Immunitat i envelliment innats específics del sexe en tortugues d'aigua dolça de llarga vida (Kinosternon Favescens: Kinosternidae)
Oct 12, 2023
Resum
Fons
La progressiva desregulació del sistema immunitari amb l'edat, anomenada immunosenescència, ha estat ben estudiada en sistemes de mamífers, però els estudis sobre la funció immune en poblacions de llarga vida, salvatges i no mamífers són escassos. En aquest estudi, aprofitem un estudi de recaptura de 38-anys per quantificar les relacions entre edat, sexe, supervivència, producció reproductiva i el sistema immunitari innat en un rèptil de llarga vida, tortugues de fang groc (Kinosternon favescens;Testudines; Kinosternidae).
Beneficis del suplement de cistanche: augmenta la immunitat
Mètodes
Hem estimat les taxes de supervivència i mortalitat específica per edat per sexe a partir de dades de marcatge-recaptura de 1530 femelles adultes i 860 mascles adults durant 38 anys de captures. Hem analitzat la competència bactericida (BC) i dues respostes immunes a glòbuls vermells estrangers: hemaglutinació natural mediada per anticossos (NAbs) i capacitat d'hemòlisi mediada pel complement (Lys) en 200 adults (102 dones; 98 homes) que oscil·laven entre De 7 a 58 anys capturats el maig de 2018 durant la seva aparició de la brumació, i per als quals es disposava de dades de producció reproductiva i de marca-recaptura a llarg termini.
Resultats
Vam trobar que les dones són més petites i viuen més temps que els homes en aquesta població, però la taxa d'acceleració de la mortalitat durant l'edat adulta és la mateixa per als dos sexes. En canvi, els homes van mostrar una immunitat innata més alta que les dones per a les tres variables immunes que vam mesurar. Totes les respostes immunitàries també van variar inversament amb l'edat, cosa que indica immunosenescència. Per a les femelles que es van reproduir en l'època reproductiva anterior, la massa d'ous (i, per tant, la massa total de la posta) va augmentar amb l'edat. A més de la immunosenescència de competència bactericida, les femelles que van produir postes més petites també tenien una competència bactericida més baixa.
Conclusions
Contràriament al patró general de vertebrats de respostes immunitàries més baixes en els mascles que en les femelles (possiblement reflectint els efectes supressors dels andrògens), hem trobat nivells més alts de les tres variables immunes en els mascles. A més, al contrari del treball anterior que no va trobar cap evidència d'immunosenescència en tortugues pintades o tortugues lliscants d'orelles vermelles, vam trobar una disminució de la competència bactericida, la capacitat de lisi i els anticossos naturals amb l'edat en les tortugues de fang groc.
Paraules clau
Funció immune innata, Rèptil, Senescència, Sexe específic, Envelliment
Beneficis del suplement de cistanche: augmenta la immunitat
Fons
L'envelliment en molts sistemes de vertebrats es caracteritza per la senescència de l'organisme: la disminució de l'eficiència i el rendiment dels processos fisiològics i cel·lulars [1] condueix a una disminució de la supervivència i la fertilitat específiques de l'edat amb l'edat [2]. Els estudis sobre l'envelliment en poblacions salvatges de vertebrats sovint s'han centrat a quantificar els canvis relacionats amb l'edat en la fecunditat i la mortalitat [3], però amb menys freqüència en els mecanismes fisiològics que poden contribuir a aquest envelliment demogràfic (p. ex., [4–6]). Un d'aquests mecanismes fisiològics candidats és la funció immune, que té un paper crític en la supervivència. S'ha demostrat que la funció immune reduïda afecta negativament la supervivència i la reproducció [6–8]. La progressiva desregulació del sistema immunitari amb l'edat, anomenada immunosenescència, ha estat ben estudiada en humans tant per a les immunitats innates (la desregulació de les quals amb l'edat pot provocar una inflamació crònica [9]) com per a la immunitat adquirida, on els canvis més ben estudiats són. un augment de les cèl·lules T de memòria i una disminució de les cèl·lules T ingènues amb l'edat avançada (però també aquí, la immunosenescència continua sent enigmàtica [10]). Tanmateix, els canvis específics de l'edat en el sistema immunitari de poblacions de llarga vida, salvatges i no mamífers no estan ben descrits a la literatura, i els estudis centrats en la immunosenescència dels rèptils són fins i tot rars (revisats a [8]). La senescència de l'organisme, que dóna lloc a la senescència demogràfica a les poblacions, va evolucionar en estat salvatge. Així, els estudis sobre poblacions naturals estan ben posicionats per revelar processos senescents conservats evolutivament que són possibles limitacions de com es produeix l'envelliment. Al mateix temps, l'estudi de la senescència orgànica i demogràfica a la natura proporciona contextos ecològics realistes i revela fins a quin punt els mecanismes d'envelliment són flexibles. En particular, els rèptils tenen moltes característiques que els recomanen per a estudis dels mecanismes de la senescència, inclosa la immunosenescència. En primer lloc, són el clade germà dels mamífers, que junts formen el clade monofilètic dels amniotes; La funció immune i les vies de senyalització cel·lular es conserven molt entre els amniotes (revisat a [11]). En segon lloc, els rèptils presenten diversos fenotips que permeten l'estudi de la senescència en una sèrie de contextos fisiològics i morfològics, cosa que no és possible en la majoria d'espècies de mamífers (per exemple, resistència a la hipòxia, tolerància a la congelació, verí, armadura, tolerància a la calor, revisada a [8]). ]). Excepte els ocells, els rèptils són poiquilotèrmics, i molts continuen creixent com a adults (per exemple, [12] però vegeu [13]) i augmentant la seva fecunditat amb l'avançament de l'edat ([14–17], revisat a [8]). A més, molts llinatges de rèptils tenen característiques morfològiques úniques. Alguns exemples d'aquests últims inclouen fenotips protectors, com ara les caixes toràciques externes de les tortugues i el verí d'algunes serps. Les anàlisis filogenètiques recents de les taxes d'envelliment de mortalitat van mostrar un fort suport a la hipòtesi que els llinatges de rèptils amb fenotips protectors tenien vides més llargues i un envelliment més lent que els mamífers de mida similar, especialment entre tortugues [18], (vegeu també [19, 20]). De fet, entre 300 espècies de tetràpodes de mostreig salvatge [18], les tortugues eren úniques perquè tot el llinatge es caracteritzava per espècies amb un envelliment de mortalitat gairebé insignificant i una llarga vida útil, una sensació reflectida en captivitat [21]. Atès que el creixement (i, per tant, la fecunditat) pot continuar durant la vida adulta, la selecció contra mutacions nocives amb fenotips d'edat tardana pot ser més forta en edats més velles en tortugues i altres rèptils amb aquestes característiques en relació amb els mamífers (com a [22]). Aquests trets suggereixen que la immunosenescència pot no manifestar-se de la mateixa manera en els rèptils en comparació amb altres vertebrats amniotes, com els mamífers o els ocells, i fins i tot pot estar absent a causa de pressions selectives per mantenir la funció immune amb una reproducció augmentada (per exemple, [5]) . Aquí ens centrem a ampliar el panorama comparatiu dels estudis d'envelliment en tortugues per promoure el seu ús com a models d'envelliment lent. El sistema immunitari de les tortugues, com altres amniotes, inclou components innats i adquirits (revisats a [23]), però anàlisis recents suggereixen que els rèptils poden dependre més de les defenses innates en relació amb els mamífers i les aus [24]. Concretament, tot i que els rèptils tenen cèl·lules B i T associades a la immunitat adaptativa, la resposta ràpida adaptativa tradicional a l'exposició secundària a patògens pot dependre més de la immunitat innata [24]. Hi ha una literatura creixent sobre patrons d'immunitat innata associats a l'edat en rèptils ectotèrmics [4, 25-27], que ofereix una primera línia de defensa contra patògens estrangers. Al mateix temps, l'estudi de les diferències de sexe tant en la senescència de l'organisme com en l'envelliment demogràfic s'ha ampliat a una millor cobertura filogenètica, inclosos els rèptils [28]. És important destacar que aquests estudis són possibles en poblacions salvatges només amb la capacitat d'envellir amb precisió els individus, cosa que requereix un estudi a llarg termini per a espècies de llarga vida ([29, 30], revisat a [31]). Per tant, afegim a aquesta literatura investigant aspectes de l'especificitat de sexe i edat de la immunitat innata, la supervivència, la reproducció femenina i les relacions entre ells en un rèptil de llarga vida. Aprofitem un estudi de recaptura de 38-anys de tortugues de fang groc d'edat coneguda (Kinosternon favescens) per quantificar les relacions entre edat, sexe, supervivència i producció reproductiva en el sistema immunitari innat com a enfocament integrador per entendre la immunosenescència. Com altres tortugues, es va trobar que aquesta espècie tenia un envelliment lent quan es consideren els sexes junts [18]. Concretament, vam avaluar tres mesures immunitàries innates: anticossos naturals circulants, capacitat de lisi mediada pel complement i competència bactericida del plasma a la nostra població d'estudi a llarg termini a Nebraska (EUA). Segons el paradigma existent de la immunosenescència innata, vam predir que les mesures d'immunitat innata disminuirien amb l'avançament de l'edat, malgrat algunes evidències contràries [5, 32].
cistanche tubulosa: millora el sistema immunitari
Resultats
El 2018 es van mostrejar dos-cents animals per a variables immunes (N=98 mascles, N=102 femelles) i aquestes observacions comprenen les nostres dades immunes. D'aquestes 102 femelles, 85 es van reproduir el 2017 i aquestes inclouen les nostres dades reproductives femenines. Finalment, per a l'anàlisi de la senescència de la mortalitat en el conjunt de la població, hem utilitzat la nostra base de dades a llarg termini de N=2380 individus únics d'edat coneguda (N=860 homes, N=1530 dones). ). A la nostra mostra d'individus de dades immunes (200 adults), l'edat estava altament correlacionada amb la mida corporal; els animals més grans eren més grans tant en massa com en longitud (p. ex., massa corporal, r=0.58, Pr.<0.0001; plastron length, r=0.60, Pr. <0.0001). Therefore body size was not included in models where age was an explanatory factor. In the immune data individuals, adult females were smaller than males and tended to be older (Table 1, Fig. S2), a result that is mirrored in the population as a whole (see Fig. 5 in [33]). Because adult females in our immune sample were significantly older than males, we z-transformed age for all analyses of innate immune function to dissociate the confound of age and sex. This allowed for a comparison of relatively old and young adult males and females.
Taula 1 Mida, edat i mortalitat Envelliment en tortugues de fang groc
En el conjunt de la població, les dones tenien una vida adulta mitjana i màxima més gran (edats en què havien mort entre el 50 i el 95% dels adults). Tant els mascles com les femelles adultes van mostrar augments de moralitat relacionats amb l'edat, cosa que indica l'envelliment. La taxa de mortalitat adulta inicial era més alta en els homes que en les dones, però les taxes d'acceleració de la mortalitat eren equivalents (taula 1, figura 1). A la nostra submostra immune d'individus, les tres mesures de la funció immune innata estaven correlacionades significativament (positivament) entre si (hemaglutinació natural mediada per anticossos, hemòlisi mediada pel complement i competència bactericida, taula S1). Però perquè les correlacions eren febles (totes les |r|< 0.28), we analyzed each variable separately. For all three variables, batch represents the reagents used. For bactericidal competence, five individual lyophilized pellets of Escherichia coli were used to generate control plates across the experiment; as control plates decreased in their colony count, a fresh control solution was made. For natural antibodies and cell lysis capability, two separate bottles of rabbit red blood cells were used sequentially. Significant variation among E. coli pellets and individual rabbits (that generate the red blood cells) is expected, and we controlled for it here as a batch effect in our models. All three immune variables declined with advancing age (BC and Lysis, Pr< 0.05; Nabs, Pr=0.08, Table 2, Fig. 2) and were higher in males than females (Table 2, Fig. 3). For the 85 females in our data for which we had both most-recent reproductive output and immune measures, clutch size did not change with age, whereas egg mass increased with age (Tables 3, S2, Fig. 4). Because clutch size did not change with age, a third measure of reproductive effort, total clutch mass followed the identical trend as egg mass and was not considered further. Interestingly, the three females greater than 50 years old had lower age-corrected egg mass (age>50 anys) que les dones en el següent interval d'edat més baix (N=13 edat de 40 a 50 anys (t=2.45, Pr.=0}.014)) cosa que suggereix la possibilitat de senescència en la producció reproductiva en femelles molt grans (vegeu la figura 4). Per a aquestes 85 femelles reproductores, les dones grans van seguir la mateixa tendència observada per a tots els adults: competència bactericida reduïda i hemòlisi mediada pel complement amb l'edat (taula 3, vegeu la figura 1). A més, les femelles amb postes més grans, independentment de l'edat, tenien una competència bactericida més alta que les que tenien postes més petites (Fig. S1). A diferència de la mida de l'embragatge, no vam trobar cap efecte de la massa d'ou sobre la funció immune (dades no mostrades).
Discussió
Beneficis del suplement de cistanche: com enfortir el sistema immunitari
Feu clic aquí per veure els productes Cistanche Enhance Immunity
【Demanar més】 Correu electrònic:cindy.xue@wecistanche.com / Whats App: 0086 18599088692 / Wechat: 18599088692
Mortalitat i senescència reproductiva
Les tortugues de fang groc femelles viuen més temps que els mascles en aquesta població; tanmateix, envelleixen a taxes similars (fig. 1), i la mortalitat específica per edat augmenta amb l'edat en ambdós sexes (fig. 1), encara que lentament. Aquestes dades demostren una senescència de mortalitat lenta en aquesta espècie, però no hem trobat cap evidència de senescència reproductiva a les nostres mostres femenines. S'ha informat d'una petita acceleració de la mortalitat específica de l'edat adulta en tortugues en l'estudi filogenètic de grans tetràpodes [18], així com en estudis individuals a llarg termini per a tortugues gegants [34] i tortugues pintades ([35, 36] però vegeu [35, 36]). 37, 38] i espècies de tortugues amb frontissa [39]); tanmateix, en altres espècies de tortugues, la mortalitat sovint es manté constant amb l'avançament de l'edat adulta [40], o disminueix amb l'edat [3, 15, 41]. A través de poblacions captives de tortugues (per exemple, registres del zoològic) da Silva et al. [21] va trobar que la majoria de les espècies de tortugues presentaven descensos lents o insignificants de la mortalitat amb l'edat. L'envelliment reproductiu femení (és a dir, la disminució de la producció reproductiva específica de l'edat) no s'ha vist fins ara a les espècies de tortugues (tortugues pintades [30], tortugues de Blanding [15, 41], tortugues del desert [3] i tortugues de caixa [42]) . Warner i els seus col·legues [30] van notar una disminució de la supervivència de les cries de tortugues pintades de les tortugues pintades femelles més antigues, malgrat no disminuir la producció reproductiva. A més, molts estudis reproductius de tortugues han demostrat correlacions positives entre la mida de la posta, la mida dels ous i/o la massa de la posta amb la mida corporal de les tortugues ([43]; revisat [44]), on la mida corporal sovint s'associa positivament amb l'edat en tortugues (per exemple, el present estudi, [17, 32], però vegeu [41]). Aquestes dades suggereixen que la senescència reproductiva rarament es produeix a les tortugues, si és que es produeix.
Fig. 1 Supervivència i mortalitat específica per edat en mascles i femelles adults K. favescens. La vida mitjana (50% viva) i màxima (5% viva) és més gran en les tortugues de fang grogues femelles adultes (línies discontinues negres) que en els mascles adults (línies sòlides grises). L'eix Y és Lx de supervivència per a adults, a partir dels 11 anys. Les línies que baixen cap a l'eix X mostren la mitjana i la vida màxima específiques del sexe en edat cronològica. El requadre mostra els models de Gompertz d'acceleració de la mortalitat durant l'edat adulta; la mortalitat adulta inicial dels mascles és significativament superior a la de les femelles (elevació de línies), amb increments equivalents (pendients de línies) (taula 1). L'eix Y és el logaritme natural de la mortalitat específica per edat del model d'acceleració de Gompertz ajustat
Longevitat i envelliment específics del sexe
Els estudis sobre diferències de sexe en la senescència demogràfica i de l'organisme segueixen sent rars en espècies no mamífers. Probablement hi ha dues raons per això: els informes inicials de demografia sobre poblacions salvatges sovint agrupen dades per obtenir una potència suficient per estimar l'acceleració de la mortalitat; i en moltes espècies el sexe dels juvenils és desconegut a causa de la manca de genitals externs i s'han de basar en el desenvolupament de fenotips sexuals secundaris per assignar el sexe en animals recentment madurs. En una revisió de les dades de longevitat en captivitat, da Silva i els seus col·legues [21] van informar que l'esperança de vida mitjana dels homes adults superava la de les femelles en un 20%, al contrari dels nostres resultats per a les tortugues de fang groc. Tanmateix, una major longevitat de les femelles en poblacions salvatges de tortugues sembla ser el patró (tortugues pintades [28, 45]), tortugues tacades [46, 47], tortugues de fusta [48], tortugues mapes [49] cooters [50], tortugues de caixa [51] i lliscants d'orelles vermelles [52]). En canvi, només sabem dos estudis que han informat que les tortugues mascles sobreviuen a les femelles en estat salvatge (les tortugues gopher [53] però vegeu [54], i una població de tortugues pintades [36]. Es necessiten més dades, però aquestes Les dades de camp contrasten amb els registres captius resumits per [21] i suggereixen una possible interacció sexe per entorn relacionada amb la longevitat i l'envelliment.
Taula 2 Anàlisi de la variància de les variables immunes per a tortugues adultes de fang groc mascles i femelles
Funció immune específica del sexe
Hem trobat nivells més alts de funció immune en mascles que en femelles, el contrari del patró general dels vertebrats [55, 56], i es presumeix que estaven relacionats almenys en part amb la supressió del sistema immunitari per part dels andrògens [57, 58]. Moltes espècies de tortugues són models adequats per a aquesta qüestió perquè no tenen cromosomes sexuals i, per tant, els sexes tenen la mateixa arquitectura del genoma en la concepció. En canvi, tenen una determinació del sexe depenent de la temperatura (TSD) mitjançant la qual el sexe està determinat per l'entorn tèrmic experimentat durant el període crític del desenvolupament embrionari, eliminant qualsevol confusió entre els genomes específics del sexe i el desenvolupament sexual específic del sexe [59]. López-Pérez i els seus col·legues [60] no van trobar cap diferència en la competència bactericida entre mascles i femelles en una espècie de tortuga almesc (una altra tortuga kinoestèrnida amb TSD). De la mateixa manera, Zimmerman i els seus col·legues [32, 61, 62] no van trobar cap diferència sexual en les mesures d'immunitat innata a les tortugues lliscants d'orelles vermelles (també amb TSD). En canvi, a les tortugues pintades [5], una altra espècie amb TSD, es va informar d'una capacitat d'hemòlisi mediada pel complement més alta en els mascles i títols d'anticossos naturals més alts en les femelles, sense cap efecte sexual sobre la competència bactericida. A més, Freedberg i els seus col·legues [63] van trobar que les temperatures d'incubació fredes i productores de mascles en una altra tortuga TSD milloraven la immunocompetència en els mascles més que en les femelles, però no van trobar aquests efectes en un congènere estretament relacionat. Tot i que aquestes dades preliminars semblen suggerir que les tortugues poden no seguir el patró general dels vertebrats de respostes immunitàries més baixes en els mascles, és evident que calen més investigacions. Seguint la teoria d'ecoimmunologia que planteja associacions entre les defenses immunitàries i les estratègies de la història de la vida [64, 65], esperem que el sexe de vida més llarga invertís més en la immunitat adquirida en relació amb la innata [66]; Les dades limitades sobre longevitats específiques del sexe impedeixen una prova exhaustiva entre espècies.
planta de cistanche per augmentar el sistema immunitari
Les diferències de comportament i els patrons d'activitat poden sotmetre les tortugues de fang groc femenins a pressions d'infecció més grans que els mascles, cosa que pot suprimir la funció immune femenina [55, 56]. La nostra espècie d'estudi té un cicle d'activitat anual inusual (vegeu Mètodes). Al nostre lloc d'estudi, els mascles adults surten de la brumació una mitjana de 5 dies abans que les femelles a la primavera [Iverson i Greene, dades no publicades], romanen actius a l'aigua al juny durant les incursions prolongades de nidificació de les femelles i, de mitjana, es passen a l'estivació estival. més tard que les dones [67]. Per tant, el període d'activitat anual d'aquesta espècie és inusualment curt, amb un mascle típic que està actiu a l'aigua potser un 25% més que una femella típica. Tanmateix, no està clar per què la temporada d'activitat més curta de les dones les exposaria a pressions més grans del sistema immunitari. A més, l'activitat reproductiva difereix entre mascles i femelles, amb l'aparellament i la fecundació a la columna d'aigua, després de la qual cosa les femelles han de sortir de l'aigua per aterrar per dipositar els seus ous (mentre que els mascles no tenen aquesta incursió obligatòria a la terra) [67]. estacional (per exemple, [Les concentracions d'esteroides circulants de rèptils són molt 68, 69]), i per tant, el patró que vam observar d'una funció immune més alta en els homes es podria atribuir al mostreig només durant l'emergència de la primavera, és a dir, molt a principis de la temporada. La variació estacional dels andrògens de les tortugues s'ha estudiat raonablement bé, i els nivells de testosterona circulants per a les tortugues mascles són generalment molt baixos a principis de primavera (revisió a [69]), mentre que arriba a la primavera per a les femelles mentre es preparen per a l'ovulació [69–. 74]. Se sap que la testosterona suprimeix la funció immune ([57], però vegeu [58]) i això podria explicar les respostes immunitàries més baixes en les dones en comparació amb els homes. Tanmateix, se sap que l'estradiol millora la funció immune [23] i, generalment, s'eleva a les dones a principis de primavera, seguit d'un pic poc després en associació amb l'ovulació i l'oviposició ([75], revisat a [69]). Així, segons el nostre mostreig a principis de primavera, els patrons d'estradiol i testosterona són explicacions poc probables de les respostes immunitàries més baixes observades a les nostres femelles. Malauradament, ens falten dades sobre els nivells d'hormones circulants a la nostra espècie d'estudi, però tenint en compte els patrons generals que s'acaben de descriure, l'impacte dels esteroides circulants en la funció immune encara no està clar.
Fig. 2 La immunitat innata disminueix amb l'edat en K. favescens adult. La competència bactericida A i la lisi mediada pel complement B van disminuir amb l'edat de manera similar per a les tortugues adultes de fang groc mascles i femelles (vegeu la taula 2 per obtenir dades estadístiques). Els anticossos naturals C (NAb) van mostrar la mateixa tendència. En tots els panells, l'eix Y representa els residus dels models lineals amb l'edat eliminada del model (taula 2). L'eix X és una edat transformada en z amb línies incrustades per indicar l'edat en anys de les tortugues adultes mascles i femelles. Regressions: residus BC=−{{10}}.138(zEdat), R2=0.06; Residus de lisi=−0,01(zEdat), R2=0,02; Residus NAbs=−0,01(zEdat), R2=0,01
Reproducció femenina i funció immune
No hem trobat cap evidència d'un cost immune per a la reproducció femenina. Ni la mida de la posta (taula 3) ni la massa dels ous (dades no mostrades) van afectar negativament cap variable immune. De fet, les femelles que van posar ous més grans tenien una capacitat bactericida més alta (Fig. S1). La teoria de la història de la vida prediu que els individus han d'assignar recursos a trets com els que donen suport a l'automanteniment i la reproducció per tal de maximitzar la forma física [76]. Tanmateix, la reproducció representa un cost energètic important per a les femelles i, per tant, els recursos destinats a la reproducció poden venir a costa d'altres trets [77]. Per tant, es pot esperar que les dones que inverteixen molt en la reproducció actual experimentin una compensació amb l'eficàcia immune actual [78]. Aquesta compensació entre la reproducció i la funció immune s'ha examinat en altres rèptils amb resultats contradictoris. Les serps de lliga terrestres gràvidas (Tamnophis elegans) van mostrar una capacitat proliferativa de limfòcits T més baixa en resposta a un mitogen en relació amb els conespecífics no gràvids, però no van mostrar cap diferència a BC entre estats reproductius [27]. En canvi, les serps de cascavell pigmees gràvidas (Sistrurus milarius) van mostrar una capacitat de BC disminuïda en relació amb les serps no gràvidas [79]. Les mesures de la immunitat innata entre els estats reproductius de les tortugues pintades (Chrysemys picta) depenien de l'edat [5]. Concretament, les femelles més joves que tenien grans embragatges van mostrar una capacitat de lisi més gran que les femelles més grans amb mides d'embragament igualment grans. No obstant això, aquest mateix estudi va trobar un augment de la BC en dones grans, que contrasta amb les troballes d'aquest estudi sobre la disminució de la funció immune amb l'avançament de l'edat. A més, independentment de l'edat, vam trobar que les mides d'embragatge més grans estaven correlacionades amb un BC més alt i que no hi havia cap efecte de la reproducció sobre la producció d'anticossos naturals o la capacitat de lisi. Aquests resultats suggereixen que les compensacions entre la funció immune i la reproducció probablement siguin específiques del component immunitari.
Fig. 3 La immunitat innata és significativament més alta en els mascles que en les femelles adultes de K. favescens. El mínim quadrat transformat enrere significa ±1 SE per a A) competència bactericida (l'eix y és la proporció de colònies d'E. coli mortes) i B) anticossos naturals (l'eix y és el títol de dilució màxim en què es produeix l'hemaglutinació dels glòbuls vermells de conill). ) i la lisi mediada pel complement (títol de dilució màxim en què es produeix la lisi dels glòbuls vermells de conill). Els asteriscs representen una diferència de sexe significativa per a una mesura immune determinada. (Vegeu la taula 2 per obtenir resultats estadístics). LS significa: BC=0,37, 0,62; NAbs=4.0, 4,6; Lys=8.2, 9.0
Taula 3 Anàlisi de variables immunitàries i esforç reproductiu per a tortugues de fang groc femelles reproductives
Fig. 4 La massa dels ous, no la mida de la posta, augmenta amb l'edat en la reproducció femella de K. favescens. L'eix Y representa els residus del model lineal de la taula 3 amb l'edat eliminada del model. Residus de massa d'ou=0.025 (Edat) - 0,73, R2=0,40
Immunosenescència
De les variables immunes innates que vam examinar a les tortugues de fang groc, vam trobar proves d'immunosenescència en les tres (Fig. 2; Taula 2). Els resultats d'altres estudis són mixtos. Per exemple, els lliscants d'orelles vermelles més grans (presumiblement més vells) no van mostrar cap canvi a BC en comparació amb individus més petits [32, 61], similar als resultats de la competència bactericida en tortugues pintades on es coneixia l'edat [5]. Aquest últim estudi també va informar d'augments de l'hemaglutinació en animals més grans. Òbviament, encara no és evident cap patró de canvis relacionats amb l'edat en el sistema immunitari innat de les tortugues. Entre altres rèptils no aviaris, els resultats també són força variables (revisats a [8, 26]). Per exemple, a les poblacions de serps de lliga, tant l'hemaglutinació com la capacitat d'hemòlisi disminueixen en les serps més velles [27, 80], igual que la resposta immune a la fitohemaglutinina mitògena dels llangardaixos de collar de Dickerson [81]. Mentre que a les pitons d'aigua, l'hemaglutinació augmenta amb l'edat [82]. Seran necessàries més investigacions per entendre aquesta variació en la direcció dels canvis relacionats amb l'edat en la immunitat innata en els rèptils en general i en les tortugues específicament. En canvi, les dades de mamífers i ocells mostren en general disminucions de la funció immune amb l'edat. A més, en aquests tàxons, la majoria de la immunosenescència observada es va produir al sistema immunitari adaptatiu [83–85] amb canvis menys pronunciats trobats en la immunitat innata (revisat a [6]), encara que també aquí, els patrons no són necessàriament coherents entre les mesures d'immunitat innata [6]. 86]. Tanmateix, en els rèptils, el sistema immunitari adaptatiu respon més lentament als reptes i no presenta respostes robustes durant l'exposició repetida a patògens (revisat a [24, 87]). Per tant, la funció immune innata i els canvis relacionats amb l'edat en aquesta funció poden ser crítics per a la salut immune general dels rèptils.
Conclusions
Aquí hem intentat ampliar les consideracions comparatives de la immunosenescència innata i les seves interaccions amb la mortalitat i l'envelliment reproductiu. Hem escollit una població salvatge estudiada durant molt de temps de tortugues (fang groc) per provar associacions entre aquestes mesures d'envelliment perquè estudis comparatius amplis recents han identificat que el clade de tortugues té un envelliment excepcionalment lent i una llarga vida útil. No obstant això, les mesures dels mecanismes d'envelliment requereixen edats conegudes, que només es poden aconseguir mitjançant un estudi a llarg termini d'espècies salvatges i de llarga vida. Vam trobar que la mortalitat i la immunitat tenien característiques específiques del sexe; les dones vivien més temps i tenien una funció immune innata més baixa que els homes. Aquest resultat és sorprenent en funció de la dependència de la temperatura de la determinació del sexe, descartant així les contribucions dels cromosomes sexuals a l'envelliment específic del sexe. Les tres mesures d'immunitat innata van disminuir amb l'edat. En les dones, la massa de l'embragament va augmentar amb l'avançament de l'edat de les dones, i la producció reproductiva no va predir la funció immune innata, excepte que les femelles amb embragaments més grans tenien una competència bactericida més alta, cosa que suggereix que no hi havia cap cost evident de l'esforç reproductiu per a la immunitat innata en les dones. Aquest és el primer estudi que examina tres eixos d'envelliment de les tortugues, un grup caracteritzat per un envelliment lent a insignificant. Aquestes troballes sobre la immunosenescència, la mortalitat i la reproducció suggereixen que les tortugues són un nou model per entendre els mecanismes de l'envelliment lent, o, més precisament, l'estudi dels mecanismes d'envelliment universal (com la immunosenescència) en un grup monofilètic caracteritzat per una acceleració lenta de la mortalitat adulta i senescència reproductiva insignificant.
Mètodes
Mostreig de camp
El mostreig de teixits per a les tortugues de fang groc (YMT) per a aquest estudi es va fer el 2 de maig018 al llac Gimlet al nostre lloc de recerca a llarg termini al Refugi Nacional de Vida Silvestre Crescent Lake (CLNWR), al comtat de Garden, Nebraska , EUA (41 graus 45,24′N, 102 graus 26,12′O). El complex de pantà del llac Gimlet és un llac de sorra poc profund (profunditat mitjana 0,8 m) amb hàbitat de pantà [88]. Els YMT presenten una determinació del sexe depenent de la temperatura (TSD) amb femelles produïdes en condicions d'incubació càlides i tant mascles com femelles produïdes en condicions més fresques [59]. Des del 1981 fins al 2018 s'han dut a terme estudis d'ecologia de marcatge i nidificació. En aquest lloc, les YMT solen hivernar terrestrement enterrades a turons de sorra de les terres altes adjacents als aiguamolls, emergeixen a l'abril i al maig i migren a l'aigua, i després la majoria de les femelles tornen a l'aigua. mateix arenal per nidificar al juny, encara que alguns no es reprodueixen cada any [67, 87]. Al juliol, totes les tortugues comencen a abandonar els aiguamolls per estivar als turons de sorra durant la resta de l'estiu (vegeu també [89]). Durant les temporades de camp, es van construir tanques a la deriva paral·leles a la riba entre tres llocs d'hivernada i el llac, i es van controlar contínuament cada dia. Durant els anys (inclòs el 2017) en què les tanques estaven al seu lloc durant la temporada de nidificació, es va fer una radiografia de cada femella capturada per determinar la mida de la posta i es va mesurar l'amplada de cada ou a cada raig X. Una equació de regressió que relaciona l'amplada mitjana de raigs X de la posta amb la massa mitjana real d'ou d'un subconjunt de nius que es van excavar posteriorment ens va permetre estimar la massa dels ous i la massa de la posta (ambdues en g) per a cada femella gràvida el 2017 (n{{24} }). Les equacions d'aquestes relacions i peus són les següents: Amplada real de l'ou=0,98(Amplada estimada de l'ou)+1,52, R2=0,89; Massa real de l'ou=0,64 (massa estimada de l'ou) - 6,07, R2=0,85; i en una mostra d'ous N=1795 YMT recollits durant diversos anys l'amplada de l'ou es pot utilitzar de manera fiable per estimar la massa de l'ou (i, per tant, la massa total de la posta) Massa d'ou=0,68 (amplada de l'ou) - 6,77, R2=0.85 (Iverson, dades inèdites). Això ens va permetre examinar els efectes d'aquestes mesures de producció reproductiva sobre la immunitat a la primavera del 2018, quan aquestes 85 tortugues femelles van sorgir de la brumació. Un cop capturades, les tortugues van ser transportades de tornada al laboratori de camp on es van registrar les dades morfomètriques, inclosa la longitud màxima del carapace (CL en mm), la longitud màxima del plastró (PL en mm) i la massa corporal (BM en g). Es van recollir fins a 0,5 ml de sang sencera del sinus cervical mitjançant una xeringa heparinitzada de calibre 26 i es van centrifugar (7000 rpm) en un criotub durant 5 minuts per separar els components sanguinis. El plasma sanguini es va pipetar a un criotub separat. Tant el plasma com els glòbuls vermells empaquetats es van congelar immediatament en nitrogen líquid fins que es van transportar a la Universitat Estatal d'Iowa per emmagatzemar-los a -80 graus. Les tortugues mostrejades (98 mascles i 102 femelles) van ser transportades de tornada al seu lloc de captura inicial i alliberades al costat oposat de la tanca per anar al llac.
Determinació de l'edat
Des que aquest estudi va començar el 1981, l'edat en anys després de la captura inicial de cada tortuga es va estimar com el nombre d'hiverns posteriors a l'eclosió. L'estimació de l'edat és la mateixa cada any i, per tant, els nostres mètodes per a la determinació de l'edat s'apliquen a totes les dades considerades aquí (població i submostra immune). Com que només es produeix un sol anell d'escut cada any en aquesta població, l'edat de les tortugues immadures sol ser igual al nombre total d'anells presents. No obstant això, durant els anys extremadament durs, pot ser que no hi hagi cap creixement, i dos anulls poden aparèixer com un sol. Per tant, els recomptes d'anells són edats mínimes i es poden infravalorar si no es compten i s'avaluen els anell en el context dels patrons generals de creixement de la closca a tota la població. En comparar el patró dels increments del creixement de l'escut d'una tortuga juvenil sense edat amb el patró general de creixement de l'escut a la població, es podria determinar de manera fiable l'edat de la primera captura fins a almenys 12 anys. Vam comptar el nombre mínim d'anells de tortugues adultes capturades durant els primers anys de l'estudi i es va estimar l'edat de totes aquestes tortugues si el nombre d'anells era inferior a 20. No obstant això, la majoria de tortugues es van marcar inicialment individualment i van envellir abans del sisè hivern, i es van envellir posteriorment en funció de l'interval real de recaptura. Les femelles adultes eren significativament més grans (i més petites) que els mascles a les nostres mostres (taula S3; prova t no aparellada, P=0.0003, vegeu la figura S2 i la figura 5 a [33]). Per tant, l'edat es va transformar en z dins de cada sexe a una mitjana de 0 amb variància unitat. Aquesta variable "edat" es va utilitzar en totes les anàlisis estadístiques. Vam excloure les dades de 26 joves sense sexe.
Anàlisi reproductiva
La producció reproductiva (mida de l'embragatge, massa total de l'embragatge) va augmentar amb l'augment de la mida i l'edat. Per tant, per a les anàlisis que van incloure la producció reproductiva femenina juntament amb l'edat al model, vam utilitzar valors bruts de la producció reproductiva sense corregir la mida corporal. Tots els models lineals es van realitzar a SAS v. 9.4 (SAS Institute, Cary, NC, EUA).
Anàlisi de supervivència
Les taxes de supervivència i mortalitat específiques per edat de Kinosternon favescens adult de l'oest de Nebraska es van estimar a partir del model de Gompertz (Taula 1) [18, 90, 91] que estima una probabilitat de mortalitat inicial a l'edat inicial i la taxa d'acceleració de la mortalitat a tot el món. esperança de vida. Models més complicats (p. ex., incloent un terme constant de Makeham per a la mortalitat independent de l'edat, inclòs un paràmetre de desacceleració) no eren compatibles amb aquestes dades basades en el canvi d'AIC (calculat al paquet BaSTA R [90]). El model de Gompertz es va aplicar al nostre conjunt de dades de recaptura de marca a llarg termini del llac Gimlet, incloses dades de 1.530 femelles individuals i 860 mascles individuals. L'edat a la maduresa va ser d'11 anys de mitjana per als dos sexes, cosa que es coneix pel seguiment a llarg termini de l'edat i la reproducció en aquesta població [88, 92, 93]. Com que la maduració depèn de la mida, aquestes estimacions de l'edat de maduració (és a dir, 11 anys) són estimacions màximes (per exemple, es pot identificar una tortuga mascle ocasional a edats més joves). Vam provar la sensibilitat d'utilitzar una edat mitjana de maduració de 10 anys sense cap efecte apreciable sobre les estimacions de la vida útil i l'envelliment de la mortalitat (dades no mostrades). La vida adulta màxima i mitjana es va calcular com el nombre d'anys després de l'edat de la primera reproducció fins que el 95% i es va estimar que el 50% dels adults de la cohort sintètica havien mort. Els conjunts de dades es van analitzar mitjançant la funció "basta" del paquet BaSTA per a R [90].
Mesures immunitàries
S'ha informat que l'hemaglutinació natural mediada per anticossos i la capacitat d'hemòlisi mediada pel complement (NAbs, Lisi) són la primera línia de defensa contra els patògens en vertebrats (revisat a [94]), i aquestes mesures de la funció immune innata s'han estudiat en molts rèptils. espècies (per exemple, [4, 5, 32, 80, 82, 95]). Hem completat els assajos de NAbs i capacitat de lisi segons l'assaig d'hemòlisi-hemaglutinació adaptat de [96] per al seu ús en tortugues pintades [5, 97]) mitjançant glòbuls vermells de conill. Hem utilitzat dues ampolles de glòbuls vermells de conill (HemoStat HemoStat Laboratories, Dixon, CA, EUA) per completar tots els assajos. Vam executar totes les plaques amb controls positius i negatius i mostres per duplicat. Els títols més alts per a l'hemaglutinació indiquen una major abundància d'anticossos naturals a la mostra de plasma, ja que els títols alts són una indicació que els anticossos naturals es troben en concentracions elevades fins i tot en plasma cada vegada més diluït [96]. De la mateixa manera, els títols més alts per a l'hemòlisi indiquen que el plasma és capaç de lisar els eritròcits fins i tot a concentracions més diluïdes [96]. Així, l'augment dels nivells d'anticossos naturals i la capacitat de lisi s'associen amb una funció immune augmentada. Es va avaluar la competència bactericida (BC) del plasma quantificant la seva capacitat per inhibir el creixement d'Escherichia coli mitjançant el nostre protocol publicat per a tortugues pintades [5, 97], adaptat de [98]. En el present experiment es van utilitzar cinc pellets liofilitzats d'E. coli (Microbiologics, ATCC # 8739), amb cada pellet nou utilitzat per generar una nova solució de control a mesura que avançàvem a través de les mostres. L'augment de la competència bactericida correspon a l'augment de la funció immune. Tots els assajos immunitaris es van realitzar a la primavera del 2019 amb mostres recollides a la primavera del 2018.
Mesura immune: anàlisis estadístiques
Les variables dependents es van analitzar mitjançant models lineals generals amb variables explicatives de zEdat (edat estandarditzada dins de cada sexe); Sexe (mascles adults i dones adultes); la interacció bidireccional entre zEdat i Sexe; i el lot d'assaig variable molest (BC: N=4; NAbs i lisi: N=2) per tenir en compte els pellets de control (BC) o l'ampolla de glòbuls vermells de conill (NAbs i lisi). La competència bactericida es va transformar en Arcsine per tenir en compte les dades proporcionals i per complir les condicions de normalitat. Els NAb i la lisi es van transformar log-10 per complir les condicions de normalitat. Tots els models lineals es van realitzar a SAS v. 9.4 (SAS Institute, Cary, NC, EUA). Els gràfics es van fer a ggplot2 [99].
Referències
1. Harman D. Envelliment: visió general. Ann NY Acad Sci. 2001;928:1–21.
2. Ricklefs RE. L'evolució de la senescència des d'una perspectiva comparada. Funt Ecol. 2008;22:379–92.
3. Jones OR, Scheuerlein A, Salguero-Gómez R, Camarda CG, Schaible R, Casper BB, et al. Diversitat d'envelliment a l'Arbre de la Vida. Naturalesa. 2014;505(7482):169–73.
4. Schwanz L, Warner DA, McGaugh S, Di Terlizzi R, Bronikowski AM. Manteniment fisiològic depenent de l'estat en un ectoterm de llarga vida, la tortuga pintada (Chrysemys picta). J Exp Biol. 2011;214:88–97.
5. Judson JM, Reding DM, Bronikowski AM. La immunosenescència i la seva influència en la reproducció en un vertebrat de llarga vida. J Exp Biol. 2020;223:jeb223057.
6. Peters A, Delhey K, Nakagawa S, Aulsebrook A, Verhulst S. Immunosenescència en animals salvatges: metaanàlisi i perspectives. Ecol Lett. 2019;22:1709–22.
7. Schmid-Hempel P. La variació en la defensa immune com a qüestió d'ecologia evolutiva. Proc R Soc B. 2003;270(1513):357–66.
8. Hoekstra LA, Schwartz TS, Sparkman AM, Miller DA, Bronikowski AM. El potencial no aprofitat de la biodiversitat dels rèptils per entendre com i per què els animals envelleixen. Funt Ecol. 2020;34:38–54.
9. Franceschi C, Capri M, Monti D, Giunta S, Olivieri F, Sevini F, et al. Infamaging i anti-infamming: una perspectiva sistèmica sobre l'envelliment i la longevitat va sorgir d'estudis en humans. Desenvolupament de l'Edat Mech. 2007;128:92–105.
10. Pawelec G, Bronikowski AM, Cunnane SC, Ferrucci L, Franceschi C, Fülöp T, Gaudreau P, Gladyshev VN, Gonos ES, Gorbunova V, Kennedy BK, Larbi A, Lemaître JF, Liu GH, Maier AB, Morais JA, Nóbrega OT, Moskalev A, Rikkert MO, Seluanov A, Senior AM, Ukraintseva S, Vanhaelen Q, Witkowski J, Cohen AA. L'enigma del sistema immunitari humà és la "senescència". Desenvolupament de l'Edat Mech. 2020;192.
11. Schwartz TS, Bronikowski AM. Les vies de l'estrès molecular i l'evolució de la reproducció i l'envelliment en els rèptils. A (T. Flatt & A. Heyland, eds.) Mecanismes moleculars de l'evolució de la història de la vida. Oxford: Oxford Univ Press; 2011. Pàgs. 193–209
12. Armstrong DP, Keevil MG, Rollinson NJ, Brooks RJ. La subtil variació individual en el creixement indeterminat condueix a una gran variació en la supervivència i la producció reproductiva durant tota la vida en un rèptil de llarga vida. Funt Ecol. 2007;32:752–61.
13. Omeyer LCM, Fuller WJ, Godley BJ, Snape RTE, Broderick AC. Creixement determinat o indeterminat? Revisitant l'estratègia de creixement de les tortugues marines. Mar Ecol Prog Ser. 2018;596:199–211.
14. Bronikowski AM, Arnold SJ. L'ecologia evolutiva de la variació de la història de la vida en la serp de lliga Thamnophis elegans. Ecologia. 1999;80:2314–25.
15. Congdon JD, Nagle RD, Kinney OM, van Loben Sels RC. Hipòtesis d'envelliment en un vertebrat de llarga vida, la tortuga de Blanding (Emydoidea blandingii). Exp Gerontol. 2001;36:813–27.
16. Wilkinson PM, Rainwater TR, Woodward AR, Leone EH, Carter C. Determinar el creixement i la vida reproductiva del caiman americà (Alligator mississippiensis): proves de recaptures a llarg termini. Copeia. 2016;104:843–52.
17. Hoekstra LA, Weber RC, Bronikowski AM, Janzen FJ. Creixement específic del sexe, forma i els seus impactes en la història de vida d'un vertebrat de llarga vida. Evol Ecol Res. 2018;19(6):639–57.
18. Reinke BA, Cayuela H, Janzen FJ, Lemaître JF. Gaillard JM, més 110 més. Les diferents taxes d'envelliment dels tetràpodes ectotèrmics proporcionen informació sobre l'evolució de l'envelliment i la longevitat. Ciència. 2022;376:1459–66.
19. Berkel C, Cacan E. L'anàlisi de la longevitat a Chordata identifica espècies amb una longevitat excepcional entre els tàxons i apunta a l'evolució de la vida útil més llarga. Biogerontol. 2021;22:329–43.
20. Stark G, Tamar K, Itescu Y, Feldman A, Meiri S. Ectoterms freds i aïllats: impulsors de la longevitat dels rèptils. Biol J Linn Soc. 2018;125:730–40.
21. da Silva R, Conde DA, Baudisch A, Colchero F. La senescència lenta i negligible entre Testudines desafia les teories evolutives de la senescència. Ciència. 2022;376:1466–70.
22. Charlesworth B. Fisher, Medawar, Hamilton i l'evolució de l'envelliment. Genètica. 2000;156:927–31.
23. Zimmerman LM, Vogel LA, Bowden RM. Comprensió del sistema immunitari dels vertebrats: coneixements des de la perspectiva dels rèptils. J Exp Biol. 2010;213:661–71.
24. Zimmerman LM. La perspectiva rèptil sobre la immunitat dels vertebrats: 10 anys de progrés. J Exp Biol. 2020;223(Pt 21):jeb214171.
25. Palacios MG, Ganglof EJ, Reding DM, Bronikowski AM. El fons genètic i el medi tèrmic influeixen de manera diferent en l'ontogènia dels components immunitaris durant la vida primerenca en un vertebrat ectotèrmic. J Anim Ecol. 2020;89:1883–94.
26. Field EK, Hartzheim A, Terry J, Dawson G, Haydt N, Neuman-Lee LA. Immunologia innata rèptil i ecoimmunologia: què sabem i cap a on anem? Integra Comp Biol. 2022;62:1557–71.
27. Palacios MG, Bronikowski AM. La variació immune durant l'embaràs suggereix costos de reproducció específics dels components immunitaris en una serp vivípara amb estratègies dispars en la història de la vida. J Exp Zool Part A. 2017;327:513–22.
28. Bronikowski AM, Meisel RP, Biga PR, Walters JR, Mank JE, Larschan E, et al. Envelliment específic per sexe en animals: perspectiva i direccions futures. Cèl·lula d'envelliment. 2022;21:e13542.
29. Reed TE, Kruuk LE, Wanless S, Frederiksen M, Cunningham EJ, Harris MP. Senescència reproductiva en un ocell marí de llarga vida: les taxes de disminució del rendiment final de la vida s'associen a costos variables de la reproducció primerenca. Sóc Nat. 2008;171:E89–E101.
30. Warner DA, Miller DA, Bronikowski AM, Janzen FJ. Dècades de dades de camp revelen que les tortugues sobreviuen a la natura. Proc Natl Acad Sci US A. 2016;113(23):6502–7.
31. Reinke BA, Miller DAW, Janzen FJ. Què ens han ensenyat els estudis de camp a llarg termini sobre la dinàmica de la població? Ann Rev Ecol Evol Sys. 2019;50(1):261–78.
32. Zimmerman LM, Bowden RM, Vogel LA. Les tortugues lliscants d'orelles vermelles no tenen resposta a la immunització amb hemocianina de lapa, però tenen alts nivells d'anticossos naturals. ISRN Zool. 2013a;2013:1–7.
33. Iverson JB. Falla de reclutament mediada pel clima en una població de tortugues i la seva relació amb els límits de distribució nord. Chelonian Cons Biol. 2022;21(2):181–6.
34. Gibson CWD, Hamilton J. Processos poblacionals en un gran rèptil herbívor: la tortuga gegant de l'atol d'Aldabra. Ecologia. 1984;61:230–40.
35. Miller DAW, Janzen FJ, Fellers GM, Kleeman PM, Bronikowski AM. La biodemografia de tetràpodes ectotèrmics proporciona informació sobre l'evolució i la plasticitat dels patrons de mortalitat. A: Weinstein M, Lane MA, editors. Socialitat, jerarquia, salut: biodemografia comparada. Washington DC: National Academies Press; 2014. pàg. 295–313.
36. Reinke BA, Hoekstra L, Bronikowski AM, Janzen FJ, Miller DAW. Estimació conjunta del creixement i la supervivència a partir de dades de marcatge-recaptura per millorar les estimacions de senescència en poblacions salvatges. Ecologia. 2020;101(1):e02877. https://doi.org/10.1002/ecy.2877.
37. Keevil, MG 2020. Estimació conjunta del creixement i la supervivència a partir de dades de marcatge-recaptura per millorar les estimacions de la senescència en poblacions salvatges: comentari. Ecologia e03232. https://doi.org/10.1002/ecy.3232.
38. Bronikowski AM, Reinke BA, Hoekstra L, Janzen FJ, Miller DAW. Estimació conjunta del creixement i la supervivència a partir de dades de marcatge-recaptura per millorar les estimacions de senescència en poblacions salvatges: resposta. Ecologia. 2022:103:e03571. https://doi.org/10.1002/ecy.3571.
39. Cayuela H, Akani GC, Hema EM, Eniang EE, Amadi N, Ajong SN, et al. Història vital i processos de mortalitat depenent de l'edat en rèptils tropicals. Biol J Linn Soc. 2019;128:251–62. 40. Gibbons JW. Per què les tortugues viuen tant de temps? Biociència. 1987;37:262–9.
41. Congdon JD, van Loben Sels RC. Relacions entre els trets reproductius i la mida corporal amb l'assoliment de la maduresa sexual i l'edat de les tortugues Blanding (Emydoidea blandingii). J Evol Biol. 1993;6:547–57.
42. Miller JK. Escapar de la senescència: dades demogràfiques de la tortuga caixa de tres dits (Terrapene Carolina Triunguis). Exp Gerontol. 2001;36(4–6):829–32.
43. Moll EO. Cicles reproductius i adaptacions. A: Harless M, Morlock H, editors. Tortugues: perspectives i investigació. Malabar, Florida: John Wiley and Sons; 1979. pàg. 305–20.
44. Iverson JB, Lindeman PV, Lovich J. Understanding reproductive allometry in turtles: a slippery slope. Ecol Evol. 2019;9:11891–903.
45. Iverson JB. Chrysemys picta bellii (tortuga pintada occidental). Longevitat. Herpetol Rev. 2022;53:484.
46. Litzgus JD. Diferències de sexe en la longevitat a la tortuga tacada (Clemmys guttata). Copeia. 2006;2006:281–8.
47. Ernst CH. Creixement de la tortuga tacada (Clemmys guttata). J Herp. 1975;9:313–8.
48. Brown DJ, Schrage M, Ryan D, Moen RA, Nelson MD, Buech RR. Glyptemys insculpta (tortuga de fusta) longevitat en estat salvatge. Herpetol Rev. 2015;46:243–4.
49. Iverson JB, Smith GR, Rettig JE. Mida corporal, creixement i longevitat de la tortuga mapa del nord (Graptemys geographical) a Indiana. J Herp. 2019;53:297–301.
50. Munscher E, Campbell K, Hauge JB, Hootman T, Osborne W, Butterfeld BP, et al. Pseudemys foridana peninsularis (cooter peninsular) i Pseudemys nelsoni (cooter de ventre vermell de Florida). Longevitat. Herpetol Rev. 2020;51:111–3.
51. Lewis EL, Iverson JB. Terrapene ornata (tortuga de caixa ornamentada). Longevitat. Herpetol Rev. 2018;49:530.
52. Lewis EL, Iverson JB, Smith GR, Rettig JE. Mida corporal i creixement al lliscant d'orelles vermelles (Trachemys scripta) a la vora nord del seu rang: s'aplica la regla de Bergmann? Herp Conserv Biol. 2018;13:700–10.
53. Curtin AJ, Zug GR, Spotila JR. Estratègies de longevitat i creixement de la tortuga del desert (Gopherus agassizii) en dos deserts americans. J Arid Environ. 2009;73:463–71.
54. Medica PA, Nussear KE, Esque TC, Saethre MB. Creixement a llarg termini de tortugues del desert (Gopherus agassizii) en una població del sud de Nevada. J Herpetol. 2012;46:213–20.
55. Klein SL. Les hormones i els sistemes d'aparellament afecten les diferències de sexe i espècie en la funció immune entre els vertebrats. Comportament Proc. 2000;51:149–66.
56. Klein SL. Mecanismes hormonals i immunològics que medien les diferències de sexe en la infecció per paràsits. Immunol paràsit. 2004;26:247–64.
57. Foo YZ, Nakagawa S, Rhodes G, Simmons LW. Els efectes de les hormones sexuals sobre la funció immune: una metaanàlisi. Biol Rev. 2007;92:551–71.
58. Kelly CD, Stoehr AM, Nunn C, Smyth KN, Prokop ZM. Dimorfisme sexual en la immunitat entre animals: una metaanàlisi. Ecol Lett. 2018;21:1885–94.
59. Janzen FJ, Paukstis GL. Determinació del sexe ambiental en rèptils: ecologia, evolució i disseny experimental. Q Rev Biol. 1991;66(2):149–79.
60. López-Pérez JE, Meylan PA, Goessling JM. Comerç basat en el sexe dels sistemes immunitaris innat i adquirit de Sternotherus minor. J Exp Zool. 2021;333:820–8.
61. Zimmerman LM, Paitz RT, Vogel LA, Bowden RM. Variació en els patrons estacionals d'immunitat innata i adaptativa en el lliscant d'orelles vermelles (Trachemys scripta). J Exp Biol. 2010;213:1477–148358.
62. Zimmerman LM, Clairardin SG, Paitz RT, Hicke JW, LaMagdeleine KA, Vogel LA, et al. Les respostes immunitàries humorals es mantenen amb l'edat en un ectoterm de llarga vida, la tortuga lliscant d'orelles vermelles. J Exp Biol. 2013b;216:633–40.
63. Freedberg S, Greives TJ, Ewert MA, Demas GE, Beecher N, Nelson CE. L'entorn d'incubació afecta el desenvolupament del sistema immunitari en una tortuga amb determinació ambiental del sexe. J Herpetol. 2008;2008(42):536–41.
64. Lee KA. Vincular les defenses immunitàries i la història de vida a nivell de l'individu i de l'espècie. Integr Comp Biol. 2006;46:1000–15.
65. Sheldon BC, Verhulst S. Immunologia ecològica: costoses defenses de paràsits i comerç d'ecologia evolutiva. Tendències Ecol Evol. 1996;11:317–21.
66. Palacios MG, Cunnick JE, Bronikowski AM. La complexa interacció de la condició, la història de la vida i l'entorn predominant configuren les defenses immunitàries de les serps en estat salvatge. Physiol Biochem Zool. 2013;86:547–58.
67. Iverson JB. Nidificació i cura parental a la tortuga Kinosternon favescens. Can J Zool. 1990;68:230–233.
68. Licht P. Patrons endocrins en el cicle reproductiu de les tortugues. Herpetològica. 1982;38:51–61.
69. Graham SP, Ward CK, Walker JS, Sterrett S, Mendonça MT. Dimorfisme sexual i variació sexual de les hormones reproductives a la tortuga mapa Pascagoula, Graptemys gibbons. Copeia. 2015;103:42–50.
70. Shelby JA, Mendonça MT, Horne BD, Seigel RA. Variació estacional dels esteroides reproductius de les tortugues mapa de taques grogues mascles i femelles, Graptemys favimaculata. Gen Comp Endocrinol. 2000;119:43–51.