Efectes neuroprotectors de quatre neccòsids fenitohanoides en l'apoptosi induïda per H2O2 en cèl·lules PC12 a través de la via Nrf2 / ARE

Contacte: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 Correu electrònic:audrey.hu@wecistanche.com

Maiquan Li 1, Tao Xu 1, Fei Zhou 1, Mengmeng Wang 1, Huaxin Song 1, Xing Xiao i Baiyi Lu 1,*

1. Introducció

L'estrès oxidatiu, que és un desequilibri de l'homeòstasi antioxidant, indueix peroxidació lipídica, lesions a proteïnes i ADN, envelliment cel·lular i mort cel·lular. Aquest procés probablement contribueix a diversos trastorns neurodegeneratius, com la malaltia d'Alzheimer (DA), la malaltia de Parkinson (PD) i la isquèmia / reperfusió[ 1]. El peròxid d'hidrogen (H2O2), que és una de les principals espècies reactives d'oxigen (ROS), és conegut per causar peroxidació lipídica i dany a l'ADN. A més, l'H2O2 és una font endògena de radicals lliures d'hidroxil que contribueix al nivell de fons de l'estrès oxidatiu cel·lular. Per tant, les estratègies terapèutiques per prevenir l'apoptosi oxidativa induïda per l'estrès poden tenir el potencial en el tractament de malalties neurodegeneratives.

El factor eritroide 2 (Nrf2) és un factor de transcripció fortament associat amb l'estrès oxidatiu. L'activació de Nrf2 indueix la transcripció de nombrosos gens antioxidants i de desintoxicació, incloent bioactivitats hemo oxigenasa-1 (HO-1), NAD(P)H quinona oxidoreductasa 1, antiinflamatori [13], i bioactivitats immunomoduladores[14]. Osmanthusfragrans és un ingredient comú en diversos aliments asiàtics i s'ha consumit durant molt de temps. Anteriorment vam demostrar que els extractes de flors d'O.fragrans van millorar l'aprenentatge espacial i la memòria, van inhibir el dany oxidatiu i van exhibir activitats neuroprotectores en l'envelliment induït per la d-galactosa en un model de ratolí ICR[ 15]. Salidroside, acteoside i isoacteoside són la principal resposta de phGs per a les activitats antioxidants dels extractes de flors D.fragrans[ 16].

Els estudis sobre l'efecte neuroprotector dels phGs han obtingut resultats desitjables. Salidroside va reduir significativament l'apoptosi cel·lular de les cèl·lules PC12 que van ser exposades en MPP + [17,18]. Acteoside també va alleujar l'apoptosi induïda per MPP + i l'estrès oxidatiu en cèl·lules PC12 [19] i una lesió cel·lular SH-SY5Y induïda per P25-35 [20]. L'equiinacòsid es va investigar sobre l'apoptosi induïda per necrosi tumoral -a (TNFa) en cèl·lules SH-SY5Y[21], toxicitat dopaminèrgica induïda per MPTP en ratolins[22], cultius primaris lesionats per glutamat de cèl·lules corticals de rata [23], i dany induït per 6-OHDA en cèl·lules PC12 [24]. Els resultats van indicar que els phGs van mostrar un efecte citoprotector i són agents potencials per tractar malalties neurodegeneratives. Els estudis han demostrat les propietats antioxidants dels phGs sota moltes altres bioactivitats per a aquests compostos. No obstant això, pocs estudis han investigat el mecanisme molecular dels phGs contra la toxicitat oxidativa.

En el nostre estudi, hem seleccionat quatre doctorats típics de la següent manera: salidroside (monosacàrids fenitohanoides), acteòrids (disacàrids fenitonoides), isoacteoside (disacàrids fenitohanoides) i equiinacòsid (trisacàrids fenitohanoides). Vam utilitzar un model de mort neuronal utilitzant cèl·lules PC12 diferenciades [26] per investigar l'efecte protector i el mecanisme molecular dels phGs en el model de cèl·lules PC12 induïdes per H2O2. Hem demostrat que els phGs van activar la via Nrf2 / ARE unint-se a la proteïna associada a ECH 1 (Keap1). Aquest procés va regular els enzims antioxidants i va augmentar la resistència de les cèl·lules PC12 a l'estrès oxidatiu.

Tractament de trastorns neurodegeneratius:PhGs de cistanche

2. Resultats

2.1. Doctorats suprimits citotoxicitat induïda per H2O2 en cèl·lules PC12

Es van provar els efectes citotòxics de H2O2 i PhGs (0.1,1,5 i 10 卩g / ml) en cèl·lules PC12. Els resultats van mostrar que la pèrdua induïda per H2O2 de la viabilitat cel·lular de PC12 de manera dependent de la concentració i dependent del temps (Figura 1A). L'exposició de cèl·lules PC12 a 200 H2O2 durant 2 h va donar lloc a una viabilitat cel·lular del 57,4%. Pretractament de cèl·lules amb doctorats a 0,1,1, 5, i 10 昭 / ml no van tenir cap efecte sobre la viabilitat cel·lular (Figura 1B) i les cèl·lules PC12 marcadament protegides del dany induït per H2O2 en millorar la viabilitat cel·lular com 9.549-22.141%, 12.092-25.289%, 1.470-9.289%, i 3.411-11.441%, respectivament (Figura 1C). No obstant això, el pretractament de salidroside (0,1 ^g/ml), isoacteoside (0,1, 5 i 10 ^g/ml), equiinacòsid (0,1,1, i 5 ^g/ml) no va mostrar cap diferència significativa en la lesió cel·lular induïda per HzOz. El pretractament de cèl·lules amb doctorats també va caletre la característica morfològica induïda per H2O2 (Figura 1D).

Figura 1.PhGs suprimit citotoxicitat induïda per H2O2 en cèl·lules PC12. La viabilitat cel·lular va ser detectada per l'assaig MTT. Efecte citotòxic d'H2O2 (A) i PhGs (B) en diferents concentracions en cèl·lules PC12. (C) Els doctorats van atenuar la disminució induïda per H2O2 en la viabilitat cel·lular. Les cèl·lules PC12 es van incubar amb phGs (0,1 i 10 mg / ml) durant 24 h, i després es van incubar amb 200 pM H2O2 durant altres 2 h després que es retiressin els phGs. d) Observació morfològica. Les cèl·lules després del tractament van ser observades per un microscopi de contrast de fase (x100), CK: grup normal, H2O2: grup tractat amb H2O2, HL: grup tractat de baixa dosi salidroside, HH: grup tractat d'alta dosi salidroside, ML: grup tractat de dosi baixa acteòsid, MH: grup tractat d'alta dosi d'acteoside, IL: grup tractat amb baixa dosi isoacteoside, IH: grup tractat amb dosis altes isoacteoside, SL: grup tractat amb dosi baixa d'equiinacòsids, SH: Grup tractat d'alta dosi d'equiinacos. ** p< 0.01="" versus="" untreated="" group;="" #="" p="">< 0.05,="" versus="" h2o2="" treated="" group;="" ##="" p="">< 0.01,="" versus="" h2o2="" treated="">

2.2. Doctorats Suprimits L'acumulació intracel·lular induïda per H2O2 de ROS, peroxidació lipídica (MDA) i augment de les activitats de superòxid dismutasa (SOD) en cèl·lules PC12

L'exposició de les cèl·lules PC12 a 200 pM H2O2 durant 2 h va augmentar els nivells de ROS, el contingut de MDA i la disminució de l'activitat de SOD (Figura 2). El pretractament dels phGs atenuava el nivell de ROS, salidroside i acteòdid, i l'alta dosi de pretractament d'isoacteoside i equiinacoside significativament atenuat nivell ros significativament atenuat (p< 0.01).="" salidroside="" pretreatment="" showed="" no="" effect="" on="" mda="" content,="" but="" acteoside="" pretreatment="" significantly="" attenuated="" mda="" content="" (p="">< 0.05).="" isoacteoside="" and="" echinacoside="" pretreatment="" significantly="" attenuated="" mda="" content="" to="" a="">

Figura 2.Els doctorats van bloquejar l'acumulació de ROS i MDA i van augmentar les activitats de SOD en cèl·lules PC12. Les cèl·lules PC12 es van incubar amb phGs (0.1, i 10 四g / ml) durant 24 h, i després es van incubar amb 200 |^M H2O2 durant altres 2 h després que els PhGs fossin eliminats. (A) Els doctorats van bloquejar l'acumulació ros i MDA. (B) Els phGs van bloquejar l'acumulació de MDA. (C) Els doctorats van augmentar les activitats de SOD. CK: grup normal, Model: Grup tractat amb H2O2, Salidroside: grup tractat amb salidroside, Acteoside: grup tractat amb acteòdid, Isoacteoside: grup tractat amb isoacteoside, Equiinacoside: grup tractat amb equiinacòsid. ** p< 0.01="" versus="" untreated="" group;="" #="" p="">< 0.05,="" versus="" h2o2="" treated="" group,="" ##="" p="">< 0.01,="" versus="" h2o2="" treated="">

2.3.PhGs Apoptosi invertida per H2O2 en cèl·lules PC12

El tractament H2O2 (200 |1M) durant 2 h va augmentar significativament l'apoptosi en les cèl·lules PC12, amb una taxa apoptòtica total fins al 16,02% (Figura 3). No obstant això, el pretractament amb phGs (0,1 i 10 卩g/ml) durant 24 h va disminuir la taxa d'apoptosi de manera dependent de la concentració (p< 0.01).="" salidroside,="" acteoside,="" isoacteoside,="" and="" echinacoside="" markedly="" decreased="" the="" percentage="" of="" cell="" apoptosis="" by="" 4.750-6.627%,="" 4.413-5.800%,="" 6.593-10.047%,="" and="" 1.530-7.510%,="">

Figura 3. PhGs va invertir l'apoptosi induïda per H2O2 en cèl·lules PC12. Les cèl·lules PC12 es van incubar amb phGs (0,1 i 10 卩g / ml) durant 24 h, i després es van incubar amb 200 pM H2O2 durant altres 2 h després que es retiressin els phGs. Després, l'apoptosi es va mesurar mitjançant citometria de flux utilitzant una sonda fluorescent PI /FITC. CK: grup normal, Model: Grup tractat amb H2O2, Salidroside: grup tractat amb salidroside, Acteoside: grup tractat amb acteòdid, Isoacteoside: grup tractat amb isoacteoside, Equiinacoside: grup tractat amb equiinacòsid. ** p< 0.01="" versus="" untreated="" group;="" ##="" p="">< 0.01,="" versus="" h2o2="" treated="">

2.4. Doctorats invertida de la desregulació induïda per H2O2 de l'expressió de proteïnes de HO-1, NQO1, GCLC i GCLM

HO-1, NQO1 i lligasa de glutamat-cisteïna (GCL) són enzims antioxidants cel·lulars importants, i HO-1, NQO1, i subunitats catalítiques o modificades de GCL (GCLC o GCLM) són gens aigües avall regulats per Nrf2. L'expressió proteica de HO-1, NQO1, GCLC i GCLM es va observar després del tractament. Es va trobar una diferència òbvia entre l'expressió proteica de HO-1 i NQO1 amb O sense H2O2 (Figura 6A-C) (p< 0.01).="" phgs="" (0.1="" and="" 10="" p^g/ml)="" reversed="" the="" h2o2-induced="" downregulation="" of="" protein="" expression="" of="" ho-1="" (except="" salidroside="" at="" 0.1="" pg/ml),="" nqo1="" (except="" acteoside="" at="" 0.1="" pg/ml)="" (p="">< 0.01).="" h2o2="" also="" downregulated="" gclc="" and="" gclm="" protein="" expression="" (p="">< 0.05)="" (figure="" 6a,d,e).="" phgs="" (0.1="" and="" 10="" pg/ml)="" reversed="" h2o2-induced="" downregulation="" of="" protein="" expression="" of="" gclc="" (except="" echinacoside="" at="" 0.1="" pg/ml)="" (p="">< 0.01)="" and="" gclm="" (except="" salidroside="" at="" 0.1="" pg/ml)="" (p="">< 0.01).="" then,="" the="" chemical="" inhibitors="" for="" ho-1="" were="" used="" to="" further="" evaluate="" the="" roles="" of="" the="" antioxidant="" enzymes="" in="" regulating="" the="" protection="" of="" phgs="" against="" h2o2-induced="" cytotoxicity.="" phgs="" (0.1="" and="" 10="" pg/ml)="" prevented="" h2o2-induced="" cytotoxicity,="" but="" such="" protective="" effect="" was="" reversed="" by="" ho-1="" inhibitor="" znpp="" (p="">< 0.01)="" at="" 20="" pm="" (figure="" 6f,="" p=""><>

2.5. Anàlisi d'expressió i acoblament molecular keap1

Sota condicions fisiològiques, Keap1 actua com una proteïna repressora de Nrf2 unint-se al domini Neh2 de Nrf2 i apuntant Arf2 a una lligasa d'ubiquitina E3 basada en Cul3 per a la ubiquitinació i la posterior degradació pel proteasoma 26S. La capacitat d'unió a Keap1 de PhGs es va avaluar mitjançant anàlisis d'acoblament molecular per investigar el mecanisme sota el seu efecte antioxidant.

Efecte antioxidant: CistanchePhGs

3. Discussió

Vam investigar la neuroprotecció de phGs sobre citotoxicitat induïda per H2O2 en cèl·lules PC12. Els resultats mostren que el pretractament dels phGs va suprimir significativament la citotoxicitat induïda per HzOz, va atenuar el nivell de ROS intracel·lular, va millorar el nivell d'enzims antioxidants intracel·lulars i, en última instància, va revertir la citotoxicitat induïda per H2O2 en les cèl·lules PC12. A més, els phGs van augmentar l'activació transcripcional de Nrf2, van revertir la desregulació induïda per HzOz de l'expressió proteica de HO-1, NQO1, GCLC i GCLM. A més, els doctorats van mostrar una possible interacció amb el lloc d'unió Nrf2 en la proteïna Keap1.

En la lesió cel·lular PC12 induïda per H2O2, la peroxidació lipídica, que es refereix a la degradació oxidativa del lípid, va augmentar la permeabilitat de les membranes, provocant dany cel·lular. La formació de MDA s'utilitza àmpliament com l'índex de peroxidació lipídica[30]. H2O2 va millorar la producció de ROS i va esgotar enzims de defensa antioxidants, com la SOD, la catalasa i el GPx. Aquest procés condueix a l'estrès oxidatiu[31], que juga un paper clau en la causalitat i progressió de la majoria dels trastorns neurodegeneratius. D'acord amb estudis anteriors, vam observar un augment del nivell de ROS, va reduir els enzims antioxidants intracel·lulars i va millorar l'apoptosi de les cèl·lules PC12 després del tractament amb H2O2. El pretractament dels phGs va atenuar significativament l'augment induït per HzOz en ros intracel·lular, va millorar els enzims antioxidants intracel·lulars i, en última instància, va revertir la citotoxicitat induïda per HzOz en les cèl·lules PC12.

Kuang et al. [32] van informar que l'equiinacòsid va mostrar un efecte neuroprotector significatiu sobre la citotoxicitat induïda per H2O2 en cèl·lules PC12 a través de la via apoptòtica mitocondrial. En aquest estudi, vam trobar que l'equiinacòsid, la salidroside, l'acteòdid i la isoacteoside van mostrar efectes neuroprotectors en millorar l'activitat antioxidant de les cèl·lules PC12 perquè van augmentar l'activació transcripcional de Nrf2 i van regular l'expressió de proteïnes aigües avall de HO-1, NQO1, GCLC i GCLM. Nombrosos estudis han demostrat clarament que l'activació dels gens diana de Nrf2, en particular HO-1, en astròcits i neurones protegeixen fortament contra la inflamació, el dany oxidatiu i la mort cel·lular. S'ha informat que el sistema HO-1 és molt actiu en el sistema nerviós central, i la seva modulació aparentment juga un paper crucial en la patogènesi dels trastorns neurodegeneratius. Estudis recents també van aclarir el paper de Nrf2 en la progressió i el risc de PD [9] i Keap1 com un objectiu eficient per a la reactivació de Nrf2 en la DA[34]. Els resultats donen suport a noves evidències de Nrf2 com a diana terapèutica en malalties neurodegeneratives.

L'anàlisi d'acoblament molecular va mostrar que els phGs podrien unir-se a Keap1, amb les següents capacitats d'unió: equiinacòid > isoacteoside > acteòside > salidroside. D'acord amb aquests resultats, el pretractament de doctorats va conduir a la translocació nuclear de Nrf2, amb la següent expressió de Nrf2 al nucli: equiinacòsid > isoacteoside * acteoside > salidroside. Vam assumir que el nombre de glicòsids afectava el possible mode d'unió de PhGs i Keap1, i el mode d'unió va provocar encara més l'alliberament de Nrf2 de Keap1. Aquest procés va donar lloc a l'activació de Nrf2 i els gens aigües avall i, en última instància, protegeix les cèl·lules PC12 de l'estrès oxidatiu induït per H2 O2.

Efectes neuroprotectors del cistanchePhGs

4. Materials i Mètodes

4.1. Compostos químics i reactius

Salidroside (CAS núm. 10338-51-9), acteòbil (CAS núm. 61276-17-3), isoacteoside (CAS núm. 61303-13-7) i echinacoside (CAS núm. 82854-37-3) van ser adquirits a YYuanye Biotechnology Company (Xangai, Xina). Els PhGs es van dissoldre en PBS per produir una solució d'estoc de 10 mg / ml, que es va emmagatzemar a -20 ° C. L'H2O2 va ser comprat a Aladdin® (Xangai, Xina). El sèrum boví mitjà i fetal RPMI-1640 es va comprar a Hyclone (Logan, UT, EUA), i el 0,5% de tripsina EDTA, penicil·lina i estreptomicina es van comprar a Keyi (Hangzhou, Xina). Els kits de diagnòstic MDA, SOD, MTT i DCFH-DA van ser comprats a l'Institut de Biotecnologia de Beyotime (Nanjing, Jiangsu, Xina). Annexin V-FITC / PI kit de doble tinció va ser comprat a Solarbio Life Sciences (Pequín, Xina). Els anticossos contra Nrf2, Histone H3, Keap1, HO-1, NQO1, GCLC, GCLM i p-actina, peròxid anti-ratolí-rave picant (HRP) IgG, i anti-conill-HRP-IgG es van comprar a Abcam (Londres, Regne Unit). Els inhibidors de HO-1 i ZnPP van ser comprats a Sigma Chemical Co. (St. Louis, MO, EUA). RNAiso Plus, PrimeScript™RT reactiu Kit amb goma d'esborrar gDNA, i SYBR® Premix Ex Taq™ II van ser comprats a Takara (Shiga, Japó). La lipofecamina® RNAiMAX Transfection Reagent va ser comprada a Thermo Fisher Scientific (Waltham, Regne Unit). Les seqüències de siRNA Nrf2 eren les següents: endavant, CCGAAUUACAGUGUCUUAA; i al revés, UUAAGACACUGUAAUUCGG. Mentrestant, les seqüències de siRNA de control eren les següents: endavant, UUCUCCGAACGUGUCACGU; i al revés, ACGUGACACGUUCGGAGAA.

4.2. Cultiu cel·lular

La línia de feocromocitoma suprarenal del ratolí (cèl·lules PC12) es va obtenir de l'Institut de Bioquímica i Biologia Cel·lular, SIBS, (CAS, Xangai, Xina). Les cèl·lules es van mantenir en RPMI-1640 (Hyclone) que conté un 10% de sèrum boví fetal (Hyclone), 100 penicil·lina U / ml i 0,1 mg / ml d'estreptomicina a 37 ° C amb un 5% de CO2. El mitjà canvia cada dia.

4.3. Viabilitat cel·lularAssay

Les cèl·lules PC12 es van sembrar en plaques de 96 pous a 2 x 104 cel·les / pou. Després de l'adhesió, les cèl·lules es preincubaven amb o sense inhibidor durant 20 min, s'incubaven amb doctorats o sense durant 24 h i després s'incubaven amb H2O2 durant altres 2 h després d'eliminar els phGs. Després de la incubació, les cèl·lules van ser tractades amb 5 mg / ml de MTT durant 4 h a 37 °C, i els mitjans es van eliminar acuradament. Els cristalls de formazan que s'havien format per les cèl·lules supervivents es van dissoldre en 150 rL de DMSO per generar un color blau[35], i l'absorbància es va mesurar a 570 nm en un lector de plaques. Els controls utilitzaven la mateixa concentració de medi només amb DMSO. La viabilitat cel·lular es va normalitzar com el percentatge de control.

Les concentracions de phGs (0.1,1,5, i 10 Rg /ml) es van triar en funció de l'anàlisi de citotoxicitat dels phGs i l'efecte citoprotector reportat de l'equiinacòsid[ 32]. Segons l'informe, no hi va haver cap efecte de citotoxicitat mostrat per sota de 10 Rg / ml, i es va informar que l'equiinacòsid mostrava efecte citoprotector en el model cel·lular lesionat per HzOz.

4.4. Assai d'apoptosi

L'apoptosi es va detectar amb un kit de doble tinció annexina V-FITC / PI (Solarbio). Les cèl·lules PC12 es van sembrar en plaques de 6 pous a 2 x 105 cel·les / pou. Després de l'afecció, les cèl·lules van ser tractades amb PhGs (0.1 i 10 Rg / ml) durant 24 h i incubades amb H2O2 durant altres 2 h després de l'eliminació dels PhGs. Després de la incubació, les cèl·lules es van rentar en PBS fred, es van centrifugar dues vegades a 1500 rpm durant 10 minuts i es van reanillar en 500 rL de tampó d'unió. Annexin V (5 rL) i iodur de propidi.

Abreviatures

Subunitat glutamat-cisteïna GCLC lligasa-catalítica

Subunitat de modificador de glutamat-cisteïna GCLM

Peròxid d'hidrogen H2O2

HO-1 hemo oxigenasa 1

Keap1 Kelch ECH associació proteïna 1

NQO1 NAD(P)H quinona oxidoreductasa 1

Factor nuclear eritroide 2 de Nrf2

PhGs salidroside, acteoside, isoacteoside i equiinacoside

Espècies reactives d'oxigen ROS

ZnPP protoporfirina de zinc

Extracte de Cistanche deserticola: PHG de cistanche

Referències

1. Sol, A.Y.; Chen, Y.M. Estrès oxidatiu i trastorns neurodegeneratius. J. Biomed. Sci. 1998, 5, 401-414. [CrossRef] [PubMed]

2. Maheshwari, A.; Micro, M.M.; Aggarwal, A.; Sharma, R.K.; Nandan, D. Vies implicades en l'apoptosi de cèl·lules germinals testiculars induïdes per H2O2 in vitro. FEBRER J. 2009.276, 870-881. [CrossRef] [PubMed]

3. Halliwell, B. Espècies reactives d'oxigen i el sistema nerviós central. J. Neuroquímic. 1992, 59,1609-1623. [CrossRef] [PubMed]

4. Richardson, J.S.; Subbarao, K.V.; Ang, L.C. Sobre el possible paper de la peroxidació de radicals lliures induïda per ferro en la degeneració neuronal en la malaltia d'Alzheimer. Ann. N. Y. Acad. Sci. 1992, 648, 326-327. [CrossRef] [PubMed]

5. Zhang, D.D. Estudis mecanicistes de la via de senyalització Nrf2-Keap1. Metab de drogues. Rev. 2006, 38, 769-789. [CrossRef] [PubMed]

6. Itoh, K.; Tong, K.I.; Yamamoto, M. Mecanisme molecular que activa la via Nrf2-Keap1 en la regulació de la resposta adaptativa als electròfils. Radic lliure. Biol. Med. 2004, 36,1208-1213. [CrossRef] [PubMed]

7. Kong, A.N.; Owuor, E.; Yu, R.; Hebbar, V.; Chen, C.; Hu, R.; Mandlekar, S. Inducció d'enzims xenobiòtics per la via map quinasa i l'element de resposta antioxidant o electrofílica (ARE/EpRE). Metab de drogues. Rev. 2001, 33, 255-271. [CrossRef] [PubMed]

8. Buendia, I.; Michalska, P.; Navarro, E.; Gameiro, I.; Egea, J.; Lleó, R. Nrf2-ARE: Una diana emergent contra l'estrès oxidatiu i la neuroinflamació en malalties neurodegeneratives. Farmaco. Ther. 2016, 157, 84-104. [CrossRef] [PubMed]

9. Skibinski, G.; Hwang, V; Ando, D.M.; Daub, A.; Lee, A.K.; Ravisankar, A.; Modan, S.; Finucane, M.M.; Shabby, B.A.; Finkbeiner, S. Nrf2 mitiga la neurodegeneració induïda per LRRK2 i a-sinucleïna modulant la proteòstasi. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 2016, 114, 1165-1170. [CrossRef] [PubMed]

10. Jiménez, C.; Riguera, R. Glicòsids fenitohanoides en plantes: Estructura i activitat biològica. Nat. Prod. Rep. 1994, 11, 591-606. [CrossRef] [PubMed]

11. Georgiev, M.; Alipieva, K.; Orhan, jo.; Abrashev, R.; Denev, P.; Angelova, M. Activitats inhibidores d'antioxidants i colinestres de Verbascum xanthophoeniceum Griseb. i els seus glucàsids fenitonoides. Cuina Chem. 2011, 128, 100-105. [CrossRef] [PubMed]

12. Li, N.; Wang, J.; Ma, J.; Gu, Z.; Jiang, C.; Yu, L.; Fu, X. Efectes neuroprotectors deCistanches HerbaTeràpia en pacients amb Alzheimer/s moderat. Complement basat en Evid.based. Altern. Med. 2015, 2015,103985. [CrossRef] [PubMed]

13. Liu, Y.L.; Ell, W.J.; Mo, L.; Shi, M.F.; Zhu, Y.Y.; Pan, S.; Li, X.R.; Xu, Q.M.; Yang, S.L. Antimicrobians, activitats antiinflamatòries i toxicologia dels glucosasids fenitohanoides de Monochasma savatieri Franch. ex Maxim. J. Ethnopharmacol. 2013,149, 431-437. [CrossRef] [PubMed]

14. Dong, Q.; Yao, J.; Fang, J.N.; Ding, K. Caracterització estructural i activitat immunològica de dos polisacàrids extraients d'aigua freda deCistanche deserticola Y. C. Ma. Carbohid. Res. 2007, 342,1343-1349. [CrossRef] [PubMed]

15. Xiong, L.; Mao, S.; Lu, B.; Yang, J.; Zhou, F.; Hu, Y.; Jiang, Y.; Shen, C.; Zhao, Y. Osmanthusfragrans Extracte de flors i Acteoside Protegir contra l'envelliment induït per d-Galactose en un model de ratolí ICR. J. Med. Food 2016, 19, 54-61. [CrossRef] [PubMed]

16. Jiang, Y.; Mao, S.; Huang, W.; Lu, B.; Cai, Z.; Zhou, F.; Li, M.; Lou, T.; Zhao, Y. Fenylethanoid Perfils de glucòsids i activitats antioxidants d'Osmanthusfragrans Lour. Flors d'UPLC/PDA/MS i Model de digestió simulada. J. Agric. Food Chem. 2016, 64, 2459-2466. [CrossRef] [PubMed]

17. Li, X.; Ye, X.; Li, X.; Sol, X.; Liang, Q.; Tao, L.; Kang, X.; Chen, J. Salidroside protegeix contra l'apoptosi induïda per MPP + en les cèl·lules PC12 inhibint la via NO. Brain Res. 2011,1382, 9-18. [CrossRef] [PubMed]

18. Zhang, L.; Ding, W.; Sol, H.; Zhou, Q.; Huang, J.; Li, X.; Xie, Y.; Chen, J. Salidroside protegeix les cèl·lules PC12 de l'apoptosi induïda per MPP + mitjançant l'activació de la via PI3K / Akt. Aliment Chem. Toxicol. 2012, 50, 2591-2597. [CrossRef] [PubMed]

19. Sheng, G.Q.; Zhang, J.R.; Pu, X.P.; Ma, J.; Li, C.L. Efecte protector de verbascòsid en 1-metil-4- neurotoxicitat induïda per fenilpiridaci en cèl·lules PC12. Eur. J. Pharmacol. 2002, 451,119-124. [CrossRef]

20. Wang, H.; Xu, Y.; Yan, J.; Zhao, X.; Sol, X.; Zhang, Y.; Guo, J.; Zhu, C. Acteoside protegeix les cèl·lules de neuroblastoma humà SH-SY5Y contra les lesions cel·lulars induïdes per beta-amiloide. Brain Res. 2009, 1283, 139-147. [CrossRef] [PubMed]

21. Min, D.; Jin, Y.Z.; Yong, J.; Zheng, B.L.; Yao, H.W. Echinacoside rescata les cèl·lules neuronals SHSY5Y de l'apoptosi induïda per TNFa. Mentó. Farmaco. Brau. 2005, 505,11-18.

22. Zhao, Q.; Gao, J.P; Li, W.W.; Cai, D.F. Efectes neurotròfics i neurorescue d'Echinacoside en el model subagut del ratolí MPTP de la malaltia de Parkinson. Res. Cerebral 2010,1346, 224-236. [CrossRef] [PubMed]

23. Koo, K.A.; Sung, S.H.; Parc, J.H.; Kim, S.H.; Lee, K.Y.; Kim, Estats Units d'Europa Activitats neuroprotectores in vitro de glucosasids fenitontanioides de Dichotoma de Calicarpa. Planta Med. 2005, 71, 778-780. [CrossRef] [PubMed]

24. Liu, Y.G.; Li, X.; Xiong, C.; Yu, B.; Pu, X.; Ye, X.S. Derivats sintenètics fenil·losanis glicòsids com a potencials agents neuroprotectors. Eur. J. Med. Chem. 2015, 95, 313-323. [CrossRef] [PubMed]

25. Fu, G.; Pang, H.; Wong, Y.H. glucòsids fenitohanoides d'ocurrències naturals: potencials clients potencials per a noves teràpies. Grosella. Med. Chem. 2008, 15, 2592-2613. [CrossRef] [PubMed]

26. Greene, Los Angeles; Tischler, A.S. Establiment d'una línia clonal noradrenèrgica de cèl·lules de feocromocitoma suprarenal de rates que responen al factor de creixement nerviós. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 1976, 73, 2424-2428. [CrossRef] [PubMed]

27. Liang, Q.N.; Sheng, Y.C.; Jiang, P.; Ji, L.L.; Xia, Y.Y.; Min, Y.; Wang, Estats Units d'Catalunya La diferència del sistema antioxidant de glutatió en el fetge de ratolins recentment deslletats i joves i la seva participació en l'hepatotoxicitat induïda per isolina. Arc. Toxicol. 2011, 85, 1267-1279. [CrossRef] [PubMed]

28. Kobayashi, A.; Kang, M.; Okawa, H.; Ohtsuji, M.; Zenke, Y; Chiba, T.; Igarashi, K.; Yamamoto, M. Sensor d'estrès oxidatiu Keap1 Funciona com un adaptador per a la lligasa E3 basada en Cul3 per regular la degradació proteasòmica de la cèl·lula de Nrf2. Mol. Biol. 2004,24, 7130-7139. [CrossRef] [PubMed]

29. Corneli, C.; Crupi, R.; Calabrese, V; Graziano, A.; Milone, P.; Pennisi, G.; Radak, Z.; Calabrese, E.J.; Cuzzocrea, S. Traumatisme cranioencefàlic: estrès oxidatiu i neuroprotecció. Antiòxid. Senyal Redox. 2013, 19, 836-853. [CrossRef] [PubMed]

30. Hou, Z.; Luo, W.; Sol, X.; Hao, S.; Zhang, Y.; Xu, F.; Wang, Z.; Liu, B. La salina rica en hidrogen protegeix contra el dany oxidatiu i els dèficits cognitius després d'un traumatisme cranioencefàlic lleu. Brain Res. Bull. 2012, 88, 560-565. [CrossRef] [PubMed]

31. Ansari, M.A.; Roberts, K.N.; Scheff, S.W. Un curs de temps d'estrès oxidatiu induït per contusió i proteïnes sinàptiques en l'escorça en un model de rata de TCE. J. Neurotrauma 2008, 25, 513-526. [CrossRef] [PubMed]

32. Kuang, R.; Sol, Y.; Yuan, W.; Lei, L.; Zheng, X. Efectes protectors de l'equinoquisid, un dels micosistes fenitohanoides, sobre la citotoxicitat induïda per H2O2 en cèl·lules PC12. Planta Med. 2009, 75, 1499-1504. [CrossRef] [PubMed]

33. Scapagnini, G.; Vasto, S.; Abraham, N.G.; Caruso, C.; Zella, D.; Fabio, G. Modulació de la via Nrf2/ARE per polifenols alimentaris: Una estratègia neuroprotectora nutricional per a trastorns cognitius i neurodegeneratius. Mol. Neurobiol. 2011, 44, 192-201. [CrossRef] [PubMed]

34. Kerr, F.; Sofolaadesakin, O.; Ivanov, D.K.; Gatliff, J.; Gómez, P.B.; Bertrand, H.C.; Martínez, P.; Callard, R.; Snoeren, I.; Cochem, H.M. Disrupció directa de Keap1-Nrf2 com a potencial diana terapèutica per a la malaltia d'Alzheimer/ s. PLoS Genet. 2017, 13, e1006593. [CrossRef] [PubMed]

35. Hansen, M.B.; Nielsen, S.E.; Berg, K. Reexamen i desenvolupament posterior d'un mètode de tint precís i ràpid per mesurar el creixement cel·lular / mort cel·lular. J. Immunol. Mètodes 1989, 119, 203-210. [CrossRef]

36. Premsa, C. Projecció virtual en descobriment de fàrmacs; Crc Press: Boca Raton, FL, ESTATS UNITS, 2005.

37. Muegge, I.; Martin, Y.C.; Hajduk, P.J.; Fesik, S.W. Avaluació de la puntuació de PMF en l'acoblament de lligands febles a la proteïna d'unió FK506. J. Med. Chem. 1999, 42, 2498-2503. [CrossRef] [PubMed]

38. Kuntz, D.D.; Blaney, J.M.; Oatley, S.J.; Langridge, R.; Ferrin, Estats Units d'Empordà Aproximació geomètrica a les interaccions macromolècules-lligands. J. Mol. Biol. 1982.161, 269-288. [CrossRef]

39. MD, E.; Murray, C.W.; Auton, T.R.; Paolini, G.V.; me, R.P. Funcions de puntuació empírica: I. El desenvolupament d'una funció de puntuació empírica ràpida per estimar l'afinitat d'unió dels lligands en complexos receptors. J. Comput.-Aided Mol. Des. 1997,11.425-445.

© 2018 dels autors. Llicenciatari MDPI, Basilea, Suïssa. Aquest article és un article d'accés obert distribuït sota els termes i condicions de la llicència Creative Commons Attribution (CC BY) (http:ZZcreativecommons.org/licenses/byZ4.0Z).