joanna.jia@wecistanche.com/ WhatsApp: 008618081934791

Reprogramació metabòlica renal mediada per IL-22- mitjançant PFKFB3 per tractar la lesió renal

Wei Chen, et al

Resum Gràfic

IL-22 s'atenuaronyólesiómitjançant la reprogramació metabòlica dels TEC renals, regula la funció mitocondrial i la glicòlisi en els TEC danyats i alleuja l'acumulació de ROS mitocondrials i mitocondris disfuncionals mitjançant la inducció d'activitats AMPK/AKT i PFBFK3. MilloraronyólesióofIL-22 mitjançant la regulació del metabolisme, la senyalització rellevant està certificada en models animals de dany renal induït per cisplatí i nefropatia diabètica.

Resum

El dany renal inicia els estats metabòlics deteriorats a les cèl·lules dels túbuls que condueixen al desenvolupament de la malaltia renal en fase terminal (ESTD). La interleucina-22 (IL- 22) és un antídot terapèutic eficaç perronyólesiómitjançant la promoció de la recuperació renal, però se sap poc sobre els mecanismes moleculars subjacents. Aquí, primer proporcionem proves que IL-22 s'atenuaronyólesiómitjançant la reprogramació metabòlica de cèl·lules epitelials tubulars renals (TEC). Concretament, les nostres dades suggereixen que IL-22 regula la funció mitocondrial i la glucòlisi en els TEC danyats. Observacions addicionals indiquen que IL-22 alleuja l'acumulació d'espècies reactives d'oxigen (ROS) mitocondrials i mitocondris disfuncionals mitjançant la inducció de la senyalització AMPK/AKT i les activitats de PFBFK3. En ratolins, millora deronyólesiói la necrosi i la millora de les funcions renals mitjançant la regulació d'aquesta senyalització rellevant del metabolisme i l'aptitud mitocondrial d'IL-22 recombinant estan certificats en models animals de dany renal induït per cisplatí i nefropatia diabètica (DN). En conjunt, les nostres troballes desenvolupen nous coneixements mecanicistes sobre els efectes protectors de la IL-22 sobre els ronyons i destaquen les oportunitats terapèutiques de la IL-22 i els reguladors metabòlics implicats en diverses malalties renals.

PARAULES CLAUinterleucina-22,ronyólesió, reprogramació metabòlica, disfunció mitocondrial

Cistanchetubulosaprevé la malaltia renal, feu clic aquí per obtenir la mostra

1. INTRODUCCIÓ

Agutronyólesió(AKI), una preocupació comuna de salut pública associada a una elevada mortalitat i morbiditat, afecta milions de pacients hospitalitzats a tot el món i mostra una incidència en augment ràpid.1–3 La fisiopatologia subjacent de l'IRA no s'entén completament, però implica el dany i l'apoptosi renal. cèl·lules epitelials tubulars (TEC), especialment al túbul proximal.4–7 Diversos tipus de literatura avalen que el seu dany sever i sostingut sovint causa una reparació incompleta i inadaptada del teixit, que condueix a una resposta inflamatòria, degeneració tubular, fibrosi renal i progressió eventual a malaltia renal terminal (ESTD).8–10 Malauradament, a part de les cures de suport basades en diàlisi, no hi ha cap tractament terapèutic ben establert perronyólesióestà disponible. Per tant, un tractament proactiu és molt necessari per reduir el patiment que causa als pacients i les importants càrregues econòmiques que comportaronyólesióals individus i a la societat.

La interleucina-22 (IL{-22), un membre important de les citocines de la família IL-10, ha cridat recentment una gran atenció com a agent de supervivència en nombrosos trastorns provocats per danys epitelials.11–13 IL. -22 provoca la protecció dels teixits i l'homeòstasi principalment mitjançant l'activació de la via de senyalització STAT3 i la promoció de la proliferació epitelial.14,15 És important destacar que els estudis han demostrat que l'expressió d'IL-22R1 es limita als TEC proximals renals. , i el tractament amb IL-22 pot protegir contra lesions epitelials renals i accelerar la regeneració tubular.16,17 No obstant això, tot i que l'acumulació d'evidències indica que la IL- 22 és un antídot terapèutic eficaç per aronyólesió, se sap poc sobre els mecanismes subjacents de la recuperació de TEC induïts per IL- 22-. Entendre les bases moleculars de la IL-22 és important tant per explorar com actua la IL-22 per inhibir l'AKI o l'ESTD com per descobrir modificadors moleculars així com processos crucials implicats en la prevenció del dany renal.

La reparació del ronyó després del dany és un procés metabòlicament dependent i complicat.18 Les evidències recents indiquen que les signatures metabòliques cel·lulars poden regular la supervivència i la plasticitat de les cèl·lules renals i, per tant, proporcionar una visió mecanicista útil sobre com els processos metabòlics controlen la reparació dels teixits.19,20 Concretament, aquestes troballes. demostren que la reprogramació metabòlica per PGC1 o el sistema S-nitroso-CoA reductasa protegeix contraronyólesió. Mecànicament, l'augment de la glucòlisi i la fosforilació oxidativa (OXPHOS) poden promoure el creixement i vies de senyalització defensives o pot subministrar les demandes energètiques més elevades de mitosi i biosíntesi anabòlica durant la reparació d'òrgans.19,21 Recentment, els nostres estudis han demostrat que IL-22 alleuja disfunció mitocondrial al fetge, que implica els processos metabòlics cel·lulars.22,24 Així, ens preguntem si la IL-22 protegeix contra el dany renal i l'apoptosi mitjançant la regulació dels seus estats metabòlics. Per determinar els mecanismes de reparació renal mediada per IL-22, tractem les cèl·lules epitelials tubulars proximals humanes (PTEC) amb estimulació de l'estrès. Suggerim que IL-22 impulsi la reprogramació metabòlica per millorar la glucòlisi i OXPHOS, que prevenen la disfunció dels TEC. Demostrem a més que IL-22 va induir aquest programa mitjançant l'activació de la senyalització AMPK/AKT i els seus modificadors moleculars per alleujar la disfunció mitocondrial. Les nostres observacions aporten llum sobre la regulació dels estats metabòlics per tractar i prevenir malalties renals i proporcionen noves idees per desenvolupar noves intervencions eficients per a lesions d'òrgans en general.

Cistanche pot tractarronyólesió

2 MATERIALS I MÈTODES

2.1 Reactius

L'oligomicina, la rotenona i el cianur p-trifluorometoxi fenil-hidrazona (FCCP) es van obtenir de Sea horse Biosciences; la IL-22 recombinant va ser proporcionada per Novoprotein (Xina); Es van obtenir cisplatí (Crisp.), MitoTrackerGreen, LY294002, 5,5′,6,6′-tetracloro-1,1′,3,3′-tetraetilbenzimidazolylcarbocyanineiodude (JC{-1) i el compost C de Beyotime Biotechnology (Xina); Els anticossos dirigits a Glut1, -Actin, p-AMPK, AMPK i GAPDH es van comprar a Abcam; els anticossos per STAT3, p-STAT3 (Y705), AKT, p-AKT (S473), PFKFB3 i Caspase-3 es van comprar a Cell SignalingTechnology; rapamicina, àcid palmític (Palm.), Z-VAD-FMK i glucosa es van obtenir de Sigma-Aldrich; MitoSOX, Hoechst33342, MitoTracker Red i PKH26 es van obtenir d'Invitrogen.

2.2 Cultiu cel·lular

La cèl·lula epitelial del túbul proximal humà (HK{{0}}) es va obtenir del Banc de cèl·lules de l'Institut de Bioquímica i Biologia Cel·lular de Xangai, Acadèmia Xinesa de Ciències, i es va mantenir seguint protocols estàndard. HK-2 es va sembrar en plaques de sis pous (1 × 106 cèl·lules/pou) o 96-plaques de pou (1 × 1{05 cèl·lules/pou) i cultivat en un 90% de medi RPMI1640 (Gibco) complementat amb 100 U/ml de penicil·lina, 100 µg/ml d'estreptomicina i un 10% de sèrum fetal boví (FBS) (Gibco). Primer vam incubar HK-2 amb IL-22 (0,5 µg/ml) durant 0,5 h, després 50 mM d-glucosa o 5 µg/ml de cisplatí o àcid palmític 0,2 mM o o 4 µM de doxorubicina (DOX). ) durant 24 h. En alguns casos, les cèl·lules es van cultivar en presència de Z-VAD-FMK (10 µM), compost C (5 µM), LY294002 (20 µM) o rapamicina (50 nM) durant els temps indicats.

2.3 Experiments amb cavallets de mar

Es van analitzar els TEC mitjançant un analitzador de flux extracel·lular Seahorse XF96 per als canvis en la taxa d'àcid extracel·lular (ECAR) i la taxa de consum d'oxigen (OCR). Breument, HK-2 (1 × 105) es va conrear en 96-pous plaques de cavallets de mar durant la nit. A continuació, vam rentar les cèl·lules amb un medi d'assaig de cavallets de mar que contenia 1 mM de piruvat, 10 mM de glucosa i 2 mM de glutamina (o sense glucosa per provar ECAR) en una atmosfera sense CO2 a 37 ◦ C durant {{18} }}.5 h. Les dades experimentals es van registrar després que els inhibidors esmentats a continuació s'injectessin a una concentració òptima de FCCP (1,0 µM), oligomicina (1,0 µM), rotenona/antimicina A (0,5 µM), 2-DG (50 mM) o glucosa (10 mM).

Cistanche pot tractarlesió renal

2.4 Ratolins i models animals

Els ratolins masculins BALB/c (6-8 setmanes) es van comprar a Slaccas Experimental Animal Co. (Xangai, Xina). Els ratolins Db/db i Db/m van ser proporcionats pel Model Animal Research Center de la Universitat de Nanjing (Nanjing, Xina). Tots els ratolins es van mantenir en instal·lacions específiques lliures de patògens (SPF) i es van cultivar seguint protocols estàndard. Per al model AKI, els ratolins BALB/c van rebre cisplatina (20 mg/kg) o control salí per injecció intraperitoneal. Els ratolins Db/db van ser alimentats amb una dieta alta en greixos (HFD) en els punts de temps indicats per induir la nefropatia diabètica (DN). Els ratolins Db/m van ser alimentats amb dietes de menjar com a grup control. En experiments amb animals AKI, IL-22 es va injectar intraperitonealment a la dosi de 0,5 mg/kg/dia o 1,5 mg/kg/dia durant 4 dies consecutius. En experiments amb DN amb animals, IL-22 es va injectar intraperitonealment a la dosi de 2,5 mg/kg dues vegades per setmana durant vuit setmanes consecutives. Els ratolins de control van rebre la quantitat adequada de PBS. Els nostres procediments experimentals amb animals es van dur a terme seguint els protocols avaluats i aprovats pel Comitè d'Ètica i Ús d'Animals de l'Escola de Farmàcia de la Universitat de Fudan. La tinció immunohistoquímica, la mesura del potencial de membrana mitocondrial, la tinció histològica i d'espècies reactives d'oxigen (ROS) de seccions de ronyó es van realitzar tal com es va descriure anteriorment.22–24.

2.5 PCR en temps real

Vam obtenir l'ARN total mitjançant reactius TRNzol (Beyotime Biotechnology, Xina) de mostres de cèl·lules o teixits i després les vam transcriure a cDNA mitjançant un kit de prova de transcriptasa inversa MMLV (Beyotime Biotechnology). El nivell d'expressió de l'ARNm es va analitzar mitjançant els instruments de PCR en temps real (BioRad) mitjançant el kit d'assaig qPCR-mix verd SYBR (Beyotime Biotechnology) i estandarditzat a GAPDH.

2.6 Citometria de flux

Les cèl·lules renals es van cultivar i es van tractar tal com es descriu anteriorment. La tinció de MitoSOX (ROS mitocondrial), MitoTracker Green (massa mitocondrial total) i MitoTracker Red (potencial de membrana mitocondrial) es va dur a terme segons les instruccions del fabricant i investigacions prèvies.22–24 Hem obtingut els resultats mitjançant el citòmetre de flux Beckman Coulter i el Programari CytExpert (BD Biosciences).

2.7 Absorció de glucosa

Es van mesurar les concentracions de glucosa en el sobrenedant de cultiu cel·lular mitjançant una prova d'assaig de captació de glucosa segons el protocol del fabricant i investigacions prèvies (GAHK20; Sigma). La normalització dels resultats es va dur a terme segons el nombre de cèl·lules.

2.8 Derrocament de gens

Hem utilitzat el petit ARN interferent (siRNA; RiboBio, Xina) per enderrocar els gens específics. Primer, la lipofectamina RNAiMAX i siRNA (100 pmol) es van barrejar suaument mitjançant pipetes i es van incubar a 37 ◦ C durant 0,5 h. A continuació, vam canviar el medi de cultiu cel·lular estàndard a un còctel de transfecció i vam incubar les cèl·lules durant 6 hores per a la transfecció del gen siRNA. A continuació, vam canviar el còctel de transfecció a un medi de cultiu cel·lular fresc. Després de 48 h, les cèl·lules renals es van incubar amb IL-22 per a estudis posteriors.

Cistanche pot tractarlesió renal

2.9 Western blot

Hem extret proteïnes totals de cèl·lules o teixits mitjançant el tampó de lisi RIPA (Beyotime Biotechnology, Xina). A continuació, vam recollir els lisats per centrifugació a 4 ◦ C a 12 000 rpm durant 10 min. Posteriorment, els lisats es van escalfar amb els tampons de mostra a 100 ◦ C durant 15 min, es van sotmetre a electroforesi en gel de dodecilsulfat de sodi-poliacrilamida (SDS-PAGE) i es van electrotransferir a la membrana de difluorur de polivinilidè (PVDF) (Millipore, Alemanya). A continuació, es van bloquejar les membranes amb un 5% d'albúmina sèrica bovina (BSA) durant 2 hores i es van co-incubar amb anticossos primaris a 4 ◦ C durant la nit. Després de rentar tres vegades, les membranes es van incubar amb anticossos secundaris conjugats amb peroxidasa de rave picant (CST, EUA). Les taques de proteïnes es van visualitzar mitjançant el sistema d'imatge de quimioluminescència millorat.

2.10 Immunofluorescència

Les cèl·lules renals es van fixar en un 3% -4% de paraformaldehid i es van permeabilitzar amb 0,1% Tritó X-100. A continuació, vam bloquejar les cèl·lules amb un 5 per cent de BSA durant 2 h. Les cèl·lules es van incubar durant la nit amb l'anticòs anti-GLUT1 a 4 ◦ C, es van rentar quatre vegades i després es van tacar amb PKH26. Posteriorment, les cèl·lules renals es van tenyir amb Hoechst 33342 i es van muntar en portaobjectes. Les dades es van obtenir mitjançant microscòpia confocal.

2.11 ARN-seq i bioinformàtica

Les mostres de TEC (2 × 107) es van lisar i es va extreure l'ARN total mitjançant el mini kit RNeasy, segons els protocols del fabricant (Beyotime, Xangai, Xina). L'ARN-seq eucariota es va realitzar utilitzant la tecnologia de seqüenciació de nova generació (NGS) al sistema de seqüenciació Illumina HiSeq, proporcionant una longitud de lectura de 50-base. L'alineació de les lectures de seqüenciació es va fer utilitzant TopHat v2.0.12 contra l'assemblea UCSC mm10. L'anàlisi de l'expressió diferencial es va calcular mitjançant el paquet DESeq2 (http://www.bioconductor.org/packages/release/bioc/html/DESeq2.html) i les anàlisis de significació estadística es van realitzar a R (v3.1.1; http://www. .r-project.org/). La sobrerepresentació de la via es va realitzar mitjançant el paquet R ReactomePA.

2.12 Estadístiques

Les dades es van expressar com a mitjana ± desviació estàndard (SD) i es van mostrar mitjançant GraphPad Prism 5.0. Per als resultats que comparaven dos o més grups, les diferències es van calcular mitjançant la prova t de Student o l'anàlisi de variància unidireccional (ANOVA): ***p <0.00 1,="" **p=""><0,01 i="" *p=""><>

Cistanche pot tractarlesió renal

3 RESULTATS

3.1 IL-22 preserva el metabolisme cel·lular en els TEC

Com que s'havia suggerit que els mitocondris eren orgànuls importants que integraven el metabolisme cel·lular i els processos apoptòtics, vam avaluar la funció mitocondrial en TECs estimulats ambronyólesiófactors i tractats amb IL-22.25 Com es mostra a la figura 1A-D, la taxa de consum d'oxigen basal mitocondrial (OCR), la capacitat respiratòria màxima (MRC) i la respiració es van bloquejar substancialment als TEC en situacions d'estrès. En particular, aquestes anomalies es van prevenir en gran mesura amb el tractament amb IL- 22. La glicòlisi en TEC danyats, evidenciada per la taxa d'acidificació extracel·lular (ECAR), també es va limitar notablement, en comparació amb IL -22 més els TEC desafiats per estímuls (figura 1B i E). També vam demostrar que la fosforilació oxidativa compromesa (OXPHOS) i la glucòlisi en TEC danyats no eren els efectes secundaris de l'apoptosi mitjançant el cotractament d'un inhibidor de la pan-caspasa (figura S1). I els efectes reparadors mediats per IL-22-en els defectes metabòlics eren específics per als TEC renals (figura S2). A més, IL-22 va promoure les cèl·lules HK2 OXPHOS i la glucòlisi en absència d'estímuls, cosa que indica que els efectes d'IL{-22 sobre les vies metabòliques no eren específics per als TEC danyats (figura S3). A més, els nostres resultats també van indicar que IL-22 va promoure l'expressió i la translocació d'IL-22R1. Mentrestant, la fosforilació d'STAT3 i els efectes de reprogramació metabòlica de IL-22 es van desarmar completament per la derrota de IL{-22R1 (figura S4). Aquestes troballes van suggerir que IL-22 va restaurar l'estat metabòlic dels TEC mitjançant l'activació directa de IL-22R1. Com que diverses proves havien suggerit que Glut1 tenia un paper principal en la glucòlisi i l'homeòstasi de la glucosa,26, per tant, vam preguntar si IL-22 afectava la translocació o l'expressió de Glut1. Com s'esperava, vam demostrar que IL-22 no només va promoure el Glut1 translocat a la superfície de la membrana cel·lular (PKH26) i l'expressió de Glut1, sinó que també va millorar la captació de glucosa (figura 1F i G). En general, aquestes observacions van indicar que IL-22 podria millorar OXPHOS i la glucòlisi en els TEC lesionats.

FIGURA 1 IL-22 conserva l'aptitud mitocondrial i la glucòlisi en els TEC. (A i B) Utilitzem l'analitzador de flux extracel·lular Seahorse XF96 per provar els canvis en la taxa d'àcid extracel·lular (ECAR) i la taxa de consum d'oxigen (OCR) dels TEC. OCR i ECAR en TECs incubats amb 50 mM de glucosa, o 5 µg/mL de cisplatí, o 0,2 mM d'àcid palmític, o 4 µM de DOX en presència o absència d'IL{{8} }. (C) Capacitat respiratòria màxima (MRC) dels TEC avaluades mitjançant canvis en temps real en OCR. (D i E) Corbes a l'OCR i ECAR dels TEC després d'incubar-los amb oligomicina, FCCP, glucosa, rotenona i {{10}}DG. (F) Localització i expressió de la membrana nuclear (blau), Glut1 (verd) i plasmàtica (vermell) en TEC. (G) Consum de glucosa en TEC després del tractament amb IL-22 durant 24 h. n=3; barres d'escala, 20 µm; Prova t de l'estudiant (no aparellat); ***p <0,001, **p=""><0,01, *p=""><>

3.2 IL-22 millora l'acumulació de mitocondris disfuncionals en TEC mitjançant l'activació de la mitofagia

formació de LC3 puncta en TEC després de l'exposició a estímuls (figura 2F). A continuació, vam esgotar la mitofagia per avaluar la seva funció en el metabolisme de les cèl·lules dels túbuls mitjançant siRNA-ATG5 (figura S6). Les nostres dades van suggerir que l'esgotament de la mitofàgia en els TEC va inhibir significativament els efectes protectors de la IL-22 en la conservació de l'aptitud mitocondrial (figura 2E), cosa que indica que la IL-22 prevé la disfunció mitocondrial mitjançant l'activació de la mitofagia.

FIGURA 2 IL-22 inhibeix la disfunció mitocondrial i l'acumulació de ROS mitocondrial mitjançant la inducció de la mitofàgia. (A) La massa mitocondrial es va tacar i es va avaluar mitjançant MitoTracker Green i citometria de flux. El ROS mitocondrial es va avaluar en TEC tenyits amb MitoSOX (B). El potencial de la membrana mitocondrial es va avaluar en TEC tenyits amb MitoTracker Green i MitoTracker Red (C); L'acumulació de ROS mitocondrial va ser avaluada per MitoTracker Green i MitoSOX (D). (E) Els resultats de la imatge confocal van suggerir la producció de ROS mitocondrial etiquetada amb MitoSOX. (F) Les imatges microscòpiques representatives van indicar la formació de LC3-GFP puntejat en presència o absència de IL-22 TECs estimulats com (A) durant 24 h. (E) Es va avaluar l'OCR en presència o absència d'IL-22 i siRNA-ATG5 durant 24 h. n=3; Prova t de l'estudiant (no aparellat); ***p < 0.001,="" **p="">< 0,01,="" *p=""><>

3.3 IL-22 manté la integritat mitocondrial dels TEC mitjançant l'activació de la senyalització AMPK/AKT

La senyalització AMPK, com a centre de senyalització clau que uneix la supervivència i el metabolisme cel·lular, el metabolisme controlat de la glucosa, la síntesi de lípids i la funció mitocondrial.28 Segons l'efecte protector renal de la interleucina-22 mediat per la reprogramació metabòlica de les TEC, vam avaluar si IL-22 va regular la integritat mitocondrial mitjançant l'activació de la transducció de senyalització AMPK. Vam trobar que IL-22 va augmentar l'activitat de la transducció de senyalització STAT3/AMPK/AKT a les TEC lesionades, evidenciada per la fosforilació de STAT3, AMPK i AKT (figura 3A). A més, aquests processos es van bloquejar en cèl·lules tubulars sense STAT3, cosa que va demostrar que IL -22 regulava la senyalització AMPK / AKT mitjançant STAT3 (figura 3B i C; figura S7). Vam incubar encara més els TEC amb el compost C i LY294002 per inhibir directament les transduccions de senyalització AMPK / AKT i després avaluar les seves funcions mitocondrials i els estats del metabolisme. Els resultats van revelar que el cotractament amb aquests inhibidors de senyalització va prevenir significativament l'OXPHOS millorat i el flux glicolític induït pel tractament amb IL-22 (figura 3D-I), cosa que va suggerir que IL{-22 va promoure el metabolisme dels TEC mitjançant l'activació de l'AMPK. Via de senyalització /AKT.

FIGURA 3 La inducció de la senyalització AMPK/AKT per IL-22 manté l'aptitud mitocondrial. Els TEC es van estimular 50 mM de glucosa, o 5 µg/mL de cisplatí, o 0,2 mM d'àcid palmític, o 4 µM de DOX en presència o absència d'IL-22, compost C , o LY294002 per a les hores indicades. (A i B) L'activació de la via de senyalització AMPK/AKT en els TEC o els TEC STAT 3-WT i STAT3–KD es va avaluar mitjançant l'anàlisi de western blot. (C i D) S'han analitzat els canvis en l'OCR i l'ECAR dels TEC. (E) L'activació de la via de senyalització AMPK / AKT en els TEC es va avaluar mitjançant l'anàlisi de western blot. (F-I) Els canvis en l'OCR i l'ECAR dels TEC es van mesurar en els TEC enfront dels TEC tractats amb el compost C i LY294002. Prova t de l'estudiant (no aparellat); n=3; ***p <0,001, **p=""><0,01, *p=""><>

3.4 IL-22 preserva el metabolisme cel·lular i la integritat mitocondrial dels TEC mitjançant la inducció de PFKFB3

A més, per explorar com es va millorar l'aptitud i el metabolisme mitocondrials dels TEC, vam utilitzar l'anàlisi de seqüenciació d'ARN (RNA-seq) per avaluar l'expressió gènica després de la lesió per estímuls i el tractament amb IL-22. Hem demostrat que diversos gens es van canviar significativament als TEC després de la incubació de IL-22 (figura 4A). Utilitzant les bases de dades disponibles, es va realitzar l'anàlisi d'enriquiment del conjunt de gens d'aquests gens regulats, la qual cosa va suggerir un enriquiment notable dels gens a la via de senyalització AMPK i la via de senyalització d'objectius MYC (figura S8). En particular, PFKFB3 va ser induït significativament per IL-22 entre els gens durantronyólesióestimulació dels factors (figura 4A). Aquestes observacions també es van indicar mitjançant imatges confocals, Q-PCR i western blot. L'alta expressió de PFKFB3 depenia de la senyalització AMPK / AKT (figura 4B i C; figura S9).

Estudis anteriors havien suggerit que PFKFB3 es podia regular mitjançant nombroses transduccions de senyalització per accelerar la regeneració i reparació epitelial després d'una lesió.29,30 Així, vam especular que IL-22 va induir PFKFB3 per preservar el metabolisme cel·lular dels TEC i mantenir la seva aptitud mitocondrial. . Vam observar que la inhibició de la senyalització AMPK / AKT va reduir l'expressió de PFKFB3 (figura 4D). Per tant, vam silenciar PFKFB3 per estudiar més a fons les seves funcions als TEC després de la incubació IL-22. Els nostres resultats van indicar que el PFKFB3 silenciat va alleujar els efectes de reprogramació metabòlica de IL-22 en la restauració de l'ECAR i l'OCR (figura 4E i F) i va prevenir la captació de glucosa així com els mitocondris disfuncionals (figura 4G i H). A més, vam demostrar a més que els efectes de reprogramació metabòlica de l'IL-22 van ser completament desarmats per la derrota d'STAT3-, mentre que la sobreexpressió de PFKFB3 podria ser capaç de rescatar aquests fenotips, cosa que suggereix que IL-22 va restaurar el estat metabòlic de les cèl·lules epitelials renals danyades mitjançant la senyalització STAT3-AMPK/AKT-PFKFB3 dirigida directament (figura S10). En conjunt, aquestes troballes van indicar que l'activació de PFKFB3 va tenir un paper important en l'aptitud mitocondrial i l'eliminació disfuncional dels mitocondris després deronyólesió.

FIGURA 4 IL-22 manté la integritat mitocondrial i el metabolisme cel·lular dels TEC mitjançant la inducció de PFKFB3. (A) Gràfic de volcà per a l'expressió de gens en TEC estimulats amb glucosa, o cisplatí, o àcid palmític o CCl4 en presència o absència d'IL-22 durant 24 h. (B) Les dades microscòpiques confocals van demostrar la sobreexpressió de PFKFB3 en TEC després del tractament amb IL-22, que va requerir l'activació de la senyalització AMPK/AKT. (C) Els resultats de la PCR en temps real indiquen que IL-22 va induir la sobreexpressió de PFKFB3 en els TEC, que es podria inhibir pel bloc de senyalització AMPK/AKT. (D) L'activació de la via de senyalització AMPK/AKT/PFKFB3 en TEC després del tractament amb el compost C i LY294002. (E i F) ECAR i OCR en TEC en presència o absència d'IL-22, o si-PFKFB3 durant 24 h. (G) Consum de glucosa en TEC després del tractament amb IL-22 o si-PFKFB3 durant 24 h. (H) La disfunció mitocondrial es va avaluar en TEC tenyits amb MitoTracker Red i MitoTracker Green. Prova t de l'estudiant (no aparellat); n=3; ***p < 0,001,="" **p=""><0,01, *p=""><>

3.5 IL-22 alleuja la lesió renal en AKI induïda per cisplatí mitjançant la supressió de l'acumulació de ROS renal i la disfunció mitocondrial

Per provar la nostra hipòtesi que IL-22 regulava els perfils metabòlics renals per suprimir la lesió del túbul renal in vivo, inicialment vam avaluar les funcions renals en ratolins tractats amb IL-22-que havien estat administrats amb cisplatí (figura 5A). Quatre dies després de la injecció de cisplatí, IL-22 no només va reduir substancialment el dany cel·lular tubular i l'hemorràgia; la seva disfunció renal també s'havia atenuat significativament, que es van avaluar mitjançant els nivells sèrics de nitrogen ureic en sang (BUN) i creatinina (Cr) (figura 5B-D). A més, vam suggerir que s'ha prevenit IL-22ronyólesiómitjançant la millora de la regeneració renal i l'activació de la senyalització AMPK / AKT i PFKFB3 (figura 5E i F; figura S11). A continuació, hem emprat MitoSOX (colorant ROS específic per a mitocondris) i JC-1 (colorant dependent del potencial de la membrana mitocondrial) per avaluar la disfunció mitocondrial implicada en el metabolisme cel·lular i l'apoptosi. A les seccions renals de ratolins que havien estat tractats amb cisplatí, hi havia acumulacions comparables de ROS. Cal destacar que quatre dies després del tractament amb IL-22, els nivells de ROS es van reduir notablement als ronyons lesionats en comparació amb els ROS dels ratolins després del tractament amb PBS (figura 5G). En conjunt, aquestes observacions van oferir proves que l'IL-22 va tenir un paper protector en l'AKI induïda per cisplatí mitjançant el control de l'aptitud mitocondrial.

FIGURA 5 IL-22 alleuja el dany renal en l'IRA induïda per cisplatí mitjançant la inhibició de l'acumulació de ROS renal i la disfunció dels mitocondris. (A) Diagrama esquemàtic dels protocols experimentals per avaluar els efectes protectors de la IL-22 en dany renal induït per cisplatí (20 mg/kg). PBS com a grup de control del vehicle i N-acetil-l-cisteïna (NAC, 150 mg/kg) com a grup de control positiu. (B i C) Es van avaluar els nivells de BUN sèric, els nivells de Cr sèric, el pes dels ronyons i el pes corporal. Es van presentar imatges representatives de HE (D), tinció de Ki-67 (E), MitoSOX (G) i JC{{{10}} (G) de les seccions de ronyó. (F) La comparació de l'activació de STAT3/AMPK/AKT/PFKFB3 en extractes de ronyó dels ratolins tractats amb IL-22-es va avaluar mitjançant western blot. Prova t de l'estudiant (no aparellat); n=3; ***p <0,001, **p=""><0,01, *p=""><>

3.6 IL-22 millora la lesió renal induïda per la diabetis mitjançant la inhibició de la disfunció mitocondrial mitjançant l'activació de la senyalització AMPK/AKT i PFKFB3

Nosaltres i altres havíem demostrat que l'IL-22 podia exercir una potència protectora en la nefropatia diabètica (DN), que era la causa principal de l'ESTD.31–33. Per estudiar més els mecanismes subjacents, vam alimentar ratolins db/db amb alts dietes amb greixos (HFD) i després les vam tractar amb IL-22 (2,5 mg/kg, IP) durant 8 setmanes (figura 6A). Quan els ratolins només es van alimentar amb HFD, vam trobar fibrosi tubular i dilatació renal, a més d'atròfia. En canvi, quan els ratolins van ser tractats amb IL-22, la fibrosi renal i la histopatologia es van millorar significativament, així com les funcions renals. Les funcions renals millorades també es van demostrar per la disminució dels nivells de Cr sèric, BUN i nivells d'albúmina urinària total / 24 h (UAE) (figura 6B-E). Per estudiar si aquestes activitats estaven associades amb els mitocondris, es va avaluar la funció mitocondrial implicada en el metabolisme cel·lular i l'apoptosi. Els resultats van indicar que l'augment dels nivells de ROS mitocondrials i els mitocondris disfuncionals acumulats es van alleujar significativament amb el tractament amb IL-22 (figura 6F i G). Per estudiar més si les funcions protectores d'IL-22 al ronyó estaven mediades per PFKFB3, vam injectar ratolins amb adenovirus shRNA PFKFB3 per enderrocar PFKFB3. Les nostres dades van indicar que els efectes beneficiosos de la IL-22 sobre la lesió renal induïda per HFD, la necrosi, l'esteatosi, la disfunció mitocondrial i l'acumulació de ROS i l'activació de les vies de senyalització relacionades es van bloquejar significativament per la derrota de PFKFB3 (Figura 6B-G) . També es va observar l'augment de l'expressió de la senyalització AMPK/AKT després del tractament amb IL -22 (figura 6H). Juntament amb l'alleujament de la disfunció renal, les expressions de PFKFB3 i enzims importants en el metabolisme cel·lular també es van millorar en els ronyons de ratolins tractats amb IL-22- (figura 6H i I). A més, l'anàlisi histològic dels òrgans principals va indicar que no hi ha danys morfològics després de la injecció d'IL-22, cosa que suggereix que l'IL-22 podria ser un antídot segur sense efectes secundaris significatius ni reaccions tòxiques per aronyólesiótrastorns (figura 12S). En general, les nostres dades van suggerir que IL- 22 va alleujar el dany renal mitjançant l'activació de la transducció de senyalització AMPK/AKT, la inhibició de l'acumulació de ROS i la regulació de la funció mitocondrial mitjançant PFKFB3.

FIGURA 6 IL-22 alleuja el dany renal induït per la diabetis mitjançant la senyalització AMPK/AKT i la inhibició de mitocondris disfuncionals mitjançant l'activació de PFKFB3. (A) Diagrama esquemàtic dels protocols experimentals per avaluar els efectes protectors de la IL-22 en el dany renal induït per la diabetis. Db/m com a grup de control del vehicle. (B-D) Es van avaluar els nivells de BUN sèric, els nivells de Cr sèric i els Emirats Àrabs Units. Es van presentar imatges representatives HE (E), MitoSOX (F) i JC -1 (G) de les seccions renals. (H i I) La comparació de l'activació de STAT3/AMPK/AKT/PFKFB3 en extractes de ronyó de ratolins tractats amb IL-22-es va avaluar mitjançant western blot. Prova t de l'estudiant (no aparellat); n=3; ***p < 0.001,="" **p="">< 0,01,="" *p=""><>

4 DISCUSSIÓ

IL-22 és secretada per cèl·lules immunitàries, com ara les cèl·lules NK, els neutròfils, les cèl·lules limfoides innates (ILC) i les cèl·lules T, però no afecta directament aquestes cèl·lules. Regula principalment les funcions de les cèl·lules epitelials a causa de l'expressió restringida d'IL-22R1 a les cèl·lules epitelials, incloses les TEC.15,34 Estudis anteriors havien suggerit que IL-22 pot protegir contra lesions epitelials renals i accelerar la regeneració tubular. mitjançant la inhibició de l'inflamsoma NLRP3 i l'activació de la senyalització STAT3 i AKT.16,31 No obstant això, els mecanismes subjacents d'aquesta protecció encara no estan per dilucidar. Per determinar encara més la base molecular de la funció de IL- 22 enronyólesió, primer investiguem si IL-22 pot alleujar la disfunció de les cèl·lules renals i l'apoptosi posterior mitjançant la regulació dels seus estats metabòlics. A més, estudiem dos models deronyólesiómalalties (AKI i DN) amb administració d'IL-22 i comparen les observacions amb les dels grups control. Indiquem que IL-22 corregeix la reprogramació metabòlica per mantenir la integritat mitocondrial, disminueix l'acumulació de ROS mitocondrial a les TEC lesionades i alleuja el dany renal progressiu i la necrosi. A més, els nostres resultats suggereixen que IL- 22 pot activar vies de senyalització associades a AMPK/AKT en TEC i ronyons, mediadors importants de la cicatrització de ferides epitelials i la supervivència cel·lular, per millorar la disfunció mitocondrial i el deteriorament dels perfils metabòlics i obrir una nova camp per al mecanisme protector renal mediat per IL-22. En general, els nostres resultats indiquen que els efectes protectors renals de la IL-22 estan mediats per processos de reprogramació metabòlica.

El paper crític d'OXPHOS i la glucòlisi en la protecció renal s'ha revelat en estudis anteriors, on l'equilibri de la utilització del combustible mitjançant la S-nitrosilació inhibidora de la piruvat quinasa M2 (PKM2) protegeix contraronyólesió.19 Els nostres resultats, que suggereixen la promoció d'OXPHOS i la glucòlisi per IL-22 mitjançant l'augment de l'expressió de reguladors metabòlics i la captació de glucosa, demostren que IL-22 reverteix els estats metabòlics deteriorats associats ambronyólesió. Aquestes observacions són coherents amb les funcions protectores renals de l'irisina recombinant i també en línia amb les troballes dels hepatòcits, on es necessiten tant OXPHOS com la glucòlisi per a les funcions cel·lulars, però si aquestes s'inhibeixen, les cèl·lules dels túbuls primaris i els hepatòcits es tornen disfuncionals.35, 36

La disfunció mitocondrial ha sorgit com la base molecular clau que integra els perfils metabòlics i la mort cel·lular. Aquí, il·lustrem que després de l'estimulació dels factors de lesió, el tractament amb TEC amb IL-22 va millorar l'acumulació de ROS mitocondrials i mitocondris disfuncionals en comparació amb la disminució de la integritat i la funció mitocondrials en els grups de control. És important destacar que les vies de senyalització AMPK, sensors d'energia crítics, modulen els processos metabòlics per mantenir l'homeòstasi cel·lular i prevenir el dany cel·lular o tissular.37–39 En l'estudi actual, les nostres observacions indiquen que IL-22 preserva la integritat i la funció mitocondrial mitjançant l'activació de la Senyalització AMPK/AKT per demostrar que IL-22 prevé la disfunció mitocondrial en un mètode directe, que és vital per mantenir la capacitat respiratòria dels TEC. A més, demostrem que la senyalització IL-22 mitjançant STAT3 té efectes directes en la preservació de l'aptitud mitocondrial, ja que s'han investigat anteriorment que la fosforilació induïda d'STAT3 és fonamental per preservar la integritat mitocondrial.40,41.

Diversos tipus de literatura han indicat anteriorment que PFKFB3 juga el paper d'un modulador central en el metabolisme cel·lular.29–30,42 Aquí, primer demostrem que IL-22 promou l'activació de PFKFB3 mitjançant la senyalització AMPK/AKT en els TEC, cosa que suggereix IL{ {6}} regula els estats metabòlics mitjançant la implicació del control de PFKFB3. A més, estudis anteriors indiquen a més que PFKFB3 és important per controlar l'OXPHOS exagerat i la glucòlisi en moltes cèl·lules o teixits.42,43 D'acord amb aquests estudis, les nostres observacions també indiquen la promoció d'OXPHOS i la glucòlisi a la IL-22- TEC tractats mitjançant l'activació de PFKFB3. Entre els nombrosos moduladors aigües avall d'IL-22 que s'han investigat, les nostres dades il·lustren que PFKFB3 es regula significativament després del tractament amb IL-22 durant els danys de TEC i que l'eix STAT3–AMPK/AKT PFKFB3 és vital per a la preservació. de la integritat mitocondrial durantronyólesió(Figura 7). Queda per investigar si IL-22 també regula altres reguladors metabòlics i processos relacionats amb la lesió renal mitjançant l'activació de la via de senyalització STAT3–AMPK/AKT-PFKFB3.

FIGURA 7 Els nostres resultats il·lustren un paper important de la IL-22 en el control del metabolisme de les cèl·lules renals per tractar el dany renal mitjançant l'activació de l'eix STAT3-AMPK/AKT-PFKFB3. Aquests resultats suggereixen que les oportunitats terapèutiques de la IL-22 i l'orientació a la senyalització metabòlica associada podrien ser directament favorables per al tractament o la prevenció de nombrosos danys renals.

5 CONCLUSIONS

En conclusió, vam demostrar el potencial terapèutic i els mecanismes subjacents de la IL-22 en el dany renal. IL-22 va regular el metabolisme de les cèl·lules renals mitjançant la reprogramació metabòlica per preservar la integritat mitocondrial. La inhibició dels seus reguladors (és a dir, AMPK, Akt i PFKFB3) podria provocar perfils metabòlics anormals i pèrdua de l'aptitud mitocondrial, tal com s'indica en els TEC amb tractament espontani-22, que van augmentar les mitocondris disfuncionals i l'acumulació de ROS mitocondrials. El més important és que el dany renal per disfunció mitocondrial i l'acumulació de ROS en models de ratolins es va alleujar substancialment amb el tractament amb IL-22 mitjançant l'activació de la senyalització STAT{3-AMPK-AKT-PFKFB3. Així, el nostre estudi va indicar que l'orientació de la senyalització metabòlica associada podria ser directament favorable per a nombroses malalties del dany renal i la IL-22 és un agent terapèutic potencial per prevenir i tractar aquestes malalties.

Els productes de Cistanche poden tractarlesió renal

De: 'IL-22-reprogramació metabòlica renal mediada per PFKFB3 per tractarronyólesió'perWei Chen, et al

---Clin. Trad. Med. 2021;11:e324.

REFERÈNCIES

1. Mehta RL, Burdmann EA, Cerdá J, et al. Reconeixement i gestió dels agutsronyólesióa la Societat Internacional de Nefrologia 0by25 Global Snapshot: un estudi transversal multinacional. Lanceta. 2016;387:2017-2025.

2. Lameire NH, Bagga A, Cruz D, et al. Agutronyólesió: una preocupació global creixent. Lanceta. 2013;382:170-179.

3. Mehta RL, Cerdá J, Burdmann EA, et al. Iniciativa 0by25 per a aguts de nefrologia de la Societat Internacionalronyólesió(zero morts evitables el 2025): un cas de drets humans per a la nefrologia.Lancet. 2015;385:2616-2643.

4. Levey AS, James MT. Agutronyólesió. Ann Intern Med.2017;167:ITC66-ITC80.

5. Jansen MPB, Florquin S, Roelofs JJTH. El paper de les plaquetes en els casos agutsronyólesió. Nat Rev Nephrol. 2018;14:457-471.

6. Agarwal A, Dong Z, Harris R, et al. Mecanismes cel·lulars i moleculars de l'IRA. J Am Soc Nephrol. 2016;27:1288-1299.

7. Linkermann A, Chen GC, Dong G, Kunzendorf U, KrautwaldS, Dong Z. Mort cel·lular regulada en AKI. J Am Soc Nephrol.2014;25:2689-2701.

8. Ferenbach DA, Bonventre JV. Mecanismes de reparació inadaptada després d'AKI que condueixen a un envelliment renal accelerat i CKD.Nat Rev Nephrol. 2015;11:264-276.

9. Chawla LS, Eggers PW, Star RA, Kimmel PL. Agutronyólesiói la malaltia renal crònica com a síndromes interconnectades. N Engl J Med. 2014;371:58-66.

10. He L, Wei QQ, Liu J, et al. AKI a CKD: augment de lesions, reparació suprimida i mecanismes subjacents. Kidney Int.2017;92:1071-1083.

11. Forbester JL, Lees EA, Goulding D, et al. La interleucina-22 promou la fusió fagolisosomal per induir la protecció contra la salmonel·la enterica Typhimurium a les cèl·lules epitelials humanes.Proc Natl Acad Sci USA. 2018;115:10118-10123.

12. Geng H, Bu HF, Liu F, et al. En els teixits intestinals inflamats i les cèl·lules epitelials, la senyalització de la interleucina 22 augmenta l'expressió de l'ARN no codificant llarg de H19, que afavoreix la regeneració de la mucosa. Gastroenterologia. 2018;155:144-155.

13. Aden K, Tran F, Ito G, et al. ATG16L1 orquestra la senyalització d'interleucina-22 a l'epiteli intestinal mitjançant cGAS-STING. J ExpMed. 2018;215:2868-2886.

14. Huber SN, Gagliani LA, Zenewicz FJ, et al. IL-22BP està regulada per l'inflamsoma i modula la tumorigènesi a l'intestí. Naturalesa. 2012;491:259-263.

15. Lindemans CA, Calafiore M, Mertelsmann AM, et al. La interleucina-22 promou la regeneració de l'epítet mediada per cèl·lules mare intestinals. Naturalesa. 2015;528:560-564.

16. Xu MJ, Feng D, Wang H, Guan Y, Yan X, Gao B. IL-22 millora la lesió d'isquèmia-reperfusió renal dirigint-se a l'epiteli del túbul proximal. J Am Soc Nephrol. 2014;25:967-977.

17. Kulkarni OP, Hartter I, Mulay SR, et al. IL-22 induïda pel receptor semblant al peatge 4-accelera la regeneració renal. J Am Soc Nephrol. 2014;25:978-989.

18. Kang HM, Ahn SH, Choi P, et al. L'oxidació defectuosa dels àcids grassos a les cèl·lules epitelials tubulars renals té un paper clau en el desenvolupament de la fibrosi renal. Nat Med. 2015;21:37-46.

19. Zhou HL, Zhang R, Anand P, et al. La reprogramació metabòlica del sistema S-nitroso-CoA reductasa protegeix contraronyólesió. Naturalesa. 2019;565:96-100.

20. Dumesic PA, Egan DF, Gut P, ​​et al. Un uORF conservat evolutivament regula el PGC1 i el metabolisme oxidatiu en ratolins, mosques i tonyina vermella. Metab cel·lular. 30;2019:190-200.

21. Shyh-Chang N, Zhu H, Yvanka de Soysa T, et al. Lin28 millora la reparació dels teixits mitjançant la reprogramació del metabolisme cel·lular. Cèl·lula. 2013;155:778-792.

22. Chen W, Luan J, Wei G, et al. Expressió hepatocel·lular in vivo d'interleucina-22 utilitzant nanopartícules híbrides basades en la penetració com a potencials terapèutics contra l'hepatitis. Biomaterials. 2018;187:66- 80.

23. Chen W, Zhang X, Fan J, et al. La vinculació de la interleucina-22 a l'apolipoproteïna AI millora els ratolins de lesions hepàtiques induïdes per l'acetaminofè. Teranòstics. 2017;7:4135-4148.

24. Zai W, Chen W, Wu Z, et al. Lliurament del gen interleucina-22 dirigit al fetge mitjançant polimetformina i nanopartícules híbrides basades en la penetració per tractar la malaltia del fetge gras no alcohòlic. Interfícies ACS Appl Mater. 2019;11:4842-4857.

25. Khacho M, Harris R, Slack RS. Els mitocondris com a reguladors centrals del destí de les cèl·lules mare neuronals i de la funció cognitiva. Nat Rev Neurosci. 2019;20:34-48.

26. Ip WKE, Hoshi N, Shouval DS, Snapper S, Medzhitov R. Efecte antiinflamatori de IL-10 mediat per la reprogramació metabòlica dels macròfags. Ciència. 2017;356:513-519.

27. Saito Y, Chapple RH, Lin A, Kitano A, Nakada D. AMPK protegeix les cèl·lules iniciadores de la leucèmia en les leucèmies mieloides de l'estrès metabòlic a la medul·la òssia. Cèl·lula mare cel·lular. 2015;17:585- 596.

28. Mihaylova MM, Shaw RJ. La via de senyalització AMPK coordina el creixement cel·lular, l'autofàgia i el metabolisme. Nat Cell Biol. 2011;13:1016-1023.

29. Li FL, Liu JP, Bao RX, et al. L'acetilació acumula PFKFB3 al citoplasma per promoure la glucòlisi i protegeix les cèl·lules de l'apoptosi induïda pel cisplatí. Nat Commun. 2018;9:508.

30. De Bock K, Georgiadou M, Schoors S, et al. Paper de la glucòlisi impulsada per PFKFB3- en la germinació dels vasos. Cèl·lula. 2013;154:651-663.

31. Dudakov JA, Hanash AM, van den Brink MR. Interleucina-22: immunobiologia i patologia. Annu Rev Immunol. 2015;33:747- 785.

32. Wang S, Li Y, Fan J, et al. La interleucina-22 va millorar la lesió renal i la fibrosi en la nefropatia diabètica mitjançant la inhibició de l'activació de l'inflamsoma NLRP3. Mort cel·lular Dis. 2017;8:e2937.

33. Shen YL, Chen W, Han L, et al. L'anticossos VEGF-B i la proteïna de fusió d'interleucina-22 milloren la nefropatia diabètica mitjançant la inhibició de l'acumulació de lípids i les respostes inflamatòries. Acta Pharm Sin B. 2020. https://doi.org/10.1016/j. apsb.2020.07.002.

34. Ouyang W, O'Garra A. IL-10 citocines de la família IL-10 i IL-22: de la ciència bàsica a la traducció clínica. Immunitat. 2019;50:871- 891.

35. Xiang X, Feng D, Hwang S, et al. La interleucina-22 millora la insuficiència hepàtica aguda sobre la crònica mitjançant la reprogramació de vies de regeneració alterades en ratolins. J Hepatol. 2020;72:736-745.

36. Chen W, Zai W, Fan J, et al. La interleucina-22 impulsa una reprogramació adaptativa metabòlica per mantenir l'aptitud mitocondrial i tractar la lesió hepàtica. Teranòstics. 2020;10:5879-5894.

37. Peng H, Wang Q, Lou T, et al. La diafonia muscular-renyó mediada per miocina suprimeix la reprogramació metabòlica i la fibrosi en els ronyons danyats. Nat Commun. 2017;8:1493.

38. Saberi B, Ybanez MD, Johnson HS, Gaarde WA, Han D, Kaplowitz N. La proteïna quinasa c (PKC) participa en l'hepatotoxicitat de l'acetaminofè mitjançant vies de senyalització dependents i independents de la c-jun-n-terminal kinase (jnk). Hepatologia. 2014;59:1543-1554.

39. Mo R, Lai R, Lu J, et al. L'autofàgia millorada contribueix als efectes protectors de la IL-22 contra la lesió hepàtica induïda per l'acetaminofè. Teranòstics. 2018;8:4170-4180.

40. Wegrzyn J, Potla R, Chwae YJ, et al. Funció de Stat3 mitocondrial en la respiració cel·lular. Ciència. 2009;323:793-797.

41. Chen W, Hu Y, Ju D. Teràpia gènica per a trastorns neurodegeneratius: avenços, coneixements i perspectives. Acta Pharm Sin B. 2020;10:1347-1359.

42. Cao Y, Zhang X, Wang L, et al. La glucòlisi endotelial mediada per PFKFB3-favoreix la hipertensió pulmonar. Proc Natl Acad Sci USA. 2019;116:13394-13403.

43. Doménech E, Maestre C, Esteban-Martínez L, et al. AMPK i PFKFB3 medien la glucòlisi i la supervivència en resposta a la mitofagia durant l'aturada mitòtica. Nat Cell Biol. 2015;17:1304- 1316.