Glicòsids monoterpènics iridoides i acíclics, kankanòsids L, M, N, O i P de Cistanche Tubulosa

Cistanche tubulosa(SCHRENK) R. WLLIT(Orobanchaceae) és una planta paràsit perenne que creix a les arrels deSalvadoraoCalotropisespècie, distribuïda al nord d'Àfrica, Aràbia i països asiàtics.1) Les tiges d'aquesta planta (Kanka-nikujuyou en japonès) s'han utilitzat tradicionalment per atractament de la impotència, l'esterilitat, el lumbago i la debilitat corporalaixí com un agent promotor de la circulació sanguínia.1,2) Durant els nostres estudis sobre components bioactius de tiges deC. tubulosa, 3-6) prèviament vam informar de vint-i-quatre aminoglucòsids feniletanoides inclosos els kankanòsids H1, H2, I, J1, J2, K1, i K2, i dos oligosucres acilats de tiges fresques deC. tubulosa. 5,6) A més, principalglicòsids feniletanoides, equinacòsid, acteòsid i isoacteòsid, es va trobar que inhibeixen l'augment dels nivells sèrics d'aspartat aminotransferasa (AST) i alanina aminotransferasa (sal) en el fetge lesionat dels ratolins induït perD-galactosamina (D-GalN)/ lipopolisacàrid a dosis de 25-100 mg/kgper os(p.o.). També es van dilucidar els requisits estructurals dels glucòsids feniletanoides per a l'activitat hepatoprotectora.5) En aquest estudi continuat sobre els components de les tiges fresques deC. tubulosa, vam aïllar encara més onze glicòsids iridoides inclosos els kankanòsids L (1), M (2), i N (3), set glicòsids monoterpènics acíclics inclosos els kancanosids O (4) i P (5), tres fenilpropanoides i quatre lignans. Aquest article tracta de l'aïllament i elucidació de l'estructura de cinc nous compostos (1-5).

TUBULOSA NATURAL DE CISTANCHE PER ALLEUAR LA DISFUNCIÓ SEXUAL PHGS75% ECH 30% ACT 12%

Les tiges fresques de C. tubulosa (cultivades a Urumqi, província de Xinjiang, Xina) es van extreure amb metanol a reflux per obtenir un extracte metanòlic (8,36% de les tiges fresques). A partir de l'extracte metanòlic, es van obtenir fraccions eluïdes amb H2O i MeOH (5,63% i 2,73%, respectivament) mitjançant cromatografia en columna Diaion HP-20 (H2O→MeOH) tal com s'ha descrit anteriorment.5) La fracció eluïda amb MeOH va ser sotmesos a cromatografies de columna SiO2 i ODS i, finalment, HPLC per proporcionar kankanòsids L (1, 0.0026%), M (2, 0.{{27} }}001%), N (3, 0.00{{60}}7%), O (4, 0.0{{90}}2{{1{05}}%) i P (5, 0 .00{02%), 6-desoxicatalpol3,7) (6, 0,197%), bartsioside3,7) (7, { {147}}.0583%), gluròsid3,7) (8, 0,0443%), kankanoïsid A3) (9, 22,3 mg, 0,0010%), àcid mussenosídic3,7) ( 10, 0,0056%), 8- àcid epilogànic3,8) (11, 0,0023%), 8-àcid epideoxilogànic3,7) (12, 0,0004%), àcid geniposidic3,7) (13, 0,0040%) ), kankanòsid E3) (14, 0,0026%), (2E,6Z)-8-bD-glucopiranosiloxi{-2,6-dimetil-2, 6-àcid octadienoic3 ,9) (15, 31,0 mg, 0,0014%), (2E,6E)-3,{7-dimetil-8-hidroxioctadi{-1-il-ObD-glucopiranòsid10) (16, 0,0082%), 8-hidroxigeraniol 8-O-bD-glucopiranòsid11) (17, 0,0044%), betulalbusida A12) (18, 0,0004%), coniferina13) (19, 0,0002%), xeringa 20, 0,0015%), aldehid sinàpic 4-ObD-glucopiranòsid14) (21, 0,0001%), ( )-pinoresinol ObD-glucopiranòsid4,8,15) (22, 0,0010%), eucommin A16) (203, 020). %), isoeucommin A17) (24, 0,0010%) i ( )-siringaresinol ObD-glucopiranòsid4,8,18) (25, 0,0044%).

Estructures dels kankanòsids L (1), M (2) i N (3)

Kankanoside L (1) es va obtenir com una pols blanca amb rotació òptica negativa ([a]D 26 - 45.7 en MeOH). El seu espectre IR va mostrar una banda d'absorció forta a 3433 i 1{{20}}80 cm- 1 suggeridora d'un fragment de glucòsid. El bombardeig ràpid d'àtoms (FAB) -MS d'1 execució en els modes d'ions positius i negatius va mostrar pics d'ions quasimoleculars a m/z 371 [M Na] i 347 [M-H]-, respectivament, i la fórmula molecular va ser determinat com a C15H24O9 mitjançant mesura FABMS d'alta resolució. La hidròlisi àcida d'1 amb àcid clorhídric (HCl) 1,0 M va alliberar D-glucosa, que es va identificar mitjançant anàlisi HPLC mitjançant un detector de rotació òptic.3-6) Els espectres de RMN 1 H i 13C d'1 (CD3OD, taules 1, 2), que van ser assignats per diversos experiments de RMN,19) van mostrar senyals assignables a quatre metilens [d 1,43 (1H, br dd, J= ca. 5, 13 Hz, 4a-H), 1,73 ( 1H, br dd, J= aprox. 12, 14 Hz, 6a-H), 1,85 (1H, m, 4b-H), 1,93 (1H, br dd, J= aprox. 8 , 14 Hz, 6b-H), 3,50 (1H, ddd, J= 2,4, 12,5, 13,0 Hz, 3a-H), 3,83 (1H, br dd, J{=

ca. 5, 13 Hz, 3b-H), 3,78, 4,12 (1H cadascun, tots dos d, J= 13,1 Hz, 10-H2)], dues metines [d 2,15 (1H, dd, J=7,2, 8,9 Hz, 9-H) i 2,23 (1H, m, 5-H)] i un grup acetal [d 4,81 (1H, d, J{{28} }},9 Hz, 1-H)] juntament amb un fragment b-glucopiranosil [d 4,70 (d, J= 7,9 Hz, 1 -H)]. Com es mostra a la figura 1, l'experiment d'espectroscòpia de correlació 1 H–1 H (1 H–1 H COSY) a 1 va indicar la presència d'estructures parcials escrites en negreta. A l'experiment de correlació d'enllaços múltiples heteronuclears (HMBC) a 1, es van observar correlacions de llarg abast entre els següents protons i carbonis (1-H i 3-C, 8-C; {{ 49}}H i 1-C 7-H i 8-C, 9-H i 8-C; }}H2 i 7-C, 8-C {1 -H i {1-C) tal com es mostra a la figura 1. A continuació, l'estereestructura relativa d'1 es va caracteritzar per fase sensible; Experiment d'espectroscòpia de millora nuclear Overhauser (NOESY sensible a la fase), que va mostrar correlacions NOE entre els següents parells de protons (1-H i 3aH; 3a-H i 4a-H; 3b-H i 4b-H; 4b-H; 4b-H). i 5-H, 9-H 5- i 6b-H, 9-H i 7-H; i 10-H2), tal com es mostra a la figura 1. Els espectres de RMN 1H i 13C de 1 es superposaven als del constituent iridoide principal 6-desoxicatalpol (6), excepte pels senyals deguts. al fragment saturat de d-lactol. Finalment, la hidrogenació de 6 va donar 1, de manera que es va dilucidar que l'estereoestructura del kankanòsid L era 3,4- dihidro-6-desoxicatalpol (1).

TUBULOSA NATURAL DE CISTANCHE PER ALLEUAR EL TRASTORN DE L'EXCITACIÓ DEL CORREU PHGS75% ECH 30% ACT 12%

Kankanoside M (2) es va obtenir com una pols blanca amb rotació òptica negativa ([a]D 26 - 18.7 en MeOH). L'espectre IR de 2 va mostrar bandes d'absorció a 3433, 1736, 1655 i 1076 cm{- 1 atribuïbles a fragments d'hidroxil, d-lactona, olefina i èter. L'espectre FAB-MS d'ions positius de 2 va mostrar un pic d'ions quasimoleculars a m/z 353 [M Na] , i la fórmula molecular es va determinar com a C15H22O8 mitjançant la mesura FAB-MS d'ions positius d'alta resolució. La hidròlisi àcida de 2 amb HCl 1,0 M va alliberar D-glucosa. Els espectres 1 H- i 13CNMR de 2 (CD3OD, taules 1, 2) mostraven senyals assignables a quatre metilens [d 1,66, 2,11 (1H cadascun, tots dos m, 4-H2), 2,15, 2,75 (1H cadascun, tots dos m, 6-H2), 4,29 (1H, ddd, J= 2,8, 8,4, 14,3 Hz, 3b-H), 4,32, 4,51 (1H cadascun, tots dos d, J{{61 }},1 Hz, 10-H2), 4,35 (1H, ddd, J{= 3.1, 6,7, 14,3 Hz, 3a-H)], dues metines [d 2,97 (1H, m, 5-H), 3,82 (1H, br s, 9-H)], una olefina [d 5,94 (1H, m, 7-H)] i un grup lactona saturat (d C 174,9) juntament amb un fragment bD-glucopiranosil [d 4,32 (1H, d, J= 7,9 Hz, 1 -H)]. Com es mostra a la figura 1, l'experiment 1 H–1 H COSY a 2 va indicar la presència d'estructures parcials escrites en negreta i, a l'experiment HMBC, es van observar correlacions de llarg abast entre els següents parells de protons i carboni ({{ 103}}H i 1-C 7-{106}}C 9-H i 1-C, {{110}; }}H2 i 7-C, 8-C, 9-C 1 -H i 10-C). L'estereoestructura relativa de 2 es va caracteritzar per un experiment NOESY sensible a la fase, que va mostrar correlacions NOE entre els següents parells de protons (3a-H i 4a-H; 3b-H i 4b-H; 4b-H i 5- H; 5-H i 6b-H, 9-H) tal com es mostra a la figura 1. Així, l'estereestructura de 2 es va dilucidar tal com es mostra.

Kankanoside N (3) es va aïllar com una pols blanca amb rotació òptica negativa ([a]D 25 - 24.6 en MeOH). En el FAB-MS d'ions positius de 3, es va observar un pic d'ions quasimoleculars a m/z 371 [M Na] . La fórmula molecular C16H28O8 es va determinar mitjançant la mesura FAB-MS d'alta resolució. Hidròlisi àcida de 3 amb 1.0 M HCl alliberat D-glucosa. Les dades de RMN 1H i 13C (CD3OD, taules 1, 2) mostraven senyals assignables a un metil [d 1.07 (3H, d, J{= 7.2 Hz, {{ 28}}H3)], quatre metilens {d 1,37, 1,87 (1H cadascun, tots dos m, 7-H2), 1,65, 1,81 (1H cadascun, tots dos m, 6-H2), [3,65 ( 1H, dd, J= 9.1, 9.8 Hz), 3.90 (1H, dd, J{= 5.9, 9.8 Hz), {11-H2] i [3.70 (1H, dd, J= 3,3, 12,0 Hz), 3,88 (1H, m), 3-H2]}, quatre metines [d 1,69 (1H, m, 4-H), 1,75 (1H, m, 9-H), 2,06 (1H, m, 8-H), 2,16 (1H, m, 5-H)] i un grup hemiacetal [d 4,67 ( 1H, d, J= 7,4 Hz, 1-H)] juntament amb un fragment bD-glucopiranosil [d 4,26 (1H, d, J= 7,9 Hz, {{101) }}H)]. L'estructura iridoide de 3 es va aclarir mitjançant experiments 1 H–1 H COSY i HMBC i l'estereoestructura relativa es va caracteritzar per un experiment NOESY sensible a la fase, tal com es mostra a la figura 1. En conseqüència, l'esteroestructura de 3 es va dilucidar tal com es mostra.

TUBULOSA NATURAL DE CISTANCHE PER A LA RESOLUCIÓ DE PROBLEMES SEXUALS PHGS75% ECH 30% ACT 12%

Estructures dels kankanòsids O (4) i P (5)

Els kankanòsids O (4) i P (5), C16H26O8, també es van obtenir com a pols blanques amb rotacions òptiques negatives (4: [a]D 23 - 26.1; 5: [a]D 21 - 32. 7 tots dos en MeOH). Els espectres IR de 4 i 5 van mostrar bandes d'absorció a 3433, 1696, 1647 i 1076 cm{- 1 per a 4, i 3434, 1701, 1647 i 1{ {95}}76 cm- 1 per a 5, atribuïble a les funcions glicosídiques, carboxíliques i olefines. Els seus espectres UV van mostrar un màxim d'absorció comú a 217 nm que indica la presència d'un fragment d'àcid carboxílic a, b-insaturat en tots dos. La hidròlisi àcida de 4 i 5 va alliberar D-glucosa, mentre que per la hidròlisi enzimàtica amb glucosidasa, 4 i 5 van donar (2E,6E)-8-hidroxi{-2,6-dimetil{{37} },6-àcid octadienoic20) (4a) i (2E,6E)-8-hidroxi-3,7- dimetil-2,{{ 47}}àcid octadienoic21) (5a), respectivament. Les dades de 1 H- i 13C-RMN de 4 (CD3OD, taules 2, 3) van mostrar senyals assignables a dos metils [d 1,71 (3H, br s, 10-H3), 1,81 (3H, d, J{{{{ 66}},0 Hz, 9-H3)], tres metilens {d 2,19 (2H, br t, J= aprox. 7 Hz, 5-H2), 2,36 (2H, m, 4-H2), [4,24 (1H, dd, J= 7,6, 12,0 Hz), 4,33 (1H, dd, J{= 6,2, 12,0 Hz), { {96}}H2]} i dues olefines trisubstituïdes [d 5,41 (1H, ddd, J= 1,2, 6,2, 7,6 Hz, 7- H), 6,75 (1H, tq, J{ {111}}.2, 1,0 Hz, 3-H)] juntament amb una part de b-Dglucopiranosil [d 4,34 (d, J= 7,8 Hz, 1 -H)]. Mitjançant la comparació de senyals de carboni en l'espectre 13C-RMN de 4

amb els de 4a, es va observar un canvi de glicosilació a la posició 8- (d C 4: 65,5; 4a: 59,4). La posició de l'enllaç glucòsid també es va confirmar mitjançant experiments HMBC, tal com es mostra a la figura 2. En conseqüència, es va aclarir que l'estereoestructura de 4 era (2E,6E)-8-bD-glucopiranosiloxi-2,{{ 16}}àcid dimetil-2,6-octadienoic. D'altra banda, les dades de 1H- i 13C-RMN de 5 (CD3OD, taules 2, 3) van indicar la presència d'un (2E,6E)-8-hidroxi{{30}} ,7-dimetil-2,6-part àcid octadienoic [d 1,70 (3H, br s, 10-H3), 2,14 (3H, br s, 9- H3), 2,24 (2H, m, 4-H2), 2,27 (2H, m, 5-H2), 4,05, 4,20 (1H cadascun, tots dos br d, J{= ca. 12 Hz, 8-H2), 5,47 (1H, tq, J= 7,1, 0,9 Hz, 6-H), 5,67 (1H, br s, 1-H )] juntament amb una part de bD-glucopiranosil [d 4,23 (d, J= 7,7 Hz, 1 -H)]. La connectivitat del fragment bD-glucopiranosil a 5 es va dilucidar a partir dels experiments HMBC tal com es mostra a la figura 2. A més, es va observar un canvi de glicosilació típic per als senyals a la posició 8- (d C 5: 75, 6; 5a: 68,8). a partir de les proves esmentades anteriorment, es va determinar que l'estereoestructura de 5 era (2E,6E)-8-bD-glucopiranosiloxi-3,7-dimetil-2,{{103 }}àcid octadienoic.

Efectes dels constituents sobre la citotoxicitat induïda pel factor de necrosi tumoral-a (TNF-a) a les cèl·lules L929

Se sap que el TNF-a media una varietat de lesions d'òrgans mitjançant la seva inducció de l'apoptosi cel·lular. En el cas del fetge, els efectes biològics del TNF-a s'han implicat en lesions hepàtiques induïdes per toxines hepàtiques, isquèmia/reperfusió, hepatitis viral i alcohol.22-24) Per tant, es considera que el TNF-a és un objectiu important per descobrir agents antiinflamatoris i hepatoprotectors. Basant-nos en el concepte esmentat anteriorment, vam investigar els components protectors de productes naturals sobre la mort cel·lular induïda per TNF-a en cèl·lules L929, una línia cel·lular sensible a TNF-a.25) Anteriorment, hem informat.

que es va trobar que diversos components de Piper chaba, 26-29) Boesenbergia rotunda, 30,31) Punica granatum, 32) Helichrysum arenarium, 33-35) i Sapindus rarak, 36-38) mostraven efectes inhibidors de la citotoxicitat induïda per TNF-a a les cèl·lules L929. Atès que els constituents feniletanoides de C. tubulosa (p. exechinacòsid, acteòsid i isoacteòsid, etc.) 5) també va inhibir aquesta citotoxicitat, vam examinar més els components iridoides, fenilpropanoides i lignans tal com es mostra a la taula 4. Com a resultat, el kankanòsid A (9, inhibició: 16,3± 2,0% a 1). 00 mM), àcid mussenosídic (10, 44,7± 8,7%), 8-àcid epigàmic (11, 10,7± 0,4%), 8-hidroxi geraniol 8-ObD- Es va trobar que el glucopiranòsid (17, 21,3 ± 2,4%) i ()-pinoresinol ObD-glucopiranòsid (22, 22,3 ± 1,6%) mostraven una activitat significativa. Tot i que les seves activitats eren més febles que les de l'equinacòsid (IC{38}},1 mM), l'acteòsid (17,8 mM) i l'isoaceteòsid (22,7 mM), els principals constituents feniletanoides.5)

TUBULOSA NATURAL DE CISTANCHE PER A LA MILLORA DE LA FUNCIÓ SEXUAL PHGS75% ECH 30% ACT 12%