2.6.1. Animals

Es van utilitzar ratolins ICR femella adulta (22-25 g, comprats al Beijing Vital River Laboratory Animal Technology Co. Ltd. El número de llicència d'animals va ser 11400700128). Els animals estaven allotjats en una habitació controlada pel medi ambient amb pinso i aigua ad libitum (la humitat relativa era del 40-60%, 22-26 °C), la ventilació de l'aire era de 12-18 vegades / h, i la condició d'irradiació de llum era un cicle clar / fosc de 12 h de 150-300 lux. Els ratolins van ser aclimatats a les condicions de l'habitació dels animals durant 7 dies abans dels experiments. Tots els procediments que involucren animals al llarg dels experiments es van dur a terme d'acord amb les normes d'ús d'animals de laboratori adoptades i promulgades pels Instituts Nacionals de Salut dels Estats Units.

2.6.2. Disseny experimental

Els ratolins ICR es van dividir aleatòriament en sis grups (grup ingènua, grup de control negatiu, grup de control positiu i tres grups de prova) amb 10 animals en cada grup. El grup ingenu va ser administrat oralment amb aigua destil·lada. El grup de control negatiu es va administrar per via oral amb alcohol (esperit blanc Er Guo-tou, 56%, 6 ml/kg). El grup de control positiu va ser administrat per via oral amb bicicleta (300 mg/kg) i 5 hores més tard amb alcohol. Tres grups de prova van ser administrats per via oral amb CDP-C a una dosi de 200, 600, 1800 mg / kg, i 5 hores més tard amb alcohol. Tots els ratolins van ser administrats durant 31 dies consecutius.

2.6.3. Determinació d'índexs serològics

Al voltant de les 4 h després de l'últim tractament alcohòlic, es va recollir sang de la cavitat ocular i es va centrifugar a 3000 g durant 15 min. Després de separar el sèrum, les activitats enzimàtiques de la transaminasa alanina (ALT), la fosfatasa àcida (ACP), la transpeptidasa γ-glutamil (γ-GTP) i el triglicèrid (TG) es van determinar mitjançant kits de diagnòstic.
2.6.4. Determinació d'indicadors hepàtics

Després de la recollida de sang, tots els ratolins van ser executats. El fetge de cada ratolí va ser immediatament extirpat, rentat amb salina fisiològica. Un tros de teixit hepàtic es va separar del lòbul esquerre. A continuació, el teixit va ser picat i homogeneïtzat amb solució de clorur de potassi aquós (1.15%, w / v) en un homogeneïtzador de vidre (Potter Elvehjem Teflon) durant 60 segons per fer un homogeneïtzació hepàtica (10% w / v). Les activitats enzimàtiques del contingut de superòxid dismutasa (SOD), malondialdehid (MDA), glutatió S-transferasa (GST) així com contingut de triglicèrids (TG) utilitzant els kits de diagnòstic.

2.6.5. Estudis histopatològics

La part residual del fetge es va fixar en el fixador de Bouin durant 24 h, després de deshidratar utilitzant solució d'etanol aquós (50-100%, v / v), el teixit hepàtic es va netejar en xilè i incrustat en parafina. Les seccions hepàtiques (5 mm) es van tenyir amb hematoxylina d'alum i eosina (H-E). Les imatges de seccions hepàtiques i canvis histopatològics van ser capturades per un microscopi de llum (Nikon-DS-L1-5M).

2.7. Anàlisi estadística

Les dades es van expressar com a mitjans ±'error estàndard de la mitjana (S.E.M) de tres (anàlisi de composició química i assay antioxidant), cinc (viabilitat cel·lular), o deu experiments independents (in vivo research). Les significacions estadístiques de les diferències entre grups es van analitzar mitjançant l'anàlisi unireccional de la variància (ANOVA) seguida d'una prova de rang múltiple de Student-Newman-Keuls utilitzant programari SPSS 19.0. En totes les anàlisis, p<0.05,><0.01, or=""><0.001 indicated="" statistical="">

3. Resultats i discussió

3.1. Caracteritzacions de CDPs

Com es mostra a la fig. 1A, el CDP-A conté dos grups, els pesos moleculars són 4000 kDa i 3946 kDa. Els pesos moleculars de CDP-B i CDP-C són 2400 kDa i 1300 kDa, Les composicions de monosacàrids es mostren en Fig. 1B. CDP-A, CDP-B i CDP-C contenen sis monosacàrids essencials amb proporcions diferents, incloent la mentosa (Home), la rhamnosa (Rha), l'àcid galacturònic (GalUA), la glucosa (Glc), la galactosa (Gal) i l'arabinosa (Ara). A més dels sis monosacàrids esmentats anteriorment, la xiilosa (Xil) també apareix en CDP-C. A més, CDP-C conté una proporció més gran de GalUA que les altres dues fraccions.

Les pureses i continguts proteics dels CDP s'exhibeixen a la Taula 1. La taula 1 mostra que el CDP-A té la puresa més alta, que és del 75,57%, mentre que les pureses de CDP-B i CDP-C són del 74,72% i el 68,92%, respectivament. El contingut de proteïnes de CDP-A, CDP-B i CDP-C són 1,27%, 1,24% i 1,05%, respectivament.

Taula 1.Les dades són el mitjà ± S.E.M de tres replicacions.

Els espectres FT-IR dels carbohidrats s'utilitzen per determinar les seves característiques estructurals i s'utilitzen típicament per a l'anàlisi qualitativa de grups funcionals orgànics, especialment per a O-H, C-O i C =O[39]. Els espectres FT-IR dels CDP es mostren a fig. 1C. Cada espectre mostra un pic d'estirament fort i ample al voltant de 3293 cm−1 per a la vibració d'estirament O-H, així com un pic d'absorció feble a 2939 cm−1 per a la vibració d'estirament C-H. La banda d'absorció a 1650 cm−1 és causada per la vibració d'estirament asimètric C = O. L'àmplia banda d'absorció a 1418cm−1 s'atribueix a la vibració deformant de l'enllaç C-H. Cada polisacàrid en particular té una banda específica en la regió de 1000-1200 cm−1, que està dominada per la vibració de l'anell superposada amb la vibració d'estirament dels grups laterals (C-OH) i la vibració de banda glicosídica (C-O-C). L'absorció a 1036 cm−1 indica una forma de piranosa de sucre. Una absorbància de gairebé 829 cm−1 suggereix la vinculació de α-glicòsids en l'estructura molecular dels CDPs. Com es mostra a la fig. 1 C, la banda d'absorció de CDP-C a 1650 cm−1 és més forta que CDP-A i CDP-B, el que significa que el contingut de C = O en CDP-C és més que els de CDP-A i CDP-B. Aquest resultat és coherent amb els resultats de la fig. 1 A, que revela que la proporció de GalUA en CDP-C és més gran que els de CDP-A i CDP-B.

3.2. Activitats antioxidants dels CDPs

3.2.1. Assay radical hidroxil

Entre les espècies reactives d'oxigen, el radical hidroxil és el més reactiu i indueix greus danys a les biomolècules adjacents. Per al radical hidroxil, hi ha dos tipus de mecanismes d'antioxidació: un està carronyejant el radical hidroxil ja generat, i un altre està suprimint la generació de radical hidroxil. Per a aquest últim, el radical hidroxil es genera per la reacció del complex Fe (II) amb peròxid d'hidrogen. Les activitats antioxidants dels CDPs poden litigar als ions metàl·lics, que no reaccionen amb H2O2 i produeixen radical hidroxil però quelat amb CDPs i formen el complex metàl·lic. El complex metàl·lic no pot reaccionar encara més amb H2O2 per donar radical hidroxil [41-43]. Per tant, els CDP mostren els efectes de carronya radical hidroxil.

La fig. 2 A mostra les capacitats de carronyeig dels CDPs sobre el radical hidroxil d'una manera dependent de la concentració. La taxa de carronyeig de CDP-A, CDP-B i CDP-C és del 29,56%, 33,44% i 38,22%, respectivament. CDP-C presenta una major activitat de carronyer radical hidroxil. Tenint en compte que CDP-C conté una proporció més alta de GalUA que CDP-A i CDP-B, els antioxidants dels CDP poden relacionar-se no només amb la propietat de lligament d'ions metàl·lics, sinó també amb el contingut de GalUA, Ara i Gal [44-46].

3.2.2. Assay radical d'anió superòxid

El radical d'anió superòxid és una espècie tòxica que es genera per nombroses reaccions biològiques i fotoquímiques i, per tant, indueix dany tissular. Encara que l'anió superòxid és un oxidant relativament feble, juga un paper important en la formació d'altres espècies oxidatives reactives més fortes, com l'oxigen singlet i el radical hidroxil. La fig. 2 B mostra la relació entre les concentracions i les capacitats carronyaires dels CDPs en radicals d'anió superòxid. A mesura que augmenta la concentració, CDP-C presenta una major capacitat de carronya que CDP-B i CDP-A.

3.2.3. Assay radical DPPH

El DPPH, un dels compostos estables centrats en el nitrogen que posseeixen un radical lliure de protons amb una absorció característica a 517 nm, disminueix significativament en l'exposició a carronyaires radicals de protons, per tant, s'utilitza àmpliament per estimar les activitats de carronyeria de radicals lliures dels antioxidants. Està ben acceptat que el radical lliure DPPH carronyejat per antioxidants es deu a les seves habilitats de donació d'hidrogen. Els antioxidants transfereixen electrons o àtoms d'hidrogen al radical DPPH i formen DPPH-H, que és una formació no radical.

Es van provar els efectes totals de carronya de DPPH de totes les mostres i els resultats es mostren a la fig. 2 C. Les habilitats de carronyeig dels CDPs en radicals DPPH mostren una manera dependent de la concentració. A mesura que la concentració augmenta d'1,0 a 5,0 mg/ml, les capacitats de carronyer de CDP-C augmenten del 52,5% al 58,7%, superior a la CDP-B (del 34,2% al 56,8%) i el CDP-A (del 12,5% al 52,8%). L'efecte de carronya del DPPH de CDP-C pot estar associat amb els grups carbonils de GalUA.

3.2.4. Assay radical ABTS

L'assaig radical ABTS s'utilitza sovint per mesurar el poder antioxidant total d'un potent antioxidant de les mostres de prova. Els efectes de carronya ABTS de totes les mostres es mostren a la fig. 2 D. Les habilitats carronyaires dels CDPs en radicals ABTS presenten una manera depenent de la dosi. Els IC50 de CDP-A, CDP-B i CDP-C són d'uns 4,0 mg/ml, 2,5 mg/ml i 1,2 mg/ml, respectivament. Els resultats indiquen que els CDP tenen activitat de carronya ABTS.

En resum, l'activitat antioxidant de CDP-C va ser superior a cdp-A i CDP-B. Va informar que algunes activitats farmacològiques dels polisacàrids estaven relacionades amb la seva GalUA. En aquest experiment, la proporció de GalUA en CDP-C era més gran que les de CDP-A i CDP-B, el CDP-C va ser seleccionat per investigar l'efecte hepatoprotector contra la malaltia hepàtica crònica induïda per l'alcohol.

3.3. Els efectes del CDP-C sobre la viabilitat cel·lular d'HepG2

Mesurar la viabilitat cel·lular és una manera comuna d'avaluar l'eficàcia dels fàrmacs naturals. Basant-se en els resultats que CDP-C posseïa la major activitat antioxidant, es van avaluar els efectes de CDP-C sobre la viabilitat cel·lular HepG2. Els resultats es mostren a la fig. 3. El tractament alcohòlic induït per la disminució notablement de la viabilitat cel·lular hepG2. Però cdp-C pot millorar notablement les taxes de supervivència en comparació amb el grup negatiu. Com es mostra a la fig. 3, la viabilitat cel·lular no presenta una manera precisament dependent de la concentració amb CDP-C. En canvi, quan la concentració de CDP-C arriba a 3,00 mg / ml, la viabilitat de la cèl·lula HepG2 disminueix dràsticament. La raó de la disminució de la viabilitat cel·lular podria ser que una baixa concentració de CDP-C va ser útil per a la supervivència de les cèl·lules HepG2. No obstant això, quan la concentració de polisacàrids en el medi de cultiu era prou alta com per canviar el microambient de les cèl·lules, es va inhibir la viabilitat cel·lular Deg2.

3.4. Efectes farmacològics del CDP-C

3.4.1. Els efectes del CDP-C sobre els índexs serològics

L'abús d'alcohol s'atribueix a gairebé el 4% de totes les taxes de mortalitat, que s'ha convertit en un greu problema social al món. En el cos humà, l'alcohol es metabolitza al fetge després d'absorbir-lo a través de la mucosa intestinal gàstrica i petita. Les malalties hepàtiques alcohòliques normalment es produeixen després d'anys d'abús d'alcohol[56]. Comunament, s'observen condicions patològiques com el fetge gras, l'hepatitis, la fibrosi i la cirrosi, o fins i tot malalties canceroses com el carcinoma hepatocel·lular i el càncer de còlon[58], en trastorns hepàtics relacionats amb l'alcohol. Per tant, l'alcohol és un hepatòxic típic i s'utilitza àmpliament com a inductor de lesions hepàtiques en la investigació científica. Tenint en compte que les malalties hepàtiques induïdes per l'alcohol sovint són causades per begudes alcohòliques i additius alimentaris en lloc d'etanol industrial, per tant, l'esperit blanc d'Er Guo-tou es va utilitzar per establir un model de lesió hepàtica en ratolins ICR en aquest estudi. El bicyclol és un agent comú utilitzat per tractar una lesió hepàtica crònica, de manera que es va utilitzar per establir un model de control positiu.

Les cèl·lules hepàtiques contenen concentracions més altes d'ALT en el citoplasma i els mitocondris. A causa de diversos danys cel·lulars hepàtics, la fuita de citosol causarà un augment de l'ALT en el sèrum. Així, la promoció de l'ALT és l'indicador de fuites cel·lulars i trastorns funcionals del fetge [60]. Per tant, el nivell ALT sèric sol establir-se com l'indicador per avaluar la salut hepàtica [61]. Per raons similars, γ-GTP, ACP i TG també s'utilitzen com a indicadors per avaluar l'estat de salut del fetge.

En el present estudi, l'activitat hepatoprotectora de CDP-C es va avaluar mitjançant la determinació dels nivells d'ALT, ACP, γ-GTP i TG. Els resultats es mostren a les fig. 4 A, B, C i D. Quatre indicadors sèrics promoguts dràsticament pel tractament alcohòlic en el grup negatiu. Però cdp-C pot atenuar aquestes alteracions induïdes per l'administració alcohòlica. No obstant això, no tots els índexs serològics presenten una manera depenent de la dosi amb CDP-C. A la fig. 4 A i B, CDP-C a baixa concentració té un efecte significatiu en la restauració d'ALT i ACP, però l'efecte de CDP-C a la concentració més alta no va ser significatiu. De fet, molts productes naturals són beneficiosos per a la salut a dosis baixes, però perjudicials per a la salut a dosis elevades. La raó podria ser que la ingestió excessiva de polisacàrids afectarà el metabolisme normal dels organismes, de manera queper afectar negativament la salut de l'organisme. No obstant això, cal investigar més el mecanisme detallat.

3.4.2. Els efectes del CDP-C sobre els indicadors hepàtics

Els organismes subjectes a estrès oxidatiu generalment van desenvolupar un mecanisme de defensa antioxidant, i el SOD és un sistema antioxidant típic basat en enzims. El SOD catalitza la desmutació de l'anió superòxid en O2 i H2O2. El GST, una proteïna soluble situada al citosol, també juga un paper important en la desintoxicació del fetge. Per les raons esmentades anteriorment, SOD i GST es converteixen en els indicadors de l'hepatotoxicitat induïda per l'alcohol. L'MDA i el TG en el fetge també s'utilitzen com a indicadors d'hepatotoxicitat.

En el present estudi, els efectes de CDP-C sobre la funció hepàtica es mostren a la fig. 5. Les imatges A, B, C i D mostren els efectes de CDP-C en SOD, MDA, GST i TG, respectivament. Aquestes quatre imatges mostren que els ratolins tractats amb alcohol disminueixen notablement els nivells de SOD i GST, i augmenten els nivells de MDA i TG, però cdp-C pot atenuar evidentment aquesta alteració. De manera similar als fenòmens descrits a la secció 3.4.1, els indicadors hepàtics tampoc no eren d'una manera dependent de la dosi amb el CDP-C. El motiu d'això pot ser similar al mecanisme il·lustrat a l'apartat 3.4.1. Estudis previs van informar que els efectes dels polisacàrids en sod i catalasa podrien estar associats amb la inducció d'expressions gèniques de SOD i catalasa. No obstant això, encara es necessiten més estudis per dilucidar el mecanisme hepatoprotector de CDP-C i la relació entre la seva estructura i funció.

3.5. Efectes histopatològics del CDP-C en ratolins induïts per l'alcohol

Sobre la base de les observacions histopatològiques sobre les seccions hepàtiques, el grup ingenu va exhibir una arquitectura cel·lular normal amb diferents cèl·lules hepàtiques i sense anomalies histològiques (fig. 6 A). En comparació, l'administració alcohòlica va causar greus danys hepàtics en ratolins del grup negatiu. Les seccions hepàtiques van mostrar deposició de greix hepatòcits, necrosi i inflor d'hepatòcits, formació de vacúol a les cèl·lules i els límits cel·lulars també van desaparèixer (fig. 6 B). Les seccions hepàtiques dels ratolins administrats amb bicyclol (Fig. 6 C), amb dosis variables de CDP-C (Fig. 6 D-F) van mostrar evidentment la restauració d'aquelles distorsions que van aparèixer en el grup de control negatiu. Aquests resultats van validar que l'alcohol induïa una certa distorsió en hepatòcits del grup de control negatiu. No obstant això, cdp-c va restaurar aquests canvis.

Està ben acceptat que l'efecte hepatoprotector dels polisacàrids s'associa amb la seva activitat antioxidant [67, 68]. L'alt contingut d'àcid urònic s'havia demostrat que era beneficiós per als efectes antioxidants dels polisacàrids [44, 45]. També s'havia comprovat que els polisacàrids rics en Gal i Ara tenien efectes antioxidants més alts. No obstant això, és difícil que els grans polisacàrids moleculars entrin directament a les cèl·lules epitelials intestinals. Per al CDP-C (amb un pes molecular de 1300kDa), no és fàcil entrar directament al cos i exercir el paper hepatoprotector. Els informes publicats van revelar que els pesos moleculars dels polisacàrids es van reduir després de la digestió gàstrica i intestinal. Així, vam assumir que cdp-C pot ser degradat en polisacàrids amb baixos pesos moleculars i absorbit per cèl·lules epitelials intestinals. La reducció dels extrems dels polisacàrids es pot augmentar a causa de la descomposició dels enllaços glicosídics [69, 70]. D'acord amb la composició monosacàrida de CDP-C, aquells polisacàrids degradats amb baixos pesos moleculars haurien de contenir GalUA, Ara i Gal. Per tant, aquests polisacàrids de baix pes molecular, que tenen extrems reductors i contenen GalUA, Ara i Gal, poden jugar el paper de protecció hepàtica en el cos. No obstant això, cal investigar més el mecanisme detallat.

4. Conclusions

D'acord amb les anàlisis de composició de monosacàrids i els espectres FT-IR, les tres fraccions de CDP contenien Man, Rha, GalUA, Glc, Gal i Ara. Cdp-C contenia una gran proporció de GalUA. El CDP-C va tenir l'activitat antioxidant més alta. Els resultats de la investigació in vitro i vivo van il·lustrar que cdp-C posseïa activitat hepatoprotectora contra les lesions hepàtiques cròniques induïdes per l'alcohol. El mecanisme subjacent estava relacionat amb la modulació de les activitats relatives de l'enzim, la reducció de l'MDA i el TG al fetge. L'activitat fisiològica del CDP-C podria associar-se amb GalUA. Aquestes troballes proporcionen nous coneixements sobre les dianes farmacològiques de C. deserticola en la prevenció de la malaltia hepàtica alcohòlica.

Cistanche herbaProtegeix elfetgeiMillora la immunitat.

Per a més informació, feu clic aquí.