Com tonifica el ronyó el Cistanche?
Mar 15, 2022
Contacte:joanna.jia@wecistanche.com/ WhatsApp: 008618081934791
Com inhibeixen els medicaments xinesos que tonifiquen el ronyó l'apoptosi de les neurones dopaminèrgiques?
Shaogang Lin,1 Shuifen Ye,2 Jinmu Huang,1 Yun Tian,3 Yihui Xu,2 Mengqi Wu,2 Jingxia Wang,2 Songying Wu,4 i Jing Cai, MD, Ph.D.2
MATERIALS I MÈTODES
Disseny
Observació comparada in vitro de farmacologia sèrica.
Temps i configuració
Els experiments es van dur a terme al Laboratori de Citobiologia de la Universitat Fujian de Medicina Tradicional Xinesa, Xina de 2010 a 2011.
Materials
Animals
Un total de 60 rates Wistar masculines, de 8 setmanes d'edat, que pesen 200-220 g, van ser comprades a SLAC Laboratory Animal Co, Ltd, Xangai, Xina (llicència Núm. SCXK (Hu) 2007-0005). Es van allotjar al Centre d'Animals de Laboratori de la Universitat Fujian de Medicina Tradicional Xinesa a la Xina a 20-22 °C amb una humitat del 40-60% i la il·luminació de 7:00 a 19:00. L'aliment va ser proporcionat pel Centre d'Animals de Laboratori de la Universitat Fujian de Medicina Tradicional Xinesa. Tots els procediments experimentals estaven d'acord amb els Suggeriments d'Orientació per a la Cura i l'Ús d'Animals de Laboratori, formulats pel Ministeri de Ciència i Tecnologia de la Xina.
Cistanche per millorar la funció renal
Drogues
Herba Epimedii, la part aèria de l'Epimedium sagittatum Maxim era de la província de Sichuan, Xina; Semen Cuscutae, la llavor madura seca de Cuscuta Chinensis Lam., era de la província de Shandong, Xina; i Herba Cistanches, el chylocaulous de fulla d'escala de Cistanche deserticola Y.C.Ma, era de la Regió Autònoma Úgur de Xinjiang. Tots els medicaments van ser proporcionats per Fujian Pharmaceutical Co, Ltd, Província de Fujian, Xina. Herba Epimedii, Semen Cuscutae, i Herba Cistanches, 97.2 g cadascun, estaven immersos en un recipient de decocció que contenia 1 500 ml d'aigua destil·lada, escalfada ràpidament, bullida, mantinguda a 100 ° C per permetre que els components actius dels fàrmacs es dissolguessin i es condensessin a 540 ml. La quantitat crua de droga en la solució de fàrmacs va ser de 0,180 g / ml. La solució es va filtrar, es va col·locar en una ampolla, es va segellar, esterilitzar i emmagatzemar a 4 ° C. Selegilina, 5 mg × 10 comprimits per kit, es va comprar a Nanjing Sike Pharmaceutical Co, Ltd . (Província de Jiangsu, Xina). La selegilina, de 21,6 mg, es va dissoldre en aigua destil·lada per preparar una solució d'aigua de 540 ml. La concentració de la droga va ser de 0,04 mg/ml. La solució de fàrmac es va col·locar en una ampolla, segellada, esterilitzada i emmagatzemada a 4 ° C.
Mètodes
Preparació de sèrum que conté drogues
Els grups Herba Epimedii, Semen Cuscutae, Herba Cistanches i selegilina es van perfusar intragàstricament amb sèrum que conté 0,180 g/ml d'Herba Epimedii, Semen Cuscutae o Herba Cistanches, o 0,04 mg/ml de selegilina, dues vegades al dia, a una dosi de 0,1 ml/kg, durant 14 dies consecutius. El grup sèric en blanc va ser administrat a un volum igual d'aigua destil·lada. Els animals van ser privats d'aliments i aigua durant 12 hores després de l'administració final. Les rates van ser anestesiades per injecció intraperitoneal amb clorhidrat de 0,3 ml/100 g. La sang es va collir de l'aorta abdominal i es va centrifugar a 1.000 r/min durant 15 minuts. El sobrenatant va ser recol·lectat, desactivat en un bany d'aigua a 56 °C durant 30 minuts, filtrat a través d'una membrana microporosa de 0,22 μm, i emmagatzemat a –20 °C.
Preparació de la solució de 50×Sato
Una barreja de 60 ml DMEM/F12 (Gibco, Carlsbad, CA, EUA), 15 mg d'insulina bovina (Sigma, St. Louis, MO, EUA), 15 mg transferrina (Sigma), 145,8 mg de piragvat de sodi (Biosharp, Corea), 12 mg putrescina (Solarbio, Pequín, Xina), 25 μL selenita de sodi (1 mg /ml, 100 mg/100 ml H2O; Sigma), i progesterona de 100 μL (0,315 mg/ml, 15,75 mg/50 ml; Biosharp) va ser sotmès a ultrasons en un bany de gel durant 1,5 hores, filtrat a través de filtre de 0,22 μm, alíquot i emmagatzemat a –20 °C.
Cistanche per tractar la funció renal
Cultiu cel·lular
Les cèl·lules es van sembrar en DMEM / F12 complementat amb 5% (v / v) sèrum boví fetal (Gibco), 1% (v / v) glutamina (Sigma), 2% (v / v) 50×Sato solució, i 2% (v / v) penicil·lina / estreptomicina. Les cèl·lules es van incubar en un 5% (v/ v) CO2 i es van mantenir a una humitat saturada a 37 °C. Les cèl·lules es van trippsinar amb 0,25% (w / v) trippsina i passatge. Les cèl·lules en fase logarítmica van ser recollides per a experiments posteriors.
Efecte de l'H2O2 sobre el creixement de les cèl·lules MES23.5
Les cèl·lules es van sembrar en plaques de cultiu de 96 pous (5 × 105 cèl·lules / pou), incubades amb 50, 100, 150, 200, 300 i 400 μmol / L H2O2 solució de cultiu (Shanghai Shiyi Chemicals Reagent Co,, Ltd,, Xangai, Xina) després de 24 hores durant 1, 3, 6, 9, 12, 24 hores, seguit de MTT (Sigma) durant 4 hores. La solució en els pous es va descartar, i es va afegir sulfuròxid de dimetil de 150 μL (Sigma). La placa de cultiu es va sacsejar durant 10 minuts, i l'absorbància de mostres a 570 nm es va determinar mitjançant un lector automàtic de microplata (EXL800; Biotek, Winooski, VT, ESTATS UNITS). La solució de cultiu DMEM / F12 acabada de preparar es va utilitzar com a control negatiu. Es van establir dos pous paral·lels en cada punt de temps. Els experiments es van dur a terme per triplicat.
Influència del sèrum que conté fàrmacs a diferents concentracions en el creixement de cèl·lules MES23.5 tractades amb H2O2
Les cèl·lules van ser sembrades i exposades a sèrum que conté drogues que contenen 5, 10, 15, 20, 25 i 30% (v / v) Herba Epimedii, Semen Cuscutae, Cistanches Herba, i selegilina o sèrum en blanc durant 24 hores. Les cèl·lules es van cultivar amb una solució de cultiu que contenia 100 μmol / L H2O2 durant 3 hores, seguit de MTT durant 4 hores. Es van establir tres pous paral·lels en cada grup. La solució de cultiu DMEM / F12 acabada de preparar es va utilitzar com a control negatiu. Les cèl·lules cultivades en solució de cultiu que conté 100 μmol / L H2O2 i sèrum en blanc van servir com a grup model, i les cèl·lules cultivades només en sèrum en blanc van servir com a grup sèric en blanc. Els experiments es van dur a terme per triplicat. El valor mitjà d'absorbància de cada grup es va calcular com la taxa de supervivència de les cèl·lules.
Citometria de flux per a l'expressió de FasL, Fas, caspasa-3 i Bcl-2 en cèl·lules MES23.5
Les cèl·lules van ser sembrades i tractades com abans. Les cèl·lules cultivades en 100 μmol/L H2O2 només eren considerades com el grup model. L'anticòs FasL etiquetat amb ficoertrina i el control isotip FasL (5 μL cadascun), es van afegir en dos tubs (BD, San José, CA, EUA), barrejats uniformement amb cèl·lules, emmagatzemats a temperatura ambient a la foscor durant 15 minuts, centrifugats a 1.000 r / min durant 5 minuts després de l'addició de 2 ml PBS. El supernatant va ser descartat, i les cèl·lules es van reanimar utilitzant 500 μL PBS. La longitud d'ona del dispositiu làser per a la citometria de flux (Facscalibur; BD) era de 488 nm. La velocitat d'expressió de les cèl·lules fasL positives va ser analitzada i calculada pel programari Cell Quest (BD). La taxa d'expressió de les cèl·lules fas-, caspasa-3-, i Bcl-2-positives es va detectar utilitzant el mateix mètode.
ELISA pel contingut de factor de creixement nerviós, factor neurotròfic derivat del cervell i factor neurotròfic derivat de la línia glial en les cèl·lules
Les cèl·lules van ser sembrades i tractades com s'ha descrit anteriorment. El supernatant es va collir, i el factor de creixement nerviós, el factor neurotròfic derivat del cervell i el contingut de factors neurotròfics derivats de la línia glial es van mesurar d'acord amb les instruccions del fabricant (BD). L'absorbància es va mesurar a 450 nm utilitzant un lector automàtic de micropàsser (EXL800; Biotek, Winooski, VT, ESTATS UNITS).
Anàlisi estadística
Els resultats es van expressar com a mitjans ± SD. Les dades es van analitzar utilitzant el programari SPSS 18.0 (SPSS, Chicago, IL, EUA). L'anàlisi unirecció de la variància es va dur a terme seguit de múltiples proves de diferència menys significatives. El valor de P< 0.05="" was="" considered="" statistically="">
Cistanche per a la funció renal
Reconeixements
Agraïm a Chen B, el Laboratori de Neurobiologia de la Capital Medical University, per proporcionar gratament MES23.5dopaminèrgiccèl·lules nervioses.
Notes
Finançament: Aquest estudi va ser recolzat pel Fons de Desenvolupament de Chen Keji Medicina Integrativa, No. CKJ2010025 i la Fundació Clau del Desenvolupament de la Societat a la província de Fujian, Nº 2013Y0059.
Conflictes d'interessos: Cap d'ells declarat.
Aprovació ètica: Aquest estudi va rebre el permís del Comitè d'Ètica Animal de la Universitat Fujian de Medicina Tradicional Xinesa, Xina.
(S'ha)
(Editat per Wang LM, Su LL, Li CH, Song LP, Liu WJ, Zhao M)
REFERÈNCIES
[1] Zhang ZX, Roman GC, Hong Z, et al. Malaltia de Parkinson a la Xina: prevalença a Pequín, Xian i Xangai. Llanceta. 2005;365(9459):595–597. [PubMed] [Google Acadèmic]
[2] Ell JC, Wang WW. Efecte de Tianma Gauteng Yin sobreapoptosidedopaminèrgicneurones en rates model de la malaltia de Parkinson. Zhongyi Zazhi. 2010;51(11):1024–1027. [Google Acadèmic]
[3] Perier C, Bové J, Vila M. Mitocondris i mort cel·lular programada en la malaltia de Parkinson:apoptosii més enllà. Senyal Redox antiòxid. 2012;16(9):883–895. [PubMed] [Google Acadèmic]
[4] Gallagher DA, Schapira AH. Etiopatogènesi i tractament de la malaltia de Parkinson. Curr Top Med Chem. 2009;9(10):860–868. [PubMed] [Google Acadèmic]
[5] Rangasamy SB, Soderstrom K, Bakay RA, et al. Teràpia neurotròfica de factors per a la malaltia de Parkinson. Prog Brain Res. 2010;184:237–264. [PubMed] [Google Acadèmic]
[6] Zuccato C, Cattaneo E. Factor neurotròfic derivat del cervell en malalties neurodegeneratives. Nat Rev Neurol. 2009;5(6):311–322. [PubMed] [Google Acadèmic]
[7] Cai DF, Chen XQ, Gao Y. Efecte dels arbustos recepta yangban sobre la funció nigrostriatal en rates model parkinsonianes després del tractament levodopa a llarg termini. Zhongguo Zhong Xi Yi Jie He Za Zhi. 2002;22(1):43–46. [PubMed] [Google Acadèmic]
[8] Yang MH, Wang HM, Liu Y. Efecte de la decocció de Bushen Huoxue sobre el receptor orfe i la hidroxilasa tirosina al cervell de rates amb malaltia de Parkinson. Chin J Integr Med. 2011;17(1):43–47. [PubMed] [Google Acadèmic]
[9] Li SD, Liu Y, Yang MH. Efectes dels arbustos Huo Xue yin en el cervell NF-kB i NO contingut en el ratolí model de malaltia de Parkinson. J Tradit Chin Med. 2012;32(1):67–70. [PubMed] [Google Acadèmic]
[10] Tian Y, Cai J, Chen XZ, et al. Efectes protectors de l'alimentació xinesaronyóherbes en neurones de neurones estriatals en el ratolí model de la malaltia de Parkinson. Zhongguo laonià Xue Zazhi. 2011;31(3):440–443. [Google Acadèmic]
[11] Yu H, Li YH, Feng XL, et al. Identificació i assay d'activitat de la tirosina hidroxilasa en cèl·lules MES23.5. Zhongguo Shengwu Huaxue yu Fenzi Shengwu Xuebao. 2004;20(1):95–100. [Google Acadèmic]
[12] Wang XR. Pequín: Editorial mèdica popular; 2007. Toxicologia Mètodes i Tecnologia Experimentals. [Google Acadèmic]
[13] Lv SJ. Pequín: China Medical Science Press; 2010. Test d'Immunologia Clínica. [Google Scholar]
[14] Eriksen JL, Wszolek Z, Petrucelli L. Patogènia molecular de la malaltia de Parkinson. Arch Neurol. 2005;62(3):353–357. [PubMed] [Google Acadèmic]
[15] Christen Y. Estrès oxidatiu i malaltia d'Alzheimer. Sóc en Clin Nutr. 2000;71(2):621S–629S. [PubMed] [Google Scholar]
[16] Blandini F, Armenteros MT, Fancellu R, et al. Efecte neuroprotector de la rasagilina en un model de rosegador de la malaltia de Parkinson. Exp Neurol. 2004;187(2):455–459. [PubMed] [Google Acadèmic]
[17] Zhang XN, Wang HH, Wang ZQ, et al. Efecte protector de la icariïna sobreapoptosineurones de rata cultivades principalment induïdes per pèptid Aâ25-35. Zhejiang Daxue Xuebao: Yixue Ban. 2007;36(3):224–228. [PubMed] [Google Acadèmic]
[18] Wang LH, Bu PC, Bao YM. Efecte neuroprotector dels extractes de Cuscuta Chinensis Lam sobre el dany de les cèl·lules PC12 diferenciades neuronalment induïdes per espècies reactives d'oxigen. Xibao Shengwu Xue Zazhi. 2005;27:69–72. [Google Acadèmic]
[19] Sun SL, Wang B, Peng HS. Inhibició dels extractes de Dodder a miòcits cardíacsapoptosien ratolins envellits. Zhongguo laonià Xue Zazhi. 2011;31:642–644. [Google Acadèmic]
[20] Yang JH, Hu JP, Rena K, et al. Relacions estructura-activitat dels glucosasids fenitohanoides en plantes de salsa Cistanche sobre activitat antioxidant. Zhong Yao Cai. 2009;32(7):1067–1069. [PubMed] [Google Acadèmic]
[21] Wu Y, Li L, Wen T, et al. Efectes protectors de l'equiinacòsid sobre l'hepatotoxicitat induïda pel tetraclorur de carboni en rates. Toxicologia. 2007;232(1-2):50–56. [PubMed] [Google Acadèmic]
[22] Cheng SD. Beijing: Publicació mèdica del poble; 2006. Malaltia de Parkinson. [Google Acadèmic]
[23] Yang T. Beijing: Publicació mèdica del poble; 2010. Biologia Cel·lular. [Google Acadèmic]
[24] Baba N, Koji T, Itoh M, et al. Canvis recíprocs en l'expressió de Bcl-2 i Bax en el nucli hipoglossal després de l'axotomia en rates adultes: possible implicació en la inducció de la mort de les cèl·lules neuronals. Res. cerebral 1999;827(1-2):122–129. [PubMed] [Google Acadèmic]
Zuccato C, Cattaneo E. Factor neurotròfic derivat del cervell en malalties neurodegeneratives. Nat Rev Neurol. 2009;5(6):311–322. [PubMed] [Google Acadèmic]
[26] Peterziel H, Unsicker K, Krieglstein K. TGFbeta indueix la capacitat de resposta GDNF en les neurones mitjançant el reclutament de GFRalpha1 a la membrana plasmàtica. J Cell Biol. 2002;159(1):157–167. [Article gratuït del PMC] [PubMed] [Google Acadèmic]
[27] Hong M, Mukhida K, Teràpia Méndez I. GDNF per a la malaltia de Parkinson. Expert Rev Neurother. 2008;8( 7):1125–1139. [PubMed] [Google Acadèmic]
[28] Chaturvedi RK, Shukla S, Seth K, et al. El factor de creixement nerviós augmenta la supervivència dedopaminèrgicempelta, rescata neurones dopaminèrgiques nigrals i restaura els dèficits funcionals en un model de rata de la malaltia de Parkinson. Neurosci Lett. 2006;398(1-2):44–49. [PubMed] [Google Acadèmic]
[29] Kavanagh ET, Loughlin JP, Herbert KR, et al. Funcionalitat de les cèl·lules PC12 protegides per NGF després de l'exposició a 6-hidroxidopamina. Biochem Biophys Res Commun. 2006;351(4):890–895. [PubMed] [Google Acadèmic]
[30] Baquet ZC, Bickford PC, Jones KR. Es requereix un factor neurotròfic derivat del cervell per a l'establiment del nombre adequat dedopaminèrgicneurones de la substància nigra pars compacta. J Neurosci. 2005;25(26):6251–6259. [Article gratuït del PMC] [PubMed] [Google Acadèmic]
[31] Hung Sy, Liou HC, Fu WM. El mecanisme de l'acció de l'hemo oxigenasa-1 està involucrat en la millora de l'expressió de factors neurotròfics. Neurofarmacologia. 2010;58(2):321–329. [PubMed] [Google Acadèmic]
[32] Duarte EP, Curcio M, Canzoniero LM, et al. Neuroprotecció per GDNF en el cervell isquèmic. Factors de creixement. 2012;30(4):242–257. [PubMed] [Google Acadèmic]
El Ministeri de Ciència i Tecnologia de la República Popular de la Xina. Consells d'orientació per a la cura i l'ús d'animals de laboratori. 30 de setembre de 2006; [Google Acadèmic]
